Name: 신경 근육 분석을위한 쥐 보컬 폴드의 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-15T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: 학습하세요 쥐 후두의 신경근육 접합부 조직화학 분석을 위한 최적의 성대 표본 준비 방법을. 동결절단 기법을 활용하여 내재성 후두 근육을 정확히 식별하고 조직 손실을 최소화합니다.

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이 연구는 보조금 F31DC017053-01A1 (Lenell, PI) 및 K23DC014517 (존슨, PI) 청각 장애및 건강의 국립 연구소의 다른 통신 장애에 대한 국립 연구소에서 지원되었다.

이 연구는 뉴욕 대학 의과 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 따라 수행되었습니다.
1. 해부 쥐 후두
<ol><li>제도적으로 승인된 프로토콜에 따라 쥐를 안락사시합니다. 하악에서 마누브리움으로 복부 목을 면도하고 술로 면봉하여 조직 표본의 모피 오염을 방지합니다.</li>
	<li>10배배율을 가진 해부 범위에서 기관체가 노출될 때까지 메스로 중간선 목 절개를 만들어 후두 전체를 소비한다.</li>
	<li>중간선에서 복부 외두 근육을 분리하여 포셉을 사용하여 후두를 노출하고 가위 또는 메스를 해부합니다.</li>
	<li>기관가 를 제3 기관 고리로 분리하고 해부 가위를 사용하여 전체 후두를 소비하기 위해 효이드 뼈에 절개 로스트랄을 만듭니다.</li>
	<li>배율하에서 미세 절도구(핀셋, 핀, 미세시)를 사용하여 후두에서 외두 조직(식도, 갑상선 및 외두 근육)을 제거합니다.</li>
	<li>미세 한 부와 함께, 후위 cricotenoid 근육 사이 중간 라인을 사용 하 여 아리티노이드 사이 후두를 이중으로. 후두의 측면 벽을 핀으로 표시하여 보컬 주름을 노출한 다음 갑상선 연골의 중간선을 통해 미세 시저로 보컬 주름의 전방 분리(도 1)를 통해 양분하게 선회한다. 참고: 이 단계는 선택 사항일 수 있습니다. 후두전체를 유지하기 위해 건너뛸 수 있습니다. 후두의 양절은 동일한 후두의 오른쪽과 왼쪽을 별도로 사용하여 다중 면역 염색 기술을 허용합니다.</li>
	<li>인산완충액(PBS)에서 각각 헤미후두를 헹구고, 동결 시 얼음 결정 형성을 줄이기 위해 작업 와이퍼로 섬세하게 건조시킵니다.</li>
</ol>2. 후두 조직을 수정 및/또는 플래시 동결
참고: 고정은 모든 면역 염색 프로토콜에 적합하지 않을 수 있습니다. 종종 후두 조직은 해부 직후 에새로 얼어 붙습니다. 단계 2.1을 건너뛰고 후두 조직을 고정하지 않고 플래시 동결시합니다.
<ol><li>헤미 후두를 해결하기 위해 70 rpm의 궤도 셰이커에서 실온에서 1 시간 동안 PBS에서 4 % 포름 알데히드로 채워진 원심 분리기 튜브에 조직을 배치합니다. 깨끗한 원심분리기 튜브로 조직을 옮기고 PBS에서 20분 동안 3배 헹구십시오. 그런 다음 깨끗한 원심분리기 튜브로 옮기고 4°C에서 20% 자당/5% 글리세롤 용액(~18h 또는 조직이 가라앉을 때까지)에 침수한다. 주의: 포름알데히드는 위험하며 적절한 개인 보호 장비와 함께 연기 후드에 사용해야합니다.</li>
	<li>모든 헤미 후두를 균일한 위치에 배치하여 최적의 절삭 온도(OCT) 화합물로 채워진 냉동 금형에 넣습니다. hemilarynx의 경우, 극저온의 바닥을 향한 보컬 폴드의 내측 표면과 극저온 개구부의 하부 가장자리에 평행하게 보컬 접힌의 세로 측면을 가진 조직을 배치한다. 전체 후두의 경우, 극저온의 바닥을 향한 후방 리코리테노이드와 극저온 개구부의 하부 가장자리에 평행하게 보컬 접힌 종방향 측면을 가진 조직을 놓습니다. 참고: OCT 화합물 내에서 일관된 후두 방향은 쥐 보컬 폴드의 극저분균에 매우 중요합니다. 헤밀리엔스가 내장되고 얼어 붙으면 방향을 바꾸기 위해 해동하여 여러 해동 동결 주기로 인한 조직 손상의 위험을 소개해야 합니다.</li>
	<li>액체 질소로 둘러싸인 강철 비커로 냉각된 isopentane(2-메틸부탄)를 사용한 플래시 동결 조직. 참고: isopentane는 백색 침전이 비커13의 측면과 바닥에 형성하기 시작할 때 조직 동결을 위한 최적 온도에 도달합니다. 이스펜탄은 액체 질소보다 열 전도도가 높기 때문에 사용되며, 이는 급속한 동결 시 조직 블록의 균열을 방지하는 데 도움이 됩니다. OTC에서 조직을 동결에 대한 자세한 설명은 쿠마르 외.13을 참조하십시오.</li>
	<li>각 금형을 라벨이 붙은 호일로 감싸고 개별 냉동고 가방에 넣어 탈수방지하고 -80°C 냉동고에 보관할 때까지 드라이 아이스에 즉시 보관하십시오.</li>
</ol>3. 단면 평면의 극저부 헤밀리엔스
<ol><li>냉동저온을 -20°C로 설정하여 제조업체 매뉴얼에 의한 근육 조직 단면에 권장되는 온도 범위(15-25°C)의 중간에 있습니다.</li>
	<li>10 μm 두께의 섹션으로 저온 분면 두께를 설정합니다. 참고: 근육 섬유 단면 분석의 경우, 10 μm 두께의 단면은 섬유 타이핑 분석을 위한 라벨이 부착된 근육 섬유의 완전한 염색 및 견고한 이미징 강도를 허용하는 것이 최적입니다14,15,16. 일부 프로토콜신경 근육 대상에 따라 다른 단면도 두께 를 요구할 수 있습니다.</li>
	<li>극저온 챔버로 조직을 옮기고, 저온 시편 디스크(chuck)에 OCT 화합물의 균일한 층을 추가하고, 임베디드 조직 블록을 표본 디스크 위에 놓습니다. 흉선(TA) 근육 섬유 분석을 위한 보컬 접이식의 단면을 얻으려면, 척에 표본을 부착하여 복부 갑상선 연골이 극저온 블레이드를 마주하고 아리티노이드 연골이 표본 디스크에 직면하도록 한다. 참고: 동결시 OCT 화합물이 흰색과 불투명해짐에 따라 이러한 랜드마크가 이 단계에서 표시되지 않습니다. 이러한 가시성 부족은 플래시 동결 단계에서 헤밀리엔스의 방향을 주목하는 것이 중요한 이유입니다.</li>
	<li>갑상선 연골의 복부 부분이 나타날 때까지 표본 머리를 100 μm로 전진시킴으로써 OCT 화합물을 트림합니다.</li>
	<li>그런 다음 갑상선 연골발병부터 라미나 프로프리아, 내측 TA 근육 및 측면 TA 근육이 노출될 때까지 30 μm 섹션을 손질하고 추적합니다. 참고: 후두 랜드마크는 단면각도가 비스듬히 되지 않도록 100μm마다 갑상선 연골이 발병하여 추적하여 주목해야 합니다. 도 2 는 10배배율의 단면 평면에서 두 개의 후두 랜드마크 세트를 나타냅니다.</li>
	<li>대상 TA 근육에 도달하면 10 μm에서 양전하 슬라이드의 섹션을 수집합니다.</li>
	<li>PBS에 섹션을 4°C로 저장하여 염색할 준비가 될 때까지 수분을 유지합니다. 참고: 고정 된 조직은 IHC 표적에 따라 최대 1 주일까지 PBS에 저장 될 수 있지만 고정되지 않은 조직은 즉시 처리되어야합니다.</li>
</ol>4. 경도 평면의 극저부 헤밀리엔스
<ol><li>저온 챔버가 다시 -20°C로 설정되면 단면 두께를 30 μm로 변경합니다. 참고: NMJ 분석의 경우, 30-60 μm 사이의 조직 두께는 신경 단자 또는 모터 엔드플레이트11,12,17의 단편화 없이 후두 근육 내의 몇 가지 완전한 NMJ를 캡처하는 데 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>TA 근육의 NMJ 분석을 위한 세로 성보컬 접이식 부분을 얻으려면, 후면이 극저온 블레이드를 향하도록 척에 표본을 부착하고 기관 루멘은 시편 디스크쪽으로 아래로 향합니다.</li>
	<li>갑상선 연골이 나타날 때까지 표본 머리를 100 μm로 전진시켜 OCT 화합물을 다듬습니다.</li>
	<li>TA 근육의 라미나 프로프리아및 내측 및 측면 분열이 드러날 때까지 갑상선 발병으로부터 30 μm의 섹션을 손질하고 추적합니다. 참고: 세로 평면의 후두 랜드마크 5세트는 표적 TA 근육을 향한 조직 깊이 진행을 추적하는 것이 좋습니다. 도 3 은 10배배율로 세로 평면의 후두 랜드마크를 나타낸다.</li>
	<li>표적 TA 근육에 도달하면 30 μm에서 양전하 슬라이드에 대한 섹션을 수집합니다.</li>
	<li>PBS에 섹션을 4°C로 저장하여 염색할 준비가 될 때까지 수분을 유지합니다.</li>
</ol>

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</ol>

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신경 근육 분석을 위한 쥐 보컬 주름을 준비하는 것은 각종 도전으로 제시할 수 있습니다. 후두 근육은 작고 연골에 둘러싸여 있어 표적 근육을 직접 추출하기가 어려워질 뿐만 아니라 후두 해부학 적 랜드 마크의 깊이에서 동물 들 사이에서 높은 가변성을 발견했습니다. 근육의 경우, 전체 보컬 접이식 섹션은 NMJ 분석 프로토콜(표 1)에 대한 종로 평면에서 63-126 단면(섹션당 35 μm)보다 약간 적은 복부 갑상선 연골의 초기 출현 후 21-85 섹션(섹션당 10 μm) 사이에 나타났다.
가변성은 균일한 포함, 지향성 및 각 프로토콜 유형에 대한 조직의 단면에도 불구하고 후두 랜드 마크 사이의 거리에서 지적되었습니다. 또한, 체중의 차이는 후두 랜드 마크의 한 세트에서 다음에 조직 깊이의 넓은 범위에서 가변성을 고려하지 않았다. 후두 랜드 마크 사이의 거리의 이 가변성은 동물에 걸쳐 후두 해부학의 개별 차이, 해부 시 OCT 화합물 내에서 극저온에서...

쥐 후두는 발달, 노화, 질병 및 약리학 에이전트에 구조적이고 기능적인 신경 근육 후두 적응을 조사하는 잘 확립 된 모델입니다1,2,3,4,5. 조직학적 방법의 일관성은 후두 연골 내에서 캡슐화 된 근육의 후두 크기, 모양 및 지형과 관련된 도전뿐만 아니라 근육 준비 및 분석에 관련된 여러 가지 복잡성이 있기 때문에이 작업 라인에 중요합니다1,6,7,8,9,10,11 . 쥐 내성 후두 근육의 작은 크기로 인해 체계적인 포함, 동결 및 냉동 절개는 일관되고 정확한 결과를 달성하는 데 중요합니다. 예를 들어, 관상 평면에서 쥐 보컬 접을 분리할 때, 내래 후두 근육 4개 중 4개의 신경근육 접합부(NMJs)는 조직 깊이11의 1.8mm 미만 내에 위치한다. 따라서, 동결 절제 동안 후두 근육 해부학의 정밀한 모니터링은 정확하게 관심의 섹션을 식별하고 조직의 과부를 방지하는 것이 필수적이다. 대상 근육의 과분은 NMJs11의 수와 지형을 부정확하게 식별할 수 있거나 랜드마크 방향 혼동으로 인해 대상 근육이 버려지면 시료 크기가 전반적으로 감소될 수 있다12. 후두 근육과 각각의 적응에 대한 새로운 모델이 개발됨에 따라 연구 전반에 걸쳐 결과가 정확하고 신뢰할 수 있으며 재현가능한지 확인하는 표준 수술 절차가 필수적입니다.
이 문서의 목적은 최적의 세로 및 단면 분석을 위해 쥐 보컬 폴드의 세부 준비입니다. 우리의 실험실에서 정기적으로 사용되는 상세한 방법은 냉동 절제 동안 대상 근육 랜드 마크를 식별하기 위해 설명된다. 유사한 방법은 여러 실험실에서 사용되지만 초보 조사관이 구현할 때 신뢰할 수 있고 정확한 복제를 보장하기 위해 문헌보다 더 자세한 정보가 여기에 제공됩니다. 이 튜토리얼의 목표는 실험실 및 조사 전반에 걸쳐 일관성을 개선하기 위해 쥐 보컬 접이의 면역 조직화학 (IHC) 평가를위한 표준 방법론을 제공하는 것입니다.

<table><tbody><tr><td>2-메틸부탄 인증</td><td>피셔 케미컬</td><td>35514</td><td></td></tr><tr><td>알루미늄 호일</td><td>Fisherbrand</td><td>1213101</td><td></td></tr><tr><td>Cryo Tongs SS</td><td>Thermo Scientific</td><td>11679123</td><td></td></tr><tr><td>저온 유지 장치</td><td>Leica Biosystems</td><td>CM3050</td><td></td></tr><tr><td>저온 유지 블레이드</td><td>C.L. Sturkey D554X50</td><td>22-210-045</td><td></td></tr><tr><td>일회용 베이스 몰드 15mm x 15mm</td><td>Thermo Scientific</td><td>41-741</td><td></td></tr><tr><td>일회용 언더패드</td><td>Medline</td><td>23-666-062</td><td></td></tr><tr><td>해부 키트</td><td>Thermo Scientific</td><td>9996969</td><td></td></tr><tr><td>DPBS - Dulbecco의 인산염 완충 식염수</td><td>Gibco</td><td>14190136</td><td></td></tr><tr><td>냉동 섹션 Medium</td><td>Fisher Healthcare</td><td>23-730-571</td><td></td></tr><tr><td>아이스 버킷</td><td>Bel-Art</td><td></td><td></td>11999054</tr><tr><td>Immunostain 수분 챔버</td><td>Ted Pella Inc</td><td>NC9425474</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>Assi</td><td>ASSI. B148</td><td></td></tr><tr><td>부직포 스폰지, 4 플라이</td><td>퀵 메디컬</td><td>9023</td><td></td></tr><tr><td>오비탈 셰이커</td><td>Troemner</td><td>02-217-987</td><td></td></tr><tr><td>Pap 펜</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드, 16% w/v aq. soln., 메탄올 프리</td><td>Alfa Aesar</td><td>50-00-0</td><td></td></tr><tr><td>프리미엄 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>Fisherbrand</td><td>5408129</td><td></td></tr><tr><td>표본 보관 가방</td><td>Fisherbrand</td><td>19240093</td><td></td></tr><tr><td>스테인리스 스틸 졸업 측정 32 oz/100 mL</td><td>Polar Ware</td><td>114231B</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus 현미경 슬라이드</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>작업 와이퍼</td><td>Kimberly-Clark Professional&trade; 34155</td><td>06666A</td><td></td></tr><tr><td>타이머</td><td>Fisherbrand</td><td>2261840</td><td></td></tr><tr><td>Vannas 패턴 가위</td><td>Assi</td><td>ASSI. </td><td></td>SAS15RV</tr><tr><td>참고: 모든 소모품에 대해 다음은 전amp구매할 장비의 파일. 방법을 완료하는 데 정확한 모델이 필요한 것은 아닙니다.</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

신경 근육 분석을위한 쥐 보컬 폴드의 준비

Preparation of the Rat Vocal Fold for Neuromuscular Analyses

이 튜토리얼의 목적은 조직화학 신경 근육 연구에 대한 쥐 보컬 접기의 준비를 설명하는 것입니다. 이 프로토콜은 쥐 후두 해부, 플래시 동결 및 보컬 주름의 저온 절제에 대한 절차를 간략하게 설명합니다. 이 연구는 세로 및 단면 평면 모두에서 저온 절 보컬 주름을 하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜의 참신은 내성 후두 근육의 정확한 식별을 보장하고 조직 손실의 기회를 감소 극저온 절제 하는 동안 후두 추적. 수치는 두 평면에서 점진적 극저온절을 보여줍니다. 29마리의 쥐 헤미 후두는 갑상선 연골의 출현에서 전체 보컬 접이를 포함하는 첫 번째 섹션의 출현까지 극저고 를 추적했다. 전체 보컬 폴드는 두 평면의 모든 동물을 위해 시각화되었습니다. 갑상선 연골의 출현에서 두 평면에서 전체 보컬 폴드의 출현까지 의 거리에서 높은 가변성이 있었다. 무게는 후두 랜드 마크의 깊이와 상관 관계가 없었다, 개별 가변성 및 조직 준비와 관련된 다른 요인은 단면 동안 랜드 마크의 출현에 높은 가변성에 대한 책임이있을 수 있음을 시사. 이 연구는 방법론을 자세히 설명하고 조직 화학 신경 근육 조사를위한 쥐 보컬 접이를 준비하기위한 형태학적 데이터를 제시합니다. 높은 개별 가변성 때문에, 후두 랜드 마크는 조직과 조직 손실을 과분하는 것을 방지하기 위하여 극저온 절제 도중 밀접하게 추적되어야 합니다. 쥐 후두 내의 랜드 마크의 적절 한 조직 준비 및 인식을 포함 하 여 일관 된 방법론의 사용, 연구 전반에 걸쳐 일관 된 결과 지원 하 고 후두 신경 근육 메커니즘을 조사 하는 모델로 쥐 보컬 접을 사용 하 여 관심 있는 새로운 연구원을 원조.

대표적인 결과는 후두 신경 근육 시스템에 음성 운동의 효력의 지속적인 조사의 일부였습니다. 29 남성 피셔 344/갈색 노르웨이 쥐 (12 9 개월, 17 24 개월)는 CO2 흡입으로 무게와 안락사 되었다 양측 thoracotomy.
절차는 NMJs와 측면 및 내측 TA 근육의 섬유 크기를 표시하는 설명 된 프로토콜을 따랐다. 후두 랜드 마크 사이의 거리는 후두 근육과 주변 연골을 사용하여 경도 및 단면 평면 모두에서 추적되어 극저온 절제 (표 1)에서 진행을 결정했습니다. 추적은 두 방향 평면에서 갑상선 연골의 첫 등장에서 시작되었습니다. 도 2는 내측 TA 근육과 라미나 프로프리아(도 2c,d)에 나타나는 갑상선(도 2a,...

이 프로토콜은 조직 화학 신경 근육 연구에 대 한 쥐 보컬 주름을 준비 하는 데 사용 하는 방법을 설명 합니다.

The purpose of this tutorial is to describe the preparation of the rat vocal fold for histochemical neuromuscular study. This protocol outlines procedures ...

이 프로토콜은 최적의 종단 및 단면 분석을 위해 랫드와 성대를 쉽게 준비할 수 있도록 합니다. 이 프로토콜은 냉동 절편 중 후두 추적을 활용하여 고유 후두 근육의 정확한 식별을 보장하고 조직 손실 가능성을 줄입니다. rant larynx는 발달, 노화, 질병 및 약리학적 제제에 대한 반응으로 구조적 및 기능적 신경근 후두 적응을 조사하기 위한 잘 정립된 모델입니다.이 시연은 성대의 갑상선 테노이드 근육에 초점을 맞추고 있지만, 이 방법론은 다른 고유 후두 근육에도 적용할 수 있습니다. 쥐의 후두를 해부하기 위해, 하악골에서 마누브리움까지 복부 목을 면도하고 노출된 부위를 알코올로 면봉으로 닦아 조직 표본의 털 오염을 방지한다. 쥐를 10배 배율의 해부 현미경 아래에 놓고 메스를 사용하여 기관이 노출될 때까지 목의 정중선을 절개합니다.집게와 날카로운 도구를 사용하여 정중선에서 복부 외인 후두 근육을 분리하고 세 번째 기관 고리에서 꼬리 기관을 절단합니다. 후두를 절제하려면 해부 가위를 사용하여 세 번째 기관 고리를 꼬리로 절개하고 설골을 상부로 절개합니다. 핀셋, 핀, 마이크로가위를 사용하여 후두에서 식도, 갑상선 및 외인성 후두 근육을 제거합니다.후방 크리코아리테노이드 근육 사이의 정중선을 랜드마크로 사용하여 마이크로가위를 사용하여 아리테노이드 사이의 후두를 등쪽으로 이등분합니다. 후두의 측벽을 고정하여 성대를 노출시키고 마이크로 가위를 사용하여 성대의 전방 코미셔너 사이에 있는 갑상선 연골의 정중선을 통해 조직을 복부로 이등분합니다. 그런 다음 PBS에서 각 헤밀라린두를 10초 동안 헹구고 작업 와이퍼로 조직을 섬세하게 건조시켜 동결 중 얼음 결정 형성을 줄입니다.헤밀라인두 조직을 고정하기 위해 4% 포름알데히드와 PBS가 함유된 원심분리 튜브에 샘플을 넣고 안와 쉐이커를 통해 분당 70회전으로 실온에서 1시간 동안 넣습니다. 배양이 끝나면 조직을 새 원심분리기 튜브로 옮기고 세척당 새 PBS에서 20분 동안 샘플을 세 번 헹굽니다. 마지막 세척 후 최대 18시간 동안 섭씨 4도에서 20%자당 5%글리세롤 용액이 들어 있는 새 원심분리 튜브로 조직을 옮깁니다.조직이 튜브 바닥으로 가라앉았을 때, 성대의 내측 표면이 성대의 바닥을 향하도록 하여 최적의 절단 온도 매체로 채워진 극저형 주형에 헤밀라린두를 넣습니다. 물에 잠긴 조직을 액체 질소로 둘러싸인 강철 비커에서 냉각된 이소펜탄으로 급속 동결하고 각 금형을

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

기술은 운동하는 동안 포유류의 뉴런의 생체내 생리적 반응을 수량과의 연결 형태, neurochemical 표현형 및 시냅스 microcircuitry와 신경 세포의 생리 신원을 확인하도록 설명되어 있습니다.

운동에 의해 변조된 뉴런의 생리, 형태학의 및 Neurochemical 특성화

합성 음성 접는 모델을 fabricating에 대한 방법론은 설명합니다. 모델은 실물 크기이며, 인간의 보컬 주름의 다층 구조를 모방. 결과는 모델 폐 압력에 비해 압력에 자체 진동과 인간의 보컬 폴드의 것과 유사 흐름 유발 진동 응답을 증명할 보여줍니다.

합성, 멀티 레이어, 셀프 진동 보컬 접어 모델 제작

출처: Andreatta, RD et. al., 삼투압 펌프 또는 직접 근육 주사를 사용한 피하 뉴로트로핀 4 주입은 노화된 쥐 후두 근육을 향상시킵니다. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 노화 관련 신경차단 및 신경근 접합부 감소에 의해 영향을 받는 후두 근육 기능을 회복하기 위해 노령 쥐 모델에 뉴로트로핀 4(NTF4) 주입을 보여줍니다. NTF4는 신경 재생을 유발하고 신경근 접합부 형성을 촉진하여 후두 기능 장애에 대한 치료 가능성을 강조합니다.

노령 쥐의 후두 신경 재생을 위한 뉴로트로핀 4 주입

후각 ensheathing 세포 (OECs)는 기본 후각 신경 세포의 성장을 허용 신경 능선 세포입니다. 이 특정 속성은 세포 이식에 사용할 수 있습니다. 우리는 여기에서 후두 신경 손상 모델에서 OECs의 사용을 기반 셀룰러 이식 모델을 제시한다.

말초 신경 손상 후 기능 회복을 평가하기 위해 후각 Ensheathing 세포의 이식

호흡 장애는 경추 척수 손상 후 사망의 주요 원인이다. 부분 자궁 경부 손상에 의해 유도 된 호흡의, 재생 가능한 정량화하고, 신뢰할 수있는 전임상 동물 모델을 갖는 것은 이후 호흡 및 비 호흡 신경 가소성을 이해하는 데 도움이 및 추정 복구 전략을 테스트 할 수 있습니다.

후 병변 호흡 신경 가소성을 연구하기 위해 자궁 경부 척수 손상의 생쥐 모델

여기에서 우리는 쥐 노화 후두 근육을 재구성하기 위해 전신적으로 그리고 직접적으로 뉴로 트로 핀 4 (NTF4)의 사용을 기술하는 프로토콜을 제시합니다.

삼투압 펌프 또는 직접적인 근육 주사를 이용한 피하 뉴로트로핀 4 주입으로 노화 후두 근육 강화

우리는 혀의 근육의 음색과 점탄성을 결정하기위한 마취 된 쥐 모델에서 수술 과정을 설명합니다. 절차는 hypoglossal 신경의 특정 자극과 수동 Lissajous 힘 / 변형 곡선의 근육에 적용이 포함됩니다.

혀의 기계적 및 점탄성 특성에 대한 생체 내 평가

이 프로토콜은 최적화된 마취 요법과 미세하게 조정된 내시경 조작 기술을 사용하여 호흡 및 삼키는 동안 후두의 클로즈업, 방해받지 않는 비디오 이미징을 허용하는 마우스와 쥐를 위한 연속 경구강 후두경 접근 방식을 설명합니다.

최소 침습적 쥐 후두경(Minimally Invasive Murine Laryngoscopy)은 호흡과 삼킴 중 후두 움직임을 클로즈업하여 촬영합니다.

본 연구에서는 랫트 다이어프램 모터 유닛 연결성을 정량화하기 위해 모터 유닛 수와 크기를 추정하는 in vivo 방법을 제시합니다. 이러한 기술에 대한 단계별 접근 방식에 대해 설명합니다.

Assessing Rat Diaphragm Motor Unit Connectivity Outcome Measures: as Quantitative Biomarkers of Phrenic Motor Neuron Degeneration and Compensation(쥐 다이어프램 운동 단위 연결성 결과 측정, 골격막 운동 뉴런 퇴행 및 보상의 정량적 바이오마커로서의 측정)

실험실 쥐 및 쥐의 초음파 발성(USV)은 음성 및 신경 기능 연구에 유용합니다. 이 프로토콜은 교미 관련 혼란 없이 식욕 유발 USV를 신뢰성 있게 유도하는 음식-보상 패러다임을 설명합니다. 동물의 조건화, 자극 제시, 기록, 음향 분석을 상세히 다루며, 정서-동기 및 두개내 감각 운동 기능을 재현 가능하게 연구할 수 있는 방법을 제공합니다.

실험실 쥐와 쥐에서 탐욕성 초음파 발성의 예상적 음식 보상 유도

학습하세요 쥐 후두의 신경근육 접합부 조직화학 분석을 위한 최적의 성대 표본 준비 방법을. 동결절단 기법을 활용하여 내재성 후두 근육을 정확히 식별하고 조직 손실을 최소화합니다.

신경 근육 분석을위한 쥐 보컬 폴드의 준비

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