Name: 신생아 쥐의 저산소증-허혈 중 연속 비디오 뇌전도 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: 배우세요 신생아 쥐의 저산소증-허혈 중 연속 비디오 뇌전도 기법을 통해 발작 전기생리학적 특성과 행동 상관관계를 분석하는 방법을. 이 기법은 신생아 발작 메커니즘 연구와 치료 전략 개발에 활용됩니다.

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우리는 다음과 같은 자금 출처를 인정: NIH NINDS – K08NS101122 (JB), R01NS040337 (JK), R01NS044370 (JK), 버지니아 의과 대학 (JB).

모든 동물 연구는 버지니아 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인되었다.
1. 전극 건물 / 케이블 건물
<ol><li>단극성 절연 스테인리스 스틸 와이어(0.005" 베어 직경, 0.008"코팅)를 사용하여 여성 소켓 커넥터(여성 리셉터클 커넥터 0.079)와 연결된 전극을 만듭니다.</li>
	<li>특수 맞춤형 케이블을 사용하여 동물을 앰프에 연결합니다.<ol>
<li>남성 4핀 커넥터(Male 커넥터 0.079")를 4채널 유니티 게인 어피던스 매칭 운영 앰프(op-amp)에 부착합니다. 9V 배터리에 연결되는 와이어에 10K 저항기를 부착합니다. op-amp에 연결되지 않은 접지 와이어는 배터리의 중간점 역할을 합니다.</li>
		<li>케이블의 한쪽 끝(AWG, 0.012" OD)을 op-amp에 연결하고 케이블의 다른 쪽 끝을 증폭기에 연결합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 전극 이식 수술
<ol><li>새끼 (산후 9 일)를 4-5 %의 이소플루란으로 마취하여 하향 흐름 후드에 있습니다. 시술시작 전에 부피바카인(0.02-0.05mL, 0.25% 피하국인 침전)으로 새끼를 주입한다.</li>
	<li>동물이 움직이지 않는 후 코 콘이있는 스테레오 전술 단계로 옮습니다. 머리를 안정적으로 유지하는 것이 부드럽기 때문에 이어 바의 역쪽을 사용합니다. 이 나이에 새끼는 이어 바의 뾰족한 끝을 사용하기 위해 완전히 발달 된 귀가 없습니다.</li>
	<li>이소플루란의 흐름을 거절하고 2.5-3 %로 유지합니다. 수술 시술 내내 강아지의 꾸준한 호흡을 주시하십시오. 꼬리를 꼬집어 통증 반응을 확인한 다음 절개를 진행합니다.</li>
	<li>베타딘과 알코올 (3 번갈아 요오드의 3 주기와 70 % 에탄올)와 두개골에 절개 영역을 살균. 절개 부위가 보이면 주변 신체 부위를 드레이프합니다.</li>
	<li>눈 위에서 두피 앞쪽 후방을 약간 열고 약 0.5cm의 피부를 후퇴시킵니다. 마우스 머리를 스테레오탁 스테이지에 재배치하여 피부가 두개골을 노출하는 바깥쪽으로 당겨지게 합니다.</li>
	<li>면봉을 사용하여 두개골에 과산화수소를 바르고 메스 블레이드를 사용하여 두개골을 깨끗하게 긁어냅니다. 두개골은 매우 부드럽습니다. 긁는 동안주의하십시오.</li>
	<li>접착제 1방울(약 50μL)을 적용하여 노출된 두개골 부위 주위에 퍼뜨려 어플리케이터를 사용합니다. 40s의 UV 광에 노출하여 접착제를 설정합니다.</li>
	<li>노출된 bregma를 참조로 사용하여 좌표를 측정합니다. 임플란트 전극은 해마의 CA1 영역에서 양자간 [-3.5 mm 도르살-벤탈(DV), ±2mm 내측-측면(ML), -1.75mm 딥(D)] 및 정수리 피질에서 양자간 [-1.22 mm DV, ±0.5mm ML, -1mm D] 및 전기전극7의 전기전극. 32 G 바늘을 사용하여 표시된 영역에 구멍을 만듭니다.</li>
	<li>두개골 표면에서 혈액을 청소합니다. 여성 소켓 커넥터에 부착된 낮은 전극은 스테레오탁스 암의 도움으로 뇌에 부착되어 치과 아크릴로 고정합니다. 뇌의 전극을 이식합니다. 소켓 커넥터 헤드셋은 치과 아크릴에 의해 함께 붙어 두개골 의 상단에 앉아있다.</li>
	<li>전극이 고정되면 케토프로펜(5 mg/kg)을 교차 부위에 피하한다. 새끼를 어머니와 함께 다시 놓습니다. 참고: 한 번에 하나씩 소개하는 대신 헤드셋이 있는 쓰레기의 절반을 어머니에게 한 번에 하나씩 소개합니다. 이렇게 하면 어머니가 강아지의 헤드셋을 손상시키는 것을 방지할 수 있습니다.</li>
</ol>3. EEG 설정 및 기록 (기준 / 사전 부상)
<ol><li>전극 이식 후 24 시간 의 회복 후, EEG 레코딩을위한 가열 (37 °C) 주문 제작 플렉시 글라스 챔버에 각 동물을 배치합니다. 이 챔버는 저산소챔버역할을 할 것이다.</li>
	<li>유연한 케이블(사용자 지정 제작 op-amp 케이블)을 통해 챔버의 새끼를 비디오-EEG 모니터링 시스템에 연결합니다. 참고: 헤드셋을 제자리에 두고 마우스는 자유롭게 이동하며 행동에 차이가 없습니다. 전극 전선에 부착되면, 새끼가 자유롭게 챔버 를 통해 이동할 수 있도록 여유의 적당한 양을 제공하기 위해 챔버 밧줄 내에서 와이어를 조정해야합니다.</li>
	<li>잔디 증폭기사용으로 1K 게인으로 1000Hz에서 EEG 데이터를 디지털화합니다. 나중에 소프트웨어(예: LabChart Pro)를 사용하여 EEG 신호(3-70Hz 사이의 대역 패스 필터)를 검토합니다.</li>
	<li>경동맥 결찰 절차에 대한 동물을 분리하기 전에 30 분 동안 부상 전 기준선 EEG를 기록합니다.</li>
</ol>4. 왼쪽 경동맥 결찰
<ol><li>새끼 (산후 10 일)를 아래쪽 흐름 후드에 4-5 %의 이소플루란으로 마취하고 수유 패드에 특별히 배치 된 설정에 배치합니다. 동물 척추를 배치하고 종이 테이프로 앞다리를 고정합니다.<ol>
<li>이소플루란의 흐름을 2-3%로 낮춥습니다. 통증 반응을 위해 꼬리를 꼬집고 시술 내내 호흡을 모니터링합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>베타딘과 알코올 (3 번의 요오드 및 70 % 에탄올)으로 목 왼쪽에 절개 영역 (하악과 쇄골 사이)을 살균합니다.</li>
	<li>미세 시저를 사용하여 목 의 왼쪽에 약 1cm 길이의 절개를합니다. 해부 현미경을 사용하여 피하 조직과 피부를 조심스럽게 철회하여 경동맥을 노출시킵니다. 미주 신경을 식별하기 위해주의 (동맥에 측면 실행) 섬세하게 분리하고 동맥에서 철회.</li>
	<li>마이크로포스를 사용하여 동맥 아래에 5cm 길이의 멸균 실크 봉합사를 실어 두어 보실. 이중 매듭봉합사를 동맥 주위에 묶어 흐름을 바칩니다.</li>
	<li>피하 조직과 피부를 다시 당겨 여분의 봉합사를 잘라 노출 된 동맥을 닫습니다. 수의사 결합을 사용하여 절개를 밀봉하십시오.</li>
	<li>온난화 매트리스에 놓인 실온챔버에 동물을 연속 EEG 모니터링에 다시 배치합니다. 챔버를 열지 않도록 강아지 코어 온도의 스팟 적외선 온도 검사를 받아. 저산소증 에 앞서 동물이 1 시간 동안 회복되도록 허용하십시오.</li>
</ol>5. EEG 및 저산소증
<ol><li>산소 모니터를 통해 챔버 내에서 FiO2 (영감받은 산소의 일부)를 지속적으로 모니터링합니다.</li>
	<li>챔버를 100% N2 의 60 L/min, 0.415 L/min으로 100% O2로 플러시합니다. 챔버의 산소 포화도가 12%에 도달하면 O2 흐름을 변경하지 않고 N2 흐름을 10L/min으로 줄입니다. 작은 조정으로 FiO2 를 8%에서 45분 동안 유지합니다.</li>
	<li>저산소증 노출 45분 후 FiO2 를 21%로 되돌리보시면 됩니다.</li>
	<li>새끼가 챔버에서 회복하고 2 시간 후 저산소증에 대한 EEG에 모니터링해야합니다.</li>
	<li>기록 기간이 완료된 후, EEG 레코딩에서 마우스를 분리하고 어머니에게 돌아갑니다.</li>
</ol>6. EEG 분석
<ol><li>LabChart Pro에서 비디오로 EEG 파일을 분석합니다. 눈을 멀게 한 연구원이 발작과 배경 패턴에 대한 EEG를 표시해야합니다17. 발작은 명확한 진화17을 가진 고주파 리듬 날카로운 파도 배출 (≥3x 기준선)으로 10 초 이상 지속되는 전기 전극 이벤트로 정의됩니다.</li>
	<li>두 번째 맹목적인 연구원이 합의를 위해 무작위로 표시된 이벤트를 검토하십시오.</li>
	<li>각 표시된 전극 이벤트에 대한 관련 비디오를 검토하고 신생아 설치류 행동 발작 점수16에 따라 분석합니다. 간단히 말해서, 이 점수는 0-6(심각한 강장제-클로닉 동작에 부동성)에 이르기까지 다양합니다. 발작 반학을 더 특성화하려면 측면(다초점/양자 운동 대 초점/일방적 대 혼합)에 대한 동작을 분석합니다.</li>
	<li>전원 분광기를 만듭니다. 1024개의 데이터 포인트 크기의 코신 벨 데이터 창으로 빠른 푸리에 변환을 사용합니다. 87.5%의 창 중첩을 통해 분광기에 부드러운 x축을 만듭니다. μV218로 전원을 표현합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Vasudevan, C., Levene, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+aetiology+of+neonatal+seizures%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Fetal+%26+Neonatal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and aetiology of neonatal seizures.</a> Seminars in Fetal & Neonatal Medicine. , (2013).</li>
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<li>Lewczuk, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EEG+and+behavior+patterns+during+experimental+status+epilepticus%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">EEG and behavior patterns during experimental status epilepticus.</a> Epilepsia. 59 (2), 369-380 (2017).</li>
<li>Wu, D., Martin, L. J., Northington, F. J., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+gradient+diffusion+MRI+reveals+unique+microstructural+information+in+normal+and+hypoxia-ischemia+injured+mouse+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Magnetic+Resonance+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oscillating gradient diffusion MRI reveals unique microstructural information in normal and hypoxia-ischemia injured mouse brains.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 72 (5), 1366-1374 (2014).</li>
</ol>

우리는 저산소 허혈성 발작 도중 신생아 마우스에 있는 지속적인 비디오 EEG 감시를 위한 모형을 제시했습니다. EEG와 함께 비디오 분석을 통해 발작 반학의 특성화를 허용합니다. EEG의 분석은 전력 분광 및 배경 진폭 분석의 추출을 허용합니다.
전극 배치 또는 부정확한 배치 중 부상이 결과에 크게 영향을 줄 수 있기 때문에 이 프로토콜에서는 전극의 정확하고 신중한 배치가 매우 중요합니다. 부상 전극 배치 중 출혈이나 부상이 드물지만 발생할 수 있기 때문에 부상 전전에 정상적인 기준선 EEG 활동의 평가가 가장 중요합니다. 둘째, 올바른 전극 배치를 확인하기 위해 적절한 배치에서 전극 트랙에 대해 뇌를 단면화하고 검사 할 수 있습니다. 또한, 그룹(개별적으로)에서 어머니에게 새끼를 돌려주지 못하면 전극 헤드셋이 손상되거나 새끼가 어머니에 의해 죽거나 방치될 수 있습니다.
이 방법의 한 가지 제한은 작은 신생아 뇌에서 깊이 전극 기...

저산소 허혈성 뇌병증 (HIE)은 매년 신생아 1000명 중 1.5명에 영향을 미치는 상태이며 신생아 발작의 가장 흔한 원인입니다1,2. 살아남은 유아는 뇌성 마비, 지적 장애 및 간질3,4,5와 같은 다양한 신경 장애의 위험이 있습니다.
동물 모델은 저산소증 허혈및 신생아 발작의 병리생리학을 이해하고 조사하는 데 중요한 역할을합니다6,7. 변형된 반누치 모델은 산후 10일째(p10)7,8에서 저산소증 허혈(HI)을 유도하는 데 사용된다. 이 시대의 마우스 새끼는 신경학적으로 대략 전체 용어 인간 neonate9로 번역합니다.
이 상해 모형과 함께 이용된 연속적인 비디오 뇌파학 (EEG) 감시는 신생아 저혈성 허혈성 발작의 추가 이해 그리고 특성화를 허용합니다. 이전 연구는 비디오 녹화, 제한된 EEG 녹음 및 원격 측정 EEG 기록 10,11,12,13,14,15,16을 포함하여 설치류의 신생아 발작을 분석하기 위한 다양한 방법을 사용했습니다. 다음 원고에서는 저산소증-허혈 중에 마우스 새끼로 연속 비디오 EEG를 기록하는 과정에 대해 자세히 설명합니다. 신생아 마우스 새끼에서 연속 비디오 EEG 모니터링을위한이 기술은 다양한 질병 및 발작 모델에 적용 될 수있다.

<table><tbody><tr><td>SURGERY</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ball Point Applicator</td><td>Metrex Research</td><td>8300-F</td><td>i-bond 애플리케이터</td></tr><tr><td>Cranioplast (Powder/Resin)</td><td>Coltene</td><td>H00383</td><td>Perm Reline/Power</td></tr><tr><td>I-Bond</td><td>Kulzer GmbH, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LOOK Silk Suture</td><td>Surgical Specialities Corporation</td><td>SP115</td><td>LOOK SP115 블랙 브레이드 실크 비흡수성 수술용 봉합</td></tr>사 <tr><td>RS-5168 Botvin 집게</td><td>Roboz 수술 기구</td><td>RS5168</td><td>수술/결찰용 집게</td></tr><tr><td>RS-5138 Graefe 집게</td><td>Roboz 수술 기구</td><td>RS5138</td><td>집게 수술/결찰용</td></tr><tr><td>집게 I-Bond</td><td>Blast Lite용 자외선 First Media BL778</td><td></td><td>UV 조명 I-bond</td></tr><tr><td>Vannas 미세 해부 가위용</td> <td>UV 조명Roboz 수술 기구</td><td>RS5618</td><td>결찰용 가위</td></tr><tr><td>, Vet Bond</td><td>3M Vetbond</td><td>1469SB</td><td>수의사 접착제</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><강한>저산소증</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>저산소성</td><td>Starr 생명 과학</td><td></td><td></td></tr><tr><td>산소 센서</td><td>, 의료 제품</td><td></td><td>, MiniOxI- 산소 분석기/저산소증 장비용 센서</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EEG RECORDING</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Female receptacle connector 0.079"</td><td>Mill-Max Manufacturing Corp</td><td>832-10-024-10-001000</td><td>Digikey</td></tr><tr><td>Grass Amplifier</td><td>Natus Neurology Incorporated</td><td></td><td>Grass Product</td></tr><tr><td>LabChart Pro</td><td>ADI Instruments</td><td></td><td>Software에서 주문 시스템을 실행하려면</td></tr><tr><td>Male Socket Connector 0.079 "</td><td>Mill-Max Manufacturing Corp</td><td>833-43-024-20-001000</td><td>Digikey</td></tr><tr><td>Operational</td><td>Amplifier Texas Instruments, Dallas, TX, USA</td><td>TLC2274CD TLC2274</td><td>Quad Low-Noise Rail-to Rail Operational</td></tr><tr><td>Amplifier Operational</td><td>Amplifier Texas Instruments, Dallas, TX, USA</td><td>TLC2272ACDR TLC2274</td><td>Quad Low-Noise Rail-to Rail 연산 증폭기</td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 와이어</td><td>AM 시스템</td><td>791400</td><td>0.005 "베어 / 0.008"코팅 100 피트</td></tr><tr><td>울트라 플렉시블 와이어</td><td>McMaster-Carr</td><td>9564T1</td><td>36 다양한 색상의 거즈 와이어</td></tr></tbody></table>

신생아 쥐의 저산소증-허혈 중 연속 비디오 뇌전도

Continuous Video Electroencephalogram during Hypoxia-Ischemia in Neonatal Mice

저산소증 허혈은 신생아 발작의 가장 흔한 원인입니다. 동물 모델은 신생아 발작과 저산소증 허혈의 기전과 생리학을 이해하는 데 중요합니다. 이 원고는 신생아 마우스에서 지속적인 비디오 뇌전도(EEG) 모니터링을 위한 방법을 설명하여 저산소증 허혈 중 발작을 감지하고 EEG 배경을 분석합니다. 비디오 및 EEG를 함께 사용하면 발작 반학에 대한 설명과 발작 확인이 가능합니다. 이 방법은 또한 실험 기간 동안 전력 분광 및 EEG 배경 패턴 동향을 분석할 수 있습니다. 이 저산소증 허혈 모델에서, 방법은 EEG 가 손상 전 과 부상 및 회복 중에 규범적 기준을 얻을 수 있도록 허용한다. 총 모니터링 시간은 새끼를 어머니와 4 시간 이상 분리할 수 없다는 데 의해 제한됩니다. 비록, 우리는이 원고에서 저산소 허혈성 발작의 모델을 사용 했지만, 신생아 비디오 EEG 모니터링을 위한 이 방법은 설치류에 있는 다양한 질병 및 포착 모형에 적용될 수 있었습니다.

발작 세미로지
신생아 저산소증 -허혈 노출은 마우스에서 일반화 및 초점 발작 모두에서 초래 (도 1A-C). 비디오 EEG 녹화를 통해 전극 결과는 비디오의 동작과 상관관계가 있습니다. 이러한 행동은 이전에 발표된 신생아 설치류 행동 발작 점수(BSS)16을 사용하여 득점되었다. BSS 외에도 동작이 초점/일방적, 양자 또는 혼합여부(그림 1B)인지에 따라 이벤트를 분류했습니다.
이 모델에서, 마우스는 일반적으로 발작 반학의 3 패턴을 전시: 1) 모순 사지의 연장과 결찰의 측면에 순환 반복적 인, 2) 몸 굴곡과 꼬리 결찰의 측면에 웅크리고 자세의 손실, 또는 3) 사지의 일방적 또는 양자 패들 (다양 한 심각도 및 길이)와 자세의 손...

본 원고는 저산소증-허혈을 앓고 있는 신생아 마우스의 다중 깊이 전극을 이용한 연속 비디오 EEG 레코딩방법을 설명합니다.

Hypoxia ischemia is the most common cause of neonatal seizures. Animal models are crucial for understanding the mechanisms and physiology underlying ...

저산소성 허혈성 뇌병증은 신생아 발작의 가장 흔한 원인입니다. 저산소성 허혈성 발작 및 지속적인 비디오 뇌파 검사 또는 EEG에 대한 이 마우스 모델은 신생아 발작에 대한 이해와 특성화를 심화하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술은 신생아 손상 모델에서 고품질 비디오 뇌파 기록 획득을 용이하게 하고 신생아 발작 메커니즘, 결과 및 치료 검사에 대한 향후 연구에 도움이 될 수 있습니다.절차를 시연하는 사람은 Pravin Wagley입니다. 내 연구실의 연구실 전문가. 전극 이식 수술용.마취된 출산 후 9일째 되는 날 마우스에서 통증 반사에 대한 반응 부족을 확인한 후, 마우스를 콧방울이 있는 입위 단계에 놓고 이어바의 뒷면을 사용하여 머리를 고정합니다. 두개골의 절개 부위를 베타인과 70% 에탄올 스크럽을 번갈아 가며 3회 소독하고 창공 드레이프를 사용하여 절개 부위를 유지하면서 마우스를 덮습니다. 눈 약간 위에서 두피 앞쪽 뒤쪽을 열고 피부의 약 50cm를 수축시킵니다.정위 단계에서 머리를 재배치하여 피부가 바깥쪽으로 당겨 두개골이 드러나도록 하고 면봉을 사용하여 과산화수소를 바릅니다. 메스 날을 사용하여 두개골을 조심스럽게 긁어냅니다. 그리고 뼈에 약 50마이크로리터의 접착제를 한 방울 떨어뜨립니다.어플리케이터를 사용하여 접착제를 두개골에 펴 바르고 접착제를 자외선 아래에 40초 동안 놓습니다. 접착제가 굳으면 노출된 브레그마를 기준으로 좌표를 측정합니다. 그리고 32게이지 바늘을 사용하여 해마의 CA1 영역에 양측으로, 두정엽 피질과 소뇌에서 양측으로 전극 구멍을 만듭니다.두개골 표면에서 혈액을 청소하고 정위 암을 사용하여 암 소켓 커넥터에 연결된 전극을 뇌로 내립니다. 각 전극을 뇌에 이식하고 치과용 아크릴로 전극을 제자리에 고정합니다. 헤드셋을 치과용 아크릴로 두개골에 붙입니다.각 강아지에게 케토프로펜 1kg당 5mg을 피하주사합니다. 모든 전극이 새끼의 절반 이상에 고정되면 새끼를 어미에게 돌려줍니다. 전극 이식 후 24시간 후에 EEG 기록을 위해 각 동물을 섭씨 37도의 맞춤형 플렉시글라스 챔버에 넣고 유연한 맞춤형 연산 증폭기 케이블을 사용하여 강아지를 비디오 EEG 모니터링 시스템에 연결합니다.다중 채널 차동 증폭기를 사용하여 1kg 이득으로 1000Hz에서 EEG 데이터를 디지털화하고 적절한 분석 소프트웨어에서 EEG 신호를 검토합니다. 그런 다음 경동맥 소송 절차를 위해 동물을 분리하기 전에 30분 동안 부상 전 기준선 EEG를 기록합니다. 기준선 EEG 데이터를 기록한 후, 시연된 바와 같이 베타 인과 에탄올로 목 왼쪽의 하악골과 쇄골 사이의 피부를 살균합니다.그리고 목 왼쪽을 약 1cm 절개합니다. 강아지를 해부 현미경 아래에 놓고 피하 조직과 피부를 조심스럽게 집어넣어 경동맥을 노출시킵니다. 5cm 길이의 멸균 실크 봉합사 조각을 동맥 아래에 놓습니다.미주신경을 확인하고 동맥에서 신경을 섬세하게 분리하고 수축시킵니다. 동맥 아래에만 오도록 봉합사를 움직입니다. 미주신경을 확인한 후 동맥에서 신경을 섬세하게 분리하고 수축시킨 다음 마이크로 집게를 사용하여 동맥 아래에 5cm 길이의 멸균 실크 봉합사를 꿰매십시오.동맥 주위에 이중 매듭 봉합사를 묶어 흐름을 막고 과도한 봉합사를 잘라냅니다. 노출된 동맥 위의 피하 조직과 피부를 교체하고 Vetbond를 사용하여 절개 부위를 봉합합니다. 그런 다음 동물을 실온의 챔버에 다시 놓고 따뜻한 매트리스에 놓고 강아지 코어 온도의 현장 적외선 온도 검사를 수행하여 챔버가 열리지 않도록 합니다.지속적인 흡기 산소 모니터링으로 새끼가 1시간 동안 회복할 때까지 기다린 후 분당 60리터의 100% 질소와 분당 0.415리터의 100% 산소로 챔버를 세척합니다. 챔버의 산소 포화도가 12%에 도달하면 산소 흐름을 변경하지 않고 질소 흐름을 분당 10리터로 줄입니다. 필요에 따라 조금씩 조정하고 45분 동안 흡기 산소 분율을 8%로 유지합니다.저산소증에 노출된 지 45분 후, 흡기 산소의 비율을 21%로 되돌리고 새끼가 2시간 동안 EEG 모니터링을 통해 챔버에서 회복할 수 있도록 합니다. 기록 기간이 끝나면 EEG 시스템에서 마우스를 분리하고 새끼를 어미에게 돌려줍니다. 비디오 EEG 녹화를 통해 전기 그래픽 결과를 비디오의 동작과 연관시킬 수 있습니다.이 모델에서 관찰되는 대부분의 사건은 국소적인 일방적 또는 혼합된 행동과 관련이 있습니다. 저산소 기간 동안 일부 생쥐는 일반적으로 비강박적 발작 활동을 나타내며, 이 기간 동안 새끼는 EEG에서 지속적인 발작 활동으로 움직일 수 없습니다. 이 분석에서 기준선 활동은 P 10 새끼 쥐에서 앞서 설명한 배경과 유사했습니다.소송 후 그리고 저산소증이 시작되기 전에, 일부 생쥐는 경련성 발작을 보였다. 저산소증 유도 후, EEG의 배경 진폭이 감소했습니다. 그리고 스파이크 파 방전의 간헐적 인 폭발이 보였고 진압이 뒤따랐습니다.생쥐는 억제된 배경에서 리드미컬한 스파이크 파동 방전으로 나타나는 전기 발작을 보였으며, 이는 폴리 스파이크 파와 함께 더 복잡하고 빈번하게 진행되었습니다. 저산소증 동안, 파워 스펙트로그램 분석은 허혈성 반구와 반대쪽 반구 사이의 비대칭에 대해 주목할 만합니다. 허혈성 반구는 버스트 억제 패턴을 나타내고 반대쪽 반구는 억제된 배경을 나타냅니다.재산소화 및 회복 동안, 생쥐의 부분 집합은 기록 기간의 나머지 기간 동안 계속해서 발작을 일으킵니다. EEG 배경은 저산소증 후 기준선에 비해 억제되며 저산소증 후 기록 기간 동안 점진적인 회복이 관찰됩니다. 신생아 강아지와 함께 일할 때는 정확성이 핵심입니다.또한 수술 후 새끼를 어미와 함께 그룹으로 다시 배치하는 데 특별한 주의를 기울여야 합니다. 비디오 뇌파 검사는 조직 병리학, 영상 및 행동과 함께 신생아 강아지에서 신생아 발작이 부상 수술 및 행동 결과에 미치는 영향을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

hypoxic - 허혈성 뇌 손상에 대한 출생 후의 쥐 모델은 인간의 신생아 hypoxic 허혈성 뇌증 (히에)의 잘 설립 모델입니다. 이 문서에서는, 우리는 포스트 나탈 쥐 새끼의 히에의 모델을 설명합니다.

Perinatal 국소 빈혈의 Hypoxic 허혈성 뇌증 모델

대형 동물 모델은 신생아 질식의 생리학과 약리학의 시험에서 좋은 병진 값을 가진다. 신생아 piglets를 사용하여, 우리는 조직과 지역 혈류 역학, 생화학 및 pathologic 경로와 상관 관계가있는 산소 수송을 공부의 장점을 가지고 신생아 질식을 시뮬레이션 할 수있는 실험 프로토콜을 개발합니다.

신생아 질식의 돼지 모델

이 비디오는 신생아 저산소성-허혈성 뇌 손상을 연구하기 위한 마우스 모델을 만드는 절차를 보여줍니다. 외과적으로 허혈을 유도하고 동물에게 저산소증을 가하여 뇌 손상을 악화시키는 단계를 설명합니다. 마지막으로, 결과로 생성된 뇌 병변을 평가하는 방법을 보여주어 마우스 모델이 추가 과학적 조사를 위해 준비되었는지 확인합니다.

신생아 저산소성-허혈성 뇌 손상의 마우스 모델 확립

출처: Ouyang, Y., et al. 마우스 뇌 저산소증-허혈 중 동시 PET/MRI 영상. J. Vis. Exp. (2015)이 비디오는 동시 양전자 방출 단층 촬영(PET) 및 자기 공명 영상(MRI)을 통해 뇌 저산소증 손상을 평가하는 기술을 보여줍니다. 마취된 쥐는 총경동맥(CCA) 결찰술을 받아 한쪽 뇌 반구로 가는 혈류를 감소시키고 저산소증으로 인한 손상에 걸리기 쉽습니다. PET 및 MRI 영상은 저산소증 중 포도당 대사 및 구조적 변화를 평가합니다. MRI는 제한된 수분 확산을 감지하는 반면, PET는 포도당 흡수 감소를 나타내어 저산소증으로 인한 세포 스트레스 및 대사 장애를 나타냅니다.

마우스 모델에서 뇌 저산소증-허혈에 의해 유도된 뇌 손상 이미징

주산기 질식에 따른 저산소성 허혈성 뇌병증은 동물 모델을 사용하여 연구할 수 있습니다. 우리는 신생아 저산소성-허혈성 뇌병증의 새끼 돼지 모델을 확립하는 데 필요한 절차를 보여줍니다.

신생아 저산소 - 허혈성 뇌증의 돼지 모델

여기에서는 인간 질병의 신생아 설치류 모델에서 뇌파(EEG)를 위한 무선 지원 기술의 사용을 보여줍니다. 원격 측정을 사용하면 번거로운 연결이 없으므로 자연스러운 동작이 가능합니다.

신기원 무선 송신기 시스템을 사용하여 인간의 질병의 작은 설치류 모델에서 장기 연속 뇌파 모니터링

우리는 출생 후 하루에 일방적인 경 동맥 폐색을 수행 7-10 CD-1 신생아 hypoxic-허 혈 성 (HI) 모델을 만드는 새끼 마우스와 뇌 손상의 영향을 조사. 우리는 운영 되지 않은 정상 쥐에 비해 이러한 마우스 neurobehavioral 함수 공부.

신생아 Hypoxic-허 혈 성 뇌 손상의 마우스 모델에서 Neurobehavioral 평가

여기, 선물이 두뇌를 기록 하 고 동시 비디오를 사용 하 여 마우스에 바이오 신호를 심장에 프로토콜 electroencephalography (뇌 파), 그리고 심전도 (ECG). 우리는 또한 발작, 뇌 파 스펙트럼 전력, 심장 기능, 그리고 심장 박동의 변화에 대 한 결과 뇌 파 ECG 기록 분석 하는 방법을 설명 합니다.

동시 비디오-뇌 파-ECG 모니터링 Neurocardiac 부전 간 질 마우스 모델에서을 식별 하

여기서, 우리는 마취제의 사용을 필요로하지 않는 초기 산후 마우스에 최적화 된 비침습적 전기 장기 (ECG) 프로토콜을 제시한다.

주산기 마우스의 비침습적 전기 검사

본 프로토콜은 7일령 신생아 마우스에서 좌심실 형태, 기능, 및 관상동맥 혈류의 심초음파학적 평가를 기술한다.

신생아 마우스의 좌심실 구조, 기능 및 관상 동맥 흐름의 심 초음파 특성

배우세요 신생아 쥐의 저산소증-허혈 중 연속 비디오 뇌전도 기법을 통해 발작 전기생리학적 특성과 행동 상관관계를 분석하는 방법을. 이 기법은 신생아 발작 메커니즘 연구와 치료 전략 개발에 활용됩니다.

신생아 쥐의 저산소증-허혈 중 연속 비디오 뇌전도

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