Name: 허혈성 신장 손상 마우스 모델의 신장에서 MicroRNA에 대한 정량적 검출 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: 학습하세요 허혈성 신장 손상 마우스 모델에서 정량적 실시간 PCR을 이용한 microRNA 검출 방법을. 이 프로토콜은 급성 신장 손상 바이오마커 연구에 활용됩니다.

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</ol>

후<table><tbody><tr><td>크 없는 벤트 팁 테이퍼 핀셋</td> 나<td>츠메 제작소</td><td>MA-47</td><td></td></tr><tr><td>버퍼 RLT</td><td>Qiagen</td><td>79216</td><td>워시 버퍼 1</td></tr><tr><td>버퍼 RWT</td><td>Qiagen</td><td>1067933</td><td>워시 버퍼 2</td></tr><tr><td>C57B6 마우스</td><td>SLC</td><td>치</td>아 첨부 겸자 할당 없음 <td></td></tr> 나<tr><td></td><td>츠메 제작소</td><td>MA-49</td><td></td></tr><tr><td>치아 없음 겸자</td><td>나츠메 제작소</td><td>MA-48-1</td><td></td></tr><tr><td>지혈 클립</td><td>나츠메 제작소</td><td>KN&-minus; 353</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optical qRT-PCR용 96웰 반응 플레이트</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4316813</td><td>96웰 반응 플레이트</td></tr><tr><td>MicroAmp 광학 접착 필름</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>96웰 반응 플레이트용 4311971 접착 필름</td></tr><tr><td>miRNA-132-3p 프라이머</td><td>Qiagen</td><td>MS00003458</td><td>5'UAACAGUCUACAGCCAUGGUCG</td></tr><tr><td>miRNA-17-5p 프라이머</td><td>Qiagen</td><td>MS00029274</td><td>5'CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG</td></tr><tr><td>miRNA-18a-5p 프라이머</td><td>Qiagen</td><td>MS00031514</td><td>5'UAAGGUGCAUCUAGUGCAGAUAG</td></tr><tr><td>miRNA-212-3p 프라이머</td><td>Qiagen</td><td>MS00003815</td><td>5'UAACAGUCUCCAGUCACGGCC</td></tr><tr><td>miRNA-21a-5p 프라이머</td><td>Qiagen</td><td>MS00009079</td><td>5'UAGCUUAUCAUGAUGUUGA</td></tr><tr><td>miRNA-223-3p 프라이머</td><td>Qiagen</td><td>MS00003871</td><td>5'UGUCAGUUUGUCAAAUACCCCA</td></tr><tr><td>miRNA-574-5p 프라이머</td><td>Qiagen</td><td>MS00043617</td><td>5'UGAGUGUGUGUGUGAGUGUGUGU</td></tr><tr><td>miRNeasy Mini 키트</td><td>Qiagen</td><td>217004</td><td>실리카 멤브레인 기반 스핀 컬럼</td></tr><tr><td>miScript II RT 키트</td><td>Qiagen</td><td>218161</td><td></td></tr><tr><td>miScript SYBR Green PCR 키트</td><td>Qiagen</td><td>218073</td><td></td></tr><tr><td>QIA 분쇄기</td><td>Qiagen</td><td>마이크로 원심분리기 스핀 컬럼의</td> <td>79654</td> 바이오폴리머 파쇄 시스템</tr>, <tr><td>QIAzol 용해 시약</td>, <td>Qiagen</td><td>79306</td><td>페놀/구아니딘 기반 용해 시약</td></tr>, <tr><td>QuantStudio 12K Flex Flex Real-Time PCR 시스템</td><td>, Thermo Fisher Scientific</td><td>4472380</td><td>실시간 PCR 기기</td></tr>, <tr><td>QuantStudio 12K Flex 소프트웨어 버전 1.2.1.</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>4472380</td><td>실시간 PCR 기기 소프트웨어</td></tr><tr><td>RNU6-2 프라이머</td><td>Qiagen</td><td>MS00033740</td><td>공개 미</td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>나츠메 제작소</td><td>B-2</td><td></td></tr><tr><td>혈관 클립 어플라이어</td><td>VITALITEC</td><td>1621420</td><td></td></tr></tbody></table>

허혈성 신장 손상 마우스 모델의 신장에서 microrna에 대한 정량적 검출 방법

A Quantitative Detection Method for MicroRNAs in the Kidney of an Ischemic Kidney Injury Mouse Model

여기서, AKI 마우스의 miRNA 발현 프로파일을 조사하였다. miRNA 발현 프로파일은 마우스의 다양한 장기 및 조직에서 조사되었습니다. MiRNA는 중요한 전사 후 조절자이며 현재 AKI를 포함한 다양한 질병의 특성화에서 광범위하게 연구되고 있습니다. MiRNA는 병리학적 상태를 밝히고 AKI12 치료에 적용할 수 있는 잠재력이 있습니다. AKI의 주요 원인은 IRI, 신독성 모욕 및 패혈증입니다. 신장의 IRI는 AKI 발병의 주요 위험 요인 중 하나입니다. 수많은 miRNA가 AKI13에 관여하는 것으로 보고되었습니다.
이 연구는 여기에 설명된 프로토콜을 사용하여 패혈증 및 IRI 모델에서 일반적으로 변경되는 miRNA를 조사했습니다. 마이크로어레이 분석에 의해 AKI 마우스의 신장에서 상향 조절되는 것으로 나타난 17개의 miRNA를 선정하고, 인간에서 발현되는 것으로 보고된 이러한 ...

허혈성 신장 손상 마우스 모델의 신장에서 MicroRNA에 대한 정량적 검출 방법

MicroRNAs (miRNAs) are involved in various disease states and are effective biomarkers for the early diagnosis of diseases and treatment in mice. However, ...

AKI에서 마이크로RNA의 발현 변경은 바이오마커 및 치료에 유용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 간단하며 실험실 간에 일정한 결과를 얻습니다. 신장의 IRI는 AKI의 주요 위험 요소 중 하나입니다. IRI에 의해 변경된 microRNA를 정량화하면 진단으로 이어집니다. 신장 샘플에서 정제된 MicroRNA는 다른 시스템에 적용됩니다. 시술 전반에 걸쳐 저체온증, 장 보습 및 마취 깊이를 주의 깊게 모니터링하십시오. 익숙해져야 할 수동 기술이 많기 때문입니다.[내레이터] 발가락 꼬집기에 반응이 없는 것을 확인한 후, 마취된 마우스를 온열 수술용 패드에 누운 자세로 놓는다. 정중선 복부 절개를 한 후 PBS를 적신 면봉을 사용하여 장을 추가 복강 왼쪽으로 부드럽게 밀어 오른쪽 신장과 요관을 노출시키고 각진 겸자를 사용하여 오른쪽 요관을 들어 올립니다. 4-0 실크 편조 봉합사로 요관을 두 곳에서 결찰하고 신장에 더 가까운 봉합사에 더 긴 끈을 남기고 봉합사 사이를 절단합니다. 남은 봉합사를 조심스럽게 잡고 신장을 따라 결합 조직과 지방을 직설적으로 해부하고 오른쪽 신장에 혈액을 공급하는 신장 동맥이나 정맥이 아닌 혈관을 식별합니다. 혈관을 결찰하고 오른쪽 신장이 충분히 분리되면 신장 정맥과 동맥을 결찰합니다. PBS를 적신 면봉을 사용하여 장을 추가 복강의 오른쪽으로 부드럽게 밀어 왼쪽 신장을 노출시키고 축축한 드레이프로 장을 덮습니다. 시연된 대로 왼쪽 신장을 준비한 후 신장에서 1cm 떨어진 곳에 신장 동맥과 정맥을 고정하여 왼쪽 신장 허혈을 유발합니다. 성공적인 허혈은 신장 조직이 점진적으로 균일하게 어두워짐에 의해 시각적으로 확인할 수 있습니다. 허혈이 확인되면 장이 뒤틀리지 않도록 주의하면서 장 조직을 복강으로 되돌리고 복부 피부를 일시적으로 닫고 드레이프합니다. 25-45분 후 클램프를 제거하고 혈류 재관류와 신장 색상이 개선되는지 확인합니다. 장이 뒤틀리지 않았는지 확인한 후 복강내 PBS를 주입하고 4-0 나일론 봉합사를 사용하여 복부 근육과 피부를 2층으로 봉합합니다. 허혈성 손상 유도 24시간 후 정중선 절개를 다시 열고 27게이지 바늘을 사용하여 하대정맥에서 혈액을 채취합니다. 흉벽을 정중선 절개하고 좌심실에 23게이지 바늘을 삽입합니다. 바늘로의 역류를 확인한 후 간 우엽을 절개하고 PBS 20ml를 주입합니다. 간이 빨간색에서 분홍색으로 변하여 충분한 혈액이 배출되었음을 확인합니다. 집게와 가위를 사용하여 왼쪽 신장을 제거하고 절제된 조직을 PBS 접시에 씻습니다. 그런 다음 겸자를 사용하여 신장을 건조시키지 않고 신장 근막을 제거하고 수직 정중선을 따라 신장을 반으로 자릅니다. 마이크로RNA 정제를 위해 냉동 신장 샘플 30mg을 700마이크로리터의 페닐구아니딘 기반 용해 시약이 들어 있는 유리 균질화기에 얼음 위에 넣고 유봉을 천천히 반복적으로 비틀어 샘플을 완전히 균질화합니다. 조직이 완전히 해리되면 균질화된 용해물을 2밀리리터 수집 튜브의 마이크로 원심분리기 스핀 컬럼의 바이오폴리머 파쇄 시스템으로 옮기고 원심분리를 통해 샘플을 튜브 바닥으로 수집합니다. 용해물을 140마이크로리터의 클로로포름이 들어 있는 새로운 마이크로 원심분리기 튜브로 옮기고 캡을 단단히 조인 상태에서 15초 동안 튜브를 반전시켜 혼합합니다. 실온에서 2-3분 동안 배양한 후, 원심분리에 의해 샘플을 침전시키고 펠릿을 방해하지 않고 100% 에탄올 부피의 1.5배를 포함하는 새로운 마이크로 원심분리기 튜브로 상청액을 옮깁니다. 700마이크로리터의 샘플을 2밀리리터 수집 튜브의 실리카 멤브레인 기반 스핀 컬럼으로 옮기기 전에 와류하여 샘플을 5초 동안 혼합합니다. 짧은 원심분리 후, 플로우 스루를 버리고 세척당 새로운 실리카 멤브레인 기반 스핀 컬럼에서 500마이크로리터의 세척 완충액 2로 샘플을 두 번 세척하여 미량의 염분을 제거합니다. 두 번째 세척 후, 실리카 멤브레인 기반 스핀 컬럼을 다시 원심분리하고 플로우 스루를 버린 후 컬럼을 새로운 1.5밀리리터 수집 튜브로 옮깁니다. 25마이크로리터의 RNase가 없는 물을 컬럼에 추가하고 샘플을 실온에서 5분 동안 배양한 후 샘플을 다시 원심분리합니다. 그런 다음 25마이크로리터 마이크로RNA 함유 엘루아이트를 새로운 마이크로 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 본 연구에서는 급성 신장 손상 마우스의 신장에서 상향 조절된 인간에서 발현되는 7개의 마이크로RNA를 조사했습니다. 입증된 바와 같이 6개의 마이크로RNA의 수준은 정량적 실시간 PCR을 사용하여 모의 마우스에 비해 허혈 재관류 손상 마우스의 신장에서 유의하게 증가한 것으로 나타났습니다. 혈청 혈중 요소, 질소 및 크레아티닌 수치와 급성 세뇨관 괴사도 유의하게 상향 조절되었습니다.IRI 진단 및 AKI의 특정 치료를 위한 바이오마커는 아직 불분명합니다. microRNA 연구가 발전하여 AKI의 진단과 치료에 기여하기를 바랍니다.

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연구

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의학

이 문서는 포르말린 고정 신장 섹션의 마이크로 RNA 발현 colormetric 검출에 최적화의 현장 하이브리드 프로토콜을 설명합니다.

마이크로 RNA<em&gt; 현장에서</em&gt; 포르말린 고정 신장 조직에 대한 하이브리드

여기에 설명된 신허혈증 재관류 손상의 마우스 모델은 급성 신장 손상을 초래하는 허혈증을 유도하기 위해 제어 조직을 제공하는 오른쪽 신장 절제술과 왼쪽 신장 척추를 고정하는 것으로 구성됩니다. 이 모델은 한 번의 절개를 통해 모든 단계를 수행하는 정중선 개복술 접근법을 사용합니다.

신장 허혈 재관류 상해 : 상해의 마우스 모델 및 재생

이 프로토콜에는 전체 신장 작업 업 사 질병 마우스 모델에서을 수행 하는 설명 합니다. 사 병의 모든 마우스 모델에 적용할 수 있는 사 기능의 자세한 기능, 구조, 및 기계적 분석 방법 허용.

신장 기능 사 질병 마우스 모델에서의 평가

우리는 양적 역전사 중합효소 연쇄 반응에 의해 일방적인 요원 방해(UUO)를 가진 마우스의 신장에서 마이크로RNA 발현을 평가하는 방법을 설명한다. 이 프로토콜은 UUO를 가진 마우스에 있는 신장 microRNA 발현 단면도및 그밖 병리학 조건의 맥락에서 공부하기 에 적합합니다.

일방적 인 요원 방해와 마우스 신장에서 microRNA 표현의 정량적 실시간 PCR 평가

microRNA는 IgA 신병증의 발병기전에 관여합니다. 우리는 IgA 신병증 마우스 모델(HIGA 마우스)의 신장에서 microRNA 발현 수준을 검출하기 위한 신뢰할 수 있는 방법을 개발했습니다. 이 새로운 방법은 IgA 신병증에 대한 miRNA의 관여를 확인하는 것을 용이하게 할 것입니다.

면역글로불린 A 신병성 마우스의 신장에서 MicroRNA 발현 검출

우리는 정량적 역전사 중합 효소 연쇄 반응에 의해 연령 의존적 신장 손상이있는 마우스의 신장 및 혈청에서 microRNA 발현을 평가하는 방법을 제시합니다.

연령 의존적 신장 장애가 있는 마우스의 신장 및 혈청에서 MicroRNA 발현의 정량적 실시간 중합효소 연쇄반응 평가

여기에서 우리는 여러 신장 질환 마우스 모델에서 비바이러스 벡터 및 폴리에틸렌이민 나노입자의 꼬리 정맥 주입을 통해 외인성 인공 합성 miRNA 모방체를 신장에 전달합니다. 이로 인해 신장에서 표적 miRNA가 크게 과발현되어 여러 마우스 모델에서 신장 질환의 진행이 억제되었습니다.

여러 신장 질환 마우스 모델에서 폴리에틸레니민 나노입자를 사용하여 신장에 외인성 인공 합성 miRNA 모방체의 전달

본 글은 단측 신장 IRI를 이용한 허혈성 CKD 모델을 제시하고, 샘플 채취 하루 전에는 반대쪽 신장 절제술을 시행합니다; 이 프로토콜은 혈청 기반 기능 평가, 높은 생존율, 그리고 28일과 42일간의 CKD 병리 재현 가능성을 가능하게 하여, 기전 및 중재적 연구를 위한 다재다능한 플랫폼을 제공합니다.

신장 허혈/재관류 손상에 의해 유도된 급성 신장 질환에서 만성 신장 질환으로의 전환 마우스 모델

마우스에서 오른쪽 신장 절제 후 일측 신장 허혈-재관류 시 신장 미세혈관 혈류 변화를 모니터링하기 위해 레이저 스펙클 대조 영상 시스템을 사용하였습니다.

쥐의 신장 허혈-재관류 손상 중 레이저 반점 조영 영상으로 모니터링되는 미세혈관 관류

절연 아일 레츠의 이식은 제 1 형 당뇨병에 대한 잠재적인 치료로 제안되었습니다. 여기 마우스 pancreata에서 아일 레츠를 분리하고 신장의 subcapsular 공간을 이식하는 방법을 설명합니다.

Murine 아일릿 절연 및 Subcapsular 신장 이식을위한 방법

학습하세요 허혈성 신장 손상 마우스 모델에서 정량적 실시간 PCR을 이용한 microRNA 검출 방법을. 이 프로토콜은 급성 신장 손상 바이오마커 연구에 활용됩니다.

허혈성 신장 손상 마우스 모델의 신장에서 MicroRNA에 대한 정량적 검출 방법

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