Name: Neisseria meningitidis 유도만능줄기세포 유래 뇌내피세포의 감염 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 12 s
Description: 배우세요 iPSC 유래 뇌내피세포를 이용하여 혈액-뇌장벽에서 Neisseria meningitidis와 숙주-병원체 상호작용을 연구하는 방법을. 이 인간 유래 모델은 중추신경계 감염 메커니즘 규명에 활용됩니다.

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L.M.E.는 A.S-U.에 수여된 "인간 병원체에 의한 미생물 감염 연구를 위한 3D 조직 모델"이라는 제목의 DFG 연구 교육 프로그램 GRK2157 지원을 받습니다. B.J.K.는 알렉산더 폰 훔볼트 재단(Alexander von Humboldt Foundation)의 박사후 연구원의 지원을 받고 있습니다. 또한, 문화 분야에서 iPSC-BEC를 생성하는 데 기술적 도움을 준 Lena Wolter에게 감사의 뜻을 전합니다.

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저자는 공개할 것이 없습니다.

시험관 내 1차 및 불멸화된 인간 BEC는 강력한 장벽 표현형이 부족한 경향이 있기 때문에 BEC와 BBB를 모델링하는 데 어려움이 있었습니다. 인간 줄기 세포 기술의 출현으로 내피 마커, 단단한 접합 발현, 장벽 특성, 다른 CNS 세포 유형에 대한 반응 및 기능적 유출 수송체와 같은 예상되는 특징적인 BBB 표현형을 유지하는 iPSC 유래 BEC 유사 세포의 생성이 가능해졌습니다 12,13,14,15,22, 24 , 25. 이를 통해 연구자들은 in vivo BEC를 밀접하게 모방...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/61400">Neisseria meningitidis Infection of Induced Pluripotent Stem-Cell Derived Brain Endothelial Cells Larvae</a>. The Authors section was updated from:
Leo M. Endres1 
Alexandra Schubert-Unkmeir1 
Brandon J. Kim1,2 
1Institute for Hygiene and Microbiology, University of W&#252;rzburg 
2Department of Biological Sciences, University of Alabama
to:
Leo M. Endres1 
Sarah F. Hathcock2 
Alexandra Schubert-Unkmeir1 
Brandon J. Kim1,2 
1Institute for Hygiene and Microbiology, University of W&#252;rzburg 
2Department of Biological Sciences, University of Alabama

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/61400">Neisseria meningitidis Infection of Induced Pluripotent Stem-Cell Derived Brain Endothelial Cells Larvae</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Neisseria meningitidis Infection of Induced Pluripotent Stem-Cell Derived Brain Endothelial Cells

혈액-뇌 장벽(BBB)과 수막 혈액-CSF 장벽(mBCSFB)은 중추신경계(CNS)에서 순환을 분리하는 매우 단단한 세포 장벽이며 주로 고도로 전문화된 뇌 내피 세포(BEC)로 구성되어 있습니다1,2. BEC는 뇌 안팎의 영양소와 노폐물을 조절하고 많은 독소, 약물 및 병원균을 배제하여 적절한 뇌 항상성을 유지합니다 1,2. 세균성 뇌수막염은 혈액 매개 박테리아가 BEC에 의해 형성된 장벽과 상호 작용하고 이를 뚫고 들어가 염증을 일으킬 때 발생합니다. Neisseria meningitidis(Nm, 수막구균)는 건강한 사람의 10-10%의 비염을 집락화하는 그람 음성 박테리아이지만 경우에 따라 심각한 전신 질환을 유발할 수 있습니다3. 영향을 받은 개인에서 Nm은 자반증을 유발할 수 있는 혈류에 접근할 수 있을 뿐만 아니라 BEC를 관통하여 뇌수막염을 유발하는 중추신경계에 접근할 수 있다3. Nm은 전 세계적으로 세균성 뇌수막염의 주요 원인이며, 백신 접종 노력에도 불구하고 여전히 뇌수막염의 주요 원인이다4. 항생제 치료와 같은 현대 의학적 개입으로 이러한 질환은 생존할 수 있게 되었지만, 뇌수막염에 걸린 사람들은 종종 영구적인 신경학적 손상을 입게 된다 5,6.
이전 연구에서는 Nm-BEC 상호 작용에 기여하는 박테리아 요인 및 숙주 신호 전달을 확인했습니다 7,8,9,10,11. CD147과 같은 수용체뿐만 아니라 불투명도 단백질 Opc 및 type-IV pili와 같은 확인된 부착 및 침습은 다양한 BEC 모델에서 시험관 내에서 수행되었지만 이러한 모델에는 BBB 특성을 정의하는 많은 것이 부족합니다 7,9,11,12. Nm-BEC 상호 작용에 대한 완전한 이해는 부분적으로 in vivo 모델을 활용할 수 없고, 불완전한 백신 보호 및 in vitro에서 강력한 인간 BEC 모델의 부족으로 인해 여전히 어렵습니다.
시험관 내 hBEC를 모델링하는 것은 BEC의 고유한 특성으로 인해 어려운 일이었습니다. 말초 내피 세포와 비교하여, BEC는 복잡한 밀착 접합부로 인한 높은 경내피 전기 저항(trans-endothelial electrical resistance, TEER)과 같은 장벽 특성을 강화하는 다수의 표현형을 가지고 있다12. 일단 뇌 미세환경으로부터 제거되면, BEC는 그들의 장벽 특성을 빠르게 상실하여 약한 장벽만을 형성하는 1차 또는 불멸화된 시험관 내 모델의 유용성을 제한한다12,13. Nm 감염의 인체 특이성, 강력한 in vivo 모델의 부족, in vitro에서 인간 BEC를 모델링하는 데 어려움이 결합되어 Nm과 BEC 간의 복잡한 숙주-병원체 상호 작용을 이해하기 위한 더 나은 모델이 필요합니다. 최근에는 모델 인간 유도만능줄기세포(iPSC) 기술을 사용하여 생체 내 BEC를 더 잘 모방하는 iPSC로부터 BEC 유사 세포를 유도했습니다 12,13,14,15. iPSC-BEC는 인간에서 유래하고, 쉽게 확장할 수 있으며, 1차 또는 불멸 표현형에 비해 예상되는 BEC 표현형을 가지고 있습니다12,13,14,15. 또한, iPSC-BEC가 숙주-병원체 상호작용, 헌팅턴병, 앨런-허른던-더들리 증후군을 유발하는 MCT8 결핍과 같은 중추신경계의 다양한 질병을 모델링하는 데 유용하다는 것을 입증했습니다 16,17,18,19,20,21. 여기서는 재생 가능한 iPSC 공급원에서 iPSC-BEC를 유도하는 방법과 Nm에 의한 iPSC-BEC의 감염이 선천성 면역 반응의 활성화를 유도하는 방법을 보여줍니다. 우리는 이 모델이 다른 in vitro 모델에서 재현할 수 없는 숙주-병원체 상호작용을 조사하는 데 유용하며 Nm과 같은 인간 특이적 병원체와의 상호작용을 검사할 때 특히 유용하다고 믿습니다.

<table><tbody><tr><td>Accutase (1x)</td><td>Sigma</td><td>A6964</td><td>효소 세포 해리 시약</td></tr><tr><td>아세트산</td><td>Sigma</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>All-trans retinoic acid (RA)</td><td>Sigma</td><td>R2625</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD31 (PECAM-1)</td><td>Thermo Scientific (Labvision)</td><td>RB-10333</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Claudin-5</td><td>Invitrogen</td><td>4C3C2</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Glut-1</td><td>Thermo Scientific (Labvision)</td><td>SPM498 (MA5-11315)</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Occludin</td><td>Invitrogen</td><td>33-1500</td><td></td></tr><tr><td>Anti-VE-cadherin</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-52751</td><td></td></tr><tr><td>Anti-ZO-1</td><td>Invitrogen</td><td>33-9100</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Proteose Peptone</td><td>BD</td><td>211684</td><td></td></tr><tr><td>b-Mercaptoethanol</td><td>Merck (Sigma-Aldrich)</td><td>805740</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 플레이트 및 플라스크</td><td>Sarstedt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>원심분리기(Heraeus Megafuge 1.0R)</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Class II 생물 안전 캐비닛</td><td>Nuaire</td><td>NU-437-400E</td><td></td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터(DHD Autoflow CO2 에어 재킷 인큐베이터)</td><td>Nuaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collagen IV</td><td>Sigma</td><td>C5533</td><td></td></tr><tr><td>Columbia ager + 5 % sheep blood</td><td>Biomerieux</td><td>43049</td><td></td></tr><tr><td>Costar Transwell 폴리 에스테르 필터 (12 또는 24 웰)</td> <td>Corning</td><td>3460, 3470</td><td></td></tr><tr><td>D (+) - 포도</td>당 <td>Merck (Sigma-Aldrich)</td> <td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>DMEM / F12</td><td>Gibco</td><td>31330-038</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ROTH</td><td>A994.1</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco의 인산염 완충 식염수(DPBS)</td><td>Gibco</td><td>21600-069</td><td></td></tr><tr><td>STX 전극이 있는 상피 전압계(Millicell ERS-2)</td><td>Merck(Millipore)</td><td>MERS00002</td><td></td></tr><tr><td>Fe(NO3)3</td><td>ROTH</td><td>5632.1</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Sigma</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>형광 현미경(Eclipse Ti)</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemacytometer (Neubauer)</td><td>A. Hartenstein</td><td>ZK06</td><td></td></tr><tr><td>Human basic fibroblast growth factor (bFGF)</td><td>PeproTech</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>Human Endothelial Serum Free Medium (hESFM)</td><td>Gibco</td><td>11111-044</td><td></td></tr><tr><td>Inverted microscope (Wilovert)</td><td>Hund (Will Wetzlar)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iPS(IMR90)-4 cells</td><td>WiCell</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kellogg's supplement Kellogg's supplement</td><td></td><td></td><td>110 ml를 준비하기 위해, 포도당 4 g/ml, 글루타민 0.1 g/ml, 피로인산 티아민 0.2 mg/ml 100 ml와 5 mg/ml Fe(NO3)3 10 ml를 준비하고, 용액을 결합한다. 필터는 -20°C에서 분주물을 살균하고 보관합니다.</td></tr><tr><td>녹아웃 세럼 대체품(KOSR)</td><td>Gibco</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>L-글루타민(GlutaMAX)</td><td>Invitrogen</td><td>35050-038</td><td></td></tr><tr><td>LunaScript RT SuperMix Kit</td><td>NEB</td><td>E3010L</td><td>cDNA 합성 키트</td></tr><tr><td>, Matrigel Matrix</td><td>Corning</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>ROTH</td><td>4627.5</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>ROTH</td><td>KK36.1</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫 (Research Plus)</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>ROTH</td><td>6329</td><td></td></tr><tr><td>Nonessential amino acids (NEAA)</td><td>Gibco</td><td>11140-035</td><td></td></tr><tr><td>NucleoSpin RNA 분리 키트</td><td>Machery-Nagel</td><td>740955</td><td>RNA 분리 키트</td></tr><tr><td>Pipette boy (Accu-Jet Pro)</td><td>Brand</td><td></td><td></td></tr><tr><td>혈소판 불량 혈장 유래 혈청, 소 (PDS)</td><td>Fisher</td><td>50-443-029</td><td></td></tr><tr><td>PowerUp SYBR Green Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>A25742</td><td>qPCR 마스터 믹스</td></tr><tr><td>qPCR 필름 (MicroAmp Optical Adhesive Film)</td><td>Applied Biosystems</td><td>4211971</td><td></td></tr><tr><td>qPCR 플레이트 (MicroAmp Fast 96-well)</td><td>Applied Biosystems</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>ROCK 억제제, Y27632 디하이드로클로라이드</td><td>Tocris</td><td>1254</td><td></td></tr><tr><td>RT-PCR thermo cycler (StepOnePlus)</td><td>Applied Biosystems</td><td>4376600</td><td></td></tr><tr><td>혈청학 피펫</td><td>Sarstedt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StemFlex 기초 배지 + 50x StemFlex 보충제</td><td>Gibco</td><td>A3349401</td><td>줄기세포 유지 배지</td></tr><tr><td>스윙 버킷 로터(Heraeus #2704)</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>티아민 피로인산</td>염 <td>시그마</td><td>C8754-5G</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루 솔루션, 0.4%</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Versene</td><td>Gibco</td><td>15040-033</td><td>비효소 세포 해리 시약(EDTA)</td></tr></tbody></table>

neisseria meningitidis 유도만능줄기세포 유래 뇌내피세포의 감염

Neisseria meningitidis Infection of Induced Pluripotent Stem-Cell Derived Brain Endothelial Cells

수막구균성 뇌수막염은 나이세리아 수막염(Neisseria meningitidis , 수막구균, Nm)이 고도로 전문화된 뇌 내피 세포(BEC)에 침투하여 중추신경계(CNS)에 접근할 수 있을 때 발생하는 생명을 위협하는 감염입니다. Nm은 인간 특이적 병원체이기 때문에 강력한 in vivo 모델 시스템이 없기 때문에 Nm과 BEC 간의 숙주-병원체 상호 작용에 대한 연구가 어려워지고 네이티브 BEC를 모방하는 인간 기반 모델이 필요합니다. BEC는 복잡한 밀착 접합부와 높은 경내피 전기 저항(TEER)을 특징으로 하는 말초 내피 세포와 비교할 때 더 단단한 장벽 특성을 가지고 있습니다. 그러나 1차 BEC 및 불멸화된 BEC와 같은 많은 in vitro 모델은 기본 신경 미세환경에서 제거된 후 장벽 특성이 부족하거나 빠르게 손실됩니다. 최근 인간 줄기세포 기술의 발전으로 유도만능줄기세포(iPSC)에서 뇌와 유사한 내피세포를 유도하는 방법이 개발되어 다른 체외 인간 모델과 비교할 때 BEC를 더 잘 표현할 수 있습니다. Nm-BEC 상호작용을 모델링하기 위해 iPSC 유래 BEC(iPSC-BEC)를 사용하면 BEC 장벽 특성을 가진 인간 세포를 사용할 수 있다는 이점이 있으며, 장벽 파괴, 선천성 면역 활성화 및 박테리아 상호작용을 검사하는 데 사용할 수 있습니다. 여기서는 분석을 위한 박테리아 준비, 감염 및 샘플 수집 외에도 iPSC에서 iPSC-BEC를 도출하는 방법을 보여줍니다.

여기에 설명된 프로토콜은 Stebbins et al.에서 채택한 것으로, iPSC를 BBB 특성을 가진 뇌 유사 내피 세포로 분화하는 과정과 Nm19,22의 iPSC-BEC를 사용하는 감염 연구에 이 모델을 활용하는 방법을 강조합니다. iPSC-BEC는 적절하게 분화될 경우 TEER로 측정한 2000 Ω·cm2보다 큰 단단한 장벽 특성을 나타내며 VE-cadherin 및 CD31(PECAM)과 같은 내피 마커를 발현합니다(그림 1A\u2012C). 또한 긴밀한 접합 마커인 Claudin-5, Occludin, ZO-1(그림 1 D\u2012F)과 Glut-1(그림 1G)과 같은 수송체를 발현하고 위치를 파악합니다.<strong class="...

여기에 설명된 프로토콜은 유도만능줄기세포 유래 뇌유사 내피세포의 분화, 감염을 위한 Neisseria meningitidis 준비 및 기타 분자 분석을 위한 샘플 수집의 주요 단계를 강조합니다.

Neisseria meningitidis 유도만능줄기세포 유래 뇌내피세포의 감염

Meningococcal meningitis is a life-threatening infection that occurs when Neisseria meningitidis (meningococcus, Nm) can gain access to the central ...

이 프로토콜은 생체 내에서 뇌 내피 세포를 더 잘 모방할 수 있는 모델에서 수막 혈액-CSF 장벽과 같은 혈액-뇌 장벽에서 숙주 병원체 상호 작용을 검사하기 위해 iPSC 유래 뇌 유사 내피 세포를 사용하는 방법을 보여줍니다. 뇌 내피 세포 장벽 특성에 대한 체외 검사와 인간 특이적 병원체와의 상호 작용은 모델링의 한계로 인해 어려울 수 있습니다. iPSC 유래 뇌 내피 세포는 우수한 장벽 표현형을 가지고 있고 인간에서 유래했기 때문에 이러한 응용 분야에 특히 유용합니다.유도만능줄기세포(iPSC)를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%로 2ml의 줄기세포 유지 배지를 사용하여 6웰 플레이트에 유지합니다. 세포를 계대에 계대화하려면 합류하지 않는 웰에서 배지를 흡인하고 1ml의 비효소 세포 해리 시약을 추가합니다. 그런 다음 섭씨 37도에서 7분 동안 플레이트를 배양합니다.한편, 새로운 6웰 플레이트의 매트릭스 겔 용액을 웰당 2ml의 새로운 줄기세포 유지 배지로 교체합니다. 세포 해리 시약을 흡인하되, 플레이트에 아직 붙어 있는 세포를 흡인하지 않도록 주의합니다. 모든 세포가 완전히 분리될 때까지 6ml의 줄기세포 유지 배지로 웰 바닥을 헹굽니다.새로운 6웰 플레이트를 다양한 밀도(일반적으로 1-6개 또는 1-12개)로 파종하여 정상적인 유지 관리를 수행합니다. 플레이트를 앞뒤로, 왼쪽에서 오른쪽으로 흔들고 매체가 안정될 때까지 교대로 흔드는 동작 사이에 일시 중지합니다. 그런 다음 인큐베이터에 넣으십시오.각 웰에 1ml의 효소 세포 해리 시약을 추가하고 플레이트를 섭씨 37도에서 7분 동안 배양합니다. 세포 해리 시약을 비활성화하려면 1ml의 세포 현탁액을 최소 2ml의 신선한 줄기세포 유지 배지가 있는 15ml 튜브로 옮깁니다. 1500G에서 5분 동안 세포 현탁액을 스핀다운합니다.그런 다음 세포 펠릿을 1ml의 줄기세포 유지 배지에 재현탁시키고 혈구계로 세포를 계수합니다. 12 밀리리터의 줄기 세포 유지 배지와 10 마이크로 몰 암석 억제제에서 7.5 배 10에서 5 번째 세포를 재현 탁탁합니다. T75 플라스크에서 매트릭스를 흡인하고 세포 현탁액을 플라스크로 옮깁니다.플라스크를 흔들어 세포를 분산시키고 인큐베이터에 넣습니다. 다음 이틀 동안 매일 배지를 새로 고쳐 암석 억제제를 제거하고 줄기 세포 집락의 성장을 지원합니다. 셋째 날에는 배지를 무조건 매체로 변경하여 차별화를 시작합니다.앞으로 5일 동안 매일 배

neisseria-meningitidis-infection-induced-pluripotent-stem-cell

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 방법은 마우스의 뇌에서 microvascular 내피 세포를 분리하고 불멸하게하다하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 뇌 조직, 소화 단계, 시딩하고 세포의 불멸화의 균질화부터 단계별로 절차를 설명합니다. 보통, 그것은 동질, 불후의 microvascular 내피 세포 라인을 얻기 위해 다섯 주 소요됩니다.

로 불후의 손쥐 뇌 Microvascular 내피 세포 라인의 생성<em&gt; 체외에서</em&gt; 혈액 뇌 장벽 모델

이 비디오는 유도 만능 줄기 세포를 뇌 내피 세포로 분화시키는 프로토콜을 보여줍니다.

유도 만능 줄기 세포에서 뇌 내피 세포 생성

이 동영상은 인간 iPSC를 뇌 미세혈관 내피 세포로 분화하는 다단계 과정을 보여줍니다. 이렇게 분화된 세포는 긴밀한 연접을 특징으로 하는 뇌 미세혈관 내피 세포를 밀접하게 모방하여 뇌 질환 연구에 이상적입니다.

Differentiating Human-Induced Pluripotent Stem Cells into Brain Microvascular Endothelial Cells

출처: Parajuli, B., et.al. 비침습적 경비강 경로를 통한 면역 적격 마우스 뇌에 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 미세아교세포의 이식. J. Vis. 경험. (2022).이 비디오는 유도 만능 줄기 세포 유래 인간 미세아교세포(iPSMG) 세포를 마우스 뇌로 경비강 이식하는 방법을 보여줍니다. 히알루로니다아제는 미세아교세포가 고갈된 마우스의 콧구멍에 적용되어 투과성을 향상시킵니다. iPSMG 현탁액을 비강 내로 투여하고 마우스를 회복시킵니다. 성장 인자가 풍부한 배지는 뇌 조직에서 iPSMG 생존을 지원하기 위해 정기적으로 투여됩니다.

유도만능줄기세포 유래 인간 미세아교세포를 마우스 뇌로 경비강 이식

여기, 우리는 일관된 결과 및 향상된 효율성을 보여줍니다 센다이 바이러스와 유전자가없는 인간 유도 만능에 인간의 체세포를 재 프로그램하는 우리의 설립 방법을 제시한다.

센다이 바이러스와 인간의 체세포의 효율적인 생성 인간 유도 만능 줄기 세포

직접 혈통 프로그래밍에 대한 뇌 상주 세포를 표적으로하는 것은 뇌 수리에 대한 새로운 관점을 제공합니다. 여기서 우리는 성인의 대뇌 피질에서 뇌에 상주하는 혈관 주위 세포에 풍부한 문화를 준비하고 SOX2 및 Ascl1 요인 전사의 레트로 바이러스 매개 식에 의해 유도 된 신경 세포로 이러한 변환하는 방법의 프로토콜을 설명합니다.

유도 된 신경 세포로 성숙한 인간 두뇌의 혈관 주위 세포에서 파생 된 세포의 리니지 - 프로그래밍

여기에서, 우리는 성인 마우스에 있는 감염의 내성인종 경로를 통해 수막구균 뇌막염을 유도하는 방법을 기술합니다. 우리는 접종의 준비에서 내질 감염에 수막 구균 감염의 단계 프로토콜에 의해 단계를 제시; 그런 다음 동물의 생존을 기록하고 뮤린 조직에서 세균 부하를 평가합니다.

인트스타스타스테어링 전달을 통해 마우스에서 수막구균 수막염 혈청계S C유도

우리는 두개골에 안정될 수 있는 끝에 바늘을 구부린, 따라서 근본적인 자렌치에 손상의 리스크를 제거하는 intracisternal 주입을 기술합니다. 이 접근법은 렙토메닝 세포의 유전적 운명 매핑 및 조작및 뇌척수액 이동 추적에 사용될 수 있습니다.

내분비주주입을 통한 렙토메닝 세포 변형 유도

이 프로토콜은 인간 유도 만능 줄기 세포를 분화하여 얻은 뇌 미생물 내피 세포를 도출, 확장 및 냉동 보존하고, 전 생체 모델에서 혈액 뇌 장벽 특성을 연구하는 적응된 방법을 자세히 설명합니다.

인간 유도 만능 줄기 세포에서 뇌 미세 혈관 내피 세포의 파생, 확장, 냉동 보존 및 특성화

여기에 제시된 프로토콜은 면역적격 마우스에서 경비강 경로를 통해 유도된 만능 줄기 세포 유래 인간 미세아교세포(iPSMG)를 뇌로 이식하는 것을 허용한다. iPSMG의 유지를 위한 세포의 제조 및 경비강 이식 및 사이토카인 혼합물의 투여를 위한 방법이 제시된다.

비침습적 경비강 경로를 통한 면역적격 마우스 뇌에서 인간 유도 만능 줄기세포 유래 미세아교세포의 이식

여기에서는 만능 줄기 세포를 뇌 미세혈관 내피 세포(BMEC) 유사 세포로 분화할 수 있는 프로토콜인 확장된 내피 세포 배양 방법(EECM)에 대해 설명합니다. 이들 세포는 내피 세포 부착 분자 발현을 보여주므로 시험관 내에서 면역 세포 상호작용을 연구하기에 적합한 인간 혈액-뇌 장벽 모델입니다.

인간 유도 만능 줄기 세포를 성숙한 면역 표현형을 가진 뇌 미세혈관 내피 세포 유사 세포로 분화

배우세요 iPSC 유래 뇌내피세포를 이용하여 혈액-뇌장벽에서 Neisseria meningitidis와 숙주-병원체 상호작용을 연구하는 방법을. 이 인간 유래 모델은 중추신경계 감염 메커니즘 규명에 활용됩니다.

Neisseria meningitidis 유도만능줄기세포 유래 뇌내피세포의 감염

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