Name: 트랜스 척추 직접 전류 자극 중 유형 식별 쥐 척추 운동 신경의 생체 내 세포 내 기록 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 7 s
Description: 학습하세요 쥐 척추 운동신경의 생체 내 세포 내 기록 방법을 통해 경척수 직류 자극이 신경 흥분성과 리듬적 발화 패턴에 미치는 영향을 연구하는 기법을. 이 프로토콜은 성숙한 신경계에서 직접 측정하여 임상 적용 가능한 통찰을 제공합니다.

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이 작품은 국립 과학 센터 보조금 번호에 의해 지원되었다 2017/25/ B / NZ7/00373. 저자는 한나 Drzymała-Celichowska와 Włodzimierz Mrówczyinski의 작품을 인식하고 싶습니다, 둘 다 이 논문에 제시된 결과의 데이터 수집 및 분석에 기여했습니다.

이 프로토콜과 관련된 모든 절차는 해당 당국(예: 지역 윤리위원회)에 의해 받아들여졌으며 동물 복지 및 관리에 관한 국내 및 국제 규칙을 따릅니다.
참고: 절차에 관여하는 각 참가자는 기본적인 외과 적 수술에 적절하게 훈련되어야하며 동물 실험을 수행하기위한 유효한 라이센스를 가져야합니다.
1. 마취 및 사전 약물
<ol><li>나트륨 pentobarbital의 관면 주사로 쥐를 마취시킵니다 (400\u2012550g의 무게6 개월 된 남성 위스타 쥐에 대한 60 mg, kg-1의 초기 용량). 참고 : 이 프로토콜은 표시된 변형, 성별 또는 쥐의 나이에 국한되지 않습니다. 또한 케타민 자일라진 믹스, 알파 클로랄로오스 또는 펜타닐+미다졸람+메데토미딘과 같은 대체 마취는 다른 연구 목표에 더 적합하거나 윤리위원회에서 요구하는 경우 사용될 수 있다.</li>
	<li>약 5분 후, 쥐의 뒷팔두다리 발가락을 무딘 집게로 꼬집어 마취의 깊이를 확인하십시오. 반사 작용이 관찰되지 않은 경우에만 프로토콜의 다음 단계를 진행합니다.</li>
	<li>삽관 후 점액 생산을 줄이기 위해 0.05 mL의 아트로핀을 피하하십시오.</li>
	<li>4% 포도당 용액을 함유한 인산염 완충제 5mL, NaHCO3 (1%) 주입 및 젤라틴 (14 %). 이 버퍼는 실험 전반에 걸쳐 배분 용기에 흡수되며 유체 균형을 유지하는 데 도움이 됩니다.</li>
	<li>수술 내내, 주기적으로 반사 작용에 대 한 동물을 확인 하 고 필요한 경우 마취를 보충 (10mg·kg·1·h-1나트륨 펜토바르비탈의).</li>
</ol>2. 수술
<ol><li>왼쪽 뒷다리의 등쪽 부분, 발목에서 엉덩이, 뒤쪽, 꼬리에서 높은 흉부 세그먼트, 가슴의 왼쪽, 흉골 위의 목 부위의 복부 에 모피를 면도하여 외과 적 치료를위한 동물을 준비합니다.</li>
	<li>정맥 라인의 배치<ol>
<li>닫기 루프 가열 패드에 뒷면에 쥐를 배치 (사지 고정으로 고정).</li>
		<li>21개의 블레이드를 사용하여 흉골에서 턱까지 피부를 세로로 자른다.</li>
		<li>집게로 피부를 잡고 기본 조직에서 분리하십시오.</li>
		<li>무딘 해부 기술을 사용하면 올바른 경정맥이 노출됩니다. 주변 조직에서 정맥을 조심스럽게 해부합니다.</li>
		<li>분기 점 없이 정맥의 부분을 찾아, 그 아래에 두 개의 4-0 합자 미끄러.</li>
		<li>정맥의 이전에 식별 된 비 분기 세그먼트의 근접 단부에 하나의 느슨한 매듭을 만들고 정맥의이 세그먼트의 말단 끝에 하나의 느슨한 매듭을. 정맥 근위를 심혼에 고정한 다음 정맥의 말단 부분을 리게이트합니다.</li>
		<li>홍채 가위를 사용하여 클램프와 먼 합자 사이에 절개를 합니다. 정맥의 플랩을 잡고 클램프에 의해 차단되는 지점에 미리 채워진 카테터를 소개합니다.</li>
		<li>정맥과 카테터를 집게와 함께 들고 있는 동안 클램프를 제거하고 카테터를 몇 밀리미터 밀어 정맥으로 밀어 넣습니다. 카테터의 양쪽 끝을 정맥에 고정하고 피부에 고정 점을 추가합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>기관관 의 도입<ol>
<li>무딘 집게를 사용하여 스테르노하이드 근육을 덮는 두 개의 하악 샘을 분리합니다. 중간선에 스테인디스 근육을 분리하여 기관진을 노출시합니다.</li>
		<li>기관 아래에 3 개의 4-0 합자 세 개를 미끄러 진 다음 기관 관 삽입 점 아래에 두 개의 매듭을 만들고 위의 매듭 을 만듭니다.</li>
		<li>후두의 크리시드 연골을 찾아 세 번째 기관 연골 아래에 절개를합니다.</li>
		<li>기관관을 기관아래로 삽입하고 미리 준비된 합자로 튜브를 고정한 다음 피부에 합자를 추가합니다.</li>
		<li>분리된 근육 위에 작은 면모를 놓고 수술 부위에 피부를 봉합합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>뒷다리 신경의 해부<ol>
<li>21개의 블레이드를 사용하여 아킬레스 건에서 엉덩이에 이르기까지 왼쪽 뒷다리의 후방 쪽에 세로 컷을 만듭니다.</li>
		<li>집게로 피부를 잡고 무딘 해부 기술을 사용하여 절개 양쪽의 기본 근육과 피부를 분리합니다.</li>
		<li>이두근 여성근 근육으로 덮인 무릎 관절 의 뒷면에 있는 포라이트 포사를 찾아가 가위를 사용하여 이 근육의 전방과 후방 부분 사이에 절단합니다.</li>
		<li>위쪽으로 이동하면 이두근 의 두 머리를 엉덩이까지 잘라 주신경을 노출시합니다. 출혈을 방지하기 위해 필요에 따라 소터리.</li>
		<li>상골 신경의 sural, 경골 및 일반적인 정경 및 일반적인 간연 한 가지를 확인합니다.</li>
		<li>가위를 사용하여, 위장관 근육의 내측 머리에서 측면을 분리하여 경골 신경과 가지를 노출시하십시오.</li>
		<li>55 개의 집게를 사용하여 sural 신경의 해사 끝을 잡고, 그것을 잘라 가능한 한 멀리 해부.</li>
		<li>일반적인 회내 신경으로 절차를 반복하십시오.</li>
		<li>무딘 유리 막대를 사용하여 주변 조직으로부터 티비알 신경을 분리하고 혈관을 손상시키지 않도록주의를 기울이고, 이를 절단합니다.</li>
		<li>내측 위트로테뉴(MG) 및 측면 위장혈증 및 솔레우스(LGS) 신경을 식별한다.</li>
		<li>사용 하 여 55 집게, 신중 하 게 MG와 LGS 신경해 부, 주변 조직에서 그들을 분리, 하지만 각 근육에 그들의 연결을 유지.</li>
		<li>노출된 신경 아래에 식염수에 흠뻑 젖은 면모 조각을 놓습니다.</li>
		<li>수술 부위에 피부를 닫습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>라미네절제술<ol>
<li>21개의 블레이드를 사용하여 천골에서 흉부 척추까지 세로 절개를 합니다.</li>
		<li>피부를 근본적인 근육과 분리하십시오.</li>
		<li>흉부와 요추 가시 과정의 양쪽에 긴 경연 근육을 잘라.</li>
		<li>무딘 가장자리메스를 사용하여 척추에서 근육을 철회하여 각 척추의 횡방향 과정을 노출시킵니다.</li>
		<li>무딘 팁 가위를 사용하여 노출 된 척추를 따라 횡방향 과정에 연결된 근육의 힘줄을 잘라냅니다. 필요한 경우 혈전성 에이전트를 적용하십시오.</li>
		<li>Th13 척추를 갈비뼈 삽입과 미세 한 난관으로 가장 낮은 흉부 세그먼트로 식별하고 미세 rongeurs를 사용하여 척수의 요추 세그먼트를 노출하기 위해 Th13에서 L2 척추까지 가시 공정과 라미네를 제거합니다. 척추 안정화를 위한 고정 지점으로 사용될 L3 가시 공정을 손상시키지 않도록 하십시오.</li>
		<li>Th12 가시 공정을 제거하고 척추 등쪽 표면을 가능한 한 부드럽게 합니다.</li>
		<li>무딘 해부 기술을 사용하여 근육을 Th11 척추와 분리하여 홀더 삽입 점을 만듭니다.</li>
		<li>노출된 척수 세그먼트 위에 얇은 식염수에 흠뻑 젖은 면모를 놓습니다.</li>
		<li>쥐를 두 개의 병렬 막대와 두 개의 조정 가능한 팔로 사용자 정의 만든 금속 프레임으로 이동하여 척추를 지지하고 안정화합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3. 녹음 및 자극 준비
<ol><li>척추 열 고정 및 신경 배열<ol>
<li>37 ± 1 °C에서 동물의 체온을 유지하기 위해 폐쇄 루프 가열 시스템에 연결된 가열 패드에 사용자 정의 된 프레임에 쥐를 배치합니다.</li>
		<li>심전도 전극을 피부 밑에 삽입하고 심박수 모니터링을 위한 앰프에 연결합니다.</li>
		<li>피부 플랩을 사용하여 노출된 척수 위에 깊은 풀을 형성하십시오.</li>
		<li>금속 클램프를 사용하여 Th12 횡방향 공정 과 L3 스핀스 공정 에 클램프를 배치하여 척추 컬럼을 수정합니다.</li>
		<li>척추 열이 수평으로 고정되고 배열되어 있는지 확인한 다음 컬럼 양쪽에 등대 복부 압력을 적용하여 근육을 후퇴시킵니다.</li>
		<li>따뜻한 (37 °C) 미네랄 오일로 수영장을 채우고이 온도에서 유지합니다.</li>
		<li>아킬레스 건을 통해 4-0 합자를 스레드, 리프트 및 발목이 엉덩이와 수평되도록 수술 왼쪽 뒷다리를 스트레칭.</li>
		<li>피부 플랩을 사용하여 노출된 티비알, MG 및 LGS 신경 위에 깊은 풀을 만듭니다.</li>
		<li>따뜻한 (37 °C) 미네랄 오일로 수영장을 채웁니다.</li>
		<li>양극성 실버 와이어 자극 전극에 MG와 LGS 신경을 배치하고 사각형 펄스 자극기에 연결합니다. 각 신경에 대해 별도의 자극 채널을 사용합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>표면 전극 배치<ol>
<li>노출된 척수의 왼쪽 소달 측에 은공 전극을 배치하고, 등 근육에 기준 전극이 삽입되어 전극을 차동 DC 증폭기에 연결합니다. 표면 볼 전극은 신경에서 발포성 발리를 기록하는 데 사용됩니다.</li>
		<li>상류 자극기사용, 0.1 ms 지속 시간의 정사각형 펄스로 MG 및 LGS 신경을 자극하고, 3Hz의 주파수에서 반복되고, 포성 발리를 관찰한다.</li>
		<li>신경 활성화를 위한 임계값(T)을 결정하고, 각 신경을 약 3에서 자극합니다. T 강도, 각 신경에 대한 발포성 발리의 진폭을 기록합니다.</li>
		<li>표면 전극 장밋랄을 이동하고 발리의 진폭이 각 신경에 대해 가장 높은 척추 세그먼트를 식별하기 위해 절차를 반복합니다. 최대 발리 위치를 결정한 후 표면 전극을 척수에서 안전한 거리로 이동합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>호흡기 의 움직임을 줄이기 위해 근육 마비 및 기흉 형성<ol>
<li>신경 근육 차단기로 정맥 내 쥐를 마비시키고 설치류 호환 캡노미터 (Pancuronium bromide, 0.4mg·kg-1의초기 용량에서) 및 일치하는 외부 인공호흡기에 기관관을 연결하여 0.2mg/kg의용량으로 30분마다 보충합니다.</li>
		<li>최종 조수CO2 농도를 모니터링하고 환기 파라미터(주파수, 기압 및 유량 부피)를 조정하여 약 3\u20124%로 유지합니다.</li>
		<li>레코딩 의 측면에 5 및 6 갈비뼈 사이의 피부에 세로 절개를합니다.</li>
		<li>무딘 팁 가위를 사용하여 갈비뼈 사이의 늑간 공간을 시각화하기 위해 오버헤드 근육을 잘라냅니다.</li>
		<li>작은 날카로운 가위를 사용하여, 늑간 근육과 흉막에 작은 절개를 한 다음, 폐를 누르지 않도록주의, 개구부에 무딘 가장자리 집게의 끝을 삽입.</li>
		<li>집게가 작은 튜브를 확장하거나 삽입하여 실험 내내 기동을 열어 두도록 합니다.</li>
		<li>신경 근육 블록 후 심전도 주파수를 확인하여 마취 깊이를 모니터링하고 심박수가 400 bpm을 초과하는 경우 마취제를 보충하십시오. 호흡 운동을 감소시키기 위하여 근육 마비 및 기질 형성, 기록 안정성을 향상시킬 것입니다</li>
	</ol></li>
	<li>듀라와 피아 마터 열기<ol>
<li>#55 집게를 사용하여 듀라 마터를 부드럽게 들어 올리고 L5 세그먼트에서 소커를 잘라 L4 세그먼트까지 장밋빛으로 자릅니다.</li>
		<li>초박형 5SF 집게 쌍을 사용하여 MG 또는 LGS 신경에서 최대 포성 발리의 수준에서 혈관 사이 등갈 컬럼을 덮는 피아에 작은 패치를 만듭니다.</li>
		<li>식염수에 흠뻑 젖고 말린 젤 폼의 작은 조각을 사용하여 필요한 경우 출혈을 차단하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>tSDCS 전극 배치<ol>
<li>L4-L5 척추 세그먼트의 위치에 해당하는 로스트로-코살 수준에서 쥐 복부의 복부에 피부에 작은 절개를 합니다.</li>
		<li>노출 된 피부 플랩을 참조 전극역할을하는 금속 클립으로 잡아.</li>
		<li>Th12 척추의 등쪽에 식염수에 흠뻑 젖은 스폰지를 놓습니다. 스폰지 크기가 활성 tsDCS 전극 (직경 5mm의 원형 모양의 스테인레스 스틸 플레이트)와 동일한지 확인하십시오.</li>
		<li>미세 조작기를 사용하여 활성 tsDCS 전극으로 스폰지를 뼈에 누르고 전극의 전체 표면이 동등하게 눌러지 확인합니다.</li>
		<li>기준 및 활성 tsDCS 전극을 상류 전류 자극기 장치에 연결하여 직류의 연속 흐름을 전달할 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>마이크로 파이프의 준비<ol>
<li>마이크로 전하 풀러를 사용하여 미세 전극을 준비합니다. 참고: 필라멘트와 비필라멘트 전극을 모두 사용할 수 있지만, 전극의 생크는 하강하는 동안 척수를 압축하지 않을 만큼 얇으면서 복부 경적에 도달할 만큼 충분히 길어야 한다는 것을 기억하십시오.<ol>
<li>척수에 들어가는 생크가 약 3mm 길이가되도록 풀러 설정을 조정하고, 전극의 끝은 직경이 1\u20122 μm 이하이고 미세 전극 저항은 10~20MΩ 사이입니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>2M 칼륨-구연산 전해질로 마이크로 전극을 채웁니다.</li>
		<li>1\u20122 μm 스테핑 움직임과 스테레오탁틱 교정을 허용하는 마이크로 조작기에 준비된 마이크로 전자전차를 장착합니다.</li>
		<li>소전극을 세포내 앰프에 연결하여 뒤 근육에 배치된 기준 전극을 연결합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>신경 근육 블록 후, 심전도 주파수를 확인 하여 마취 깊이를 모니터링 하 고 쥐 심박수가 400 bpm을 초과 하지 않도록 마취제를 보충.</li>
</ol>4. 모토뉴런 추적 및 침투
<ol><li>포심발리 레코딩 전극을 척수의 등쪽 표면에 다시 놓고, L6 세그먼트의 수준에서 기록 부위의 위치에 소굴로 놓습니다.</li>
	<li>3Hz 및 3T 강도의 주파수에서 전기 0.1 ms 펄스로 MG 및 LGS 신경을 자극하여 선택한 신경 내에서 알파 모토뉴런의 모든 축축을 활성화시합니다.</li>
	<li>마이크로피펫을 15\u201220°의 메디오 측각으로 피아의 선택한 패치로 구동합니다(팁은 측면으로 지시됨).</li>
	<li>표면 아래로 내려온 후, 마이크로 전극을 보정하고 커패시턴스 및 전압 오프셋을 보정하고 모든 매개 변수가 안정되면 척수의 침투를 계속합니다. 모토뉴런 풀의 항드로믹 필드 전위는 각각의 신경을 자극하는 동안 전용 모터 핵에 접근하는 동안 마이크로 전극 전압 추적에서 볼 수 있습니다.</li>
	<li>1\u2012μm 단계에서 마이크로 전극으로 침투를 진행하고 주기적으로 세포 내 앰프의 버즈 기능을 사용하여 모든 잔류물에서 전극 끝을 지웁울 수 있습니다.</li>
	<li>기록된 전압 추적의 급격한 과극화를 특징으로 하는 모토뉴런 침투를 관찰하고 항드로믹 스파이크 전위.</li>
</ol>5. 모토뉴런 멤브레인 및 발사 특성 기록
<ol><li>세포 내 증폭기의 다리 모드에서, 각 신경 분기를 자극하여 항드로믹 작용 잠재력의 "전부 또는 아무것도"모양에 기초하여 운동 신경을 식별합니다. 나중에 평균화할 경우 20개의 후속 추적을 기록합니다.</li>
	<li>고품질 데이터를 보장하기 위해 엄격한 포함 기준을 구현합니다: 진폭에서 적어도 -50 mV의 휴식 막 전위; 50mV보다 큰 작용 전위 진폭, 양성 오버슈트; 멤브레인 전위는 기록하기 전에 최소 5분 동안 안정적입니다.</li>
	<li>세포내 증폭기의 불연속 전류 클램프 모드(현재 스위치 속도 모드 4-8kHz)에서 0.5ms 세포 내 탈극성 전류 펄스를 사용하여 모토뉴런에서 정형소드로이드 작용 전위를 불러일으킨다. 오프라인 평균을 위해 적어도 20번 반복합니다.</li>
	<li>세포 입력 저항을 계산하기 위해 40개의 짧은 펄스(100ms)의 과극 전류(1nA)로 운동신경을 자극한다.</li>
	<li>진폭을 증가시키는 50ms 제곱파 펄스로 모토뉴런을 자극하여 단일 스파이크를 유도하는 데 필요한 탈극 전류의 최소 진폭으로 레오베이스 값을 결정합니다.</li>
	<li>500 ms 사각 파 펄스를 주입 전류, 0.1-2 nA의 단계에서 진폭을 증가에 모토 뉴런의 리듬 배출을 연상.</li>
</ol>6. 트랜스 척추 직접 전류 자극 (tsDCS)
<ol><li>모토뉴런의 안정적인 침투를 유지하면서, 직접 전류의 척추 횡단 응용에 의해 편광 절차를 시작합니다. 실험 설계(예: 15분 동안 0.1mA)로 전류 강도 및 적용 시간을 조정합니다.</li>
	<li>DC를 전환 한 직후, 모토 뉴런 멤브레인 전위를 관찰한다. 음극 편광(양극으로서의 활성 전극)은 막 전위력의 탈극을 초래해야 하며, 음극 편광(음극으로서의 활성 전극)은 반대의 효과를 불러일으켜야 한다. DC 자극에 대한 응답으로 휴식 막 전위전위가 일정하는지 관찰하여 전기장 강도가 영향을 받지 않도록 합니다.</li>
	<li>연속 현재 응용 프로그램 동안 5분 간격으로 5.3\u20125.6단계를 반복합니다.</li>
	<li>DC를 끄고 기록이 불안정해지거나 포함 기준이 손상될 때까지 5분 간격으로 5.3\u20125.6 단계를 계속 반복합니다.</li>
	<li>실험을 종료하고 안락사펜토바르비탈 나트륨 (180mg·kg-1)의치명적인 복용량의 정맥 투여를 사용하여 동물.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개할 이해상충이 없습니다.

올바르게 수행되는 경우, 설명된 프로토콜의 수술 부분은 약 3시간 이내에 완료되어야 한다. 하나는 수술 중 동물의 안정적인 생리 적 상태를 유지에 특히주의해야한다, 특히 체온과 마취의 깊이. 명백한 윤리적 고려 사항 외에도 적절한 마취가 부족하면 신경 해부 또는 라미네절제술 중 과도한 사지 운동이 발생할 수 있으며 준비 또는 조기 실험 종료에 손상을 초래할 수 있습니다. 척수를 미세 전극으로 관통하기 전에 동물을 마비시면 마취와 심박수의 깊이를 모니터링하고 동물의 체중과 폐 용량에 따라 적절한 환기 매개 변수를 적용하는 것이 중요합니다. 원하는 생리 학적 매개 변수에서 임의의 편차는 절차 성공을 보장하기 위해 즉시 수정해야합니다. 수술 후, 안정적인 기록 조건은 적어도 4 시간 동안 유지 해야합니다.
모토뉴런의 침투 후, 레코딩 안정성이 매우 중요합니다. 어떤 변동도 류베이스 전류와 리듬 발사의 임계값에 크게 영향을 미치기 때문에 멤브레인 잠재력은 제어 기록 중에 일정하게 유지되...

트랜스-척추 직접 전류 자극(tsDCS)은 건강과,질병1,2,23에서척추 회로 흥분성을 수정하는 강력한 방법으로 인정을 받고 있다. 이 기법에서, 일정한 전류는 선택된 척추 세그먼트 위에 위치한 활성 전극 사이에 전달되며, 기준 전극은 통풍구 또는 더 rostrally4에위치한다. 여러 연구는 이미 tsDCS가 신경병증 통증5,경련6,척수 손상7 또는 재활을 용이하게하기 위해 특정 병리학 적 상태를 관리하는 데 사용될 수 있음을 확인했다8. 연구원은 tsDCS가 세포막을 가로 질러 세포내 및 세포 외 공간 사이 이온 분포에 있는 변경을 불러 일으킨다는 것을 건의하고, 이것은 현재방향에따라서 신경 활동을 촉진하거나 억제할 수 있습니다9,10,,11. 그러나, 최근까지, 모토 뉴런에 이 영향의 직접적인 확인이 부족했다.
여기서, 우리는 척추 신경 망의 무음 또는 음극 양극화에 대응하여 모토뉴런 막및 발사 특성의 변화를 관찰하기 위해, tsDCS의 동시 적용과 함께 마취 쥐에서 요추 척추 운동신경으로부터 전기 전위의 생체 내 세포 내 기록을 수행하는 상세한 프로토콜을 설명합니다. 세포 내 기록은 이전에 사용 된 세포 외 기술9,12에사용할 수없는 뉴런 특성의 조사의 여러영역을엽니 다. 예를 들어, tsDCS에 의해 유도된 직접 전류 흐름에 대한 모토뉴런 멤브레인 전압 반응을 정밀하게 측정하거나, 스파이크 생성을 위한 전압 임계값을 표시하거나, 동작 잠재적 파라미터를 분석할 수 있다. 더욱이, 이 기술은 입력 저항과 같은 모토뉴런 수동 막 특성을 결정하고, 세포내 자극 전류와 모토뉴런의 리듬 발사 빈도 사이의 관계를 관찰할 수 있게 한다. 기능적으로 확인된 신경(즉, 굴곡 또는 엑스텐서에 efferents을 제공하는 신경)의 자극에 기초하여 기록된 motoneuron의 항드로믹 식별은 편광이 성숙한 척추 뉴런 시스템의 개별 요소에 다르게 영향을 미치는지 여부를 테스트할 수 있는 기회를 제공하는 내부 모터 유닛(fast vs slow)의 유형을 추가로 식별할 수 있게 해줍니다. 기록의 안정성과 신뢰성에 대한 광범위한 수술과 높은 요구 사항으로 인해이 기술은 매우 도전적이지만 하나의 motoneuron의 전기 생리적 특성에 대한 직접적이고 장기적인 평가를 허용합니다 : 급성 행동과 지속적인효과(13)를결정하는 데 중요한 tsDCS의 적용 전, 도중 및 후. motoneuron직접 외경 근육섬유를 활성화 하 고 근육 수축및 개발 된 힘(15)의피드백 제어에 참여 하고,16 모터 단위 또는 근육 수축 특성에 tsDCS의 관찰 된 영향 motoneuron 흥분 성 또는 발사 특성의 변조에 연결 될 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Durgs 및 솔루션</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Atropinum sulfuricum</td><td>Polfa Warszawa</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Merck</td> <td>346351-NaHCO3</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>106329-Pancuronium Jelfa</td><td>PharmaSwiss/Valeant-Neuromuscular</td><td></td> <td>blocker</td></tr><tr><td>Pentobarbital sodium</td><td>Biowet Pu?awy Sp. z</td> <td>o.o-Main</td> <td>마취제</td></tr><tr><td>Pottasium citrate</td><td>Chempur</td><td>6100-05-06-Tetraspan</td><td></td></tr> <tr><td></td><td></td><td>Braun-HES</td> <td>solution</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical equipment</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>-21 Blade</td><td>FST</td><td>10021-00</td><td>메스 블레이드</td></tr><tr><td>소작자</td><td>FST</td><td>18010-00</td><td>-</td></tr><tr><td>흉관</td><td>Mila</td><td>CT1215-Dumont</td><td></td></tr> <tr><td>#4 집게</td><td>FST</td><td>11241-30</td><td>근육 집게</td></tr><tr><td>Dumont #5 집게</td><td>FST</td><td>11254-20</td><td>듀라 집게</td></tr><tr><td>Dumont #5F 집게</td><td>FST</td><td>11255-20</td><td>신경 집게</td></tr><tr><td>Dumont #5SF 집게</td><td>FST</td><td>11252-00</td><td>Pia 집게</td></tr><tr><td>집게</td><td>FST</td><td>11008-13</td><td>무딘 집게</td></tr><tr><td>집게</td><td>FST</td><td>11053-10</td><td>피부 집게</td></tr><tr><td>지혈</td><td>FST</td><td>13013-14-Rongeur</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>FST</td><td>16021-14</td><td>laminectomy</td></tr><tr><td>가위</td><td>FST</td><td>15000-08</td><td>정맥 가</td></tr><tr><td>위</td><td>FST</td><td>15002-08</td><td>Dura 가위</td></tr><tr><td>가위</td><td>FST</td><td>14184-09</td><td>기관 절단</td></tr><tr><td>가위</td><td>FST</td><td>104075-11</td><td>근육 가위</td></tr><tr>가<td>위</td><td>FST</td><td>14002-13</td><td>피부 가위</td></tr><tr><td>기관 튜브</td> <td>-</td><td></td> <td>맞춤형</td></tr><tr><td>정맥 카테터</td><td>Vygon</td><td>1261.201</td><td>-</td></tr> <tr><td>혈관 캐뉼레이션 겸자</td><td>FST</td><td>18403-11</td><td>- </td></tr><tr><td>혈관 클램프</td><td>FST</td><td>18320-11</td><td>정맥 클램핑</td></tr><tr><td>용 혈관 확장 프로브</td><td>FST</td><td>10160-13</td><td>정맥 박리</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>용 Sugrgical 재료 </td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>-젤 폼</td><td>Pfizer</td><td>GTIN 00300090315085</td><td>지혈제</td></tr><tr><td>실크 봉합사 4.0</td><td>FST</td><td>18020-40</td><td>-</td></tr><tr><td>실크 봉합사 6.0</td><td>FST</td><td>18020-60</td><td>-</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>-Axoclamp 2B</td><td>분자 장치</td><td>단종</td> 세포 <td>내 증폭기/새 모델 Axoclamp 900A</td></tr><tr><td>CapStar-100 호기말 CO2 모니터</td><td>CWE</td><td>11-10000</td><td>가스 분석기</td></tr><tr><td>Grass S-88</td><td>A-M 시스템</td><td>단종</td><td>정전류 자극기</td></tr><tr><td>유연한 프로브가 있는 동종 담요 시스템</td><td>Harvard Apparatus</td><td>507222F</td><td>난방 시스템</td></tr><tr><td>ISO-DAM8A</td><td>WPI</td><td>74020</td><td>세포 외 증폭기</td></tr><tr><td>마이크로드라이브</td><td>-</td><td>-</td><td>맞춤형 제작/교체 IVM/Scientifica</td></tr><tr><td>P-1000 미세 전극 풀러</td><td>Sutter Instruments</td><td>P-1000</td><td>마이크로 전극 풀러</td></tr><tr><td>SAR-830/AP 소형 동물 인공호흡기</td><td>CWE</td><td>12-02100</td><td>호흡기</td></tr><tr><td>지원 프레임</td><td>-</td><td>-</td><td>맞춤 제작/교체 실험실 표준 베이스 51601/Stoelting</td></tr><tr><td>척추 클램프-</td><td></td><td>-</td><td>맞춤 제작/교체 쥐 척추 어댑터 51695/Stoelting</td></tr><tr><td>TP-1 DC 자극기</td><td>WiNUE</td><td>-</td><td>tsDCS 자극기</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><강한>기타</강한></td><td>-</td><td></td><td></td></tr><tr><td>-1B150-4 유리 모세관</td><td>WPI</td><td>1B150-4</td><td>미세 전극 생산용</td></tr><tr><td>면모</td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>유연한 튜브</td><td>-</td><td>-</td><td>인공 호흡기 및 CO2 분석기 연결용</td></tr><tr><td>MicroFil</td><td>WPI</td><td>MF28G67-5</td><td>마이크로피펫 충전용</td></tr><tr><td>Silver wire</td><td>-</td><td>-</td><td>신경 전극용</td></tr></tbody></table>

트랜스 척추 직접 전류 자극 중 유형 식별 쥐 척추 운동 신경의 생체 내 세포 내 기록

In Vivo Intracellular Recording of Type-Identified Rat Spinal Motoneurons During Trans-Spinal Direct Current Stimulation

생체 내에서 척추 운동신경의 세포내 기록은 그대로 척추 네트워크에서 세포의 전기 생리적 특성을 결정하기위한 "금 본위제"를 제공하고 고전적인 체외 또는 세포 외 기록 기술에 비해 상당한 장점을 보유하고 있습니다. 생체 내 세포 내 기록의 장점은 이 방법이 완전히 성숙한 신경계를 가진 성인 동물에서 수행될 수 있고, 따라서 많은 관찰된 생리적 기계장치가 실제 적인 응용 프로그램으로 번역될 수 있다는 것입니다. 이 방법론 논문에서, 우리는 척추 신경 네트워크 내에서 발생하는 편광 과정을 모방 외부적으로 적용 된 일정한 전류 자극과 결합된이 절차를 설명합니다. 트랜스 척추 직접 전류 자극 (tsDCS)은 스포츠뿐만 아니라 다양한 신경 손상 후 재활에 신경 조절 개입으로 점점 더 많이 사용되는 혁신적인 방법입니다. 신경계에 tsDCS의 영향은 제대로 이해 되지 남아 있으며 그것의 행동 뒤에 생리 적 메커니즘은 크게 알 수 없습니다. tsDCS를 세포내 기록과 동시에 적용하면 tsDCS 동작에 대한 이해가 중요한 척추 뉴런 네트워크의 편광에 대응하여 모토뉴런 막 특성및 리듬 발사특성의 변화를 직접 관찰할 수 있습니다. 더욱이, 제시된 프로토콜이 내측 근육 및 그 기능(굴곡 대 엑스텐서)과 생리적 유형(fast vs slow)에 대하여 모토뉴런의 식별을 포함할 때, 이는 편광에 의해 다르게 영향을 받는 척수 회로의 식별된 구성 요소에 대한 tsDCS의 영향을 선택적으로 조사할 수 있는 기회를 제공한다. 제시된 절차는 결과의 준비 안정성 및 재현성을 달성하는 데 필요한 단계에 중점을 두고 세포 내 기록 및 자극을 위한 외과 준비에 중점을 둡니다. 무음 또는 음극 tsDCS 응용 프로그램의 방법론의 세부 사항은 실용적이고 안전 문제에주의를 기울이면서 논의됩니다.

세포 침투의 안정적인 조건이 보장될 때 작업 잠재력 및 여러 멤브레인 특성의 매개 변수는 세포 내 기록에 기초하여 계산될 수 있다. 도 1A는 세포 내 자극에 의해 발생되는 전형적인 직교 작용 잠재력을 제시하며, 이는 데이터 포함에 대한 모든 기준을 충족합니다(적어도 -50 mV의 휴식 막 전위, 및 50mV 이상의 스파이크 진폭은 양성 오버슈트로). 스파이크 진폭, 후극극 진폭 또는 과극 후 반부패 시간(AHP-HDT)과 같은 작용 전위 파라미터를 측정할 수 있다. 쥐 모토뉴런의 후자 파라미터의 값은 빠르고 느린 모토뉴런(AHP-HDT &gt; 20ms 저속, 빠른 motoneurons용 AHP-HDT &lt;20 ms)을 구별하기 위한 신뢰할 수 있는 기준 역할을한다. 도 1B는 1nA의 100ms 과극전류 펄스에 대한 세포 반응을 나타내며, 이로부터 모토뉴런의 피크 및 고원 ...

이 프로토콜은 동시 트랜스 척추 직접 전류 자극을 가진 쥐 요추 모토뉴런의 생체 내 세포 내 기록을 설명합니다. 이 방법을 통해 멤브레인 특성을 측정하고 척수의 무음 또는 음극 편광 전, 도중 및 후에 모토뉴런의 리듬 발사를 기록할 수 있습니다.

Intracellular recording of spinal motoneurons in vivo provides a &#8220;gold standard&#8221; for determining the cells&#8217; electrophysiological ...

이 프로토콜은 척추 모토뉴런의 세포내 기록을 사용하여 척추 네트워크의 기능에 대한 트랜스 척추 직접 전류 자극의 영향을 직접 조사합니다. 이 기술의 주요 장점은 완전히 성숙한 신경계에서 세포 내 녹음을 수행 할 수 있다는 것입니다. 실험 관측의 번역을 실용적인 응용 분야에 용이하게 합니다.페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 마취 된 6 개월 된 남성 Wistar 쥐는 해부 현미경과 숫자 21 블레이드를 사용하여 흉골에서 턱까지 세로 피부 절개를합니다. 그리고 무딘 해부를 사용하여 올바른 경정맥을 노출하십시오. 분기 점 없이 정맥 의 섹션 아래에 2, 4-0 합자 놓습니다.그리고 정맥 세그먼트의 근근 끝에 하나의 느슨한 매듭을 합니다. 그리고 세그먼트의 말단 끝에 하나의 느슨한 매듭. 정맥 근위를 심장에 고정시키고 정맥의 말단 끝을 리게이트합니다.홍채 가위를 사용하여 클램프와 단산 합자 사이에 절개를 합니다. 그리고 정맥의 플랩을 들고 정맥이 클램프에 의해 막힌 지점에 미리 채워진 카테터를 소개합니다. 그런 다음 클램프를 제거하고 카테터를 몇 밀리미터 밀어 정맥으로 밀어 넣습니다.기관관 배치의 경우 무딘 집게를 사용하여 스테르노하이드 근육을 덮는 두 개의 하악샘을 분리하십시오. 그리고 중간선에 스테인로이드 근육을 분리하여 기관진을 노출시한다. 기관 아래에 3개, 4-0 합자를 놓고 기관관 삽입 점 아래에 2매듭을 만들고 위의 매듭 을 만듭니다.그런 다음 제 3 기관 연골 아래 기관관에 기관 튜브를 삽입합니다. 그리고 미리 준비된 합자로 튜브를 제자리에 고정시합니다. 뒷다리 신경을 해부하려면 숫자 21 블레이드를 사용하여 아킬레스 건에서 엉덩이에 이르기까지 왼쪽 뒷다리의 후방 측면에 세로 절단을 합니다.그리고 가위를 사용하여 무릎 관절의 뒤쪽에 있는 포라이트 포사의 전방 및 후방 영역 사이의 절단을 합니다. 이두근 여성스러움의 두 머리를 잘라, 상골 신경을 노출. 그리고 측면 머리를 위장관 근육의 내측 머리에서 분리하여 경골 신경과 가지를 노출시하십시오.그런 다음 55번 의 집게를 사용하여 내측 위트로테미와 측면 위트로테미와 솔레우스 신경을 조심스럽게 해부합니다. 근육의 각각에 그들의 연결을 유지 하면서 주변 조직에서 그들을 분리. 라미케네절절제술을 수행하려면 21번 블레이드를 사용하여 천골에서 흉부 척추까지 종방향 절개를 합니다.그리고 흉부 삽입을 가진 가장 낮은 흉부 세그먼트로, Th13 척추를 식별합니다. 그런 다음 미세 한 rongeurs를 사용하여 Th13에서 L2 척추까지 가시 적 과정과 라미네를 제거하고 척수의 요추 세그먼트를 노출시하십시오. 척추 열을 고정하려면 닫힌 루프 가열 시스템에 연결된 섭씨 37도 가열 패드에 쥐를 사용자 지정 만든 프레임에 넣습니다.그리고 피부 플랩을 사용하여 노출된 척수 위에 깊은 풀을 형성합니다. 금속 클램프를 Th12 횡단 공정 아래에 놓고 L3 가시 공정에 놓고 풀을 섭씨 37도 미네랄 오일로 채웁니다. 피부 플랩을 사용하여 노출된 티비알, 내측 위트로테믹, 측면 위트로테믹 및 솔레우스 신경위에 깊은 미네랄 오일 풀을 만듭니다.그리고 양극성 실버 와이어 자극 전극에 신경을 배치합니다. 그런 다음 각 신경에 대해 별도의 자극 채널을 사용하여 전극을 제곱 펄스 자극기로 연결합니다. 표면 전극 배치의 경우, 해부 현미경 의 밑에, 노출된 척수의 왼쪽 caudal 쪽에 은공 전극을 놓습니다.후면 근육에 레퍼런스 전극이 삽입됩니다. 그리고 두 전극을 차동 DC 증폭기에 연결합니다. 일정한 전류 자극기를 사용하여 내측 위트로네미하와 측면 위트로테네미에이즘 및 솔레우스 신경을 자극하고, 3헤르츠 주파수에서 반복되는 0.1 밀리초 의 제곱 펄스와 발포성 발리를 관찰한다.시뮬레이션의 끝에서, 표면 전극을 장밋빛으로 이동하고, 배구의 진폭이 각 신경에 대해 가장 높은 척추 세그먼트를 식별하기 위해 자극을 반복한다. 최대 발리의 위치를 결정 한 후, 쥐를 마비하는 정맥 신경 근육 차단제를 제공합니다. 도우미가 설치류 호환 캡 지명자와 일치하는 외부 인공호흡기에 기관관을 연결합니다.듀라와 피아 메이트를 열려면 숫자 55 집게를 사용하여 듀라 마터를 부드럽게 들어 올리고 L5 세그먼트에서 조직을 다시 잘라 L4 세그먼트까지 장밋빛으로 자릅니다. 그런 다음 초박형 5SF 집게 쌍을 사용하여 혈관 사이의 등갈 컬럼을 덮고 피아에 작은 패치를 만듭니다. 정확히 내측 위트로테미온및 측측 위트로테미하및 솔레우스 신경으로부터 최대 발구의 수준에서.트랜스 척추 직접 전류 자극 전극을 배치하려면 Th12 척추의 등쪽에 식염수에 담근 스폰지를 놓습니다. 그리고 활성 트랜스 척추 직접 전류 자극 전극으로 스폰지를 누르기 위해 미세 조작을 사용합니다. 그런 다음 사용자 정의 풀링 된 마이크로 전자 전차를 마이크로 조작기에 장착하여 1 ~ 2 개의 미크론 스테핑 움직임과 스테레오 탁스 교정을 허용합니다.그리고 15~ 20도 내측 각도에서 피아의 선택된 패치로 마이크로피펫 팁을 구동한다. 세포내 증폭기의 브리지 모드에서, 모토뉴런 막 및 발사 특성을 기록하기 위해, 항드로믹 작용 잠재력의 전부 또는 전혀 모양에 기초하여 모토뉴런을 식별하기 위해 각 신경 가지를 자극한다. 현재 스위치 속도 모드를 가진 세포내 증폭기의 불연속 전류 클램프 모드에서 4~8킬로헤르츠, 0.5밀리초 세포내 탈극 전류 펄스를 사용하여 모토뉴런에서 치열 교정 작용 잠재력을 연상시킨다.세포 입력 저항을 계산하려면 1 나노그램 전류의 40개의 짧은 100밀리초 펄스로 모토뉴런을 자극합니다. 단일 스파이크를 유도하는 데 필요한 탈극 전류의 최소 진폭으로 실제 기준 값을 결정하기 위해, 증가 진폭에서 50 밀리초 제곱파 펄스로 모토뉴런을 자극한다. 그런 다음 진폭을 증가시면 500밀리초 의 제곱파 펄스를 탈극 전류의 펄스를 주입합니다.0.1 ~ 2 나노 앰프 단계에서, 모토 뉴런의 리듬 배출을 연상시킨다. 트랜스 척추 직접 전류 자극의 경우, 모토뉴런의 안정적인 침투를 유지하면서 직접 전류의 척추 횡단 응용에 의해 편광 절차를 시작합니다. 여기서, 데이터 포함에 대한 모든 기준을 충족하는 세포 내 자극에 의해 불러지는 전형적인 정형 외과 동작 전위가 표시됩니다.이 분석에서, 1나노그램의 100밀리초 과극화 전류 펄스에 대한 세포 반응. 모토뉴런의 피크 및 고원 입력 저항이 모두 전압 편향으로부터 결정될 수 있는, 관찰될 수 있다. 실제 기본 스파이크의 확장 된 전압 추적은 스파이크의 명확하게 표시된 전압 임계 값을 나타낸다.전압 게이트 나트륨 채널이 활성화되어 작업 전위를 시작하는 멤브레인 탈극화 수준을 나타냅니다. 이 그래프는 셀룰러 전압 추적의 예를 제공합니다. 두 개의 motoneurons에서, 탈극 전류의 500 밀리 초 제곱 펄스와 세포내 자극.전, 도중, 그리고 트랜스 척추 직접 전류 자극 응용 프로그램 후. 아노달 척추 직접 전류 자극은 증가 된 motoneuron 흥분성 및 리듬 발사의 높은 주파수를 향해 작용하는 것으로 나타났습니다. 음극 트랜스 척추 직접 전류 자극 동안, 발사 억제를 향해 행동.더욱이, 두 가지 유형의 트랜스 척추 직접 전류 자극의 효과는 양극화 기간을 능가했습니다. 불완전한 셀 침투로 인해 데이터 포함 기준이 손상된 경우 부정확한 데이터를 수집할 수 있습니다. 미세 전극 저항 및 정전 또는 척수 불안정을 보상하지 못하는 경우.해부 동안 척수에 손상이 발생하지 않는 것은 부상이 척추 충격을 초래할 수 있으므로 추가 기록이 불가능해짐에 따라 반드시 손상되지 않는 것이 필수적입니다. 추가 조직학적 또는 면역 세포 화학 분석을 위해 조직 샘플을 수확할 수 있다. 예를 들어, c-fos 발현의 측정은 뉴런 활동의 프록시로서 사용될 수 있다.

in-vivo-intracellular-recording-type-identified-rat-spinal

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 새로운 방법은 하나의 성인 마우스 motoneuron과 근육 섬유에 의해 생성 된 힘의 측정의 동시 세포 녹음을 할 수 있습니다. 정상과 유전자 변형 동물의 모터 장치의 전기 및 기계적 성질의 결합 조사 신경 근육 시스템의 연구를위한 돌파구이다.

성인 마우스에서의 모터 단위 제작 룸버 Motoneuron과 포스의 동시 세포 녹화<em&gt; 생체에</em

이 비디오는 끝이 가는 유리 마이크로피펫과 특수 설정을 사용하여 단일 뇌 뉴런의 전기 신호를 기록하는 방법을 보여줍니다. 마이크로피펫은 쥐의 뇌에 조심스럽게 삽입되고 윙윙거리며 뉴런을 관통하여 내부 뉴런 전기 신호를 기록합니다.

단일 뉴런(single neuroron)에서 세포 내 신호의 생체 내 기록(In vivo recording of intracellular signals from a single neuroron)

이 비디오는 트랜스 척추 직류 자극 하에서 쥐의 운동 뉴런의 생체 내 녹음을 설명합니다. 이 프로토콜은 막 특성을 측정하고 척수의 항문 또는 음극 분극 전, 도중 및 후에 운동 뉴런의 리드미컬한 발화를 기록하는 방법을 설명합니다.

쥐의 척추 운동 뉴런의 경척추 직류 자극

이 비디오는 척골 신경에 전기 자극을 가하고, 최적의 신호를 위해 전극을 조정하고, 신경 기능을 평가하기 위해 자극을 증가시켜 쥐의 복합 근육 활동 전위(CMAP)를 기록하는 절차를 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 신경 장애에서 말초 신경 기능에 대한 생체 내 조사를 할 수 있습니다.

쥐의 복합 근육 활동 전위의 생체 내 측정

이 비디오는 쥐의 C 섬유 신경 전도에 대한 단일 섬유 기록을 보여줍니다. 마취된 쥐는 하지에 감각 및 운동 공급을 제공하는 좌골 신경을 노출시키기 위해 절개됩니다. 그런 다음 개별 C-섬유가 노출됩니다. 발에 이식된 자극 전극을 사용하여 전기 자극이 제공되며, 단일 신경 섬유에서 반응이 기록됩니다.

쥐에서 좌골 신경 C-섬유의 생체 내 단일 섬유 기록

GABA 성 시냅스 억제는 모터와 척수 네트워크에서 감각 신호 통합을위한 중요한 척수에서 강력한 억제 메커니즘입니다. 기초 기본 심성의 탈분극은 후근 전위 (DRP)의 기록에 의해 측정 할 수있다. 여기에서 우리는 생쥐의 DRP의 생체 기록하는 방법을 보여줍니다.

배근 잠재적 기록하여 생쥐의 척수 시냅스 억제를 측정<em&gt; 생체</em

우리는 젊은 쥐에서 척수의 경사 조각을 준비하는 방법을 보여줍니다. 이 준비는 복부 뿌리의 자극 수 있습니다.

복부 루트 자극에 대한 사선 척수 조각의 준비

단일 섬유 기록은 중추 및 말초 신경계에 적용할 수 있는 효과적인 전기 생리학적 기술입니다. 부착 된 동골 신경과 함께 손상되지 않은 DRG의 준비와 함께 전도 실패의 메커니즘을 검사합니다. 두 프로토콜 모두 말초 신경계의 통증과의 관계에 대한 이해를 향상시킵니다.

전도 실패의 메커니즘을 검사하기 위해 연결된 Sciatic 신경을 가진 생체 내 단일 섬유 기록 및 손상되지 않은 등철 루트 신경절의 사용

이 방법은 쥐 내측 위트로테미에미근 근육의 3가지 유형의 모터 단위로 트위치 및 파탄 수축 및 작용 잠재력을 기록할 수 있게 한다. 단일 모터 장치의 기능적 절연은 축축의 전기 자극에 의해 유도된다.

쥐 내측 위트로테미즘 근육의 단일 모터 단위의 기능적 격리

이 프로토콜은 패치 클램프를 사용하여 높은 시공간 분해능으로 척수 자극(SCS)에 대한 운동 뉴런의 전기적 반응을 연구하는 방법을 설명하며, 이를 통해 연구자들은 척수를 분리하고 세포 생존력을 동시에 유지하는 기술을 향상시킬 수 있습니다.

척수 자극 중 운동 뉴런의 전체 세포 패치-클램프 기록을 위한 척수 절편의 생체 외 제조

우리는 심장 기능을 기록하고 심장 잠금 척추 등쪽 뿔 뉴런을 분석하는 것과 함께 척추 다채널 세포 외 기록을 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 이 방법은 침술에 의해 유발된 흉추의 내장 기능 변화의 기저에 있는 척추 메커니즘을 연구하기 위한 시간적으로 동기화된 틀을 제공합니다.

쥐 척추 등쪽 뿔(Rat Spinal Dorsal Horn)의 심장 잠금 뉴런 반응에 대한 체세포 자극의 코딩 프로파일 연구

학습하세요 쥐 척추 운동신경의 생체 내 세포 내 기록 방법을 통해 경척수 직류 자극이 신경 흥분성과 리듬적 발화 패턴에 미치는 영향을 연구하는 기법을. 이 프로토콜은 성숙한 신경계에서 직접 측정하여 임상 적용 가능한 통찰을 제공합니다.

트랜스 척추 직접 전류 자극 중 유형 식별 쥐 척추 운동 신경의 생체 내 세포 내 기록

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