마우스 망막 안료 상피의 빛 방출 전기 응답 기록을 위한 직접 결합 된 전기 전체노그램 (DC-ERG)

DC-ERG 기술은 노화 관련 변화 또는 질병 진행을 모니터링하고 약리학적 개입 효과를 평가하기 위해 망막 안료 상피 기능의 비 회피 평가에 사용될 수 있다. 이 기술은 모세관 전극 준비를 단순화하여 DC-ERG 재생 능력과 사용편의성을 향상시킵니다. 또한 분석을 용이하게하기 위해 표준 ohm 소프트웨어 응용 프로그램으로 보완 할 수 있습니다.

실리콘 고무 개스킷을 통해 25게이지 주사기 바늘을 전극 홀더의 뒷벽에 조심스럽게 슬라이딩하는 것으로 시작합니다. 전극 홀더의 베이스를 탈가스 HBSS로 채우고 바늘을 천천히 철회하고 거품을 유발하지 않도록 주의하고 조임없이 나사 캡을 교체하십시오. 주사기 바늘을 다시 삽입하여 HBSS로 틈새 내에 빈 공간을 채우고 모세관을 수평으로 잡고 다른 쪽 끝에서 용액이 빠져나가는 것을 방지합니다.

구부러진 끝에 채워진 모세관을 잡고 느슨한 캡을 통해 다른 쪽 끝을 천천히 삽입하고 나사 캡을 제자리에 조입니다. 전극 홀더를 모세관 전극으로 기울여 거품이 흘러 나와 진공 챔버에서 모세혈관을 5~10분 동안 탈유할 수 있도록 합니다. 그런 다음, 진공을 천천히 방출하고 입증된 바와 같이 전극 홀더및 유리 모세혈관을 리필한다.

마이크로 전극 홀더에 대한 사용자 정의 스탠드를 만들기 위해, 숫자 8 T 클립의 한쪽에서 검은 폴리 아세탈 클립을 제거하고 높이를 조정하기 위해 반으로 가공 된 자기 공 조인트가있는 실린더 베이스를 사용합니다. 수정된 T-클립을 M3 크기의 너트와 약 1인치 테이퍼 처리된 나무 손잡이의 슬라이드로 고정하여 면 끝 클리닝 스틱에서 변형하여 마이크로 전전자 홀더를 사용자 정의로 만든 T 클립 자기 공 조인트 스탠드에 고정시하십시오. 그런 다음 희토류 자석 실린더 베이스를 사용하여 맞춤형 전극 홀더스탠드를 스테이지의 금속 판에 단단히 배치하여 180도 축에서 360도 회전을 가능하게 합니다.

전극 테스트를 수행하기 위해 먼저 완전히 조립된 HBSS 채워진 모세관 미세 전극을 HBSS의 작은 용기로 부드럽게 낮춥춥습니다. 바늘 접지 전극과 은, 은 염화물 중심 펠릿 기준 전극을 동일한 HBSS에 배치하여 회로를 완료하고 테스트할 마우스를 설명하기 위해 적절한 식별자를 선택하거나 생성합니다. 수행될 직접 결합된 전자망전 프로토콜을 선택하려면 프로토콜을 클릭하고 DC-ERG를 선택합니다.

실행을 클릭합니다. 대화 상자는 환자 정보와 함께 나타납니다. 정보가 정확하면 예를 클릭하고 6단계 중 하나를 진행합니다.

패리데이 케이지에 문을 닫고 임피던스 모드를 표시하려면 임피던스를 클릭합니다. 입 참조, 꼬리 접지 및 기록 전극의 값이 허용되는지 확인하고 단계를 클릭하여 6중 4단계로 진행하여 기준선 안정성을 테스트합니다. 추적보기를 보려면 미리 보기를 클릭합니다.

흔적은 200 마이크로볼트 미만의 피크-피크 진폭으로 낮은 소음이어야 합니다. 실험을 위해 마우스와 전극을 배치하려면, 2.5%의 페닐레프린 HCL 과 5%의 트로피카미드를 떨어뜨리기 전에 5%의 프로파라카인 염산으로 진정된 마우스의 각막을 마취한다. ERG 시스템 소프트웨어에서 올바른 환자가 선택되었는지 확인합니다.

프로토콜을 클릭합니다. 프로토콜 설명에서 DC-ERG를 선택하고 실행을 클릭합니다. 올바른 테스트가 수행되고 있는지 확인하려면 예를 클릭합니다.

6단계 중 하나를 사용하여 돔 내부의 희미한 빨간색 표시등을 켜고 가열된 레코딩 테이블에 마우스를 놓습니다. 집게를 사용하여 리어 레그 스킨을 조심스럽게 텐트로 두습니다. 그리고 한 손으로 바늘 전극을 단단히 고정시키고, 다른 손으로 전극을 후방 다리에 피하로 삽입하여 전극을 제자리에 고정시한다.

참고문헌 은, 은염화물 전극을 동물의 입에 넣고 중앙 펠릿이 뒤쪽 뺨을 따라 놓여 치아 뒤에 제자리에 놓습니다. 모세관 전극을 눈에 배치하기 전에 전극 홀더를 유리 모세혈관으로 수직으로 배치하고 검지 손가락으로 전극 홀더를 쓸어 들어 도입되었을 수 있는 기포를 제거합니다. 25 게이지 바늘을 사용하여 모세관 팁을 HBSS로 채우고 모세 혈관을 검사하여 팁에 기포가 갇혀 있지 않도록하십시오.

전극 홀더를 배치하여 HBSS가 채워진 모세혈관의 열린 팁이 각막과 부드럽게 접촉하도록 합니다. 그리고 거품을 도입하지 않도록주의하고 윤활유 아이 젤 디스펜서를 반전하여 초기 방울을 버리십시오. 그런 다음 윤활유 눈 젤 한 방울을 각 눈에 배치하여 전도도를 유지하고 기록 중에 탈수를 방지합니다.

DC-ERGs를 기록하려면 단계를 클릭하여 6단계 중 5단계를 선택하고 임피던스를 클릭하여 임피던스 검사 화면을 사용하여 왼쪽 과 오른쪽 눈의 저항을 검사합니다. 각 눈의 기록 전극에 대한 임피던스 값은 비슷해야 합니다. 그리고 지상 및 기준 전극 모두에 대한 임피던스 값은 10킬로함 미만이어야 한다.

미리 보기를 클릭하여 왼쪽 눈과 오른쪽 눈의 흔적을 보고 안정적인 기준선이 달성될 때까지 최대 10분 까지 기다립니다. 그런 다음 중지를 클릭하여 추적 미리 보기를 종료하고 실행을 클릭하여 레코딩을 시작합니다. 여기서, 조건부 녹아웃 및 야생형 마우스의 샘플 데이터 집합이 표시됩니다.

이 분석에서, 추적은 전극의 미세 한 거품으로 고통. 추적에서 피크-투-피크 노이즈를 증가시켰습니다. 별도의 분석에서, 전극 홀더 스탠드 내의 마이크로 전극을 조립하기 전에 진공 챔버를 사용하여 기포가 제거되었다.

초기 25초에 가장 적합한 선을 계산하여 드리프트 보정 된 응답을 다시 플로팅하고 DC-ERG 구성 요소의 진폭을 식별할 수 있습니다. 예상대로, RPE에서 7.1 칼륨 채널의 감소된 발현은 c-wave 및 빠른 진동을 크게 감쇠하여 망막 색소 상피 전기 적 특성의 현저한 손상을 나타낸다. 여기서, DC-ERG 성분의 상대진폭이, 야생형으로 정규화되고 상대적인 두 개의 가장 큰 광발성 a-wave 진폭에 대하여 플롯된, 도시된다.

이러한 형태의 분석은 RPE의 감소된 전기 반응이 단독으로 광수용체 활성의 감소에 의해 고려될 수 있는지 여부를 결정할 수 있다. 또는 RPE에서 발생하는 기본 결함이 있는 경우. 마우스 레코딩으로 이동하기 전에 안정적인 기준선을 달성하고 도입되었을 수 있는 기포에 대해 주기적으로 전극을 재검사해야 합니다.

어두운 적응형 ERG는 DC-ERG 이전에 기록하여 원뿔 구동 망막 기능을 측정할 수 있습니다. DC-ERG 후에 는 원뿔 구동 망막 응답을 평가하기 위해 빛으로 조정된 ERG도 수행할 수 있습니다.