Name: 정맥 기형에 대한 환자 유래 제노이식 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: 학습하세요 정맥 기형 연구를 위한 환자 유래 제노이식 모델 구축 방법을. 내피세포를 이용한 이 기법은 질병 기전 규명과 전임상 치료제 테스트에 활용됩니다.

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저자는 교정노라 레이크에 감사드립니다. 이 원고에서 보고된 연구는 국립 심장, 폐 및 혈액 연구소에 의해 지원되었다, 수상 번호 R01 HL117952 (E.B.), 건강의 국립 연구소의 일부. 이 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 국립 보건원의 공식 견해를 나타내는 것은 아닙니다.

<ol><li>Dompmartin, A., Vikkula, M., Boon, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venous+malformation%3A+update+on+aetiopathogenesis%2C+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Phlebology%3A+The+Journal+of+Venous+Disease%22%5BJournal%5D)">Venous malformation: update on aetiopathogenesis, diagnosis and management.</a> Phlebology: The Journal of Venous Disease. 25 (5), 224-235 (2010).</li>
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<li>Allen, P., Kang, K. T., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+onset+of+perfused+blood+vessels+after+implantation+of+ECFCs+and+MPCs+in+collagen%2C+PuraMatrix+and+fibrin+provisional+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative%22%5BJournal%5D)">Rapid onset of perfused blood vessels after implantation of ECFCs and MPCs in collagen, PuraMatrix and fibrin provisional matrices.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative. 9 (5), 632-636 (2015).</li>
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<li>Boscolo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+improves+TIE2-mutated+venous+malformation+in+murine+model+and+human+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Rapamycin improves TIE2-mutated venous malformation in murine model and human subjects.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (9), 3491-3504 (2015).</li>
</ol>

저자는 공개할 이해관계의 충돌이 없습니다.

여기서는 VM의 환자 유래 이노이식 모델을 생성하는 방법을 설명합니다. 이 뮤린 모델은 연구원이 병리학적인 루멘 확대에 대한 깊은 이해를 얻을 수 있게 해주는 우수한 시스템을 제시하며 VM 치료를 위한 보다 효과적이고 표적화된 치료법을 개발하는 데 중요한 역할을 할 것입니다. 이것은 모세관 림프 정맥 기형(16)과같은 혈관 이상의 그밖 모형을 조사하기 위하여 쉽게 적응될 수 있습니다. 재현 가능한 혈관 병변의 성공적인 생성에 중요 한 몇 가지 단계가 있다. 첫째, 환자 유래 내피 세포는 순수해야 하며(다른 세포 유형의 존재 없이) 주사 시에 기하급수적으로 증가한다. 섬유아세포 또는 기타 중간엽 비EC를 오염시키는 것은 길쭉한 형태에 의해 쉽게 인식될 수 있다. 드물게, 항체를 이용한 정제 후에도 자기구슬을 공수할 수 있으며, 소수의 비EC가 배양에 남아 있을 수 있다. 이러한 배양은 내피 특이적 세포 표면 마커를 통해 추가 정화가 필요하다. 대체 접근법으로, 내피 세포의 단일 세포 클론...

혈관의 발달에 있는 결점은 정맥 기형 (VM)를 포함하여 많은 질병의 근본 원인입니다. VM은 비정상적인 형태 발생 및 정맥1의확장을 특징으로 하는 선천성 질환이다. VM 조직 및 내피 세포 (EC)에 대한 중요한 연구는 두 가지 유전자에서 게인 돌연변이를 확인했습니다 : 티로신 키나아제 수용체 TIE2를 인코딩하는 TEK과 PIK3CA는PI3-kinase (PI3K),2,3,,4,5의p110α (촉매 하위 단위)를 인코딩합니다. 이러한 체세포 돌연변이는 PI3K/AKT를 포함한 주요 혈관신생/성장 신호 경로의 리간드 독립적인 하이퍼 활성화를 초래하여 3개의 압자정맥을3팽창시키는 결과를 낳는다. 이러한 중요한 유전 적 발견에도 불구하고 비정상적인 혈관 신생 및 확대 된 혈관 채널의 형성을 유발하는 후속 세포 및 분자 메커니즘은 여전히 완전히 이해되지 않습니다.
정상 및 병리학 적 혈관 신생 동안, 기존의 혈관 네트워크 및 EC에서 새로운 혈관싹증증증, 마이그레이션, 세포 외 매트릭스 (ECM) 리모델링 및 루멘 형성6을포함하는 중요한 세포 과정의 순서를 겪는다. EC의 체외 배양에서 2차원 및 3차원(2D/3D)은 이러한 각 셀룰러 특성을 개별적으로 조사하는 중요한 도구입니다. 그럼에도 불구하고, 마우스 모델에 대한 명확한 요구가 호스트 미세 환경 내에서 병리학 적 혈관 확대를 회수하면서 번역 연구를위한 표적 약물의 전임상 평가를위한 효율적인 플랫폼을 제공.
현재까지 TIE2 게인-기능 돌연변이와 관련된 VM의 형질전환 모린 모델은 보고되지 않았다. 현재 형질전환 VM 마우스 모델은 활성화 돌연변이 PIK3CA p.H1047R3,,5의유비쿼터스 또는 조직 제한 발현에 의존한다. 이 형질 전환 동물은 이 핫스팟 PIK3CA 돌연변이의 전신 또는 조직 특정 효력에 중요한 통찰력을 제공합니다. 이 모형의 한계는 초기 치사성의 결과로 높게 병리학적인 혈관 네트워크의 형성입니다. 따라서, 이러한 마우스 모델은 VM 병리학의 돌연변이 이벤트 및 국소화된 성질의 산발적 발생을 완전히 반영하지 않는다.
반대로, 환자 유래 이종이이식 모델은 환자로부터 유래한 병리학적 조직 또는 세포의 이식 또는 주입에 기초하여 면역결핍 마우스7을포함한다. 제노이식 모델은 새로운 치료제8의질병 발달 및 발견에 대한 지식을 넓히는 강력한 도구이다. 또한, 환자 유래 세포를 사용하면 과학자들이 돌연변이 이질성을 재구성하여 환자 표현형의 스펙트럼을 연구할 수 있습니다.
여기서는, 우리는 자티믹 누드 마우스의 뒷면에 피하로 주입되는 TIE2 및/또는 PIK3CA의 돌연변이 성분 활성 형태를 표현하는 환자 유래 VM EC가 피하되는 프로토콜을 기술합니다. 주입된 혈관 세포는 이전 혈관 이종이이식 모델9,,10,,11에기술된 바와 같이 혈관 신생을 촉진하기 위해 ECM 프레임워크에서 중단된다. 이러한 VM EC는 중요한 형태 발생을 겪고 지원 세포의 부재에 확대, perfused 병리학 혈관을 생성합니다. VM의 설명된 xenograft 모델은 통제되지 않은 루멘 확장을 억제하는 능력에 대한 표적 약물의 전임상 평가를 위한 효율적인 플랫폼을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>흉선 누드 마우스, (Foxn1-nu); 5-6 주, 수컷</td><td>Envigo</td><td>069 (nu) / 070 (nu / +)</td> <td>피하 주사</td></tr><tr><td>Biotinylated Ulex europeaus Agglutinin-I (UEA-I)</td> <td>Vector Laboratories</td><td>B-1065</td><td>조직 학적 분석</td></tr><tr><td>병 상단 필터 (500 ml; 0.2 &micro; M)</td> <td>Thermo Fisher</td><td>974106</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td> <td>BSA</td><td>A7906-50MG</td><td>세포 배양; 조직학적 분석</td></tr><tr><td>칼슘 클로라이드 이수화물 (CaCl2.2H2O)</td><td>Sigma</td><td>C7902-500G</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>캘리퍼스</td><td>전자 현미경 과학</td><td>50996491</td><td>병변 플러그 측정</td></tr><tr><td>CD31-conjugated magnetic beads (Dynabeads)</td><td>Life Technologies</td><td>11155D</td><td>EC separation</td></tr><tr><td>Cell strainer (100 &mu; M)</td><td>Greiner</td><td>542000</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Roche</td><td>10103578001</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Conical Tube; polypropylene (15 mL)</td><td>Greiner</td><td>07 000 241</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Conical Tube; polypropylene (50 mL)</td><td>Greiner</td><td>07 000 239</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Coplin staining jar</td><td>Ted Pella</td><td>21029</td><td>Histological anlaysis</td></tr><tr><td>커버 글라스 (50 X 22 mm)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12545E</td><td>조직학적 분석</td></tr><tr><td>DAB: 3,3'디아미노벤지딘 시약(ImmPACT DAB)</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4105</td><td>조직학적 분석,</td></tr><tr><td>Dulbecco의 독수리 배지 변형(DMEM)</td><td>Corning</td><td>10-027-CV</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>DynaMag-2</td><td>Life Technologies</td><td>12321D</td><td>EC 분리</td></tr><tr><td>Ear punch</td><td>VWR</td><td>10806-286</td><td>피하 주사</td></tr><tr><td>EDTA (0.5M, pH 8.0)</td><td>Life Technologies</td><td>15575-020</td><td>Histological anlaysis</td></tr><tr><td>Endothelial Cell Growth Medium-2 (EGM2) Bulletkit (basal medium and supplements)</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Eosin Y (alcohol-based)</td><td>Thermo Scientific</td><td>71211</td><td>Histological anlaysis</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs</td><td>2716</td><td>조직학적 분석 Fetal</td></tr><tr><td>Bovine Serum (FBS) , HyClone</td><td>GE Healthcare</td><td>SH30910.03</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>필터 팁 1,250 &mu; L</td><td>MidSci</td><td>AV1250-H</td><td>다단계</td></tr><tr><td>필터 팁 20 &mu; L</td><td>VWR</td><td>10017-064</td><td>여러 단계</td></tr><tr><td>필터 팁 200 &mu; L</td><td>VWR</td><td>10017-068</td><td>다단계</td></tr><tr><td>포르말린 완충 용액 (10%)</td><td>Sigma</td><td>F04586</td><td>병변 플러그 절제</td></tr><tr><td>혈구계(INCYTO; 일회용)</td><td>SKC FILMS</td><td>DHCN015</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Vector Hematoxylin</td><td>H-3401</td><td>Histological anlaysis</td></tr><tr><td>Human plasma fibronectin purified protein (1mg/mL)</td><td>Sigma</td><td>FC010-10MG</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Hydrogen Peroxide solution (30% w/w)</td><td>Sigma</td><td>H1009</td><td>Histological anlaysis</td></tr><tr><td>ImageJ Software</td><td></td><td></td><td>분석</td></tr><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Akorn Animal Health</td><td>59399-106-01</td><td>피하 주사</td></tr><tr><td>마그네슘 황산염 헵타하이드레이트 (MgSO4.7H2O)</td> <td>시그마</td><td>M1880-500G</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>기저막 매트릭스 (Phenol Red-Free; LDEV-free)</td><td>Corning</td><td>356237</td> 피<td>하주사</td></tr><tr><td>미세원심분리기 튜브(1.5mL)</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td>EC 분리</td></tr><tr><td>현미경 슬라이드 Superfrost(75mm x 25mm)</td><td>Fisher Scientific</td><td>1255015-CS</td><td>조직학적 분석</td></tr><tr><td>바늘, 26G x 5/8인치 Sub-Q 멸균 바늘</td><td>Becton Dickinson(BD)</td><td>BD305115</td><td>피하 주사</td></tr><tr><td>정상 horse serum</td><td>Vector Laboratories</td><td>S-2000</td><td>조직학적 분석,</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신-L-글루타민 (100X),</td> <td>Corning</td><td>30-009-CI</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>영구 장착 매체 (VectaMount)</td><td>Vector Laboratories</td>, <td>H-5000</td><td>조직학적 분석,</td></tr><tr><td>유봉 크기, C, Plain</td><td>, Thomas Scientific</td><td>3431F55</td><td>EC 절연</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP3994</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>규모</td><td>VWR</td><td>65500-202</td><td>피하 주사</td></tr><tr><td>혈청 피펫 (10 ml)</td><td>VWR</td><td>89130-898</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>혈청 피펫 (5ml)</td><td>VWR</td><td>89130-896</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>탄산나트륨 (Na2CO3)</td><td>Sigma</td><td>223530</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>Streptavidin, 양 고추 냉이 peroxidase, 농축액, IHC</td><td>Vector Laboratories</td><td>SA-5004</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>주사기 (60ml)</td> <td>BD Biosciences</td><td>309653</td><td>Cel 배양</td></tr><tr><td>주사기 필터 (0.2 &micro; M)</td><td>Corning</td><td>431219</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>주사기(Luer Lock 포함 1mL)</td><td>Becton Dickinson (BD)</td><td>BD-309628</td><td>피하 주사</td></tr><tr><td>조직 배양 처리 플레이트(100 X 20mm)</td><td>Greiner</td><td>664160</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>조직 배양 플레이트(145X20mm)</td><td>Greiner</td><td>639160</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>조직 배양 처리 플레이트(60 X 15) mm</td><td>Eppendorf</td><td>30701119</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Tris-base (Trizma base)</td><td>Sigma</td><td>T6066</td><td>Histological anlaysis</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution (0.4 %)</td><td>Life Technologies</td><td>15250061</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Trypsin EDTA, 1X (0.05% Trypsin/0.53mM EDTA)</td><td>Corning</td><td>25-052-Cl</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Biorad</td><td>170-6531</td><td>Histological anlaysis</td></tr><tr><td>Wheaton 병</td><td>VWR</td><td>16159-798</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>자일렌</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>X3P-1GAL</td><td>조직학적 분석</td></tr></tbody></table>

정맥 기형에 대한 환자 유래 제노이식 모델

A Patient-Derived Xenograft Model for Venous Malformation

정맥 기형 (VM)은 혈관 이상으로 정맥 네트워크의 손상된 발달로 인해 팽창되고 종종 기능 장애 정맥이 발생합니다. 이 문서의 목적은 인간 VM을 모방하고 환자 이질성을 반영할 수 있는 뮤린 이노이식 모델의 확립을 신중하게 설명하는 것입니다. 내피 세포(EC)에서 의학적 유전(체혈) TEK(TIE2) 및 PIK3CA 돌연변이를 하이퍼 활성화시키는 것은 VM에서 병리학적 혈관 확대의 주요 동인으로 확인되었다. TEK 다음 프로토콜은 돌연변이 TIE2 및/또는 PIK3CA를 발현하는 환자 유래 EC의 격리, 정제 및 확장을 설명합니다. 이 EC는 면역 절제성 자티믹 마우스의 뒤쪽으로 피하주사되어 유방 혈관 채널을 생성합니다. TIE2 또는 PIK3CA 돌연변이 EC로 생성된 병변은 VM 환자 조직의 주입 및 조직 병리학적 특징을 재구성한 7\u20129 일 이내에 눈에 띄게 혈관화된다. 이 VM 제노이식 모델은 VM 형성 및 확장을 주도하는 세포 및 분자 메커니즘을 조사하는 신뢰할 수 있는 플랫폼을 제공합니다. 또한, 본 모델은 인간 VM에서 볼 수 있는 비정상적인 혈관 확대를 방지하는 새로운 약물 후보의 효능을 시험하는 번역 연구에 도움이 될 것이다.

이 프로토콜은 면역 형결성 누드 마우스의 뒤쪽으로 환자 유래 EC의 피하 주입을 기반으로 VM의 뮤린 제노이식 모델을 생성하는 과정을 설명합니다. 내피 세포 식민지는 VM 조직 또는 레시오날 혈액으로부터 초기 세포 격리 후 4 주 이내에 수확 될 수있다(도 1A, B). 주입 다음날, xenograft 병변 플러그는 약 80\u2012100 mm2의표면적을 커버한다. 우리의 손에, TIE2 / PIK3CA 돌연변이 EC와 병변 플러그는 눈에 띄게 혈관 및 주입 에서 7\u20129 일 이내에 perfused 14,,15 (그림 1C-E). 그러나, 병변 성장의 정도는 가변적이고 환자 및 샘플 이질성에 반영됩니다.
병변 플러그는 인간 VM 조직의...

우리는 정맥 기형의 뮤린 xenograft 모형을 생성하는 상세한 프로토콜을 제시합니다. 본 모델은 하이퍼 활성화 TIE2 및/또는 PIK3CA 유전자 돌연변이를 포함하는 환자 유래 내피 세포의 피하 주입을 기반으로 한다. Xenograft 병변은 VM 환자 조직의 조직 병리학적 특징을 밀접하게 재구성합니다.

Venous malformation (VM) is a vascular anomaly that arises from impaired development of the venous network resulting in dilated and often dysfunctional ...

이 프로토콜은 정맥 기형의 조직 병리학을 재구성하는 환자 유래 제노이식을 만드는 데 사용할 수 있습니다. 이것은 우리의 전임상 치료 시험을 더 할 수 있었습니다. 이 기술은 환자 직접 내피 세포의 성장과 실험 치료에 대한 반응의 매일 모니터링을 허용하는 빠르고 신뢰할 수있는 NVivo 시스템을 제공합니다.이 방법은 쉽게 혈관 또는 림프 이상의 다른 유형을 조사하기 위해 적응 될 수있다. 먼저 주사를 위해 세포 현탁액을 준비합니다. 2 분 동안 섭씨 37도에서 사전 따뜻하게 0.05 %의 섭씨 0.05 %의 5 밀리리터로 내피 세포를 트립시니얼.트립신을 중화시키고 EGM의 5 밀리리터를 추가하여 세포를 150 밀리리터 원내 튜브로 수집합니다. 원심 분리는 5 분 동안 400 배 G로 한 다음 슈퍼 나탄을 흡인하고 EGM의 3 밀리리터에서 세포를 다시 중단합니다. 혈전계로 세포를 계산합니다.원하는 세포 수로 부피를 새로운 50 밀리리터 원판 튜브로 벤처하고 원심분리에 의해 세포를 다시 펠릿하게 한다. 셀 펠릿을 풀기 위해 소량을 남기는 슈퍼네티티를 흡인합니다. 주사 당 BMEM의 220 마이크로 리터와 세포 펠릿을 다시 중단.거품을 만들지 않도록 얼음에 셀 서스펜션을 철저히 섞습니다. BMEM 세포 배양 믹스를 플런저를 당겨 서 1 밀리리터 주사기 개구부로 혼합한다. 26 게이지 멸균 바늘을 주사기에 잠그고 주입 하기 전에 얼음위에 준비된 주사기를 평평하게 유지합니다.마우스가 제대로 마취되었는지 확인 한 후 위장에 배치하고 70 %의 에탄올로 주사 부위를 소독합니다. 준비된 주사기를 부드럽게 굴려 정착된 세포를 다시 보냅니다. 플레이크는 주사기의 끝으로 거품을 내고 셀 서스펜션의 소량을 추방한다.주사 부위의 피부를 꼬집어 구조와 같은 텐트를 만듭니다. 그런 다음 피부 바로 아래에 바늘을 삽입하고 바늘이 근육 조직에 주입을 방지하기 위해 핀치 피부를 방출하여 피부 깊숙이 있는지 확인하십시오. 바늘을 꾸준히 조심스럽게 주입 200 작은 구형 질량을 만들기 위해 세포 현탁액의 마이크로 리터.근육에 세포 현탁액을 주입 하지 않도록 주의. 캘리퍼로 각 플러그의 길이와 너비를 측정합니다. 눈금자 옆 도마에 해부된 제노이식 플러그를 정렬하고 이미지를 사용하여 병변의 총 혈관을 기록합니다.그런 다음 실온에서 하룻밤 사이에 10 %의 포르말린에 잠급하여 플러그를 고정하십시오. 해부 후, 병변 플러그는 조직학적 분석을 위해 처리되고 UEA-1을 위해 염색되어 플러그 내에서 인간 유래 내피 세포를 검출한다. 겹침을 피하기 위해 병변 섹션 내의 X 평면 패턴에서 20 X 배율에서 밝은 필드 현미경으로 병변 섹션당 5 개의 HPF 이미지를 가져 가라.촬영한 이미지에 배율 막대를 포함해야 합니다. 이미지에서 HPF 이미지를 열고 스케일 막대의 픽셀을 보정하고 직선 도구를 사용하고 스케일 막대를 통과 J.To합니다. 그런 다음 측정된 픽셀을 분석 및 설정 배율조정을 클릭하여 밀리미터로 변환합니다.다음으로 측정 설정 분석 및 영역을 선택하고 오버레이에 추가합니다. 이 측정을 분석하고 측정하여 HPF의 총 필드 영역을 측정하여 정량화를 위해 이 측정을 저장합니다. 무료 손 선택 도구를 사용하여 수동으로 UEA-1 양성 혈관 채널을 간략하게 설명합니다.분석 및 측정을 클릭하여 설명된 영역을 정량화합니다. HPF 내의 모든 혈관 채널을 측정합니다. 각 섹션에서 가져온 5개의 HPF에 대한 프로세스를 반복하고 값을 Excel로 전송하여 추가 분석을 수행합니다.그런 다음 원고 방향에 따라 혈관 영역 및 혈관 밀도의 백분율을 계산합니다. 이 프로토콜을 사용하여 TIE2 또는 PIK3CA 활동적인 돌연변이 내피 세포를 가진 병변 플러그는 주사 후 7~9일 이내에 눈에 띄게 혈관화되고 침투된다. 병변 플러그는 인간 VM 조직의 조직 병리학적 특징과 밀접하게 유사하며 내피 세포의 얇은 층에 의해 정렬된 큰 혈관 채널이 보입니다.이러한 혈관 구조는 전형적으로 숙주 마우스 혈관과 기능성 해부학을 확인하는 적혈구를 함유하고 있다. 인간 특이렉틴 UEA-1을 이용한 면역히스토케미칼 염색은 혈관 부위를 안감하는 세포가 마우스 혈관보다는 인간 이식된 세포로부터 유래되는 것을 확인한다. 이 절차에 따라, 증식 또는 석멸의 마커에 대한 병변 섹션의 추가 염색을 실험 치료의 특정 효과를 분석하기 위해 수행 될 수있다.이 scenographic 모형은 VM 환자를 위한 몇몇 임상 시험에서 효험을 보여주었던 mTOR 억제제 라파마이신과 같은 정맥 기형에 대한 새로운 치료의 전임상 연구 결과를 위해 이용되었습니다.

a-patient-derived-xenograft-model-for-venous-malformation

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

이 비디오에서는 인간 유래 흑색종 세포를 면역이 저하된 마우스의 옆구리에 피하로 이식합니다. PDX 모델을 사용하면 생체 내  조건에서 관찰된 종양 이질성과 흑색종 공격성을 더 잘 요약할 수 있는 흑색종 세포의 전임상 조사를 수행할 수 있습니다.

환자 유래 이종이식 모델링: 흑색종 마우스 모델을 생성하는 기술

우리는 성인 마우스에서 대뇌 정맥 고혈압 안정적인 모델을 생성하는 방법을 설명한다. 이 모델은 광범위 래트에서 설명되고 시험되었다. 마우스에서이 새로운 상대 유전자 변형 동물을 사용할 수있는 가능성을 열어하여 모델의 애플리케이션을 넓게.

성인 마우스 정맥 ​​고혈압 모델 : 외부 경정맥 정맥 문합에 경동맥.

혈관은 성공적인 조직 공학의 접근 방법의 핵심입니다. 따라서, 신뢰성있는 기술은 조직 구조에서의 혈관 망의 발달을 평가하기 위해 필요하다. 여기서 우리는 시각화 및 생체 내에서 혈관 생성을 정량화하기 위해 간단하고 비용 효율적인 방법을 제시한다.

전체 피부 결함 모델은 생체의 혈관 신생을 평가하기<em&gt; 생체</em

세포 및 분자 neotissue 형성에 대한 우리의 지식을 개선하기 위해, TEVG의 쥐 모델은 최근에 개발되었다. 이식은 C57BL / 6 마​​우스의 신동맥 대정맥 개재 이식으로 이식되었다. 이 모델은 우리의 임상 연구에서 달성 된 것과 유사한 결과를 얻을 수 있지만, 훨씬 단축 된 시간 과정을 통해.

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

우리는 고립과 잘 특성화 된 환경에서 생체 내에서 혈관을 분석하기위한 모델로서 동정맥 (AV) 루프의 생성을위한 미세 수술 방법을 설명합니다. 이 모델은뿐만 아니라 혈관 신생의 조사에 유용 할뿐만 아니라 최적의 엔지니어링 축 방향으로 혈관 및 이식 가능한 조직에 적합합니다.

소형 동물 모델에서의 동정맥 (AV) 루프는 혈관 신생과 혈관을 조성한 조직 공학을 공부하기

이 비디오는 쥐의 정맥 삽입 수술 후 근육 내막 증식증의 발달을 연구하는 모델을 보여줍니다.

정맥 삽입 위치 모델 : 바이 패스 이식 개통을 연구하기위한 적절한 모델

환자 유래 이종이식(PDX) 모델은 흑색종 분자 및 생물학적 특징을 보다 강력하게 회귀하고 기존의 플라스틱 조직 배양 계 세포 에 비해 치료 반응의 더 예측이다. 여기서는 새로운 PDX 모델 의 확립과 기존 PDX 모델의 특성화/실험에 대한 표준 운영 프로토콜에 대해 설명합니다.

흑색종 환자 유래 이종이식 모델

대반 카발 누공은 두 벽을 통해 뮤린 적외선 대인 대공을 열등한 정맥으로 뚫고 열등한 정맥 카바의 부분 결찰을 통해 유출에 협착증을 생성하여 만들어졌습니다. 이 재현 가능한 모델은 중앙 정맥 협착증을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

유출 협착증을 가진 Aortocaval 누공을 사용하여 중앙 정맥 협착증의 뮤린 모형

본 프로토콜은 정맥 이식편을 사용하여 정맥 혈관 화 수술 후 정맥 심상 증식을 감쇠하는 전략을 개발하기 위한 동맥 혈압에 정맥을 복종시킴으로써 정맥 친혈증을 실험적으로 만드는 것을 목표로 합니다.

정맥 이식편을 사용하여 동맥 혈압하에서 인티맥 증식을 평가하는 재혈관 외과를 모방한 토끼 정맥 중개 모델

우리는 내인성 HER2 증폭 염증성 유방암 세포주의 꼬리 정맥 주사를 통해 생성된 유방암 뇌 전이의 이종이식 마우스 모델을 설명합니다.

염증성 유방암 세포의 꼬리 정맥 주입을 통한 뇌 전이 모델링

이 프로토콜에서는 심폐 우회술 없이 왼쪽 흉벽의 작은 절개를 통해 새로운 돼지 정맥 우회술을 시행했습니다. 수술 후 병리학 연구가 수행되어 내막이 두꺼워지는 것으로 나타났습니다.

돼지 정맥 이식 질환 모델의 수립 및 평가

학습하세요 정맥 기형 연구를 위한 환자 유래 제노이식 모델 구축 방법을. 내피세포를 이용한 이 기법은 질병 기전 규명과 전임상 치료제 테스트에 활용됩니다.

정맥 기형에 대한 환자 유래 제노이식 모델

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