Name: 외상성 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응의 시스템 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-27T13:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: 학습하세요 외상성 뇌 손상에서 신경 염증 및 혈역학 반응을 특성화하는 방법을. 이 프로토콜은 부분 최소 제곱 회귀를 활용한 다변량 시스템 분석을 통해 뇌 손상에 대한 전체적인 이해를 제공합니다.

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이 프로젝트는 National Institutes of Health R21 NS104801 (EMB) 및 R01 NS115994 (LBW / EB) 및 애틀랜타 주니어 교수진 집중 상 (EMB)의 어린이 건강 관리가 지원했습니다. 이 작업은 또한 미국 국방부가 상 번호 (Award No)에 따라 의회 감독 의료 연구 프로그램을 통해 지원했습니다. W81XWH-18-1-0669 (LBW / EMB). 의견, 해석, 결론 및 권고는 저자의 의견이며 반드시 국방부에서 보증하는 것은 아닙니다. 이 자료는 보조금 번호 1937971에 따라 국립 과학 재단 대학원 연구 펠로우십 프로그램에서 지원하는 작업을 기반으로합니다. 이 자료에 표현 된 의견, 결과 및 결론 또는 권장 사항은 저자의 의견이며 반드시 국립 과학 재단의 견해를 반영하지는 않습니다.

<ol><li>Langlois, J. A., Rutland-Brown, W., Wald, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+and+impact+of+traumatic+brain+injury%3A+a+brief+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Head+Trauma+Rehabilitation%22%5BJournal%5D)">The epidemiology and impact of traumatic brain injury: a brief overview.</a> Journal of Head Trauma Rehabilitation. 21 (5), 375-378 (2006).</li>
<li>Iraji, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resting+State+Functional+Connectivity+in+Mild+Traumatic+Brain+Injury+at+the+Acute+Stage%3A+Independent+Component+and+Seed-Based+Analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Resting State Functional Connectivity in Mild Traumatic Brain Injury at the Acute Stage: Independent Component and Seed-Based Analyses.</a> Journal of Neurotrauma. 32 (14), 1031-1045 (2015).</li>
<li>Guskiewicz, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cumulative+effects+associated+with+recurrent+concussion+in+collegiate+football+players%3A+the+NCAA+Concussion+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Cumulative effects associated with recurrent concussion in collegiate football players: the NCAA Concussion Study.</a> Journal of the American Medical Association. 290 (19), 2549-2555 (2003).</li>
<li>Longhi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+window+of+vulnerability+to+repetitive+experimental+concussive+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Temporal window of vulnerability to repetitive experimental concussive brain injury.</a> Neurosurgery. 56 (2), 364-374 (2005).</li>
<li>Committee on Sports-Related Concussions in Youth, Board on Children, Youth, and Families, Institute of Medicine, National Research Council. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Sports-Related+Concussions+in+Youth%3A+Improving+the+Science%2C+Changing+the+Culture%22">Sports-Related Concussions in Youth: Improving the Science, Changing the Culture</a>. , National Academies Press (US). Washington (DC). http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK169016/ (2014).</li>
<li>Barkhoudarian, G., Hovda, D. A., Giza, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Molecular+Pathophysiology+of+Concussive+Brain+Injury+-+an+Update%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Medicine+and+Rehabilitation+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">The Molecular Pathophysiology of Concussive Brain Injury - an Update.</a> Physical Medicine and Rehabilitation Clinics of North America. 27 (2), 373-393 (2016).</li>
<li>McCrory, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+statement+on+concussion+in+sport--the+4th+International+Conference+on+Concussion+in+Sport+held+in+Zurich%2C+November+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Journal+of+Sport+Medicine%22%5BJournal%5D)">Consensus statement on concussion in sport--the 4th International Conference on Concussion in Sport held in Zurich, November 2012.</a> Clinical Journal of Sport Medicine. 23 (2), 89-117 (2012).</li>
<li>Belanger, H. G., Vanderploeg, R. D., Curtiss, G., Warden, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+neuroimaging+techniques+in+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuropsychiatry+and+Clinical+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Recent neuroimaging techniques in mild traumatic brain injury.</a> Journal of Neuropsychiatry and Clinical Neurosciences. 19 (1), 5-20 (2007).</li>
<li>Sours, C., Zhuo, J., Roys, S., Shanmuganathan, K., Gullapalli, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruptions+in+Resting+State+Functional+Connectivity+and+Cerebral+Blood+Flow+in+Mild+Traumatic+Brain+Injury+Patients%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Disruptions in Resting State Functional Connectivity and Cerebral Blood Flow in Mild Traumatic Brain Injury Patients.</a> PLoS ONE. 10 (8), 0134019(2015).</li>
<li>Buckley, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+Microvascular+Cerebral+Blood+Flow+Assessed+by+Diffuse+Correlation+Spectroscopy+after+Repetitive+Concussions+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Decreased Microvascular Cerebral Blood Flow Assessed by Diffuse Correlation Spectroscopy after Repetitive Concussions in Mice.</a> Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 35 (12), 1995-2000 (2015).</li>
<li>Sankar, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+cerebral+blood+flow+is+a+non-invasive+biomarker+of+neuroinflammation+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Low cerebral blood flow is a non-invasive biomarker of neuroinflammation after repetitive mild traumatic brain injury.</a> Neurobiology of Disease. 124, 544-554 (2019).</li>
<li>Vagnozzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+window+of+metabolic+brain+vulnerability+to+concussions%3A+mitochondrial-related+impairment--part+I%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Temporal window of metabolic brain vulnerability to concussions: mitochondrial-related impairment--part I.</a> Neurosurgery. 61, 379-388 (2007).</li>
<li>Longhi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+window+of+vulnerability+to+repetitive+experimental+concussive+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Temporal window of vulnerability to repetitive experimental concussive brain injury.</a> Neurosurgery. 56, 364-374 (2005).</li>
<li>Fujita, M., Wei, E. P., Povlishock, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intensity-+and+interval-specific+repetitive+traumatic+brain+injury+can+evoke+both+axonal+and+microvascular+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Intensity- and interval-specific repetitive traumatic brain injury can evoke both axonal and microvascular damage.</a> Journal of Neurotrauma. 29, 2172-2180 (2012).</li>
<li>Angoa-Perez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sports-related+head+injury%3A+bridging+the+gap+between+preclinical+research+and+clinical+reality%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Animal models of sports-related head injury: bridging the gap between preclinical research and clinical reality.</a> Journal of Neurochemistry. 129, 916-931 (2014).</li>
<li>Prins, M. L., Hales, A., Reger, M., Giza, C. C., Hovda, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeat+traumatic+brain+injury+in+the+juvenile+rat+is+associated+with+increased+axonal+injury+and+cognitive+impairments%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Repeat traumatic brain injury in the juvenile rat is associated with increased axonal injury and cognitive impairments.</a> Developmental Neuroscience. 32, 510-518 (2010).</li>
<li>Viano, D. C., Hamberger, A., Bolouri, H., Saljo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concussion+in+professional+football%3A+animal+model+of+brain+injury--part+15%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Concussion in professional football: animal model of brain injury--part 15.</a> Neurosurgery. 64, 1162-1173 (2009).</li>
<li>Kane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+human+repetitive+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A mouse model of human repetitive mild traumatic brain injury.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203, 41-49 (2012).</li>
<li>Meehan, W. P., Zhang, J., Mannix, R., Whalen, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+Recovery+Time+Between+Injuries+Improves+Cognitive+Outcome+After+Repetitive+Mild+Concussive+Brain+Injuries+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Increasing Recovery Time Between Injuries Improves Cognitive Outcome After Repetitive Mild Concussive Brain Injuries in Mice.</a> Neurosurgery. 71 (4), 885-892 (2012).</li>
<li>Durduran, T., Yodh, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffuse+correlation+spectroscopy+for+non-invasive%2C+micro-vascular+cerebral+blood+flow+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroImage%22%5BJournal%5D)">Diffuse correlation spectroscopy for non-invasive, micro-vascular cerebral blood flow measurement.</a> NeuroImage. 85, 51-63 (2014).</li>
<li>Sathialingam, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+separation+diffuse+correlation+spectroscopy+for+measurement+of+cerebral+blood+flow+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Small separation diffuse correlation spectroscopy for measurement of cerebral blood flow in rodents.</a> Biomedical Optics Express. 9 (11), 5719(2018).</li>
<li>Lee, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+optical+assessment+of+resting-state+cerebral+blood+flow+in+children+with+sickle+cell+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Noninvasive optical assessment of resting-state cerebral blood flow in children with sickle cell disease.</a> Neurophotonics. 6 (03), 1(2019).</li>
<li>Wang, H., Liu, Q., Tu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpretation+of+partial+least-squares+regression+models+with+VARIMAX+rotation%5BTitle%5D)+AND+%22Partial+Least+Squares%22%5BJournal%5D)">Interpretation of partial least-squares regression models with VARIMAX rotation.</a> Partial Least Squares. 48 (1), 207-219 (2005).</li>
<li>Eriksson, L., Byrne, T., Johansson, E., Trygg, J., Vikström, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-+and+Megavariate+Data+Analysis+Basic+Principles+and+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Umetrics+Academy%22%5BJournal%5D)">Multi- and Megavariate Data Analysis Basic Principles and Applications.</a> Umetrics Academy. , (2013).</li>
<li>Conzen, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+and+regional+hemodynamics+of+isoflurane+and+sevoflurane+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+Analgesia%22%5BJournal%5D)">Systemic and regional hemodynamics of isoflurane and sevoflurane in rats.</a> Anesthesia and Analgesia. 74 (1), 79-88 (1992).</li>
<li>Durduran, T., Choe, R., Baker, W. B., Yodh, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffuse+optics+for+tissue+monitoring+and+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Reports+on+Progress+in+Physics%22%5BJournal%5D)">Diffuse optics for tissue monitoring and tomography.</a> Reports on Progress in Physics. 73 (7), 076701(2010).</li>
<li>Lee, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+separation+frequency-domain+near-infrared+spectroscopy+for+the+recovery+of+tissue+optical+properties+at+millimeter+depths%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Small separation frequency-domain near-infrared spectroscopy for the recovery of tissue optical properties at millimeter depths.</a> Biomedical Optics Express. 10 (10), 5362-5377 (2019).</li>
<li>Bertrand, F., Maumy-Bertrand, M. plsRglm: Partial Least Squares Regression for Generalized Linear Models. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://CRAN.R-project.org/package=pplsRglm">https://CRAN.R-project.org/package=pplsRglm</a> (2019).</li>
<li>White, B. R., Bauer, A. Q., Snyder, A. Z., Schlaggar, B. L., Lee, J. M., Culver, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+functional+connectivity+in+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Imaging of functional connectivity in the mouse brain.</a> PLoS One. 6, 16322(2011).</li>
<li>Buckley, E. M., Parthasarathy, A. B., Grant, P. E., Yodh, A. G., Franceschini, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffuse+correlation+spectroscopy+for+measurement+of+cerebral+blood+flow%3A+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Diffuse correlation spectroscopy for measurement of cerebral blood flow: future prospects.</a> Neurophotonics. 1 (1), 011009(2014).</li>
<li>Rowan, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+reactivity+measured+in+awake+mice+using+diffuse+correlation+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular reactivity measured in awake mice using diffuse correlation spectroscopy.</a> Neurophotonics. 8 (1), (2021).</li>
<li>Tate, J., Ward, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferences+in+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22The+Clinical+Biochemist.+Reviews%22%5BJournal%5D)">Interferences in immunoassay.</a> The Clinical Biochemist. Reviews. 25 (2), 105-120 (2004).</li>
<li>Staples, E., Ingram, R. J. M., Atherton, J. C., Robinson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+the+quantification+of+cytokines+present+at+low+concentrations+in+small+human+mucosal+tissue+samples+using+Luminex+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimising the quantification of cytokines present at low concentrations in small human mucosal tissue samples using Luminex assays.</a> Journal of Immunological Methods. 394 (1-2), 1-9 (2013).</li>
<li>Gierut, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network-level+effects+of+kinase+inhibitors+modulate+TNF-%CE%B1-induced+apoptosis+in+the+intestinal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Signaling%22%5BJournal%5D)">Network-level effects of kinase inhibitors modulate TNF-α-induced apoptosis in the intestinal epithelium.</a> Science Signaling. 8 (407), 129(2015).</li>
</ol>

여기에서 우리는 반복적 인 경미한 외상성 뇌 손상에 대한 혈역학 및 신경 염증 반응의 평가를위한 방법을 자세히 설명합니다. 또한 부분 최소 제곱 회귀를 사용하여 이러한 데이터를 다변량 시스템 분석의 일부로 통합하는 방법을 보여 주었습니다. 아래 텍스트에서 우리는 프로토콜과 관련된 몇 가지 주요 단계 및 제한 사항뿐만 아니라 기존 방법에 비해 방법의 장점 / 단점에 대해 논의 할 것입니다.
가벼운 외상성 뇌 손상의 체중 감소 모델. 외상성 뇌 손상 유도의 이러한 방법은 스포츠 관련 두부 부상10,19에서 흔히 볼 수 있는 빠른 전후부 회전 가속에 뒤따르는 둔한 충격을 특징으로 한다는 점에서 유리하다. 확실히, lissencephalic 마우스 뇌는 gyrocephalic 인간 두뇌의 복잡성을 완전히 회복하지 못합니다. 그럼에도 불구하고,이 모델은 ...

개요 경미한 외상성 뇌 손상 (mTBIs)은 ~ 1.6-3.8 백만 운동 선수에게 매년 영향을 미칩니다1. 뇌진탕 하 및 뇌진탕 부상을 포함한 이러한 부상은 일시적인 신체적, 정서적, 심리적 및인지 적 증상을 가진 환자를 떠날 수 있습니다2. 더욱이, "취약성의 창" 내에서 지속되는 반복적인 mTBI(rmTBI)는 단일 mTBI 단독의 효과보다 더 오래 지속되는 인지적 결과의 누적된 심각도 및 지속기간을 야기할 수 있고, 궁극적으로는 기능(4,5,6)의 영구적인 손실로 이어질 수 있다. 많은 환자들이 비교적 짧은 기간 (<1 주) 내에 회복되지만, 환자의 10-40 %는 > 1 개월 동안 mTBI의 더 오래 지속되는 효과를 겪으며 일부는 1 년까지 지속됩니다 3,7,8,9. 이러한 부상의 높은 유병률과 지속적인 결과에도 불구하고 부상 메커니즘은 제대로 이해되지 않으며 효과적인 치료 전략이 존재하지 않습니다.
mTBI / rmTBI 이후의 결과의 높은 변동성을 감안할 때, 말단 mTBI / rmTBI 연구에서 얻은 조직으로부터 초기 단계 분자 트리거를 식별하는 데있어 한 가지 과제는 이러한 분자 트리거의 결정적인 "급성 분자 연결"을 보여주는 종단 데이터가 부족하다는 것입니다. 이 도전을 극복하기 위해 우리 그룹은 확산 상관 분광법 (DCS)이라는 광학 도구를 사용하여 급격하게 측정 된 급격하게 감소 된 뇌 혈류가 rmTBI10의 마우스 모델에서 장기적인인지 결과와 강하게 관련이 있음을 발견했습니다. 이 혈역학적 바이오마커를 사용하여, 우리는 뇌혈류가 급격히 낮은 마우스(그리고 확장에 의해, 더 나쁜 예측된 장기적 결과)를 가진 마우스가 MAPK 및 NFκB 경로 둘 다에서 뉴런 포스포-신호전달의 수반되는 급성 증가, 전염증성 사이토카인의 뉴런 발현의 증가, 식세포/미세아교세포 마커 Iba111의 발현 증가를 나타냈다. . 이러한 데이터는 신경 포스포 신호전달, 사이토카인 발현 및 미세아교세포 활성화에 대한 가능한 역할을 시사하며, 손상 후 뇌혈류의 급성 조절뿐만 아니라 뉴런 기능 장애 및 더 나쁜인지 결과를 초래하는 신호전달 캐스케이드를 촉발시키는 데 있다. 여기에서는 rmTBI 후 혈역학적 및 신경 염증 환경을 동시에 조사하는 방법과 이러한 복잡한 데이터 세트를 통합하는 방법에 대해 자세히 설명합니다. 구체적으로, 우리는이 포괄적 인 접근법에 대한 네 가지 주요 단계에 대한 절차를 간략하게 설명합니다 : (1) 경미한 외상성 뇌 손상의 체중 감소 모델, (2) 확산 상관 분광법을 통한 뇌 혈류 평가, (3) 신경 염증 환경의 정량화 및 (4) 데이터 통합 (그림 1). 아래에서는 이러한 주요 단계 각각에 대한 간략한 소개를 제공하여 독자가 우리의 방법의 근거를 안내하는 데 도움을줍니다. 원고의 나머지 부분은 이러한 각 주요 단계에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다.
가벼운 외상성 뇌 손상의 체중 감소 모델 반복적 인 경증 TBI의 많은 우수한 전임상 모델이 존재하지만 12,13,14,15,16,17,18, 우리는 잘 정립되고 임상 적으로 관련된 체중 감소 폐쇄 두부 손상 모델을 사용합니다. 이 모델의 주요 특징은 (1) 손상되지 않은 두개골 / 두피의 둔한 충격과 목에 대한 머리의 무제한 회전, (2) 명백한 구조적 뇌 손상, 부종, 혈액 - 뇌 장벽 손상, 급성 세포 사멸 또는 만성 뇌 조직 손실 없음, (3) 여러 번 히트 한 후에 만 나타나는 지속적인(최대 1 년의) 인지 결핍(그림 2)을 포함합니다.
확산 상관 분광법을 통한 뇌 혈류 평가 확산 상관 분광법 (DCS)은 혈류 5,20,21을 측정하는 비 침습적 광학 기술입니다. DCS에서는 근적외선 광원이 조직 표면에 배치됩니다. 검출기는 조직 표면의 소스로부터 고정된 거리에 배치되어 조직을 통해 흩어져있는 빛을 감지합니다 (그림 3). 움직이는 적혈구를 산란하면 감지 된 빛의 세기가 시간에 따라 변동합니다. 상관 확산 이론으로 알려진 간단한 분석 모델은 이러한 강도 변동을 혈류 지수와 관련시키는 데 사용됩니다 (CBFi, 그림 4). CBF i (cm2/s)의 단위가 전통적인 유동 단위 (mL/min/100 g)는 아니지만, 마우스에 대한 이전의 연구는 CBFi가 MRI21로 표지된 동맥 스핀에 의해 측정된 뇌 혈류와 강하게 상관관계가 있음을 보여주었다.
참고로, 여기에 사용된 DCS 계측기는 사내에 제작되었으며 852nm 길이의 일관성 길이 레이저, 4개의 광자 계수 애벌런치 광 다이오드 어레이 및 하드웨어 자동 상관기 기판(단일 타우, 8채널, 100ns 최소 샘플 시간)21,22개로 구성됩니다. 데이터는 LabView로 작성된 수제 소프트웨어로 수집됩니다. 이 장치의 동물 인터페이스는 400 μm 다중 모드 소스 섬유 (400-2200 nm 파장 범위, 순수 실리카 코어, TECS 하드 클래딩) 및 780 nm 단일 모드 검출기 섬유 (780-970 nm 파장 범위, 순수 실리카 코어, TECS 하드 클래딩, 730 ± 30 nm 초 모드 컷오프)로 구성되며 6 mm 간격으로 이격되어 검은 색 3D 인쇄 센서 (4 mm x 8 mm, 그림 3).
신경 염증 환경의 정량화 신경 염증은 다양한 세포 과정에 의해 조절되지만, 두 가지 주요 관련 메커니즘은 사이토 카인 / 케모카인에 의한 세포 외 신호 전달과 포스포 단백질에 의한 세포 내 신호입니다. 손상 후 뇌의 신경 염증 환경을 조사하기 위해 뇌는 생쥐에서 추출되고 미세 해부되며 Luminex를 사용하여 사이토 카인 / 케모카인 및 포스포 단백질이 정량화됩니다 (그림 5, 그림 6, 그림 7). Luminex 다중화 면역검정은 형광 태그가 지정된 자기 비드에 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISAs)을 결합시킴으로써 이러한 단백질의 다양한 수집을 동시에 정량화할 수 있게 합니다. 별개의 형광 태그가 관심있는 각 단백질에 대해 사용되고, 각 태그의 비드는 특정 단백질에 대한 포획 항체로 기능화된다. 각 단백질을 포획하기 위한 수백 개의 비드를 함께 혼합하고, 96 웰 플레이트에 넣고, 샘플과 함께 인큐베이션한다. 샘플 인큐베이션 후, 자석을 사용하여 샘플을 세척하는 동안 웰에 비드를 트랩합니다. 다음으로, 비오티닐화 검출 항체는 관심있는 분석물에 결합하여 전통적인 ELISA와 유사한 항체-항원 샌드위치를 형성하지만, 각각의 단백질에 대한 ELISA와 함께 상이한 형광 태깅된 비드 상에서 발생한다. 피코에리트린-컨쥬게이션된 스트렙타비딘(SAPE)을 첨가하면 각 반응이 완료된다. 그런 다음 Luminex 기기는 비드를 읽고 각 형광 태그/단백질에 따라 신호를 분리합니다.
데이터 통합 Luminex 분석에서 측정된 많은 수의 분석물(예를 들어, 사이토카인)으로 인해, 각각의 정량화된 단백질이 개별적으로 분석된다면 데이터 분석은 해석하기 어려울 수 있다. 분석을 단순화하고 분석물 사이에서 관찰된 경향을 포착하기 위해, 우리는 부분 최소 제곱 회귀(PLSR, 그림 8)23이라는 다변량 분석 방법을 사용합니다. PLSR은 각각의 측정된 단백질(즉, 사이토카인 또는 포스포-단백질, "예측인자 변수"로 지칭됨)에 상응하는 가중치의 축을 확인함으로써 작동하며, 이는 함께 측정된 단백질과 반응 변수(예를 들어, 대뇌 혈류)의 공분산을 최적으로 설명한다. 가중치는 "로딩"이라고 하며 잠복 변수(LV)로 알려진 벡터로 조립됩니다. 측정된 단백질 데이터를 두 LV 각각에 투사("스코어링"으로 지칭됨)함으로써, 데이터는 이들 LV의 관점에서 재플롯팅될 수 있다. PLSR을 계산한 후, 우리는 변량체 회전을 사용하여 LV에 대한 샘플 프로젝션과 예측 변수24 사이의 공분산을 최대화하는 새로운 LV를 식별한다. 이 접근 방식을 사용하면 LV1을 반응 변수의 분산이 가장 잘 설명되는 축으로 정의 할 수 있습니다. LV2는 반응 변수와 LV1 잔류 데이터 사이의 공분산을 최대화하며, 이는 샘플 간의 생물학적 또는 기술적 변동성과 연관될 수 있다. 마지막으로, 우리는 PLSR 모델이 어느 하나의 샘플(23)에 크게 의존하지 않도록 하기 위해 LOOCV(Leave One Out Cross Validation)를 실시한다.
이 프로토콜에서, 우리는 mTBI에 대한 신경염증 및 혈역학적 조직 반응을 특성화하는 방법을 상세히 설명한다. 일반적인 워크플로는 그림 1에 요약되어 있습니다. 이 프로토콜에서, 마우스는 체중 감소 폐쇄 두부 손상 모델을 사용하여 하나 이상의 mTBI를 받는다. 대뇌 혈류는 부상 전과 부상 후 여러 시점에서 종으로 측정됩니다. 신경 염증 변화의 심문에 대한 관심의 시점에서, 동물은 안락사되고, 뇌는 추출된다. 관심있는 뇌 영역은 미세 해부를 통해 분리 된 다음 용해되어 단백질을 추출합니다. 용해물은 이어서 사이토카인 및 포스포-단백질 발현의 루미넥스 다중화 면역검정 및 웨스턴 블롯 둘 다에 사용된다. 마지막으로, 이 전체 론적 데이터 세트는 부분 최소 제곱 회귀 분석을 사용하여 통합됩니다.

<table><tbody><tr><td>조절 가능한 피펫,</td><td></td><td></td><td>조절 가능한 피펫</td></tr>, <tr><td>알루미늄 호일</td>, <td>VWR</td><td>89107-726</td><td></td></tr>, <tr><td>Bio-Plex 세포 용해 키트</td>, <td>C, Bio-Rad</td><td>171304012</td><td></td></tr>, <tr><td>BRAND BRANDplates, pureGrade Microplates, 비멸균</td><td>BrandTech</td><td>781602 96</td><td></td></tr><tr><td>Complete mini protease inhibitor tablet</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11836153001</td><td></td></tr><tr><td>제모 크림</td><td>Amazon</td><td>Nair</td><td></td></tr><tr><td>DiH2O</td><td>VWR</td><td>VWRL0200-1000</td><td></td></tr><tr><td>96 웰 플랫 바닥 플레이트용 휴대용 자기 분리기 블록</td><td>Millipore Sigma 카탈로그</td><td>40-285</td><td></td></tr><tr><td>하드웨어 자동 상관기 보드</td><td>www.correlator.com</td><td>Flex05-8ch</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란 250 mL</td><td>MED-VET INTERNATIONAL</td><td>RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe (11.2 x 21.3 cm)</td><td>VWR</td><td>21905-026</td><td></td></tr><tr><td>실험실 와류 믹서</td><td>VWR</td><td>10153-838</td><td></td></tr><tr><td>LabView</td><td>National Instruments</td><td>LabVIEW</td><td></td></tr><tr><td>Luminex 200, HTS, FLEXMAP 3D 또는 MAGPIX (xPONENT 소프트웨어 포함</td>) <td>Luminex Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luminex Drive Fluid</td><td>Luminex</td><td>MPXDF-4PK</td><td></td></tr><tr><td>Luminex sheath fluid</td><td>EMD Millipore</td><td>SHEATHFLUID</td><td></td></tr><tr><td>MILLIPLEX MAP 마우스 사이토카인/케모카인 마그네틱 비드 패널 - 사전 혼합 32 Plex - 면역학 멀티플렉스 분석</td><td>Millipore Sigma</td><td>MCYTMAG-70K-PX32</td><td></td></tr><tr><td>MILLIPLEX MAPK/SAPK 신호 전달 10-Plex 키트-세포 신호 멀티플렉스 분석</td><td>Millipore Sigma</td><td>48-660MAG</td><td></td></tr><tr><td>Mini LabRoller 로테이터</td><td>VWR</td><td>10136-084</td><td></td></tr><tr><td>Phenylmethylsulfonyl fluoride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7626-1G</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>VWR</td><td>97064-158</td><td></td></tr><tr><td>플레이트 씰러</td><td>VWR</td><td>82050-992</td><td></td></tr><tr><td>폴리프로필렌 마이크로퓨지 튜브</td><td>VWR</td><td>20901-547</td><td></td></tr><tr><td>Mini LabRoller</td><td>Millipore Sigma</td><td>Z674591</td><td></td></tr><tr><td>시약 저장소</td><td>VWR</td><td>89094-668</td><td></td></tr><tr><td>R 프로그래밍 언어</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RStudio</td><td>www.rstudio.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>역가 플레이트 셰이커</td><td>VWR</td><td>12620-926</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416-50ML</td><td></td></tr><tr><td>1m 아크릴 가이드 튜브</td><td>McMaster-Carr</td><td>49035K85</td><td></td></tr><tr><td>4 광자 계수 눈사태 포토다이오드</td><td>Perkin-Elmer</td><td>SPCM-AQ4C-IO</td><td></td></tr><tr><td>400 um 다중 모드 소스 파이버</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>FT-400-EMT</td><td></td></tr><tr><td>54g 볼트</td><td>에이스 하드웨어</td><td></td><td>0.95 cm 기본 본체 지름 2cm 머리 지름 10.2 cm 길이</td></tr><tr><td>780nm 싱글 모드 검출기 섬유</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>780HP</td><td></td></tr><tr><td>852nm 장시간 일관성 길이 레이저</td><td>TOPTICA Photonics</td><td>iBeam 스마트</td><td></td></tr></tbody></table>

외상성 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응의 시스템 분석

Systems Analysis of the Neuroinflammatory and Hemodynamic Response to Traumatic Brain Injury

경미한 외상성 뇌 손상 (mTBIs)은 중요한 공중 보건 문제입니다. mTBI에 반복적으로 노출되면 누적적이고 오래 지속되는 기능 결핍이 발생할 수 있습니다. 우리 그룹과 다른 사람들의 수많은 연구에 따르면 mTBI는 사이토 카인 발현을 자극하고 미세 아교세포를 활성화시키고 뇌 혈류와 신진 대사를 감소시키고 뇌 혈관 반응성을 손상시킵니다. 또한, 몇몇 연구는 이러한 신경 염증 및 혈역학 마커의인지 장애의 혼란과 연관성을보고했습니다. 본원에서 우리는 마우스에서 mTBI에 대한 신경염증 및 혈역학적 조직 반응을 특성화하는 방법을 상세히 설명한다. 구체적으로, 우리는 mTBI의 중량 감소 모델을 수행하는 방법, 확산 상관 분광법이라고 불리는 비침습적 광학 기술을 사용하여 뇌 혈류를 종방향으로 측정하는 방법, 그리고 미세아교세포 및 기타 신경 면역 세포의 활성에 반응하고 조절하는 사이토카인 및 면역조절 포스포 단백질(예를 들어, MAPK 및 NFκB 경로 내)을 정량화하기 위해 뇌 조직 샘플에 대해 루미넥스 다중화 면역검정을 수행하는 방법을 설명한다. 마지막으로 다변량 시스템 분석 접근 방식을 사용하여 이러한 데이터를 통합하여 이러한 모든 변수 간의 관계를 이해하는 방법을 자세히 설명합니다. 이러한 생리 변수와 분자 변수 간의 관계를 이해하면 궁극적으로 mTBI를 담당하는 메커니즘을 식별 할 수 있습니다.

이전에 수집된 데이터는 C57BL/6 마우스 8마리로 구성된 그룹이 매일11일에 한 번 간격을 두고 3개의 폐쇄머리 부상(그림 2)을 입은 이전 작업에서 가져온 것입니다. 이 연구에서, 뇌 혈류는 마지막 손상 후 4 시간 후에 확산 상관 분광법으로 측정되었다 (그림 3, 그림 4). 손상 후 CBF 평가 후, 동물을 안락사시키고, 면역검정을 통해 사이토카인 및 포스포 단백질의 정량화를 위해 뇌 조직을 추출하였다(도 5). 우리는 또한 웨스턴 블롯을 통해 식세포 / 미세 아교세포 활성화 마커 Iba1을 정량화했습니다 (11에 설명 된 방법). 각 마우스로부터의 뇌 조직을 용해시키고, 총 단백질 농도를 BCA 검정을 사용하여 측정하였다....

이 프로토콜은 경미한 외상성 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응을 특성화하고 부분 최소 제곱 회귀를 사용하는 다변량 시스템 분석의 일부로 이러한 데이터를 통합하는 방법을 제시합니다.

Mild traumatic brain injuries (mTBIs) are a significant public health problem. Repeated exposure to mTBI can lead to cumulative, long-lasting functional ...

이러한 방법은 부분 최소 제곱 회귀를 사용하는 다변량 시스템 분석의 일환으로 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응을 특성화하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술은 부상에 대한 뇌의 반응에 대한 전체적인 시각을 더 많이 제공하는 데 사용됩니다. 손상을 유도하려면 마취 된 마우스에서 발가락 꼬집음에 대한 반응 부족을 확인하고 마우스를 얇은 막의 중앙에있는 경향이있는 위치에 놓습니다.양손을 사용하여 가르치는 조직을 잡고 마우스의 꼬리를 엄지 손가락 아래에 고정하고 가이드 튜브 아래에 마우스 머리를 놓습니다. 마우스가 제자리에 있을 때, 눈의 뒤쪽과 귀의 앞쪽 사이의 충격을 목표로 하여, 가이드 튜브의 상단에서 마우스 머리의 등쪽 측면에 볼트를 떨어뜨립니다. 충격이 가해지면 마우스가 조직을 뚫고 목에 대한 머리가 빠르게 가속됩니다.부상 후, 마우스가 섭씨 37도 온난화 패드의 수핀 위치에서 회복되도록하십시오. 두 분간의 안정화 기간이 지난 후 DCS 센서를 마우스 두개골의 오른쪽 반구 위에 부드럽게 올려 놓으면 광학 센서의 위쪽 가장자리가 눈 뒤쪽과 정렬되고 센서 측면이 중간선을 따라 정렬됩니다. 센서에 손을 얹어 실내 조명으로부터 보호하고 다섯 초의 데이터를 수집합니다.그런 다음 센서를 왼쪽 반구 위에 재배치하고 다섯 초의 왼쪽 반구 데이터를 수집합니다. 다중화된 사이토카인 및 포스포-단백질 생산을 평가하려면, 수확된 동물 뇌 조직의 약 3밀리그램당 150마이크로리터의 혼합 용해 완충액을 첨가한다. 1, 000 마이크로리터 피펫 팁을 사용하여 조직을 15 내지 20회 기계적으로 트리트레이트한다.균질화된 샘플을 섭씨 네 도에서 30분 동안 회전기 상에 놓고 원심분리에 의해 조직 파편을 수집한다. 상층액을 새로운 튜브로 옮기고 샘플을 원심분리하여 남아있는 침전물을 제거하십시오. 상청액을 새로운 튜브로 옮기고 표준 프로토콜에 따라 BCA 분석법으로 단백질 농도를 결정합니다.새로운 튜브에서 선형 범위 분석에 의해 결정된 최적의 단백질 농도로 각 샘플의 25 마이크로리터를 준비합니다. 분석 완충액을 사용하여 각 샘플의 총 부피를 25 마이크로리터로 정규화합니다. 분석 플레이트를 제조하기 위해, 200 마이크로리터의 세척 완충액을 96-웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 분당 750 회전으로 10분 동안 진탕기 상에서 진탕한다.인큐베이션이 끝나면 세척 버퍼를 데칸트하고 플레이트를 종이 타월 위에 두드려 잔류 물을 제거하십시오. 다음으로, 25 마이크로리터의 분석 완충액을 각 웰에 첨가한 다음, 배경 웰에 25 마이크로리터의 완충액을 추가로 첨가한다. 희석된 샘플 25 마이크로리터를 적절한 샘플 웰에 첨가하고, 다중화된 자기 비드를 통해 1분 동안 와류시킨 다음, 25 마이크로리터의 완전히 재현탁된 비드를 각 웰에 첨가한다.모든 비드가 첨가되면 플레이트 실러로 플레이트를 밀봉하고 플레이트를 호일로 덮고 섭씨 두 ~ 여덟 도에서 흔들면서 하룻밤 동안 배양하십시오. 다음날 아침, 플레이트를 자기 분리기 위에 놓고 웰이 자석과 정렬되어 있는지 확인하십시오. 2분 후, 자기 분리기에 여전히 부착된 플레이트로 웰 내용물을 데칸트하고 각 웰에 200 마이크로리터의 세척 완충액을 첨가한다.두 분 동안 흔들어 놓은 후 플레이트를 자기 분리기 위에 두 분 동안 놓습니다. 이어서, 자기 분리기에 여전히 부착된 플레이트로 웰 내용물을 데칸트하고, 방금 입증된 바와 같이 웰 당 200 마이크로리터의 신선한 세척 완충액으로 플레이트를 세척한다. 두 번째 세척 후, 웰 당 25 마이크로리터의 검출 항체를 첨가하고, 실온에서 분당 750 회전에서 한 시간 인큐베이션을 위해 호일로 다시 덮는다.인큐베이션이 끝나면 25 마이크로리터의 스트렙타비딘 피코에리트린을 각 웰에 첨가하고 플레이트를 실온에서 추가로 30분 동안 진탕기로 복귀시킨다. 인큐베이션이 끝나면 플레이트를 두 분 동안 자기 분리기 위에 놓고 우물 내용물을 디캔팅하십시오. 세척 당 200 마이크로리터의 신선한 세척 완충액으로 플레이트를 두 번 세척하고 각 웰에 적절한 구동액 75 마이크로리터를 첨가한다.그런 다음 실온에서 다섯 분 동안 플레이트 쉐이커에 비드를 다시 현탁하고 제조업체의 지침에 따라 분석기의 플레이트를 읽으십시오. 이 분석에서, 대뇌 혈류는 마지막 손상 후 네 시간 후에 확산 상관 분광법으로 측정되었다. 이어서, 각 반구에 대한 대뇌 혈류 지수 및 평균 대뇌 유동 지수가 결정될 수 있다.선형 범위 분석은 모든 샘플에서 데이터를 수집하기 전에 적절한 단백질 로딩 질량을 결정하기 위해 수행 될 수 있습니다. 사이토카인 데이터는 샘플 데이터로부터 배경 측정치를 뺀 다음, 각 양극액에 대한 Z-스코어 데이터를 계산함으로써 제조될 수 있다. 부분적 최소 제곱 회귀는 식세포 미세아교세포 활성화 마커 또는 다른 관심 변수를 반응 변수로서 사용하고, 사이토카인 측정을 예측 변수로서 사용하여 수행될 수 있다.Varimax 회전은 활성화 마커 측정과 함께 잠복 변수 하나에 대한 데이터의 공분산을 최대화하기 위해 수행 될 수 있습니다. 잠복 변수에서의 높은 로딩 가중치는 활성화 마커의 높은 발현과 가장 관련된 사이토카인 발현과 상응한다. 활성화 마커와 사이토카인 사이의 선형 회귀는 잠복 변수에서 가장 큰 로딩 가중치를 갖는 사이토카인이 또한 이 분석에 대해 통계적으로 유의하다는 것을 예시한다.우리는이 프로토콜을 외상성 뇌 손상에 초점을 맞추었지만 이러한 방법은 뇌에 영향을 미치는 많은 병리학 적 상태에 대한 연구에 널리 일반화 될 수 있습니다. 우리는 이러한 기술을 사용하여 인과 관계 적 관계를 수립하고 궁극적으로 경미한 외상성 뇌 손상에 대한 새로운 치료 전략을 개발하는 것을 목표로 향후 실험에서 조절할 수있는 견인 가능한 표적을 식별하는 데 도움을줍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 문서는 온화한 외상성 뇌 손상 진단 및 청소년의 회복에 멀티 모달 접근법의 개요를 제공합니다. 이 접근법은 기능적인 자기 공명 영상과인지 테스트하는 동안 머리 영향과 뇌의 활동 사이의 관계를 모니터하기 위해 헤드 충​​격 텔레 메 트리 시스템과 neuropsychological 테스트를 결합한 제품입니다.

기능성 자기 공명 이미징 및 머리 충격 텔레 메 트리 시스템을 사용하는 청소년의 스포츠 관련 뇌진탕의 효과 조사

래터럴 유체 타진 (LFP), 생쥐의 외상성 뇌 손상의 설립 모델이 증명됩니다. LFP 동물 모델에 대한 세 가지 주요 기준을 충족 : 타당성, 안정성 및 임상 관련. 수술 craniotomy 구성 절차, 허브의 고정은 초점과 확산 부상의 결과로, 상해의 유도 뒤에 설명되어 있습니다.

측면 유체 타악기 : 마우스의 외상성 뇌 손상 모델

hippocampal 회로에 대한 기능 변경 사항을 조사에 대한 다원적 인 측면의 접근이 설명되어 있습니다. Electrophysiological 기술은 부상 프로토콜, 행동 테스트 및 지역 해부 방법과 함께 설명되어 있습니다. 이러한 기술의 결합은 다른 뇌 영역과 과학 질문에 대해서도 이와 유사한 방식으로 적용 할 수 있습니다.

가벼운 외상성 뇌 손상 후 Hippocampal 회로 기능의 수선에 관한 조사

이 비디오에서는 경미한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 뇌 혈류를 측정하기 위한 확산 상관 분광법 기술을 보여줍니다.

Diffuse Correlation Spectroscopy를 사용하여 마우스 모델에서 대뇌 혈류를 평가합니다.

외상성 뇌 손상(TBI)은 여전히 심각한 건강 문제로 남아 있습니다. 통제된 피질 충격 수술 모델을 사용하여 TBI의 영향과 가능한 치료 방법에 대한 연구를 수행할 수 있습니다.

외상성 뇌 손상에 대한 제어 피질 충격 모델

뇌타박상을 동반한 뇌골 출혈 및 신경 염증은 심각한 2차 뇌 손상을 유발할 수 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 제어 피질 영향(CCI) 모델을 자세히 설명하여 연구원들이 출혈, 타박상 및 외상 후 면역 반응을 연구하고 잠재적인 치료법을 탐색할 수 있도록 합니다.

외상성 출혈 타박상 및 신경염증에 대한 전임상 제어 피질 영향 모델

이 프로토콜은 폐쇄성 두부 손상(CHI) 방법을 통해 유도된 반복적인 경미한 외상성 뇌 손상(rmTBI)의 수정된 마우스 모델을 제시합니다. 이 접근법은 두개골 창과 유체 타악기를 사용하여 수막 노출로 인해 일반적으로 발생하는 염증을 줄이고 설치류의 rmTBI 모델링에서 재현성 및 정확도를 향상시킵니다.

얇아진 두개골 창과 유체 타악기를 통합한 반복적인 경미한 외상성 뇌 손상의 수정된 마우스 모델

본 연구에서는 단순하고 가벼운 외상성 뇌 손상의 신경영상 결과를 급성기 및 장기 뇌 위축에서 보존된 뇌 구조와 함께 복제하는 폐쇄두부 손상 동물 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시한다. 종방향 자기 공명 영상(Longitudinal magnetic resonance imaging)은 증거에 사용되는 기본 방법입니다.

Weight-Drop Method로 수정되고 자기 공명 영상(Magnetic Resonance Imaging)으로 입증된 복잡하지 않은 경미한 외상성 뇌 손상 모델의 개발

단순화된 외상성 뇌 손상(TBI) 모델은 치료적 접근의 개발을 촉진했습니다. 이 프로토콜은 바늘을 사용하여 찔린 상처 마우스 피질을 생성하는 방법을 간략하게 설명하여 출혈 및 염증을 분석할 수 있습니다. 칼에 찔린 TBI 마우스 모델은 특수 장비 없이도 수행할 수 있는 이점을 제공합니다.

외상성 뇌 손상의 출혈 및 염증을 연구하기 위한 Stab-Wound Mouse 모델

우리는 정량 실시간 PCR 및 / 또는 전체를 게놈 microarrays를 사용하여 후속 유전자 발현 분석을위한 부상을 쥐의 뇌의 냉동 섹션에서 hippocampal 뉴런 또는 단일 뉴런의 풍부한 인구를 얻기 위해 레이저 캡처 microdissection (LCM)를 사용하는 방법에 대해 설명합니다.

외상성 뇌 손상 후 뉴런 또는 유전자 발현 분석을위한 단일 뉴런의 강화 인구의 레이저 캡처 Microdissection

학습하세요 외상성 뇌 손상에서 신경 염증 및 혈역학 반응을 특성화하는 방법을. 이 프로토콜은 부분 최소 제곱 회귀를 활용한 다변량 시스템 분석을 통해 뇌 손상에 대한 전체적인 이해를 제공합니다.

외상성 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응의 시스템 분석

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