Name: 24시간 장기 보존 및 지속적인 원격 분석을 사용하여 돼지 모델에서 직소 신장 자동 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: 배우세요 돼지 모델에서 24시간 장기 보존과 원격 분석을 활용한 직소 신장 자동 이식 기법을. 이 방법은 임상적 관련성이 높은 이식 연구에 필수적인 도구를 제공합니다.

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저자들은 파스칼 파셴다, 마리케 슐츠, 브리타 분가르트, 안나 퀴메케에게 숙련된 기술 지원에 감사를 표하고 싶습니다.
저자는 의학 학부의 시작 프로그램에서 부분적으로 자금을 선언, RWTH 아헨 대학 (#23/19 Z.C.), B.브라운 재단에서, 멜성겐, 독일 (BBST-S-17-00240 Z.C.), 독일 연구 재단 (도이치 포르슈주메인샤프트 - DFG; for-2591, 542/5-1, 542/6-1; 2016년 - R.T. 및 SFB/TRR57, SFB/TRR219, BO3755/3-1, BO3755/6-1 ~ P.B.) 독일 교육부(BMBF: STOP-FSGS-01GM1901A to P.B.) 연구 설계, 데이터 수집, 데이터 분석, 원고 준비 또는 출판 결정에 펀더의 개입 없이.

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<li>Faure, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+porcine+model+of+heterotopic+renal+autotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">An experimental porcine model of heterotopic renal autotransplantation.</a> Transplantation Proceedings. 45 (2), 672-676 (2013).</li>
<li>Golriz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+we+need+animal+hands-on+courses+for+transplantation+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Do we need animal hands-on courses for transplantation surgery.</a> Clinical Transplantation. 27, Suppl 25 6-15 (2013).</li>
<li>Gallinat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+Cold+Stored+Porcine+Kidneys+After+Controlled+Oxygenated+Rewarming%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Organs%22%5BJournal%5D)">Transplantation of Cold Stored Porcine Kidneys After Controlled Oxygenated Rewarming.</a> Artificial Organs. 42 (6), 647-654 (2018).</li>
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<li>Markert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+telemetry-based+system+for+assessing+cardiovascular+function+in+group-housed+large+animals.+Taking+the+3Rs+to+a+new+level+with+the+evaluation+of+remote+measurement+via+cloud+data+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacological+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">A new telemetry-based system for assessing cardiovascular function in group-housed large animals. Taking the 3Rs to a new level with the evaluation of remote measurement via cloud data transmission.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 93, 90-97 (2018).</li>
<li>Längin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perioperative+Telemetric+Monitoring+in+Pig-to-Baboon+Heterotopic+Thoracic+Cardiac+Xenotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Perioperative Telemetric Monitoring in Pig-to-Baboon Heterotopic Thoracic Cardiac Xenotransplantation.</a> Annals of Transplantation. 23, 491-499 (2018).</li>
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<li>van Dijk, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+of+composite+measure+schemes+for+comparative+severity+assessment+in+animal-based+neuroscience+research%3A+A+case+study+focussed+on+rat+epilepsy+models%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Design of composite measure schemes for comparative severity assessment in animal-based neuroscience research: A case study focussed on rat epilepsy models.</a> PLoS One. 15 (5), 0230141(2020).</li>
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저자는 공개 할 이해상충이 없습니다.

KT의 돼지 모델은 임상적으로 관련된 대형 동물 설정15,17,21에서새로운 치료 접근법 및 의료 기기에 대한 조사를허용합니다. 돼지와 인간 환경 사이의 해부학적, 병리학적 및 외과적-기술적 유사성은 임상 시험15,16,17,18,19,21로의 결과 및 기술의 임상 해석 및 신속한 번역을 용이하게 할 수 있다.
직교성 신장 자동 이식모델은 동종 이식에 비해 필요한 동물의 수를 줄임으로써 3R 원리를 준수할 뿐만 아니라, 예를 들어 별도의 기증자 동물이 필요하지 는 않지만 면역 반응 및 면역 억제약물(17,21)의혼동 효과 없이 IRI 및 보존 상해의 효과를 조사할 수 있는 독특한 기회를 제공한다.
프로토콜의 약간의 수정은 광범위한 임상 상황을 모델링 할 수 있습니다. 순환사멸(DCD) 신장 후 기부를 이용한 KT를 모방하기 위해 혈관 구조는 신장 검색 전 30~60분 동안 신장 회복 전에 고정되며, 감기허혈시간(24시간 이상)을 모델링하여 광범위한 보존상해를 16,17,28,29로모델링할 수 있다.
돼지 KT 모델은 작은 동물(예: 쥐 및마우스)의고체 장기 이식 모델(예: 쥐 및 마우스)보다 수술적으로 덜 도전적이지만, 결과를 개선하고 특정합병증을피하기 위해 여러 가지 기술적 측면과 함정이 존재한다.
기술적 실수 나 해부학적 변화로 인한 이식 검색 또는 이식 중에 열등한 베나 카바 및 대동맥 주위의 큰 림프혈관을 피하지 못하면 고출력 림프누공 및 수술 후 복부 유체 수집, 감염 및 잠재적으로 기술적 실패로 이어질 수 있습니다. 림프관은 수술 중에 완전히 피하거나 5-0 또는 6-0 폴리 프로필렌 봉합사로 닫아야합니다. 림프 누출의 경우 양극성 또는 기타 응고 장치의 사용을 피하는 것이 현명합니다. 그것은 일반적으로 상황의 악화로 이어집니다. 낮은 출력 림프 누출의 경우, 우리 팀은 피브린 기반 콜라겐 패치 (예 : 타초실)30의적용에 대한 좋은 경험을 가지고 있지만, 높은 비용은이 설정에서 자신의 응용 프로그램을 제한합니다.
본 프로토콜에서 우리는 신장 회수 및 자동 이식을 위한 전염 접근을 보여줍니다. 이것은 신장 이식편이 일반적으로 외과적 접근을 사용하여 iliac fossa로 이식되는 임상 상황에 비해 중요한 기술적 차이입니다. 비록, 대부분의 단은 돼지 모델에서 전염 및 정형소 접근법을 사용하지만, 오리악 포사에 이종성 이식도돼지(31)에서가능하다. 그러나, 30-40kg 돼지에서 외부 장악 동맥의 비교적 낮은 직경과 혈관 경련의 경향으로 인해 때로는 외부 장악동맥(31)에신장 동맥의 종단 간 해부학을 수행하기가 어려워진다. 후속 자동 이식을 수행하기 위한 트랜스페리오날 접근법을 통해 왼쪽 신장을 회수한다는 사실에 관해서는, 동일한 절개를 재개하고 성도 성도 교정 접근법을 사용하여 이식을 수행하는 것이 더 가능하며, 특히 프로토콜당 동물이 하나의 전손상된 종류로 만 회복되도록 기본 오른쪽 신장을 제거해야 한다는 것이 더 가능하다. 모델의 가능한 모든 기술적 변화에 대한 포괄적인 설명은 이 프로토콜의 범위를벗어납니다.
이식된 신장 이식편의 탈구및 혈관 성모의 결과적 인꼬는 혈관 KT 모델의 주요 실패원인이며, 외과적 합병증으로 인해 혈관 폐색 및 실험의 완전한 실패로 빠르게 이어집니다. 이를 피하기 위해 자동 이식 후 우리는 3-0 폴리글락틴을 사용하여 실행 봉합사를 사용하여 신장 위에 회중 층을 닫습니다. 더욱이, 피부도플러 초음파는 신장 이식과 복부 폐쇄의 이식 직후에 직접 수행되며, 신장 이식의 좋은 동맥 및 정맥 관류를 보장한다. 초음파는 또한 동물의 임상 성능에 기초하여 매일 및 온디맨드로 사용되며, 신장 관류, 신장 후 문제 (예 : 오줌 카테터의 방해 또는 꼬임) 및 림프 누공, 출혈 또는 감염으로 인한 유체 수집(도 4 및 도 6)에대해 검사합니다. 
감기 허혈의 24 시간은 수시로 기능장애 및 지연된 이식 기능으로 이끌어 내기 때문에, 동물은 수의학 책임자에 의해 필요하다고 여겨지는 경우에 주문형 의학 치료를 요구할 수 있습니다. 여기에는 중앙 정맥 라인을 통해 투여되는 5% 포도당 및/또는 링거 용액을 이용한 주입 요법, furosemide bolus 주사(임상 상태 및 실험실 결과에 따라 올리구리아/무뇨증의 경우), 60-80 mg bolus 주사 최대 200 mg/day), 및 폴리스티렌 설포네이트 나트륨의 경구 투여(리온 아칼레네아)의 경구 투여(리졸레32)의 경구 투여가 포함될 수 있다. 실험적 편견을 피하기 위해, 동물의 이식 후 수의학적 치료를 담당하는 수의장교는 적용된 치료 및 그룹화에 대해 눈을 멀게 해야 합니다.
비록, 신장 동맥의 해부학은 일반적으로 재건 하는 하나의 동맥독일 육종 돼지에서 오히려 간단, 정맥 재건 하는 동안 특정 외과 창의력을 필요로 하는 신장 정맥 분기의 해부학 적 변화의 넓은 스펙트럼이 있다. 빈번하게 2개(또는 그 이상) 신장 정맥 가지는 신장 동개와 열등한 정맥 카바 사이의 다른 수준에 참여합니다. 가장 자주 관찰되는 변형 및 가능한 재구성옵션(17)은 도 3에나와 있다.
첫 번째 외과 적 개입 (일 -15, 원격 측정 이식)에 따라 모든 동물은 실험의 전체 기간 동안 착용 하는 돼지 재킷을 받습니다. 이것은 이식 된 카테터의 우발적 인 부상과 탈구에 대한 우수한 보호를 제공하고 소변 수집 가방의 보관을위한 공간을 제공합니다. 이러한 재킷의 사용은 또한 3R 원리에 따른 정제 방법으로 크레아티닌 클리어런스 의 평가를 위한 신진 대사 케이지의 필요성을 제거하기 위한 실현 가능한 솔루션이다.
당사의 주택 시설은 원격 분석 및 비디오 기반 페리 운영 모니터링의 사용을 통합합니다. 이러한 방법은 수의과 장교와 기술자의 정기적인 방문을 대체할 수는 없지만 신속한 개입을 용이하게 하고 심각도 평가를 개선하여 미래에 대한 실험 설정을 더욱 개선합니다. 대형 동물모델(33)에서이식형 원격 분석 장치의 사용에 대한 광범위한 적응증이 있다. 심전도, 혈압, 온도 등 주요 수술 에 따른 임상 기생충의 면밀한 모니터링은 수술 중집중 및 중간 치료실의 인간 임상 환경에서 표준으로 간주되지만, 실험 수술 모니터링은 동물이마취33,34,35에서깨어나면 대부분 중단된다. 따라서 원격 측정은 이러한 동물의 지속적인 모니터링을 위한 실행 가능한 방법을 제공합니다. 우리는 이 모든 데이터가 가능한 수술 후 합병증의 조기 발견에 정확하고 적시에 기여한다고 믿습니다 (예를 들어, 출혈 성 충격, 또는 온도 증가하여 검출된 패혈증, 저혈압 및 빈맥). 이것은 적시에 개입(예를 들어, 치료 항생제 치료의 도입, 유체 대체, 항응고 중단, 또는 고통을 피하기 위해 동물의 희생)을 촉진할 수 있다. 이러한 "실시간" 모니터링 측면 외에도, 우리 그룹은 현재 동물 실험36,37,38의심각도 평가 및 개선에 초점을 맞추고 있습니다. 이러한 실험에서 수집된 다량의 원격 분석 데이터를 회고분석하면 이러한 종류의 외과 적 개입의 심각성을 더 잘 계층화하고 실험실 동물에서 perioperative care (예 : 진통)를 최적화 할 수 있습니다.
이식형 원격 분석의 관점에서 측정 시스템의 이식 후 최소 12일 의 기간이 안정적이고 최적의 측정 데이터를 보장하는 것이 좋습니다(개인 통신 기준). 다양한 실험 환경에서 이러한 시스템을 사용하는 다른 연구 그룹과 대형 동물을 위한 원격 측정 솔루션을 제공하는 다양한 제조업체와 이 문제를 논의한 후, 원격 측정 이식과 신장 이식 사이에 14일 의 기간을 통합하기로 결정했습니다. 이전 일 동안, 흉터와 치유 과정이 아직 불완전하기 때문에 동물의 움직임으로 인해 편차가 여전히 발생할 수 있습니다.
그 장점에도 불구하고, 위에서 설명 한 모델은 특정 제한이 있습니다. 복잡성과 필수 리소스 및 인프라는 모델의 가장 중요한 제한 사항입니다. 시간이 많이 소요되는 실험 프로토콜, 복잡한 기술 및 강렬한 peri 수술 후속 조치는 상당한 주택 및 OR 용량의 가용성을 필요로하며 박사 동료, 외과 의사, 수의 장교 및 기술자 (표 1)를 포함한 더 큰 팀의 참여가 필요합니다. 따라서, 우리의 경험적 관찰에 따라, 그것은 일반적으로 하루에 두 개 이상의 절차를 수행 하는 것이 불가능. 작은 동물 모델에 비해 돼지 모델의 추가 단점은 기계및 분자 생물학적 조사의 제한된 가능성이다. 본 의정서에서는 5일 간의 후속 조치가 보고되었다. 이것은 모델의 가장 중요한 실험 적 특성을 입증하기에 적합했지만, 이러한 비교적 짧은 후속 조치는 특정 특정 연구 질문 (예 : 기능의 장기 회복 대 급성 손상)에 대답하기에 충분하지 않을 수 있습니다. 따라서 후속 조치의 프로젝트 관련 확장이 필요할 수 있습니다. 이 원고는 돼지 직소 신장 자동 이식의 실험 적인 환경에서 우리의 현재 "모범 사례"를 설명합니다. 특정 단계는 성공적으로이 모델을 확립하는 것이 필수적이지만, 사소한 측면 (예 : 방광 카테터의 수술 내 사용, 대 경동맥에 동맥 카테터 배치)은 양성이며 조사관의 재량에 따라 피할 / 변경 될 수 있습니다. 각 조직적 측면에 대한 설명과 정당성은 현재 프로토콜의 범위를 벗어나다른 31에서논의되었습니다. 마지막으로, 노인 기증자, 급성 신장 손상및 고혈압, 당뇨병 멜리터또는 동맥 경화증과 같은 만성 질환을 가진 기증자가 한계 기증자 풀8,9의주요 부분을 나타내는 돼지 모델에서 ECD KT의 정확한 임상 상황을 복제하기가 어렵다.
위에서 언급한 한계와 기술적, 물류적 과제에도 불구하고, KT의 잘 확립되고 재현가능한 대형 동물 모델은 장기 보존 및 임상 결과를 개선하기 위한 새로운 치료법과 기술을 조사할 수 있는 특별한 기회를 제공하며, 젊은 외과 의사가 대형 동물 모델에서 장기 이식 기술을 습득할 수 있는 훌륭한 플랫폼을 제공합니다.

1954년 노벨상 수상자 인조셉 머레이1의선구적인 그룹에 의해 수행된 일란성 쌍둥이 간의 첫 번째 성공적인 인간 신장 이식 이후, 신장 이식(KT)은 말기 신장 질환(ESRD)2환자를 위한 치료의 주축으로 진화했다. KT는투석2에비해 우수한 장기 임상 결과와 삶의 질을 보여줍니다. KT가 수술기술, 장기보존, 면역억제치료, 중환자치료의 발전으로 지속적으로 개선된 후 단기 및 장기 생존율은 글로벌 척도2,3,4로널리 보급되었다.
중요한 장기 부족으로 인해 동종 이식 공급과 수요3,5,6 사이의 격차가 지속적으로 증가하고있습니다. 2018년에는 약 12,031명의 환자가 독일에서 KT를 기다리고 있었지만, 이식을 위한 장기의 극심한 부족으로 인해 20%(2,291명)만 이내의신장을받을 수 있었다. 불행하게도, 장기 기증자의 절대 수뿐만 아니라 이식을 위해 제공되는 동종 이식의 일반적인 품질은 지난 수십 년 동안 감소했다8,9. 이식(10)을위해 받아들여져야 했던 사전 손상되거나 "한계" 신장 동종 이식의 수에서 증가된 경향을 관찰했다. ECD 동종 이식의 사용은 대기 시간 및 대기자 명단 이환율 및 사망률을 감소시킬 수 있지만, 그러나, 1차 이식비(PNF) 및/또는 지연된 이식 기능(DGF)8,9,10과같은 접목 관련 합병증의 발생률 증가와 관련이 있다. 추가 연구는 동종 이식 활용을 최적화하고, 기증자 풀을 확장하고 궁극적으로 환자 결과를 향상시킬 수있는 한계 동종 이식을 보호하고 재조건하는 데 필수적입니다3,6.
큰 동물 이식 모델의 자원 집약적이고 복잡한 특성으로 인해, 많은 수의 연구가 작은 동물을 사용하거나 전 생체 설정11,12,13,14,15에서수행된다. 이 모형은 중요한 과학적인 데이터를 전달할 수 있더라도, 임상 설정에 이 사실 인정의 번역은 수시로 제한됩니다. 치열 교정 신장 자동 이식의 돼지 모델은 잠재적으로 더 긴 후속 기간과 반복적인 샘플수집16,17에대한 풍부한 가능성과 함께, 잠재적으로 더 긴 후속 기간과 반복적 인 샘플 수집에 대한 풍부한 가능성으로, 생체 내에서 임상적으로 관련된 새로운 혁신적인 치료 접근 방식을 테스트 할 수있는 잘 확립되고 재현 가능한 모델이다. 임상 설정(특히 의료기기 개발 및 약물 투여의 경우)으로 비교적 직접 번역할 수 있는 비교 크기의 장점을 넘어, 허혈-재퍼퓨전 손상(IRI) 반응 및 신장 손상 측면에서 외과-해부학적 및 생리적 유사성을, 번역 연구에서 이 모델의 사용을지원한다 17,18,19. 이 모델은 또한 임상 장기 이식20의기술적 인 도전에 대한 젊은 이식 외과 의사를 준비하는 훌륭한 훈련 기회를 제공한다.
또한 인간 설정에 비해 여러 가지 차이가 있으며 모델의 다양한 기술적 수정은문헌(16,17,19,20,21)에서찾을 수 있다. 이 문서에서는 돼지 치열 교정 신장 자동 이식 모델을 확립하는 데 도움이 될 수 있는 기술적 세부 사항, 함정 및 권장 사항을 포괄적으로 설명합니다. 기술된 원격 분석 및 비디오 모니터링 방법뿐만 아니라 특별히 설계된 하우징 시설은 동물의 클로즈업 심각도 평가 및 임상 관찰을 가능하게 합니다. 경피 오줌 카테터와 지정된 돼지 재킷의 사용은 신진 대사 케이지를 사용하지 않고 신장 기능에 대한 상세한 평가의 가능성을 제공합니다. 이러한 기술적 수정은 3R 원리(교체, 감소 및 정제)의 현대적인 과제를 준수하고 대형 동물모델(22)을사용하여 동물 실험을 개선하는 잠재적 솔루션으로 설명된다.

<table><tbody><tr><td><강한>마취 재료, 약물 및 약물</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>아스피린 500mg i.v., 주사용 용액용 분말&nbsp;</td><td>바이엘 바이탈 AG, 레버쿠젠, 독일</td><td>4324188</td><td>항혈소판제</td></tr><tr><td>아트로핀 황산염 용액 주사, 100mg</td><td>Dr. Franz K&ouml; hler Chemie GmbH, 독일 벤스하임&nbsp;</td><td>1821288</td><td>부교감신경 용해제,</td></tr><tr><td>눈과 코를 위한 사전 투여 Bepanthen 연고</td><td>Bayer Vital AG, 레버쿠젠, 독일</td><td>1578675</td><td>눈 연고</td></tr><tr><td>BD Discardit II 주사기, 2ml, 5ml, 10ml, 20ml</td><td>Becton Dickinson GmbH, 하이델베르크, 독일</td><td>300928, 309050,309110, 300296&nbsp;</td><td>주사기</td></tr><tr><td>BD Micolance 3 (20G yellow) Cannula</td><td>Becton Dickinson GmbH, 하이델베르크, 독일</td><td>305888</td><td>정맥 카테터</td></tr><tr><td>BD Venflon Pro Safety (20G pink)</td><td>Becton Dickinson GmbH, 하이델베르크, 독일</td><td>4491101</td><td>정맥 카테터</td></tr><tr><td>부프레노르핀 (부프레노벳)</td><td>Bayer Vital AG, 레버쿠젠, 독일</td><td>794-996</td><td>진통제</td></tr><tr><td>Cefuroxime 750mg, 주사 용액 준비용 분말</td><td>FRESENIUS KABI Deutschland GmbH, Bad Homburg, Germany</td><td>J01DC02</td><td>항생제</td></tr><tr><td>Covidien Hi-Contour, Endotracheal Tube 7,5 with Cuffed Murphy Eye</td><td>Covidien Deutschland GmbH, Neustadt/Donau, Germany</td><td>COV-107-75E</td><td>기관내 튜브</td></tr><tr><td>FENTANYL 0,5 mg Rotexmedica 용액 주사&nbsp;</td><td>Rotexmedica GmbH Arzneimittelwerk, Trittau, Germany</td><td>4993593</td><td>아편이드 진통제</td></tr><tr><td>Furosemide-ratiopharm 250 mg/25 ml 주사용 용액</td><td>Ratiopharm GmbH, Ulm, Germany</td><td>1479542</td><td>루프 이뇨제</td></tr><tr><td>포도당 5% 주입용 용액 (500ml, 250ml)</td><td>B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany&nbsp;</td><td>3705273,03705422</td><td>주입액</td></tr><tr><td>포도당 20% 용액</td><td>B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany&nbsp;</td><td>4164483</td><td>삼투압 이뇨</td></tr><tr><td>Heparin-Sodium 5000 I.E./ml</td><td>B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany&nbsp;</td><td>15782698</td><td>항응고제</td></tr><tr><td>Isoflurane-Piramal (Isoflurane)</td><td>Piramal Critical Care Deutschland GmbH, Hallbergmoos, Germany</td><td>9714675</td><td>휘발성 마취제</td></tr><tr><td>케타민 (케타민 염산염) 10%</td><td>Medistar Arzneimittelvertrieb GmbH, Ascheberg, Germany</td><td>0004230</td><td>일반마취제</td></tr><tr><td>MIDAZOLAM 15mg/3ml</td><td>Rotexmedica GmbH Arzneimittelwerk, Trittau, Germany</td><td></td><td>828093 hybnotica, 진정제</td></tr><tr><td>NaCl 0,9% 용액 (500ml, 1000ml)</td><td>B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany&nbsp;</td><td>864671.8779</td><td>주입액</td></tr><tr><td>노르에피네프린 (아르테레놀)</td><td>Sanofi-Aventis Deutschland GmbH, 프랑크푸르트, 독일</td><td>16180</td><td>혈압 상승&nbsp;</td></tr><tr><td>장기 보존 용액(예: HTK)</td><td>Dr. Franz K&ouml; hler Chemie GmbH, 독일 벤스하임&nbsp;</td><td>선호도 및 실험 설계에 따라 결정해야</td> 합니다 <td>장기 보존</td></tr><tr><td>Pantoprazole 40mg/주사용 용액</td><td>Laboratorios Normon, Madrid, Spain</td><td>11068</td><td>양성자 펌프 억제제</td></tr><tr><td>Paveron N 25mg/ml 주사용 용액(Papaverine Hydrochloride)LINDEN</td> <td>Arzneimittel-Vertrieb-GmbH, Heuchelheim, Germany</td><td>2748990</td>혈관 <td>확장용 경련제</td></tr>, <tr><td>펜토바르비탈( Narcoren)</td><td>Boehringer Ingelheim vetmedica GmbH, Ingelheim, Germany</td><td>1,204,924,565</td><td>안락사에 사용</td></tr><tr><td>프로포폴 1% (10mg/ml) MCT Fresenius</td><td>FRESENIUS KABI Deutschland GmbH, Bad Homburg, Germany</td><td>654210</td><td>전신 마취제</td></tr><tr><td>Ringer solution</td><td>B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany&nbsp;</td><td>1471411</td><td>주입액</td></tr><tr><td>Sterofundin 주입용 ISO 솔루션(1000ml)</td><td>B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany&nbsp;</td><td>1078961</td><td>주입 액체</td></tr><tr><td>Stresnil (Azaperone) 40mg/ml</td><td>Elanco</td><td>797-548</td><td>진정제</td></tr><tr><td>소변 카테터 주름 장식 12CH&nbsp;</td><td>Wirutec R&uuml; sch Medical Vertriebs GmbH, 독일 줄츠바흐</td><td>R&Uuml; SCH-180605-12</td><td>경요도 소변 카테터</td></tr><tr><td><강한>수술 재료</강력한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Appose ULC 스킨 스테이플러</td><td>Covidien Deutschland GmbH,Neustadt/Donau, Germany</td><td>8886803712</td><td>스킨 스테이플러</td></tr><tr><td>Cavafix Certo 375&nbsp;</td><td>B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, 멜숭겐, 독일&nbsp;</td><td>4153758</td><td>중앙 정맥 카테터</td></tr><tr><td>EMKA Easytel +L-EPTA 트랜스폰더</td><td>emka TECHNOLOGIES S.A.S,Paris,France</td><td>L-EEEETA 100</td><td>텔레메트리 트랜스폰더</td></tr><tr><td>EMKA 수신기 및 데이터 분석기 시스템</td><td>emka TECHNOLOGIES S.A.S,Paris,France</td><td>Reviever&nbsp;</td><td>텔레메트리 수신기</td></tr><tr><td>깃털 일회용 Scapel (11) (21)</td> <td>Feather, Japan</td><td>8902305.395</td><td>scapel</td></tr><tr><td>Prolene 2-0, blue monofil VISI-BLACK, FS 바늘</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td><td>EH7038H</td><td>피부</td></tr><tr><td>프롤렌 3-0, 블루 모노필, FS1 바늘</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, 노르더슈테트, 독일</td><td>EH7694H</td><td>스킨</td></tr><tr><td>프롤렌 5-0(단순 각도, C1 바늘) 블루 모노필 VISI-BLACK</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td><td>EH7227H</td><td>혈관</td></tr><tr><td>프롤렌 5-0 (이중 무장, C1 바늘) 60cm</td><td>Johnson & ; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td><td>KBB5661H</td><td>혈관</td></tr><tr><td>프롤렌 6-0 (이중 무장, C1 바늘) 60cm</td><td>Johnson & ; Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td><td>EH7228H</td><td>혈관</td></tr><tr><td>Sempermed derma PF 수술용 장갑 Seril Gr. 7, 7.5, 8&nbsp;</td><td>Semperit 투자 Asia Pte Ltd, 싱가포르</td><td>4200782,4200871,4200894</td><td>수술용 장갑</td></tr><tr><td>Sentinex&reg; PRO 수술 가운 스펀레이스 XL 150cm</td><td>Lohmann & 라우셔 GmbH & Co. KG, Neuwied, Germany</td><td>19302</td><td>수술 가운</td></tr><tr><td>Tachosil</td><td>Takeda Pharma Vertrieb GmbH & Co. KG, Berlin, Germany</td><td>MAXI 9,5 x 4,8 cm</td><td>지혈</td></tr><tr><td>Telasorp 배꼽 닦음 (녹색 45x45cm)</td><td>PAUL HARTMANN AG, Heidenheim, Germany</td><td>4542437</td><td>복부 수건</td></tr><tr><td>소아 소변 카테터</td><td>Uromed Kurt Drews KG, Oststeinbeck, Germany</td><td>PZN 03280856</td><td>에 사용됩니다. 요관-피부 장루</td></tr><tr><td>VICRYL- 0 MH Plus</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td><td>V324</td><td>근막 폐쇄</td></tr><tr><td>VICRYL - 3-0, SH1 Plus needle, 75cm</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td><td>W9114</td><td>피하 봉합사, 복막 봉합사,&nbsp;</td></tr><tr><td>VICRYL - 3-0, SH1 플러스 바늘, 4*45cm</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td><td>V780</td><td>피하 봉합사, 복막 봉합사,&nbsp;</td></tr><tr><td>VICRYL - 합자 Sutupak 보라색 꼰, 3-0</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany</td><td>V1215E</td><td>합자</td></tr><tr><td>3M&trade에 대한 위협; 표준 수술용 마스크 1810F</td><td>3M Deutschland GmbH, Neuss, Germany</td><td>3M-ID&nbsp; 7000039767</td><td>수술 용 마스크</td></tr> <tr><td>< 강>수술 도구< / 강></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>해부학 겸자 표준</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, 투틀링겐, 독일&nbsp;</td><td>PZ0260</td><td>해부학 겸자</td></tr><tr><td>외상성 핀셋 스틸, De Bakey Tip 1,5mm 8"</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&nbsp;</td><td>GF0840</td><td>아나트미칼 무외상성 집게</td></tr><tr><td>바이폴라 집게 16cm 직선, 분기 0,30mm 뾰족한, 보편적인 핏</td><td>B&uuml; hler Instrumente Medizintechnik GmbH,Tuttlingen, Germany</td><td>08/0016-A</td><td>바이오폴라 집게</td></tr> 불<tr><td>독 클램프 비외상, 곡선, De bakey 78 mm, 3"</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&nbsp;</td><td>GF0900</td><td>불독 클램프</td></tr><tr><td>DE BAKEY-SATINSKY 혈관 클램프 215mm</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, 투틀링겐, 독일&nbsp;</td><td>GF1661</td><td>혈관 클램프</td></tr><tr><td>해부 가위 Mayo, 250mm, 10"</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&nbsp;</td><td>SC2232</td><td>&nbsp; 해부용 가위</td></tr><tr><td>해부 가위 Metzenbaum-Fino, 260 mm, 101/4"</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&nbsp;</td>해부용 <td>SC2290</td><td>가위</td></tr>, <tr><td>PM8050 모니터 Dr&auml이 있는 Draeger CATO 마취 기계</td><td>; 게르, Dr&auml; gerwerk AG & 주식회사 KGaA, L&uuml; beck, 독일&nbsp;</td><td>106782</td><td>환기 시스템</td></tr><tr><td>&nbsp; 파인 핀셋, ADSON 180 mm</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, 투틀링겐, 독일&nbsp;</td><td>ADSONPZ0571</td><td>미세 집게</td></tr><tr><td>Gosset 복벽 살포기</td><td>CHIRU-INSTRUMENTE, Kaierstuhl, Germany</td><td>09-621512</td><td>복부 견인</td></tr>기 <tr><td>HALSTEAD MOSQUITO, 곡선형, 외과용 125mm</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&nbsp;</td><td>KL2291</td><td>모스키트 클램프</td></tr><tr><td>HF 수술 장치 ICC 300, 전기 소작</td><td>Erbe Elektromedizin Gmbh; 티&uuml; bingen, 독일</td><td>20132-043</td><td>소작, 바이오폴라</td></tr><tr><td>MICRO HALSTED-MOSQUITO 100mm, 곡선형</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, 투틀링겐, 독일&nbsp;</td><td>KL2187</td><td>모스키트 클램프</td></tr><tr><td>마이크로 스틸 바늘 홀더 스트레이트 0,5mm, 스프링 잠금 장치</td><td>포함 ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&nbsp;</td><td>MN1324D</td><td>미세수술용 바늘 홀더</td></tr><tr><td>미세외과/워터메이커 핀셋 LINZ 150mm 6" Ergo 라운드 핸들</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, 투틀링겐, 독일&nbsp;</td><td>MN0087</td><td>미세 수술 겸</td></tr><tr><td>자 바늘 홀더 Mayo-hegar,190 mm, 71/2"</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&nbsp;</td><td>NH1255</td><td>바늘 홀더</td></tr><tr><td>Overhold Slimline Fig. 0 8 1/2"</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&nbsp;</td><td>KL4400</td><td></td></tr>은 <tr><td>멸균 거즈 10X10</td><td>Paul HaRTMANN AG, Heidenheim, Germany</td><td>401725</td><td>멸균 거즈</td></tr><tr><td>흡입 팁 OP-Flex 핸드피스 Yankauer</td><td>Pfm Medical AG, K&ouml을 능가합니다. ln, 독일</td><td>33032182</td><td>흡입</td></tr><tr><td>수술용 집게 표준 5 3/4"&nbsp;</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, 독일 투틀링겐&nbsp;</td><td>PZ1260</td><td>수술용 집게</td></tr><tr><td>수술용 가위 표준 뾰족한-뭉툭한 (실/천 가위)175 mm, 7"</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&nbsp;</td><td>SC1522</td><td>외과용 가위</td></tr><tr><td>Titanit 혈관 가위 POTTS-SMITH,185 mm, 71/4"60°;</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, 독일 투틀링겐&nbsp;</td><td>SC8562</td><td>Pott 가위</td></tr><tr><td>터널링 기구</td><td>Marina Medical Instruments Inc,Davies,US</td><td>MM-TUN06025</td><td>피하 터널링</td></tr><tr><td>용기 루프</td><td>Medline International Germany GmbH,Kleve, Germany</td><td>VLMINB</td><td>용기 유지 및 조정</td></tr><tr><td>상처 스프레더 Weitlander, Stump,110 mm, 41/4"</td><td>ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany&nbsp;</td><td>WH5210</td><td>상처 치료</td></tr><tr><td><강력한>추가 재료</강력한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>가열 패드</td><td>Eickemeyer - Medizintechnik f&uuml; r 계층&auml; rzte KG, 독일 투틀링겐&nbsp;</td><td> 648050 MHP-E1220</td>은 <td>수술 중 체온을 유지합니다</td></tr>. <tr><td>후두경, 맞춤형</td><td>Wittex GmbH, Simbach, Germany</td><td>333222230</td><td>&nbsp; 성대 노출</td></tr><tr><td>직장 온도 프로브</td><td>Asmuth Medizintechnik, Minden, Germany</td><td>ASD-RA4</td><td>체온 측정</td></tr><tr><td>스프레이 상처 필름</td><td>Mepro-Dr. Jaeger und Bergmann GmbH, 독일 훼히타</td><td>2830</td><td>&nbsp; 멸균 상태 유지</td></tr><tr><td>멸균 장기 백</td><td>Raguse Gesellschaft f&uuml; r medizinische Produkte, Ascheberg, Germany</td><td>800059</td><td>장기 보존</td></tr><tr><td>돼지 재킷 소형, 성인 Landrasse 돼지 30-50kg, Emka 텔레메트리 및 요로 카테터 삽입을 위해 맞춤형&nbsp;</td><td>Lomir Biomedical Inc., 영국</td><td>SS J1LAPMP</td><td>이식된 카테터를 보호하고 소변 주머니를 보관하기 위해 돼지 재킷</td></tr>을 제공합니다<tr><td>&nbsp; 초음파 장치, Sonosite Edge-II</td><td>FUJIFILM SonoSite GmbH, 프랑크푸르트, 독일</td><td>V21822</td><td>초음파 및 컬러 도플러</td></tr><tr><td>소변 주머니 2000ml 용량</td><td>ASID BONZ GmbH, Herrenberg, Germany&nbsp;</td><td>2062578</td><td>관-피부 누공 카테터에 연결된 일회용 소변 주머니</td></tr></tbody></table>

24시간 장기 보존 및 지속적인 원격 분석을 사용하여 돼지 모델에서 직소 신장 자동 이식

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

현재 중요한 장기 부족의 장기 이식 시대에는 신장 이식(KT)을 위한 사용 가능한 동종 이식풀을 확대하기 위한 다양한 전략이 사용되고 있습니다. 비록, 확장 된 기준 기증자에서 동종 이식의 사용 (ECD) 부분적으로 장기 기증자의 부족을 완화 수 있습니다., ECD 장기 열등 한 결과 및 수술 후 합병증에 대 한 잠재적으로 높은 위험을 수행. 역동적인 장기 보존 기술, 허혈 재관전 및 보존 상해의 변조, 동종 이식 요법은 KT의 동종 이식 활용 및 환자 결과를 개선하기 위한 노력의 과학적 관심의 스포트라이트에 있습니다.
전임상 동물 실험은 번역 연구에서 필수적인 역할을 하고 있으며, 특히 의료 기기 및 약물 개발에서 중요한 역할을 하고 있습니다. 전 생체 또는 작은 동물 연구에 대한 돼지 치열 교정 자동 이식 모델의 주요 장점은 임상 설정에 대한 외과 해부학 적 및 생리적 유사성 내에 있습니다. 이것은 새로운 치료 방법 및 기술의 조사를 허용하고 사실 인정의 촉진한 임상 번역을 보장합니다. 이 프로토콜은 24시간의 보존 시간 및 원격 측정 모니터링을 사용하여 돼지 직교 신장 자동 이식 모델에 대한 포괄적이고 문제 지향적인 설명을 제공합니다. 정교한 수술 기법과 마취, 동물 하우징, perioperative 후속 및 모니터링의 매우 표준화및 최첨단 방법의 조합은 이 모델의 재현성과 성공을 보장합니다.

우리 그룹은 크고 작은 동물에서 고체 장기 이식 모델에 대한 몇 년의 경험을 가지고 있으며 돼지 치열 교정 신장 자동 이식 모델을 활용하여 다양한 실험 설정16,25,26,27에서재현 가능한 결과를 얻습니다. 실험 용 설정에 따라 전체 실험 팀의 충분한 학습 곡선을 보장하는 예비 실험으로 3 ~5 개의 자동 이식을 수행하는 것이 좋습니다. 현재 설정에서 5 이식은 외과 의사를 양성하는 데 필요했다, 이전 실험의 8 년 - 및 이식 수술 분야에서 임상 수술 경험의 5 년, 이러한 실험을 수행. 이것은 이 기술에 외과 의사의 이전 노출에 따라 다를 수 있습니다.
이 프로토콜의 프레임 워크 내에서, 5 돼지 치열 교정 신장 자동 이식 실험의 세트의 결과가 입증된다. 트랜스폰더 이식은 관찰 기간 내내 충분한 원격 측정 신호를 가진 각 동물에서 성공했습니다 (부분 트랜스 폰더 기능 장애가있는 한 동물을 제외하고). 트랜스폰더 이식용 칼-피부 간격은 85분 ±5분(표1)이었다. 이식 검색 후, 모든 동물은 주택 시설에서 잘 회복. 검색 수술에 대한 칼- 피부 간격은 135 분 ± 32 분이었다 (삽입에 대한 약 30-45 분 포함, 경마 카테터의 터널링 및 고정). 왼쪽 신장은 24시간(24시간 ± 30분)의 고온혈 시간으로 찬수조에 보관하였다. 다음 날, 마취 유도 및 재발 절제술 후, 금단의 (오른쪽) 신장이 제거된 후 감기저장 왼쪽 신장 이식의 직교자가 이전에 설명된 바와 같이 제거되었다. 자동 이식 수술에 대한 칼- 피부 간격은 27 분 ± 168 분 (오른쪽 신장의 절충포함)이었다. 따뜻한 허혈 시간은 34분 ± 7분이었습니다. 각 이식 된 신장 이식편은 레퍼퓨전 다음 최소한의 직접 소변 생산을했다. 복부 폐쇄 에 이어, 색 도플러 초음파는 모든 경우에 신장의 만족스러운 동맥 및 정맥 관류를 보였다(도 4). 모든 동물은 마취에서 회복되었고 관찰 기간 내내 중요한 합병증이 관찰되지 않았습니다. 매일 혈액과 소변 샘플을 수집하였다. 모든 돼지는 후속 기간 동안 양호한 임상 상태에 있었고 5 일 후에 희생되었습니다. 세럼 크레아티닌과 칼륨 값은 POD3-4에 정점을 찍었습니다. 혈액 pH는 정상 범위 내에 남아있다(그림 5). 소변 출력은 처음 4 수술 후 일 동안 정상 값으로 회복. 백혈구 수는 후속기간(도 5)의끝에 약간 증가하였다. 지속적인 원격 분석 모니터링에 의해 측정된 체온은 수술 후 기간 동안 약간의 변동을 보였다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig1.jpg"> 그림 1: 스터디 순서도 및 프로토콜. 약어 사용: POD 수술 후 일; 심전도 - 전기 장학. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig2.jpg"> 그림 2: 최대 6마리의 동물을 실시간으로 지속적으로 원격 측정 모니터링하는 동물주택 시설. (A)최대 6마리의 동물의 주거 및 원격 측정 모니터링에 적합한 시설의 회로도 청사진. 단일 홀딩 박스의 크기는 EU 지침 2010/63 및 ETS 123 부록 A. 패널 A-E쇼의 지침에 따라 결정되었습니다. (B)6마리의 동물을 수용할 수 있는 동물실. (C)원격 분석 데이터의 지속적인 등록에 사용되는 PC가있는 전망실. (D)동물의 실시간 비디오 및 열 영상. (E)개인의 사회적 고립을 피하기 위해 반려동물과 동물의 음향 및 후각 접촉을 보장합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig3.jpg"> 도 3: 직교 신장 자가 이식 및 해부학 적 변이 및 재건 가능성. (A,B)"표준"혈관 해부학의 경우 직교 신장 자동 이식 모델의 단계. (C)변형 1: 하나의 큰 정맥은 기증자 신장과 함께 제공 하는 동안, 받는 사람 측에 두 개의 정맥이 있다. 관리: 더 작은 정맥은 합자에 의해 닫히고 아나스토모증은 신장 정맥 사이 끝까지 수행됩니다. (D)변형 2: 하나의 큰 정맥이 기증자 신장과 함께 제공되지만, 모순쪽에 적합한 수령인 혈관이 없습니다(예: 크기 불일치). 관리: 열등한 베나 카바에 신장 정맥의 측면 아나스토모증을 종료합니다. (E)변형 3: 양쪽에 두 개의 유사한 크기의 정맥. 관리: 두 개의 정맥 해부학에 의한 재건. (F)변형 4: 두 개의 유사한 크기의 정맥이 기증자 신장과 함께 제공되지만, 반대로 적합한 수령인 용기는 없습니다. 관리: 두 개의 신장 정맥의 경우 열등한 베나 카바에 신장 정맥의 측면 아나스토모증을 종료합니다. (G)변이 5: 기증자 신장은 초기 분기를 보여주는 정맥과 함께 제공되며, 반대로 하나의 큰 정맥이 있습니다. 관리: 기증자 신장 정맥의 짧은 공통 채널의 해부학을 종료하는 것은 받는 사람 측에 하나의 큰 정맥을 가진. (H)변형 6: 기증자 신장은 초기 분기와 단일 신장 정맥과 함께 제공 하는 동안, 반대로 측면에 적합한 받는 혈관이 없습니다. 관리: 열등한 베나 카바에 기증자 신장 정맥의 짧은 공통 채널의 측면 아나스토모증을 끝. 이 그림은 더 빈번한 변화의 소수를 묘사하고 독일 육상 돼지에서 가능한 모든 변화의 관점에서 통계적으로 포괄적이지 않습니다. 약어 사용: KG 신장 이식; RK 오른쪽 신장; IVC 열등한 베나 카바; AO-aorta는 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig4.jpg"> 그림 4: 대표적인 색상 도플러 초음파 이미지, 직교 신장 자동 이식 및 복부 폐쇄 직후. (A)색도플러 초음파는 신장 및 복부 폐쇄의 이식 후 직접 수행되며, 신장 이식의 좋은 동맥 및 정맥 관류를 보장하고 잠재적 인 iatrogenic 혈관 꼬임에 대한 검사를 합니다. 초음파는 또한 다양한 문제를 선별하기 위해 동물의 임상 성능에 기초하여 매일 및 주문형으로 사용되었습니다. (B-E) 이식 후 신장 이식의 대표적인 초음파 이미지. 색상도플러(B,C)의신장 이식편의 이미지는 우수한동맥(D)및 정맥 관류(E)를 나타낸다. 이 그림은 같은 동물의 대표적인 이미지를 보여줍니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig5.jpg"> 그림 5: 24h의 감기 허혈 시간을 가진 직교 신장 자동 이식모델의 대표적인 실험실 결과 및 원격 분석 데이터. (A)혈청 칼륨 값(B)혈청 크레아티닌 값(C)pH(D)백혈구 수(WBC)(E)소변 출력. (F)4회 연속 신장 이식(부분 트랜스폰더 기능 장애로 인한5번째 동물로부터 제시된 자료 없음)에서 관찰 기간 전반에 걸쳐 텔레메트릭 모니터링에 의해 등록된 평균 체온. 사용 된 약어 : POD 수술 후 날. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61591/61591fig6.jpg"> 도 6: 가능한 peri 수술 합병증 및 함정의 예. (A-C)이식 된 신장 이식의 수술 후 혼잡 POD3 다음 직교 킨티 자동 이식. (D)혼잡의 원인은 피부 의 수준에 과다조 봉합사로 인해 카테터 꼬임으로 확인되었다. 봉합사를 재조정한 후 24시간(E)에서 거의완전히 해결된 혼잡이 나타나고 있으며, 여기서 는 치열교정 신장 자동 이식에 따른 POD2에 대한 다른 신장 이식이 나타난다. 아스테릭스(*)는 이식편(피 묻은 컬렉션 대 림프구)의 밑장 주위에 유체 컬렉션을 보여줍니다. 신장을 통해 복막의 폐쇄와 우리의 기술 때문에 이러한 수집은 일반적으로 로컬 압축의 유리한 효과로 인해 자기 제한. 동물은 현지 발견, 출혈 또는 감염의 징후의 관점에서 밀접하게 모니터링되어야합니다. (F)주택 시설에서 매일 수행 (및 주문형) 자격을 갖춘 색상 도플러 초음파는 학업 활용 외에 (예를 들어, 문서, 동맥 저항 지수의 등록), 초기 하위 임상 단계에서 잠재적 인 합병증을 인식하는 중요한 진단 역할을 갖는다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61591/61591fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:font-size="9px" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td rowspan="2">실험 작업/단계</td>
			<td rowspan="2">일</td>
			<td rowspan="2">시간 (분)</td>
			<td rowspan="2">외과 의사</td>
			<td rowspan="2">수의학 책임자</td>
			<td rowspan="2">수의학 기술자</td>
			<td rowspan="2">실험실 기술자</td>
			<td rowspan="2">박사 과정 학생</td>
			<td>총</td>
		</tr>
<tr>
<td>Nr</td>
		</tr>
<tr>
<td>Preopreative 치료</td>
			<td>D-29 ~ D-15</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>3</td>
		</tr>
<tr>
<td>원격 분석 이식 수술</td>
			<td>D-15</td>
			<td>85±5</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>원격 분석 이식 후 수술 후 치료</td>
			<td>D-15 ~ D-1</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>3</td>
		</tr>
<tr>
<td>접목 검색 수술</td>
			<td>D-1</td>
			<td>135±32</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>8</td>
		</tr>
<tr>
<td>신장 자동 이식 수술</td>
			<td>D 0</td>
			<td>168 ±27</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>8</td>
		</tr>
<tr>
<td>신장 자동 이식 다음 수술 후 치료</td>
			<td>D 0 ~ D5</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
			<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
			<td>2</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>희생</td>
			<td>D 5</td>
			<td>n.a.</td>
			<td></td>
			<td>2</td>
			<td></td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
			<td>4</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1. 돼지 신장 자동 이식 모델의 다양한 실험 단계를 수행하기위한 필요한 인적 자원 및 시간 일정에 대한 설명.

대형 동물 모델은 전임상 이식 연구에서 필수적인 역할을 합니다. 임상 설정과의 유사성으로 인해, 본 문서에 기재된 치열 신장 자동 이식의 돼지 모델은 장기 보존 기술 및 치료 내정간섭의 시험을 위한 우수한 생체 내 설정을 제공한다.

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

이 프로토콜은 24시간의 장기 보존 시간 및 peri 수술 텔레메트릭 모니터링을 사용하여 돼지 직소 신장 자동 이식 모델을 성공적으로 확립하는 모든 주요 단계를 설명합니다. 작은 동물 모델에 대한 전 생체 연구보다 이 큰 동물 자동 이식 모델의 주요 장점은 임상 설정에 대한 외과 해부학 및 병리학적 유사성입니다. 대학 병원 RWTH Aachen에 있는 우리 팀은 절차를 시연할 것입니다.하룻밤 동안 금식 성인 여성 돼지에서 적절한 수준의 퇴적물을 확인한 후 사타구니에 3~5센티미터 절개를 하고 대퇴동맥을 360도 방식으로 해부한다. 숫자 11 메스를 사용하여 동맥 절제술을 만들고 원격 분석 장치의 동맥 센서를 삽입하십시오. 왼쪽 측면에 피하 파우치를 만든 후, 측면으로 원격 측정 트랜스 폰더를 터널과 3-O 폴리 프로필렌 단일 매듭 봉합사근육 근막에 트랜스 폰더를 고정.다음으로 흉부의 왼쪽과 오른쪽에 두 개의 작은 절개를 만들고 빨간색과 흰색 ECG 전극을 지정된 위치로 터널링합니다. 전극이 확보되면 원격 분석 데이터의 등록을 시작합니다. 안정적인 신호 획득시 봉합사및 스프레이 필름 드레싱으로 사타구니 절개를 닫고 적절한 크기의 돼지 재킷을 동물에 놓습니다.첫 번째 수술 후 14 일, 마취 동물의 오른쪽에 있는 경정맥에 4~5센티미터 절개를 하고, 피하 및 근육 조직을 해부하여 저글러 정맥을 노출한다. 필링 어웨이 시트 소개자 또는 셀딩거 방법을 사용하여 경마 카테터를 삽입합니다. 5-0 폴리프로필렌 봉합사로 카테터를 고정하고 두 층으로 절개를 닫습니다.외과 소독 및 멸균 드레이핑에 따라 중간 절개 절제술을 수행하여 복부를 열고 표준 복부 리트랙터를 사용하여 수술장을 노출시하십시오. 복막층을 열고 단극성 소작, 양극성 집게 및 미세 가위를 사용하여 모든 부착 된 조직에서 왼쪽 신장과 요료를 해부합니다. 그런 다음 3-0 폴리글락틴 봉합사를 사용하여 왼쪽 요관을 신장 힐룸으로 최소 10센티미터 이상 분할합니다.이식 신장을 검색하려면 혈관 클램프를 사용하여 대동맥과 정맥을 대동맥과 정맥 근처의 정맥을 닫습니다. 그리고 조개 위에 혈관을 잘라. 그런 다음 추가 준비를 위해 백 테이블 팀에 신장을 주고 신장 동맥과 정맥의 그루터기를 닫기 위해 5-0 폴리 프로필렌 봉합사를 사용합니다.검색 직후, 표준 14 게이지 주변 카테터를 사용하여 신장 동맥을 꾸미고 적어도 500 밀리리터의 얼음 차가운 장기 보존 용액으로 신장을 플러시하십시오. 플러시 후, 컴퓨터 제어 냉각 회로를 사용하여 섭씨 4도에서 24 시간의 목표 감기 허혈 시간으로 장기 보존 용액에 보관하기 위해 멸균 장기 가방에 접목을 감쌉니다. 혈관 클램핑 2~5분 전에, 정맥 내 100개의 국제 단위를 낫리움 헤파린킬로그램당 주입하고, 그 후에 입증된 바와 같이 금단성 오른쪽 신장을 제거하고 중앙분리대를 다시 엽니다.혈관 클램핑 2~5분 전에, 정맥 내 100개의 국제 단위를 낫리움 헤파린킬로그램당 주입하고, 그 후에 입증된 바와 같이 반대측 오른쪽 신장을 제거합니다. 보존된 이식성 신장을 수술 분야에 배치하고 효율성을 모니터링하기 위해 평균 동맥 혈압과 심박수를 사용하여 지속적인 주입으로 노르의 분당 0.1~ 1 마이크로그램의 투여를 시작합니다. 신장 정맥의 종단 간 해부학의 경우 5-0 폴리 프로필렌을 사용하여 두 개의 코너 스티치를 배치하고 백 월을 연속 방식으로 봉합하십시오.후면 벽을 완성한 후 두개골 모서리 스티치의 한쪽 끝을 사용하여 앞벽을 두개골 방향으로 봉합하고 Heparinized 식염수 용액의 밀리리터 당 100 개의 국제 단위로 정맥을 플러시하십시오. 신장 동맥의 종단 간 해부학의 경우 낙하산 기술을 사용하여 백 벽을 연속적인 방식으로 봉합하기 전에 6-0 폴리 프로필렌 두개골 코너 스티치를 사용하십시오. 이중 무장 6-0 폴리 프로필렌 봉합사의 다른 쪽 끝으로 전면 벽을 봉합하고 Heparinized 식염수 용액의 밀리리터 당 100 국제 단위로 동맥을 플러시합니다.해부학이 완료된 후, 코달 모서리에 있는 두 개의 실을 묶고 정맥 혈관 및 동맥 클램프를 순차적으로 열어 신장의 재침투를 허용합니다. 레퍼퓨전에 따라, 상류성 동맥의 외부 벽에 파파베린의 5 밀리리터를 국소 투여하고 정맥 관리 250 20% 포도당 용액의 단일 80 밀리그램 복용량푸로즈미드. 다음으로, 복벽과 피부를 통해 12개의 프랑스 소아 소변 카테터를 전달하고 합자를 사용하여 카테터를 요관에게 고정시하십시오.혈관 해부학의 이식 및 꼬임의 탈구를 방지하기 위해 신장 위에 회중 층을 닫습니다. 그리고 입증 된 대로 네 개의 층으로 복부를 닫습니다. 마지막으로, 색상 도플러 초음파를 사용하여 완전히 억류 된 동물을 주택 시설로 되돌리기 전에 신장 이식의 적절한 동맥 및 정맥 관류를 보장하십시오.5개의 돼지 치열 교정 신장 자동 이식 실험의 이 대표적인 세트에서, 트랜스폰더 이식 및 자동 이식 절차는 관찰 기간 동안 등록된 충분한 원격 측정 신호를 가진 각 동물에서 성공적이었다. 복부 폐쇄 에 이어, 컬러 도플러 초음파는 모든 경우에 신장의 만족스러운 동맥 및 정맥 관류를 밝혀. 혈청 칼륨과 크레아틴 값은 수술 후 3~4일에 정점을 찍었으며 그 후 점진적인 회복을 보였습니다.혈액 pH는 정상 범위 내에 남아 있고 소변 출력은 처음 4 수술 후 일 동안 정상 값으로 회복되었습니다. 이 프로토콜은 임상적으로 중요한 큰 동물 모형에 있는 장기 보존 기술 또는 전 생체 내 또는 생체 내 치료의 효력에 관하여 다양한 질문에 대답하기 위하여 이용될 수 있습니다.

orthotopic-kidney-auto-transplantation-porcine-model-using-24-hours

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 요관 부분과 함께 신장 중 하나를 제거하는 수술인 신장 절제술을 보여줍니다. 신장을 오가는 혈관이 묶여 나뉩니다. 절제된 신장은 이식 절차에 사용할 수 있습니다.

돼지 모델의 신장 절제술: 이식을 위해 돼지 신장 이식편을 회수하는 수술 절차

이 비디오에서는 돼지 기증자 신장에서 장기간 냉간 허혈성 저장 시간을 통해 보존 손상을 유도하는 기술에 대해 설명합니다.

돼지 기증자 신장의 보존 손상 모델링: 신장에 장기간의 저온 허혈을 가하여 이식 기능 장애를 유도하는 절차

이 비디오는 돼지 모델에서의 정소성 신장 자동 이식에 대해 설명합니다. 이 수술 절차는 동물의 신장 이식편을 원래의 해부학적 위치에 이식하는 것입니다. 이 모델은 인간의 말기 신장 질환에 대한 새로운 치료법을 조사하는 데 사용됩니다.

정소성 돼지 신장 이식: 돼지 모델에서 이식 신장을 이식하는 기술

동물 장기 생리학에 대한 연구는 실험적인 생체 외 관류 시스템을 수행하여 달성할 수 있습니다. 이전에 개발한 생체 외 간 관류 모델에 항상성 기관인 돼지 신장을 추가하는 것은 더 나은 생리학적 환경을 달성하기 위한 주요 단계가 될 수 있습니다.

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정상 체온<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 신장의 보존을위한 신장 관류는 이식 전에 이식

돼지 장기 이식 모델은 장기 보존 메커니즘을 연구하는 데 중요한 플랫폼을 제공합니다. 이 논문은 변연 신장 이식편을 사용하여 이식 결과를 개선하기 위한 새로운 접근 방식을 조사할 수 있는 이종성 돼지 신장 자가이식 모델에 대해 설명합니다.

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