Name: 고양이과 거대 동물 모델에서 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 조직의 망막하 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: 배우세요 고양이 모델에서 망막하 유기체 이식술을 통해 퇴행성 망막 질환의 세포 치료법을 개발하는 방법을. 이 기술은 정확한 조직 전달과 임상 적용 가능성을 검증합니다.

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이 작업은 NEI Fast-track SBIR 보조금 R44-EY027654-01A1 및 SBIR 보조금 3 R44 EY 027654 - 02 S1(I.O.N., Lineage Cell Therapeutics, Dr. Petersen-Jones는 공동 PI)의 지원을 받았습니다. 저자는 이 연구에 포함된 동물에 대한 마취 및 일반적인 관리와 수술 환경 및 기구 준비/살균에 도움을 준 Ms. Janice Querubin(MSU RATTS)에게 감사드립니다. 저자는 이식 전날 오가노이드를 받아 배지에 삽입하는 데 도움을 준 Paige Winkler 박사와 이식 당일에 도움을 준 Paige Winkler 박사에게 감사를 표합니다. 저자는 또한 망막 오가노이드의 부지런한 배송, 배송업체 조립, 각 배송 후 온도 및 G-스트레스 기록 다운로드에 대해 Mr. Randy Garchar(LCTX)에게 감사드립니다. 이 작업은 작가 Igor Nasonkin이 Biotime(현재 Lineage)에 고용되어 있는 동안 수행되었습니다.

Ratnesh K. Singh, Ph.D., Francois Binette, Ph.D. 및 Igor O. Nasonkin Ph.D.는 Lineage Cell Therapeutics, Inc.의 직원입니다. 저자는 이해 상충을 선언하지 않습니다.

hPSC 유래 망막 조직(망막 오가노이드)을 망막하 공간에 이식하는 것은 PR 세포 사멸(심도 또는 말기 실명)로 인한 말기 망막 퇴행성 질환의 시력 회복을 위한 유망한 실험적 접근 방식입니다. 제시된 접근법은 인간 태아 망막 조직 23,24,25 조각의 망막하 이식을 기반으로 이전에 개발되고 성공적으로 테스트된 실험적 치료법을 기반으로 합니다. 이는 hPSC로부터 유래된 대체적이고 보충 가능하며 윤리적으로 수용 가능한 망막 조직 공급원의 사용을 제시한다. 큰 눈 동물 모델에서 치료의 외과적 타당성과 안구 안전성을 입증하는 것은 임상 적용에 대한 이 유망한 접근 방식의 발전을 위해51,55가 필요합니다. 이 원고는 정상 망막과 퇴행성 망막이 모두 있는 대형 동...

전 세계 수백만 명의 사람들이 망막 변성(RD)의 영향을 받아 시각 장애 또는 빛 감지 광수용체(PR)의 손실과 관련된 실명을 경험합니다. 연령 관련 황반변성(AMD)은 유전적 위험 요인과 환경/생활 습관 요인의 조합으로 인한 실명의 주요 원인입니다. 또한 200개 이상의 유전자와 유전자좌가 유전된 RD(IRD)1을 유발하는 것으로 밝혀졌습니다. 가장 흔한 IRD인 색소성 망막염(RP)은 유전적으로 이질적이며 약 70개의 유전자에서 3,000개 이상의 유전적 돌연변이가 보고되고 있습니다 2,3,4. 어린 시절에 실명을 유발하는 Leber 선천성 Amaurosis(LCA)도 유전적으로 이질적입니다 5,6. 유전자 확대 요법이 개발되어 소수의 IRD를 치료하기 위한 임상 시험 중에 있다 3,7. 그러나 IRD의 각 뚜렷한 유전적 형태를 치료하고 따라서 소수의 환자만을 치료하기 위해 별도의 치료법을 개발해야 합니다. 또한, 유전자 증강은 구출 가능한 광수용체 집단의 존재에 의존하므로 진행된 변성에는 적용할 수 없습니다.
따라서 진행성 RD와 중증에서 말기 실명을 다루고 치료하는 치료법 개발에 대한 시급하지만 아직 충족되지 않은 임상적 요구가 있습니다. 지난 2 년 동안 신경 인공 임플란트는 인간이 사용하기 전에 고양이와 같은 대형 동물 모델에서 개발되고 테스트되었습니다 8,9,10,11,12,13,14. 마찬가지로, 지난 20년 동안 망막하로 이식된 배아 또는 성숙한 포유류 망막 시트를 활용하는 망막 대체 요법이 개발되었으며 15,16,17,18,19,20,21,22 RD 환자에서도 성공적으로 테스트되었습니다 23,24,25. 두 접근 방식 모두 새로운 센서(신경 보철 장치의 경우 광전지 실리콘 포토다이오드26,27, 망막 시트 이식의 경우 시트로 구성된 건강한 돌연변이 없는 광수용체)를 퇴행성 PR이 있는 망막에 도입하는 아이디어를 활용합니다. 최근 연구에서는 인간 만능 줄기 세포(hPSC) 유래 망막 전구체28,29, hPSC-광수용체 30 및 hPSC-망막 오가노이드31,32,33의 이식과 같은 줄기 세포 기반 접근법의 사용을 조사했습니다. 망막 오가노이드는 접시에서 망막 조직의 형성을 가능하게 하고 발달 중인 인간 태아 망막의 광수용체 층과 유사한 수천 개의 돌연변이가 없는 PR을 가진 광수용체 시트의 유도를 가능하게 합니다 34,35,36,37,38,39,40. RD 질환 환자의 망막하 공간에 hPSC 유래 망막 조직(오가노이드)을 이식하는 것은 새롭고 유망한 연구용 세포 치료 접근법 중 하나이며 여러 팀(31,32,41,42)에서 추구하고 있습니다. 세포 현탁액(어린 광수용체 또는 망막 전구체)의 이식과 비교하여, 태아 광수용체의 이식 시트는 임상 시험에서 시력 개선을 가져오는 것으로 입증되었습니다23,24.
여기에 제시된 프로토콜은 PR이 있는 온전한 망막 시트를 도입하고 이식편 생존을 증가시키고 시트 보존을 개선하는 잠재적으로 더 나은 방법으로서 전체 망막 오가노이드(오가노이드 테두리33,41이 아닌)의 망막하 전달을 위한 이식 절차를 자세히 설명합니다. 인간 망막의 평평한 조각과 RPE 패치를 도입하는 절차가 개발되었지만43,44,45, 더 큰 3D 이식편의 이식은 조사되지 않았습니다. 줄기 세포 유래 망막 오가노이드는 시력 회복 기술 개발을 위한 광수용체 시트의 무궁무진한 공급원을 제공하고, 윤리적 제한이 없으며, 진행성 RD 및 말기 실명 치료에 중점을 둔 치료법을 위한 인간 망막 조직의 훌륭한 공급원으로 간주됩니다46. 숙주 망막 틈새(신경 망막, 망막 색소 상피 및 망막 및 맥락막 혈관 구조)에 대한 손상을 최소화하면서 망막 오가노이드의 정확한 망막하 이식을 위한 수술 방법의 개발은 이러한 치료법을 임상 적용으로 발전시키기 위한 중요한 단계 중 하나입니다31,32. 고양이, 개, 돼지, 원숭이와 같은 대형 동물 모델은 외과적 전달 방법을 조사하고 이식된 조직 시트(망막 색소 상피(RPE) 세포)의 안전성을 입증하고 오가노이드 41,44,45,47,48,49,50의 사용을 조사하는 데 좋은 모델임이 입증되었습니다. 큰 동물의 눈은 인간의 황반과 유사한 원뿔(중앙 영역)을 포함하여 광수용체 밀도가 높은 영역의 존재를 포함하여 인간과 유사한 지구 크기뿐만 아니라 유사한 해부학적 구조를 가지고 있습니다 6,51,52.
이 원고에서는 hPSC 유래 망막 조직(오가노이드)을 고양이과 대형 동물 모델(야생형 및 CrxRdy/+ 고양이 모두)의 망막하 공간에 이식하는 기술을 설명하며, 이는 유망한 효능 결과와 함께32,53 RD 상태를 치료하기 위한 임상 적용에 대한 이러한 연구 요법의 추가 개발을 위한 기반을 구축합니다.

<table><tbody><tr><td>0.22 & 마이크로; PES 멤브레인 Cameo NA가 있는 m 기공 주사기 필터는</td><td></td><td></td><td>다양한 공급업체를 통해 찾을 수 있습니다</td></tr>. <tr>확장 가능한 41G 캐뉼라 <td>DORC</td><td>1270.EXT</td><td></td>250 &micro<td>가 있는 23G 망막하 주사기</td></tr><tr><td>; L hamilton 가스 타이트 루어 록 주사기</td><td>Hamilton</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급업체를 통해 찾을 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>6-0 실크 봉합</td>사 <td>Ethicon</td><td>707G</td><td></td></tr><tr><td>6-0/7-0 폴리글락틴 봉합사</td><td>Ethicon</td><td>J570G</td><td></td></tr><tr><td>아세프로마진 말레산염 500mg/5mL (Aceproject)</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급업체를 통해 찾을 수 있습니다</td></tr>. 부<tr><td>프레노르핀 0.3 mg/mL</td><td>Par 제약</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급업체를 통해 찾을 수</td></tr> 있습니다. <tr><td>cSLO + SD-OCT,</td><td>Heidelberg Engineering</td><td>Spectralis HRA+ OCT</td><td></td></tr><tr><td>Cyclosporine</td>, <td>Novartis</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급업체를 통해 찾을 수</td></tr> 있습니다. <tr><td>Dexamethasone 2mg/mL (Azium)</td><td>Vetone</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급업체</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>를 통해 찾을 수 있습니다.다양한 공급 업체를 통해 찾을 수 있습니다</td></tr><tr><td>Fatal Plus 솔루션 (pentobarbital 솔루션)</td> <td>Vortech</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급 업체를 통해 찾을 수</td></tr> 있습니다 <tr><td>Gentamicin 20mg / 2mL</td><td>Hospira</td><td>NA</td><td>다양한 공급 업체를 통해 찾을 수</td></tr> 있습니다 <tr><td>유리 모세관 (얇은 벽 단일 배럴 표준 붕규산 (Schott Duran) 유리 튜브</td><td>세계 정밀 기기</td><td>TW150-4</td><td></td></tr><tr><td>메틸 프레드니솔론 액테 테이트 40 mg / mL</td><td>화이자</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급 업체를 통해 찾을 수 있습니다</td></tr><tr><td>: 현미경</td><td>: Zeiss</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>, OCT 매체 (Tissue-Tek O.C.T. 화합물)</td> <td>: Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Olympic Vac-Pac Size 23</td><td>Natus</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급 업체를 통해 찾을 수 있습니다</td></tr><tr><td>: 파라 포름 알데히드 16 % 용액</td>, <td>EMS</td><td>15719</td><td></td></tr><tr><td>Phenylephrine Hydrochloride 10% Ophthalmic Solution</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급업체를 통해 찾을 수 있습니다</td></tr><tr><td>Prednisolone 15mg/5mL</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급업체를 통해 찾을 수</td></tr> 있습니다 <tr><td>Propofol 500mg/50mL (10 mg/mL) (PropoFlo28)</td><td>Zoetis</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급업체를 통해 찾을 수 있습니다</td></tr><tr><td>RetCam II 비디오 안저 카메라</td><td>Clarity Medical Systems</td><td>NA</td><td>다양한 공급업체를 통해 찾을 수 있습니다</td></tr>: <tr><td>Triamcinolone 400mg/10 mL (Kenalog-40)</td><td>Bristol -Myers Squibb Company</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급업체를 통해 찾을 수</td></tr> 있습니다. <tr><td>Tropicamide 1% 안과 용액</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>는 다양한 공급업체를 통해 찾을 수</td></tr> 있습니다. 유리체 <tr><td>절제술 23G 포트</td><td>Alcon</td><td>Accurus 시스템</td><td></td></tr>, <tr><td>유리체 절제술 기계</td>, <td>Alcon</td><td>Accurus 시스템</td><td></td></tr><tr><td>유리체 망막 수직 80도; 스퀴즈 핸들이 있는 가위</td><td>Frimen</td><td>FT170206T</td><td></td></tr></tbody></table>

고양이과 거대 동물 모델에서 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 조직의 망막하 이식

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

연령 관련 황반변성(AMD), 색소성 망막염(RP) 및 Leber 선천성 무암증(LCA)과 같은 광수용체 손실과 관련된 망막 퇴행성(RD) 상태는 진행성 및 쇠약해지는 시력 상실을 유발합니다. 광수용체가 상실되면 시력을 회복할 수 있는 치료법에 대한 충족되지 않은 요구가 있습니다. 진행된 RD를 사용하여 인간 만능 줄기 세포(hPSC) 유래 망막 조직(오가노이드)을 눈의 망막하 공간에 이식하면 수천 개의 건강한 돌연변이가 없는 광수용체가 있는 망막 조직 시트가 제공되며 하나의 승인된 프로토콜로 광수용체 변성과 관련된 대부분의/모든 실명 질환을 치료할 수 있는 잠재력이 있습니다. 동물 모델과 진행성 RD를 가진 사람들의 망막하 공간에 태아 망막 조직을 이식하는 것이 성공적으로 개발되었지만 윤리적 문제와 제한된 조직 공급으로 인해 일상적인 치료법으로 사용할 수 없습니다. 큰 눈 유전 망막 변성(IRD) 동물 모델은 망막 세포/조직을 망막하 공간에 이식하기 위한 고급 외과적 접근 방식을 활용하여 시력 회복 요법을 개발하는 데 유용합니다. 지구 크기 및 광수용체 분포(예: 황반 유사 영역 중심의 존재) 의 유사성 및 인간 IRD를 밀접하게 요약하는 IRD 모델의 가용성은 유망한 치료법을 클리닉으로 신속하게 번역하는 것을 용이하게 할 것입니다. 여기에 제시된 것은 hPSC 유래 망막 조직을 대형 동물 모델의 망막하 공간에 이식하는 수술 기술로, 동물 모델에서 이 유망한 접근 방식을 평가할 수 있습니다.

이 절차를 통해 큰 눈 동물 모델의 망막하 공간에 hPSC 유래 망막 오가노이드를 성공적이고 재현 가능하게 이식할 수 있습니다(여기서는 건강한 광수용체(PR)가 있는 야생형 고양이와 퇴행성 PR 및 망막이 있는 CrxRdy/+ 고양이의 2가지 예를 사용하여 시연됨). 그림 1에 표시된 단계를 사용하여 hPSC 유래 망막 오가노이드를 준비하고 오가노이드가 손상되지 않도록 주입 장치의 붕규산 유리 캐뉼라에 로드합니다. 이는 오가노이드 로딩 중(단계 2.10) 및 수술 중(단계 3.16)(그림 2A, B)과 수술 종료 시 안저 영상(단계 3.23, 그림 2C)을 통해 직접 시각화하여 확인할 수 있습니다. 이 기술을 사용하여 망막하 공간에 오가노이드의 존재는 오가노이드의 위치와 모양을 기록하는 안...

여기서는 인간 만능줄기세포(hPSC) 유래 망막 조직을 대형 동물 모델의 망막하 공간에 이식하는 수술 기법을 제시합니다.

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...

현재 프로토콜은 망막 변성에 대한 세포 치료 접근법 개발을 목표로 하는 대형 동물 모델에서 전체 망막 오가노이드의 망막하 전달을 자세히 보여줍니다. 이 기술의 주요 장점은 오가노이드를 표적 조직인 망막에 직접 전달할 수 있다는 것입니다. 이 기술은 연령 관련 황반변성, 색소성 망막염 또는 leber 선천성 무모증과 같은 진행성 실명 망막 퇴행성 상태를 치료하는 것을 목표로 합니다.절차를 시연하는 것은 Dr.Peterson Jones가 될 것입니다. 오가노이드의 망막하 이식의 경우, Stevens 건절개술 가위를 사용하여 생후 4개월 된 하룻밤 금식 마취된 고양이에게 0.5-1센티미터의 측면 안과 절개술을 시행하고, 적절한 크기의 Barraquer 눈꺼풀 검경을 절개 부위에 배치하여 수술 보조원이 시술 전반에 걸쳐 정기적으로 각막에 BSS를 관개하여 눈꺼풀을 열어 둡니다. 0.5 Castroviejo 각막 묶음 겸자와 작은 모기 지혈제를 사용하여 윤부 옆의 구근 결막을 부드럽게 잡습니다.4시와 8시 방향에서 윤부 바로 옆의 결막에 두 개의 6-0 실크 봉합사를 배치하여 눈을 일차 시선으로 유지하고 세 번째 눈꺼풀을 집어넣습니다. 작은 모기 지혈제로 봉합사의 끝을 고정하여 조작을 돕고, 윤부의 두께를 부분적으로 통해 윤부의 12시 위치에 다른 봉합사를 놓고 눈을 관통하지 않도록주의하십시오. 봉합사를 느슨하게 매듭을 짓고 끝을 짧게 자르고 4시 방향에서 윤부 바로 옆의 결막에 스테이 봉합사를 놓아 눈과 일차 시선을 유지합니다.10시에서 2시 사이에 구근 결막을 반사하고 건절개술 가위를 사용하여 윤부에서 2-3mm 떨어진 결막을 절개합니다. 결막을 훼손하고 장부 캡슐을 제거하여 윤부에서 3-5mm 떨어진 2시 및 10시 유리체 절제술 포트 부위에서 공막을 노출시킵니다. 캘리퍼스를 사용하여 경화술 부위를 식별하고 고양이에서 두드러질 수 있는 주요 공막 혈관을 피하십시오.오른손잡이 외과의를 위한 10시 방향 기구 포트에서 3mm 영역을 계획하고, 제안된 경화술 부위에 묶지 않고 6-0 또는 7-0 폴리글락틴 십자형 패턴 봉합사를 미리 배치합니다. 봉합사가 제자리에 있으면 조수가 12시 방향 스테이 봉합사를 잡고 지구본을 제자리에 유지하도록 하고 0.12mm Castroviejo 집게를 사용하여 경화 절개술 부위 옆에 조직을 고정합니다. 투관침을 사용하여 렌즈와의 접촉을 피하기 위해 시신경을 향해 기울어진 2시 및 10시 위치에서 공막을 통해 23게이지 유리체 절제술 포트를 삽입하고 묶는 집게를 사용하여 관개 포트를 부드럽게 밀어 팁이 유리체 내에서 시각화될 수 있는지 여부를 결정합니다.조수가 Machemer 확대 유리체 절제술 렌즈를 각막에 배치하여 눈의 뒤쪽 부분을 시각화하고 기구 포트를 통해 23게이지 유리체 절제술 프로브 커터를 배치하여 부분 코어 유리체 절제술을 수행하도록 합니다. 다음으로, 1 밀리리터의 트리암시놀론 용액을 함유 한 1 밀리리터 주사기의 바늘을 기기 포트에 넣고 250 내지 500 마이크로 리터의 결정 현탁액을 주입한다. 용액이 전달되면 유리체 절제술 프로브를 기구 포트를 통해 전진시켜 포트가 망막 표면에서 반대쪽을 향하도록 하여 시신경두에 가깝게 합니다.고진공을 사용하여 망막에서 유리체 표면을 분리하고, 기구 포트를 통해 망막 표면을 향해 인젝터를 삽입하고, 캐뉼라 팁을 밀어냅니다. 망막 표면의 끝을 부드럽게 누르고 조수가 주사기 플런저를 약간 빠르게 눌러 망막 박리를 시작하도록 하여 주입 압력을 줄여 원하는 크기가 될 때까지 망막 박리가 천천히 증가할 수 있도록 합니다. 인젝터의 41게이지 캐뉼라를 사용하여 망막 가위가 삽입될 때까지 박리를 약간 확대하고 10시 방향 공막 포트를 제거합니다.그런 다음 시신경을 향한 직선 2.850mm 슬릿 나이프를 사용하여 이 부위의 경화술을 확대하기 위해 수정체를 만지지 않도록 합니다. 이식 부위에서 유래한 망막 신경 섬유의 손상을 방지하기 위해 시신경에서 멀리 떨어진 안검의 망막 절개술을 하고 출혈 위험을 줄이기 위해 주요 망막 혈관 절단을 피하십시오. 오가노이드를 이식하려면 확대된 경화술을 통해 오가노이드가 로드된 유리 모세관을 망막 절개술 부위 쪽으로 삽입하고 모세혈관 끝을 사용하여 망막 절개술을 약간 열어 망막하 안검 개구부에 접근할 수 있도록 합니다.조수가 인젝터의 플런저를 다시 천천히 눌러 오가노이드를 망막하 안검에 주입하도록 합니다. BSS는 오가노이드, 장기를 진행하고 망막 절개술을 개방해야 합니다. 모든 오가노이드가 전달되면 유리 모세관을 몇 초 동안 제자리에 두었다가 갑자기 체액이 방출되지 않도록 주의하면서 눈에서 모세관을 천천히 제거합니다.모세 혈관이 제거되면 십자 패턴으로 미리 배치 된 봉합사를 사용하여 경화술을 닫습니다. 조수가 주입 포트를 제거하고 경화 절개술 봉합사를 신속하게 묶고 간단한 연속 패턴으로 폴리글락틴 봉합사로 복막을 닫습니다. 6-0 폴리글락틴 봉합사와 8자형 피부 봉합사로 측면 안과 절개술을 봉합하여 외측 안각을 수행하고 단순 중단된 피부 봉합사를 사용하여 나머지 상처를 봉합합니다.그런 다음 적절한 수술 후 스테로이드와 항생제 칵테일을 투여하십시오. 인간 만능 줄기 세포 유래 망막 오가노이드 로딩은 주사 장치의 유리 캐뉼라 내에서 그리고 수술 중에 직접 시각화하여 확인할 수 있습니다. 망막하 공간 내 오가노이드의 존재는 수술 후 안과 검사와 안저 영상으로 확인할 수 있습니다.안락사 전에 오가노이드의 위치를 평가하기 위해 공초점 스캐닝 레이저 검안경 및 스펙트럼 영역 광간섭 단층 촬영 이미징도 수행할 수 있습니다. 이러한 기술은 수상자 눈의 신경 망막과 망막 색소 상피 사이의 망막하 공간에서 망막 오가노이드의 지속성을 입증하는 데 사용할 수 있습니다. 조직학적 및 면역조직화학적 분석은 면역억제 동물에서 큰 눈의 망막하 공간 내에서 이종 발생 그래프의 생존을 설명하는 데 사용할 수 있습니다.훈련된 수의사 안과 의사 또는 인간의 눈과 비교하여 고양이 눈의 종 차이에 익숙한 유리체 망막 외과 의사와 같이 유리체 망막 수술에 숙련된 사람만이 이 절차를 수행해야 합니다. 이 비디오에 제시된 기술은 유리체 망막 수술 기술을 클리닉으로 번역하는 데 사용되는 다른 대형 동물 모델에도 적용할 수 있어야 합니다.

subretinal-transplantation-human-embryonic-stem-cell-derived-retinal

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

세포 이식은 광수용체 손실을 특징으로 하는 망막 변성의 치료를 위한 전략을 나타낸다. 여기에서 우리는 이식 가능한 광수용체의 농축 및 성인 마우스로그들의 감하 이식을 위한 방법을 기술합니다.

성인 마우스 망막으로 MACS 정제 광수용체 전구체 세포의 감하 이식

여기에서 우리는 쥐와 생쥐에 RPE 세포 덩어리를 망막하 주입하기 위한 멀티미디어 형식의 커뮤니티 승인 프로토콜을 제시합니다. 이 접근 방식은 망막 변성의 동물 모델에 이식할 때 이식된 RPE 세포의 구조 가능성, 안전성 프로필 및 생존 능력을 결정하는 데 사용할 수 있습니다.

서스펜션에 망막 색소 상피 세포를 제공하기 위해 설치류에서 망막 주사를 수행

Subretinal 주입은 나이 관련 황 반 변성에 대 한 줄기 세포 대체 요법의 전 임상 연구에 널리 적용 되었다. 이 시각화 된 문서에서는, 우리 쥐 눈 세포를 제공 하는 트랜스 scleral 접근을 통해 덜 위험 하 고, 재현 고 정확 하 게 수정 subretinal 주입 기술을 설명 합니다.

쥐의 눈으로 인간 망막 안료 상피 세포의 트랜스 scleral Subretinal 이식에 대 한 세련 된 프로토콜의 개발

망막 색소 상피 세포 건조 연령 관련 황 반 변성의 고급 형태에 대 한 세포 보충 치료 될 수 있습니다. 이 프로토콜 지리적 위축의 눈이 큰 모델 및 질병의이 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식의 생성을 설명합니다.

지리적 위축의 눈이 큰 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식

비인간 영장류 (NHP)는 해부학적 및 유전적 유사성으로 인해 인간의 망막 세포 치료법을 연구하기위한 이상적인 모델입니다. 이 원고는 NHP 눈의 망막 색소 상피 세포의 피하 학적 이식 방법과 황반 조작과 관련된 수술 내 합병증을 방지하기위한 전략을 설명합니다.

퇴행성 망막 질병을 위한 비인간 영장류 모형에 있는 망막 안료 상피 이식

이 프로토콜은 망막 변성이 있거나 없는 마우스 수용자에서 수술 합병증 발생률이 낮은 망막하 세포 이식편을 안전하고 정확하게 전달하기 위한 동공 시야 유도 경공막 접근법을 제시합니다.

망막 변성 마우스 모델에서 망막하 이식편의 Transpupillary-Guided Trans-Scleral Transplantation

동결 보존 후 hESC 유래 광수용체 전구 세포의 제조 및 rd10 마우스에서 이러한 세포의 망막하 전달에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다.

rd10 마우스에서 인간 배아 줄기 세포 유래 광수용체 전구체의 망막하 전달

우리는 인간의 연결을 progenitors 및 신경 수리 개발 CNS에의 연결을 세포 유형의 대형 공급 파생을 가능하게 작은 분자와 함께 정의된 조건 하에서 유지 pluripotent 인간 배아 줄기 세포에서 직접 neuroblasts의 유도를위한 프로토콜을 설립했습니다.

작은 분자와 유도 Pluripotent 인간 배아 줄기 세포에서 인간의 연결을 Progenitors과 뉴런의 효율 유도

신경 튜브의 배아 신경 능선의 분리가의 사용을...

배아 Murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화

Xenopus laevis는 세포의 운명 사양 및 기본 세포 배양의 개별 망막 세포의 생리 기능을 연구하기위한 이상적인 모델 시스템을 제공합니다. 여기 망막 조직을 해부하고 칼슘 활동 이미징 및 현장 하이브리드 화에 의해 분석 기본 셀 문화를 생성하는 기법을 제시한다.

의 해부, 문화, 및 분석<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; 배아 망막 조직

배우세요 고양이 모델에서 망막하 유기체 이식술을 통해 퇴행성 망막 질환의 세포 치료법을 개발하는 방법을. 이 기술은 정확한 조직 전달과 임상 적용 가능성을 검증합니다.

고양이과 거대 동물 모델에서 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 조직의 망막하 이식

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