Name: 꿀벌의 구강 감염을위한 바이러스 풍부 접종물 준비 (Apis mellifera) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: 학습하세요 꿀벌 바이러스 입자 대량 생산 및 고속량 생물검정법을 이용한 바이러스 감염 효과 분석 방법을 Apis mellifera 유충 모델로 연구합니다. 이 기법은 바이러스-숙주 상호작용 이해에 기여합니다.

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프로토콜 생성 과정에서 그녀의 아이디어와 토론에 대한 줄리아 파인 박사와 편집 전반에 걸쳐 도움이되는 의견을 주신 Cassondra Vernier 박사에게 감사드립니다. 이 자료들은 보조금 ID 549025에 따라 식량 농업 연구 재단이 부분적으로 지원하는 프로젝트에 기여했습니다.

저자는 공개 할 것이 없습니다.

여기에서는 유충 수집 및 바이러스 전파, 추출 및 농축뿐만 아니라 케이지 먹이 실험의 형태로 바이러스 처리를 포함하여 바이러스 증폭 및 접종 재고 준비 과정의 모든 단계를 자세히 설명하는 방법을 설명했습니다. 이러한 방법은 반순수 바이러스 입자의 생산을 허용하며(그림 4), 그 효과는 성인에게 치명적인 바이러스에 대한 용량-반응 사망률 테스트에 의해 일관되게 정량화될 수 있다(도 5). 감염 능력 및/또는 병리학의 확인 후, 생성된 입자는 꿀벌과 꿀벌 바이러스 사이의 상호작용을 밝히기 위해 생물 검정에 사용될 수 있다.
기술된 프로토콜의 가장 독특한 이점 중 하나는 번데기 수확, 입자 생성 또는 생물학적 검정 수행 여부에 관계없이 각각이 대량으로 쉽게 스케일링된다는 것입니다. 번데기 절제 방법33을 사용하면 시간당 ~ 100 마리의...

꿀벌 (Apis mellifera)은 현대 세계 농업 환경에서 중요한 역할을하지만 현재 살충제 노출, 가난한 사료, 기생충 및 병원균 1,2를 포함한 생물 학적 스트레스 요인과 비생물 적 스트레스 요인의 조합으로 고통 받고 있습니다. 우려되는 가장 중요한 병원균 중 하나는 바이러스이며, 그 중 많은 바이러스는 또 다른 주요 꿀벌 스트레스 요인 인 기생 Varroa 진드기 (Varroa 소멸자)에 의해 벡터화됩니다. 이 바이러스는 꿀벌에 일련의 부정적인 영향을 미칠 수 있습니다 감소 된 새끼 생존, 발달 결함 및 마비를 포함하여 과동기 3,4,5 전후에 총 벌집 붕괴로 이어질 수 있습니다. 바이러스 감염 6,7,8,9 퇴치에 사용되는 기술 개발에는 유망한 발전이 있었지만, 꿀벌이나 식민지 내에서 많은 바이러스가 전파, 확산 및 상호 작용하는 역학은 여전히 잘 이해되지 않습니다 5,10 . 꿀벌과 바이러스 상호 작용의 기본 생물학과 다른 환경 요인과의 관계를 이해하는 것은 효과적인 바이러스 관리 기술을 개발하는 데 중요합니다.
그러나 꿀벌 - 바이러스 상호 작용을 연구하는 것은 과정을 복잡하게 만드는 수많은 알려진 요인과 알려지지 않은 요인으로 인해 어려움을 겪습니다. 여기에는 식이요법 11,12, 살충제 노출(13), 꿀벌 유전적 배경(14,15)과의 상호작용이 포함된다. 바이러스 감염에만 초점을 맞출 때조차도, 꿀벌 개체군은 관리되고 야생이기 때문에 합병증이 흔합니다.하지만 종종 급성 증상을 나타내지 않고 바이러스 16,17 및바이러스 공동 감염의 효과는 잘 이해되지 않습니다 18. 이로 인해 꿀벌 바이러스 효과에 대한 연구가 풀리기 어려워졌습니다.
많은 꿀벌 바이러스 연구는 상황 바이러스 감염을 사용하여 다른 스트레스 요인과의 상호 작용을 찾아 배경 감염이 다른 치료법12,19,20,21과 어떻게 변하는지 관찰했습니다. 이 접근법은 중요한 효과, 특히 살충제 또는식이 요법이 바이러스 수준과 복제에 어떻게 영향을 미치는지 발견하는 데 성공했지만 알려진 함량과 농도의 바이러스 처리 접종은 바이러스 감염 역학의 실험적 테스트에 중요합니다. 그럼에도 불구하고 실험적 치료를 배경 감염과 분리하는 것도 어려움을 초래할 수 있습니다. 현장 연구에서 연구자들은 꿀벌에서 꿀벌22로 바이러스가 전염되는 증거를 제공하기 위해 변형 된 날개 바이러스 (DWV)의 균주를 차별화했지만이 접근법을 사용하는 것은 꿀벌만으로는 어려울 것입니다. 바이러스 감염성 클론은 감염 23,24,25을 추적하는 것뿐만 아니라 꿀벌 바이러스의 역 유전학 연구 및 바이러스 - 숙주 상호 작용 연구 26,27,28을위한 강력한 도구입니다. 그러나 대부분의 경우, 감염성 클론은 입자를 생산하기 위해 세포 내부의 감염주기를 충족시켜야합니다. 이러한 입자는 그들의 감염성이 네이키드 바이러스 RNA보다 높고 캡슐화된 게놈을 사용한 접종이 자연 감염을 모방하기 때문에 실험적 치료를 위한 접종물로서 바람직하다.
오염되지 않은 순수 꿀벌 바이러스 접종물 (야생형 바이러스 균주 또는 감염성 클론에서 유래 한 균주)의 생산은 또한 도전을 제기합니다. 이들은 주로 순수 균주 바이러스29,30을 생산하기 위해 신뢰할 수 있고, 지속적으로 복제되는, 바이러스가 없는 꿀벌 세포주를 수득하는데 어려움 때문이다. 일부 세포주가 생산되었지만, 이러한 시스템은 불완전한 상태로 남아 있습니다. 그럼에도 불구하고 생존 가능한 세포주가29 개 생산되어 바이러스 생산 및 조사를보다 세밀하게 제어 할 수 있기를 희망합니다. 이러한 라인이 널리 이용가능해질 때까지, 대부분의 바이러스 생산 프로토콜은 생체내 바이러스 생산 및 정제(18,31,32,33,34)의 사용에 계속 의존할 것이다. 이러한 접근법에는 관심있는 바이러스 입자를 확인하고 정화 (또는 전염성 클론을 생산)하고이를 사용하여 꿀벌, 보통 번데기와 같은 꿀벌을 감염시키는 것이 포함됩니다. 번데기는 표적 바이러스와 함께 주입 된 다음 희생되고 더 많은 입자가 추출되고 정제됩니다. 그러나 처음에는 바이러스가없는 꿀벌이 없기 때문에 그러한 농축액에서 다른 바이러스의 흔적으로 인해 어느 정도 오염이 항상 발생하므로 배경 감염 가능성이 낮은 꿀벌을 선택할 때 세심한주의를 기울여야합니다. 또한, 이들 프로토콜(33)에 사용하기 위해 빗 세포로부터 번데기를 제거하는 방법은 매우 노동 집약적이며 꿀벌에서 스트레스를 유도할 수 있으며, 이러한 수단(18,32)에 의해 생산을 제한한다. 여기에서, 우리는 꿀벌에 대한 노동이 거의없고 기계적 스트레스가 적고 애벌레를 대규모로 제거 할 수있는 대체 방법을보고합니다.
번데기를 얻고 시작 바이러스 접종물과 함께 주입하면 바이러스가 복제 할 시간을 제공하기 위해 배양되어야합니다. 이어서, 생산된 바이러스 입자는 실험용 꿀벌을 감염시키는 데 사용할 수 있는 형태로 가공될 수 있다. 이를 달성하기 위한 몇 가지 간단한 방법들이 있는데, 여기에는 바이러스적으로 감염된 꿀벌로부터 생성된 조질 균질액(35,36) 또는 용혈림프(37)를 감염원으로서 사용하는 것을 포함한다. 이러한 방법은 효과적이지만 배경 기질로부터 알려지지 않은 변수 (예 : 죽은 벌 균질물의 다른 요인)를 도입 할 가능성이 더 큽니다. 또한, 실험이 단기간에 바이러스의 크고 알려진 복용량을 제공해야하는 경우 입자를 집중시키는 것이 바람직합니다. 따라서, 보다 나은 제어를 위해, 바이러스 입자의 어느 정도의 정제 및 농축을 허용하는 방법을 사용하는 것이 바람직하다. 일반적으로, 일련의 침전 및 원심분리 단계는 거의 모든 가능한 비표적 바이러스 물질(33)의 제거를 초래할 것이다.
이 농축 접종물을 생산 한 후, 바이러스 역가 (qPCR)를 정량화하고 생체 내 생물 분석법으로 특성화하여 생존력과 사망률을 유발하는 능력을 테스트 할뿐만 아니라 감염 후 증가 된 바이러스 역가가 얻어진다는 것을 확증하는 것이 유익합니다. 이것은 주사 실험 (번데기 또는 성인으로) 또는 먹이 실험 (애벌레 또는 성인에게)을 통해 달성 될 수 있습니다. 이러한 모든 접근법이 가능하지만 새장에있는 성인 꿀벌 그룹에 먹이를주는 것이 종종 가장 빠르고 간단합니다. 케이지 분석 방법은 또한 살충제 독성38, 난소 발달39 및 행동40,41에 대한 영양 영향을 포함하여 꿀벌에 대한 다양한 다른 치료법을 테스트하는 데 널리 사용되므로 바이러스 감염과 다른 요인(42)을 연결하는 실험을위한 좋은 기초를 형성 할 수 있습니다.
여기서는 꿀벌에 대한 노동 및 기계적 스트레스를 줄이는 번데기를 제거하는 방법과 바이러스 감염 및 효과를 테스트하기위한 반복성이 높고 처리량이 높은 생물 분석을 포함하여 값 비싼 초원심분리기를 사용하지 않고 대량의 반 순수하고 고농축 바이러스 입자를 생산하는 신뢰할 수있는 방법을 설명합니다. 바이러스 접종의 순도를 엄격하게 조절함으로써 조사관은 다른 바이러스 접종 방법에 비해 꿀벌 바이러스 반응의 변화를 줄일 수 있습니다. 또한, 생물 분석은 현장 현실적인 설정으로 확장하기 전에 매우 반복 가능한 실험 단위를 사용하여 소그룹 수준에서 바이러스 효과를 스크리닝 할 수 있으며, 이는 관리하기에 훨씬 더 노동 집약적입니다. 이 두 가지 방법이 결합되어 꿀벌 - 바이러스 생리 학적 상호 작용에 대한 전반적인 이해를 향상시키는 데 도움이되는 연구에 필요한 도구를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>10% 표백제 용액</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>24:1 클로로포름:이소아밀 알코올</td><td>SigmaAldrich</td><td>C0549</td><td></td></tr><tr><td>70% 에탄올 용액</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>생물학적 분석</td><td></td><td></td>용 케이지 <td>실험 설정에 따라</td></tr><tr><td>다름 Combitips Advanced 0.1 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30089405</td><td>옵션(주입기 appartus를 사용할 수 없는 경우)</td></tr><tr><td>유충 자체 제거</td><td></td><td></td>를 위한 용기는 <td>대략 19" x 9-1/8"(Langstroth 딥 프레임 치수)를 측정해야 합니다.</td></tr><tr><td>집게</td><td></td><td></td><td>유충 분리를 위한 뭉툭하고 부드러운 집게;번데기 절제를 위한 뭉툭하고 단단한 집게</td></tr><tr><td>흄 후드</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td></td><td></td><td>34 &ordm을 유지할 수 있음; C 및 50% 상대 습도</td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666</td><td>모든 흡수성 물티슈가 작동합니다</td></tr><tr><td>중형 보트</td><td></td><td></td><td>접종 트레이로 사용</td></tr><tr><td>Biomax 멤브레인이 있는 Microcon-100kDa</td><td>MilliporeSigma</td><td>MPE100025</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>니트릴 장갑</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5119</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌 글리콜 8000 (PEG)</td><td>SigmaAldrich</td><td>1546605</td><td></td></tr><tr><td>냉장 탁상형 원심분리기</td><td></td><td></td><td>15,000 x g</td></tr><tr><td>냉장 원심분리기</td><td></td><td></td><td>21,000 x g</td></tr><tr><td>리피터 M4 멀티피펫</td><td>Eppendorf</td><td>4982000322</td><td>옵션(주입기가 없는 경우) 사용 가능)</td></tr><tr><td>RNAse Away</td><td>, ThermoFisher</td><td>7000TS1</td><td></td></tr>, <tr><td>RNAse-free water</td><td>SigmaAldrich</td><td>W4502</td><td></td></tr>, <tr><td>Sucrose</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TES</td><td>, SigmaAldrich</td><td>T1375</td><td></td></tr></tbody></table>

꿀벌의 구강 감염을위한 바이러스 풍부 접종물 준비 (apis mellifera)

Preparation of Virus-Enriched Inoculum for Oral Infection of Honey Bees (Apis mellifera)

꿀벌은 전 세계적으로 생태 학적 및 농업적으로 매우 중요하지만 바이러스 성 병원균에 노출되는 것을 포함하여 꿀벌 건강에 부정적인 영향을 미치는 다양한 압력을받습니다. 이러한 바이러스는 매우 다양한 파괴적인 효과를 일으킬 수 있으며 실험 치료의 효과를 기존의 배경 감염과 분리하는 것을 어렵게 만드는 여러 요인으로 인해 연구하기가 어려울 수 있습니다. 여기서 우리는 바이러스 감염 및 효과를 테스트하기 위해 높은 처리량의 생물 분석과 함께 다량의 바이러스 입자를 대량 생산하는 방법을 제시합니다. 현재 바이러스가없는 지속적인 꿀벌 세포주의 부족으로 인해 바이러스 입자는 최소한의 스트레스 방법론을 사용하여 벌집에서 대량으로 추출되는 꿀벌 번데기를 사용하여 생체 내에서 증폭됩니다. 이 바이러스 입자는 꿀벌 케이지 생물 검정에 사용되어 접종 생존력뿐만 아니라 영양, 살충제 및 기타 병원체와의 상호 작용을 포함한 다양한 다른 바이러스 감염 역학을 테스트 할 수 있습니다. 이러한 입자를 사용하는 가장 큰 장점은 감염된 꿀벌 용혈림프 또는 균질화에 의한 감염과 같은 현재의 대안과 비교할 때 후속 실험에서 알려지지 않은 변수를 도입 할 가능성을 크게 줄여 주지만 꿀벌을 소싱 할 때는주의를 기울여야하지만 배경 바이러스 오염을 최소화해야한다는 것입니다. 케이지 분석은 콜로니 수준에서 바이러스 감염 효과를 테스트하는 대규모 현장 현실적인 실험을 대체하는 것이 아니라 반순수 바이러스 입자와 결합하여 꿀벌과 바이러스 생리 적 상호 작용의 다양한 차원을 검사하는 중요한 도구 역할을 할 수있는 기준선 바이러스 반응을 확립하는 방법으로 기능합니다.

번데기 주사 및 바이러스 추출을위한 프로토콜 (그림 1)을 성공적으로 따르면 다량의 바이러스 입자가 생성되어야합니다. 그러나 여러 시점에서 다양한 콜로니에서 공급되는 번데기를 샘플링하고 주입하면 오염이 적은 표적 바이러스를 획득 할 가능성이 극대화됩니다. 꿀벌 내에서 바이러스가 복제되고 서로 상호 작용하는 역학은 잘 이해되지 않았습니다. 기존 감염의 가능성과 함께, 번데기가 동일한 원래 식민지에서 샘플링 된 경우에도 주사 된 (원하는) 바이러스가 주어진 번데기에서 우세해질 것이라는 보장은 없습니다. 그림 4는 추출 후 볼 수 있는 바이러스 비율의 잠재적 범위를 보여줍니다. 표시된 네 개의 콜로니는 모든 번데기가 처음에 ~ 95 %의 이스라엘 급성 마비 바이러스 (IAPV) 접종을 주입 한 더 큰 바이러스 수확 노력의 하위 집합을 나타냅니다. 이러한 추출에 관여하는 16개의 콜로니 샘플 중 10개는 일부 &gt; 99%(예를 들어, 콜로니 1)를 ...

여기서 우리는 두 가지 프로토콜을 설명합니다 : 먼저 꿀벌 번데기를 제거하는 방법을 포함하여 다량의 꿀벌 비 외피 바이러스 입자를 전파, 추출, 정제 및 정량화하는 것과 두 번째로 반복성이 높고 처리량이 높은 케이지 생물 검정을 사용하여 바이러스 감염의 효과를 테스트하는 것입니다.

꿀벌의 구강 감염을위한 바이러스 풍부 접종물 준비 (Apis mellifera)

Honey bees are of great ecological and agricultural importance around the world but are also subject to a variety of pressures that negatively affect bee ...

당사의 프로토콜은 바이러스 치료 효과의 신속한 스크리닝을 위해 통제된 고처리량 생물 검정에 사용하기 위해 꿀벌 바이러스 입자를 대량으로 생산하는 방법을 보여줍니다. 이 분석은 세포 배양보다 배양하기 쉬운 꿀벌 번데기를 사용하여 실험 대상을 얻는 데 드는 노동력을 줄여줍니다. 그런 다음 바이러스를 사용하여 예측 가능한 사망률 곡선과 반복 가능한 생물학적 분석을 생성할 수 있습니다.소위 꿀벌 바이러스가 더 넓은 숙주 범위에 어떤 영향을 미치는지 이해하는 데 상당한 관심이 있었습니다. 이 바이러스 생산 기술은 다른 수분 매개체 시스템과 함께 사용하여 감염성을 테스트할 수 있습니다. 유충 자가 제거에 의한 대량 꿀벌 추출의 경우, 꿀벌 여왕을 비어 있고 당겨진 Langstroth 프레임에 가두어 그녀의 식민지로 되돌립니다.여왕벌이 틀에 24시간 동안 알을 낳도록 한 후, 대부분의 빗 세포에 새로 낳은 알이 들어 있는지 확인하고 여왕벌을 방출합니다. 여왕벌을 우리에 가둔 지 정확히 192시간 후에 군체에서 틀을 제거하고 다 자란 꿀벌을 털어냅니다. 실험실로 돌아온 후 벌통의 내부 조건으로 설정된 인큐베이터에 프레임을 놓고 유충으로 채워진 프레임과 동일한 높이와 너비의 용기를 순차적 비누와 물, 표백제 및 에탄올 세척제로 철저히 청소합니다.용기 바닥에 여러 겹의 종이 타월을 깔고 더 얇은 흡수성 물질을 겹쳐서 여러 겹쳐 추가합니다. 용기가 준비되면 프레임을 용기의 초점 유충 면이 아래로 향하게 놓고 텐트가 있는 알루미늄 호일 조각을 사용하여 용기와 프레임을 덮습니다. 하룻밤 배양 후 각 용기의 최상층에서 개별 물티슈를 조심스럽게 들어 올려 유충이 전사 트레이에 부드럽게 부어질 수 있도록 합니다.그런 다음 뭉툭하고 부드러운 집게를 사용하여 유충을 건드리지 않고 트레이 표면에 퍼뜨리고 유충이 번데기가 되어 눈이 넓은 단계로 성숙할 때까지 텐트 호일로 덮인 트레이를 인큐베이터에 놓습니다. 번데기 바이러스를 주입하려면 15ml 튜브에 멸균 PBS에 적절한 농도의 관심 바이러스 입자를 혼합하고 수동 멀티피펫에 주입 장치를 부착합니다. 인젝터 효능을 테스트하려면 인젝터에 100마이크로리터의 물을 넣고 1마이크로리터 용량으로 물을 분배합니다.주사가 정확하면 100마이크로리터의 바이러스 입자 용액을 주사기에 넣고 흉부를 따라 번데기 한 마리를 부드럽게 잡고 내부 액체가 복부로 밀어 넣어 터자이트 분열이 더 뚜렷하게 나타나도록 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

우리는 마약 조직의 응용 프로그램에서 꿀벌의 후각 appetitive 에어컨 패러다임 (아피스 mellifera)의 행동 약리학 방법을 구현하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 메커니즘 기본 학습과 간단하고 안정적​​인 방식으로 메모리 형성의 조사를 허용합니다.

꿀벌의 코 확장 응답 클래식 컨디셔닝에 Behavioural 약리학 ( 아피스 mellifera)

우리는 감염된 세포로부터 고순도 herpesvirus nucleocapsid DNA를 분리하는 과정을 설명합니다. 솔루션에서 촬영한 마지막 DNA는 이상적으로 높은 처리량 시퀀싱, 높은 충실도 PCR 반응, 새로운 바이러스 recombinants 생산 transfections에 적합하고, 높은 집중력과 순결입니다.

Nucleocapsids에서 바이러스성 DNA의 준비

이 프로토콜에서는, 우리는 동시에 꿀벌 두 개의 유전자 (더블 유전자 최저를) 억제 두 가지 전략에 대해 설명합니다. 그럼 우리는 꿀벌 미각 지각을 두 번 유전자 최저의 효과를 연구하는 코 확장 응답 (PER) 분석을 사용하는 방법을 제시한다.

꿀벌의 RNAi를 매개로 두 유전자 넉다운과 미각 지각 측정 (<em&gt; 아피스 mellifera</em&gt;)

여기에서 우리는 시험 관내에서 Homalodisca vitripennis 세포와 HoCV-1을 전파하는 프로토콜을 제시한다. 중간 HoCV - 한 긍정적 인 문화에서 제거하고 RNA는 168 시간 동안 매 24 시간을 추출 하였다. 세포 생존은 트리 판 블루 염색에 의해 정량 하였다. 전체 바이러스 입자는 감염 후를 추출 하였다. 추출 된 RNA는 QRT-PCR에 의해 정량 하였다.

의 전파<em&gt; Homalodisca의 coagulata 바이러스-01</em&gt;를 통해<em&gt; Homalodisca vitripennis</em&gt; 세포 배양

여기에서 우리는 단일 코호트 꿀벌 식민지의 제조를위한 우리의 상세한 프로토콜을 설명 - 롤 관련 근로자의 생리를 분석하기위한 유용한 도구입니다. 우리는 또한 작업자의 행동 및 / 또는 생리 조절에 이러한 호르몬의 참여를 평가하기 위해 청소년 호르몬과 에크 디손과 근로자를 치료하기위한 상세한 프로토콜을 설명합니다.

단일 코호트 식민지와 노동자 꿀벌의 호르몬 치료의 준비 역할 및 / 또는 내분비 시스템과 생리학 관련 분석하기

범블 비 하이브 내 미생물 컨소시엄 풍부 하 고 꽃가루 꿀벌 애벌레에 대 한 유지. 살 균 제 잔류물 꽃가루 미생물, 및 궁극적으로 식민지로 이어지는 식민지 인구 통계를 변경 하는 가설을 테스트 하는 데 사용 하는 프로토콜을 설명 합니다이 원고 실험실 및 필드 기반 실험 다음 세대 시퀀싱을 사용 하 여 손실입니다.

실험, Metagenomic, 및 계산 기법 밝히는 어떤 균 타협 꿀벌 건강 메커니즘

이 원고는 자유 비행 꿀벌에 대한 간단한 비 침습적 방법뿐만 아니라 억제 꿀벌의 정확한 지역화 된 처리 수 있도록 더 많은 침략 변종을 포함, 꿀벌에 약리 에이전트를 관리하기위한 여러 프로토콜을 설명합니다.

절제된 자유 비행 꿀 꿀벌의 Neuropharmacological 조작,<em&gt; API를 mellifera이</em

여기에서 우리는 제시   방법은 개별 꿀벌과 벌집 콜로니 모두 농약 오염 된 식품을 공급한다. 절차는 기본 유생 다이어트 생체 공급함으로써, 또한 벌집 콜로니의 자연 상태에서 개별 꿀벌의 살충제 효과를 평가한다.

식민지 수준에 개인에서 꿀 꿀벌 개발에 대한 환경 화학 물질의 효과를 평가

농약의 sublethal 복용량만 주기적 또는 시각적 방법을 사용 하 여 검출 하기 어려운 방법으로 식민지 영향을 미칠 수 있습니다. 총 성인 꿀벌 질량을 측정 하는 방법 가만히, 그리고 식량 자원 하이브와 하이브 부품 무게, 프레임, 촬영 및 센서를 설치 하 여 제공 됩니다. 데이터 분석은 또한 해결 되었습니다.

꿀 꿀벌에 Sublethal 농약 노출의 식민지 수준 효과 모니터링

이 프로토콜은 농약이 꿀벌(아피스 멜라이프라)재생에 미치는 이해를 향상시키기 위해 개발되었으며, 꿀벌 여왕과 그 노동자 관리인을 통제 된 실험실 환경에서 농약에 노출시키는 방법을 확립하고 관련 반응을 주의 깊게 모니터링합니다.

꿀벌 여왕을 짝짓기하는 농약적 위험 평가

경구 수유 및 흉강내 주사 감염을 포함하는 이 방법론은 아르보 바이러스 감염에 대한 중장 및/또는 침샘 장벽의 영향을 효과적으로 평가할 수 있습니다.

경구 수유 및 미세 주입에 의한 성인 모기의 실험적 바이러스 감염

학습하세요 꿀벌 바이러스 입자 대량 생산 및 고속량 생물검정법을 이용한 바이러스 감염 효과 분석 방법을 Apis mellifera 유충 모델로 연구합니다. 이 기법은 바이러스-숙주 상호작용 이해에 기여합니다.

꿀벌의 구강 감염을위한 바이러스 풍부 접종물 준비 (Apis mellifera)

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