Name: 췌장암의 정형소 절제술 마우스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-24T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: 학습하세요 췌장암 정형소 절제술 마우스 모델을 통해 보조 및 신보조 요법을 테스트하는 방법을. 이 기법은 정위 이식 모델과 안전한 췌장 절제술을 결합하여 인간 췌장암을 효과적으로 재현합니다.

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저자는 아브너 췌장암 재단의 지원을 받았습니다.

모든 절차는 뉴 사우스 웨일즈 대학의 동물 관리 및 윤리위원회 (17/109A)에 의해 승인되었습니다. 16-19g의 8-10주 나이 든 암컷 아티믹 Balb/c 누드 마우스가 이 프로토콜에 사용되었습니다. 마우스는 마이크로 이솔레이터 케이지에 보관되었고 시판되는 펠릿 식품및 물 광고 리비툼을공급하였다.
1. 정형외 췌장암 이식
<ol><li>이식을 위해 세포를 준비합니다. 먼저, 절차에 필요한 세포 수를 계산합니다(1 x 106 luciferase 태그된 AsPC-1 세포 및 1 x 106 암 관련 인간 췌장 스텔레이트 세포 [CAhPSC]는 각 동물에 대해 필요합니다).<ol>
<li>가습 된 온도 제어 CO2 인큐베이터에서 이러한 세포를 유지하고 일상적인 마이코 플라즈마 테스트를 수행합니다. AsPC-1 및 CAhPSC에 사용되는 배양 배지는 RPMI 1640(300 mg/L-글루타민, 20% v/v 태아 소 혈청, 1% v/v 페니실린/스트렙토마이신) 및 IMDM(4m L-글루타민, 10% v/v 태아 소 혈청, 1% v/v/v 페니실린/연쇄절제술).</li>
		<li>표준 세포 배양 기술을 사용하여 세포를 세포 현탁액으로 시험시화합니다. 트립신 용액의 두 배에서 각각의 완전한 배양 배지를 사용하여 트립신을 중화시다.</li>
		<li>인산염 완충식식염(PBS)으로 이 세포를 두 번 세척하고 50 μL 세포 현탁액에서 1 x 106 AsPC-1 셀과 1 x 106 CAhPSC를 포함하는 혼합물로 다시 중단한다.</li>
		<li>이 서스펜션을 사용할 때까지 얼음 위에 보관하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>절차에 대한 클래스 II 생물 안전 캐비닛을 준비합니다. 멸균 플라스틱 커튼에 겹쳐진 가열 매트를 사용하십시오. 시술 중 배율의 경우 2.5x에서 3.5배 배율 수술용 루페 쌍을 사용하십시오.</li>
	<li>직경 1cm의 구멍을 거즈 면봉으로 자르면 지갑 끈 면봉을 준비합니다. 지갑 끈 봉합사로 이 구멍을 고정하십시오. 모든 미세 편조 봉합사는 이것에 사용할 수 있습니다 (예를 들어, 5/0 폴리 글리콜산 봉합사). 조임 후 느슨한 매듭이 제자리에 머무를 수 있으므로 편조 봉합사 소재를 추천합니다. 이것은 도 1a에설명되어 있습니다.</li>
	<li>쥐를 80 mg/kg의 케타민과 10 mg/kg의 자일라진 주사로 마취시킵니다.</li>
	<li>투여 5 mg/kg enrofloxacin 항생제 예방, 2.5 mg/kg 플루닉스진 진통 및 1 mL의 0.9% 식염수 피하.</li>
	<li>일단 마취되면, 마우스를 멸균 장에 놓고 포비도네 요오드를 적용한 다음 피부 준비를 위해 70% 에탄올을 적용합니다.</li>
	<li>복부의 왼쪽 두개골 사분면의 피부에 세로 절개를 한 다음 집게 사이의 근육 층을 절개하여 복부를 입력합니다.</li>
	<li>29 G 인슐린 주사기를 50 μL의 세포 서스펜션으로 로드합니다-이것은 인젝트당 1 x 106 CAhPSC 및 1 x 106 루시파라제 태그된 AsPC-1 세포와 동일합니다. 사출 장치에 장착합니다. 이 주입 장치의 설계 및 기능은 그림 1b와 그 전설에 자세히 설명되어 있습니다.</li>
	<li>지갑 끈면봉을 복강경 절개 위에 놓고 비장과 췌장 꼬리를 이 면봉의 개통을 통해 외부화합니다. 지갑 끈을 조여 췌장의 본체를 부드럽게 둘러싸고 췌장 꼬리를 주입합니다. 거즈가 췌장에 대접하는 동시에 수축하지 않을 정도로 단단하게 하는 것이 중요합니다.</li>
	<li>한 쌍의 집게를 사용하여 췌장의 꼬리를 잡고 측면 의 장력을 부드럽게 배치합니다. 얕은 각도에서 바늘로 복부 간음 표면에 구멍을 뚫은 다음 주사 장치와 함께 느리고 제어 된 방식으로 췌장에 세포 현탁액을 주입합니다.</li>
	<li>주입 과정에서, 신중하게 누출에 대 한 관찰-주사 사이트 주위 (역류에서) 췌 장 소의 반대편에 (관통 및 관통의 경우). 눈에 보이는 누출이 발생하면 주사를 멈추고 주사기에 남은 주사의 양을 확인하여 누설의 양을 기록하십시오. 누설이 소량(<10 μL)인 경우 거즈로 누설을 흡수한 다음 바늘을 다른 췌장 로뷸러로 재배치하여 주사를 완료합니다.</li>
	<li>비장과 췌장을 교체하고 복부벽을 5/0 폴리글리콜산 봉합사로 연속하여 닫습니다. 클립으로 피부를 닫습니다.</li>
	<li>마취에서 회복 될 때까지 따뜻하게 된 케이지에서 마우스를 모니터링합니다. 일단 깨어 있고 경고하면 마우스를 다시 케이지로 옮습니다.</li>
</ol>2. 암 절제술 수술 : 실산 췌장 절제술 및 비장 절제술
<ol><li>이식과 관련하여 절제의 타이밍은 실험 프로토콜에 따라 달라질 수 있습니다. 일반적으로, 종양이 절제 전에 적어도 3 주 동안 성장하도록 허용하지만, 특정 이식 된 암 세포주에 대해 경험적으로 최적화.</li>
	<li>절제 수술 전날, 동물에 대한 생물 발광 이미징을 수행하여 국소화된 1차 종양의 존재를 확인합니다. 이 화상 진찰 연구 결과는 단순히 절제에서 명백한 엑스트라 췌장 질병을 가진 마우스를 제외하기 위하여 이용됩니다. 크기나 복사플럭스를 절제 자격을 결정하기 위한 임계값으로 사용해서는 안 됩니다.<ol>
<li>쥐의 무게와 D-루시페린 내과 함께 주입 (150 mg/kg).</li>
		<li>루시페린 운동 곡선의 성능에 의해 각 실험에 대한 루시페린 주입과 관련하여 이미징 단계의 타이밍을 결정한다. 복사 플럭스가 최대의 90% 이상이되는 기간은 생체 발광 이미징에 대한 최적의 시간을 나타냅니다(이 실험에서 18~26분 후 주입).</li>
		<li>마취를 유도하고 이소플루란(각각 4% 및 3%의 산소)을 사용하여 유지하며 생물발광성 이미징 장치(예를 들어, IVIS Lumina II)를 사용하여 이미징을 수행합니다. 자동 노출 및 비닝 설정을 사용합니다(그러나 예상되는 복사 플럭스에 최적화될 수 있음).</li>
	</ol>
</li>
	<li>절차에 대한 클래스 II 생물 안전 캐비닛을 준비합니다. 멸균 플라스틱 커튼에 겹쳐진 가열 매트를 사용하십시오. 해부 중 배율의 경우 2.5x에서 3.5배 배율 수술용 루페 쌍을 사용하십시오.</li>
	<li>쥐를 80 mg/kg의 케타민과 10 mg/kg의 자일라진 주사로 마취시킵니다.</li>
	<li>투여 5 mg/kg enrofloxacin 항생제 예방, 2.5 mg/kg 플루닉스진 진통 및 1 mL의 0.9% 식염수 피하.</li>
	<li>마우스를 멸균 장에 놓아 수핀 위치에 놓고 포비도요오드를 바르고 피부 준비를 위해 70% 에탄올을 적용합니다.</li>
	<li>복부의 왼쪽 두개골 사분면의 피부에 세로 절개를, 바람직하게는 이전 절개 부위를 통해.</li>
	<li>근본적인 근육 복벽에서 피부를 무뚝뚝하게 해부한 다음 Alm 자가 유지 리트랙터를 배치하여 피부 상처를 열어 놓습니다.</li>
	<li>이전 작업의 봉합선의 한쪽에 집게 사이의 근육 층을 절인 다음 절개를 확장하여 이전 봉합사 라인 전체를 축출한다.</li>
	<li>비장과 말단 췌장을 외부화하고 craniis로 철회하십시오. 췌장의 소달 양상에서, 결장은 필름 접착에 의해 부착된 것을 발견할 수 있다. 이 발견 되면 결장의 결장해제를 무뚝뚝하게 해부합니다.</li>
	<li>조심스럽게 한 쌍의 집게 를 췌장과 비장 용기의 몸에 전달하고이 공간을 엽니다. 이렇게 하면 후속 결찰을 위해 췌장 세그먼트가 확보됩니다.</li>
	<li>췌장의 본체를 티타늄 결찰 클립으로 종양으로 옮기고, 배설물을 소터리와 함께 이것으로 변환합니다. 췌장 그루터기를 제어하는 또 다른 방법은 트랜섹션 전에 5/0 폴리글리콜산 봉합사로 연속성을 유지하는 것입니다.</li>
	<li>췌장을 소생시키고 비장의 두개골 장대와 위 사이의 위장 혈관을 소생시킵니다.</li>
	<li>시편을 제거하고 해모를 확인합니다.</li>
	<li>5/0 폴리글리콜산 봉합사로 복벽을 연속하여 닫습니다. 클립으로 피부를 닫습니다.</li>
</ol>3. 수술 후 관리
<ol><li>즉각적인 포스트 마취 기간 (위의 절차 모두에 대해) 마취에서 회복 될 때까지 따뜻하게 된 케이지에서 마우스를 모니터링하십시오. 일단 깨어 있고 경고하면 마우스를 다시 케이지로 옮습니다. 수술 후 기간에 동물에게 통증과 고통의 징후를 모니터링하십시오. 피하 주사에 의해 0.05 mg/kg buprenorphine를 관리하고 밀접하게 12 시간 동안 동물을 관찰.</li>
	<li>그 후, 체중, 음식 섭취 및 활동에 대 한 매일 쥐를 모니터링. 절개 부위를 검사하고 종양 크기에 대한 각지. 수술 후 일곱 번째 날에 피부 클립을 제거합니다.</li>
	<li>인도적 엔드포인트에 도달하면 마우스를 안락사시합니다. 이러한 인도적 종점은 다음과 같습니다 : 체중 >20%, 치료 할 수없는 고민의 특징 (구부러진 자세, 운동 또는 그루밍의 부족 포함) 및 외부 심백에 의해 추정된 1cm3 보다 큰 종양 크기.</li>
</ol>

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<li>Egberts, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superiority+of+extended+neoadjuvant+chemotherapy+with+gemcitabine+in+pancreatic+cancer%3A+a+comparative+analysis+in+a+clinically+adapted+orthotopic+xenotransplantation+model+in+SCID+beige+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biology+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Superiority of extended neoadjuvant chemotherapy with gemcitabine in pancreatic cancer: a comparative analysis in a clinically adapted orthotopic xenotransplantation model in SCID beige mice.</a> Cancer Biology & Therapy. 6 (8), 1227-1232 (2007).</li>
</ol>

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췌장암의 절제 성 교정 마우스 모델은 보조 및 신아주반트 치료의 검사를 허용하기 때문에 중요합니다. 이것은 수술이 가장 효과적인 처리남아 그러나 재발의 고위험과 연관되는 췌장암에서 특히 중요합니다. 이 논문은 신중하게 절제술로 치료 할 수있는 췌장암을 안정적으로 생성하는 방법을 설명하며, neoadjuvant / 보조 치료가 필요한 임상 시나리오를 복제합니다.
기존 방법에 대한 중요성 췌장암에서 보조및 신학 치료의 중요성에도 불구하고, 문학에 있는 몇몇 잘 기술된 치열 교정 절제술 마우스 모형이 있습니다. 이 설명된 절제 모형은 인간에 있는 임상 상황의 복제의 그들의 충실도에서 변화했습니다. 이러한 이전 모델은 광범위하게 분류 될 수있다: (i) 종양 절제만, 형광 지침; (ii) 비장 절제술없이 하위 총 췌장 절제술; (iii) 실태적인 범분 절제술/비장 절제술.
형광 유도를 가진 종양 절제는...

췌장 덕트 아데노암 (췌장암 [PC])은 가난한 예후1과관련이 있다. 외과 절제술은 PC를 위한 유일한 잠재적으로 치료 처리 남아 있고 초기 단계 질병으로 제출하는 환자를 위해 고려되어야 합니다. 불행히도, R0 절제(즉, 종양이 없는 절제 마진)에서도 재발률(국소 또는 검출되지 않은 전이성 질환)은2,3이다. 따라서, 전신 보조요법은 절제술4를겪는 거의 모든 환자에서 표시된다. 더욱이, 네오아드주반트 요법은 이제 경계선 절제암에대해서만 권장되지만, 그 증상은 많은 임상 연구의 초점이될 정도로 확장되고 있다5,6,7,8. 절제술을 포함하는 PC를 위한 새로운 치료 접근을 개발하기 위하여는, 이 접근은 정확하게 임상 설정을 회수하는 전 임상 모형에서 첫째로 평가될 필요가 있습니다.
PC의 직교 마우스 모델은 과거에 약물 치료9,10을테스트하는 데 자주 사용되어 왔다. 이들 중 많은 마우스 췌장에 혼자 암 세포의 주입에 의해 생산 되었다, PC의 특징인 눈에 띄는 스트로마 부족 종양의 결과. 최근에는 인간 PC와 인간 췌장 스텔레이트 셀(PC내 콜라주기의 1차 생산업체인 PSC)의 혼합물을 주입하여 처음 개발한 것과 같은 공동 주입 직교 모델들이 정기적으로 사용되어11,12로정기적으로 사용된다. 이러한 암 및 기질 세포의 공동 주입에 의해 생성된 종양은 (i) PC의 암 원소 및 특성 기질(desmoplastic) 성분을 모두 나타내며, (ii) 향상된 암세포 증식 및전이(11). 따라서 이 모델은 인간 PC와 매우 유사합니다. 정형PC의 다수의 절제 모델이13,14,15,16으로설명되었지만, 인간에서 췌장 절제술의 임상적 현실을 본 모델만큼 정확하게 반영한 사람은 없으며, 따라서 보조제 또는 신아주반트 치료를 테스트하기 위한 최적이 아니다.
제시된 마우스 모형의 목적은 (i) 성공적으로 자궁경부 췌장암을 이식하는 방법을 보여주기 위한 것이었으며, 부주의한 회대 보급을 최소화하고 (ii) 이후에 암을 완전히 절제술하였다. 이 문서는 이 기술의 팁과 잠재적인 함정을 강조합니다.

<table><tbody><tr><td>Animals, Materials and Equipment for Implantation Procedure</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AsPC-1 human pancreatic cancer cell line, luciferase tagged (promega PGL3 Basic plasmid의 luc+ gene)</td><td>American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA</td><td></td><td>provided by Takashi Murakami, Saitama Medical University, Saitama, Japan</td></tr><tr><td>Autoclip wound clips, 9 mm</td><td>Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW, Australia</td><td>500346</td><td></td></tr><tr><td>Basic Dressing Pack</td><td>Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>암 관련 인간 췌장 성상 세포</td><td>췌장 연구 그룹 세포 은행</td><td></td><td>사내 세포 은행</td></tr><tr><td>극저온 튜브, 1.0 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific Australia Pty Ltd, Scoresby, VIC, Australia</td><td>366656</td><td></td></tr><tr><td>손잡이가 있는 일회용 스테인리스 스틸 메스 블레이드, 크기 15</td><td>Livingstone International, Mascot, NSW,</td> <td>SCP15</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청(FBS)</td><td>Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>Gilles 가는 치아 집게 12cm</td><td></td><td></td><td>일반 스테인리스 스틸 미세 수술 기구 세트</td></tr><tr><td>수술 및 수술 후 회복 중 체온을 유지하기위한 가열 매트</td><td>일반</td><td></td><td></td></tr><tr><td>동형 접합 흉선 누드 마우스 : 균주 BALB / c-Fox1nu / Ausb, 여성</td><td>Australian Bioresources, Moss Vale, NSW, 호주</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iscove의 변형 된 Dulbecco 매체 (IMDM) 4mM L- 글루타민 및 페놀 레드 없음</td><td>Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia</td><td>21056023</td><td></td></tr><tr><td>보석 집게 11.5 cm</td><td></td><td></td><td>일반 스테인레스 스틸 미세 수술 기구 세트</td></tr><tr><td>마이크로 바늘 홀더 (둥근 손잡이) 15 cm 스트레이트</td><td></td><td></td><td>일반 스테인레스 스틸 미세 수술 기구 세트</td></tr><tr><td>마이크로 가위 (둥근 손잡이) 15 cm 직선</td><td></td><td></td><td>일반 스테인레스 스틸 미세 수술 기구 세트</td></tr><tr><td>페니실린 10,000 U/mL, 스트렙토 마이신 10,000 &mu; g/mL</td><td>Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>폴리글리콜산 봉합사, 13mm 반원형 원형 바늘에 크기 USP 5/0</td><td>Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia</td><td>C1049407</td><td></td></tr><tr><td>휴대용 저울</td><td>정밀 저울, Bradford, MA, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Reflex 클립 적용기 및 클립 제거제</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, 미국 플로리다</td><td>500345</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 페놀 레드 및 300 mg/L Lglutamine</td><td>Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia</td><td>11875085</td><td></td></tr><tr><td>원형 용기 확장기 15cm, 0.1mm 팁</td><td></td><td></td><td>일반 스테인리스강 미세 수술 기구 세트</td></tr><tr><td>트립신 0.05%, EDTA 0.02%</td><td>Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia</td><td>25300054</td><td>췌장 성상 세포</td></tr><tr><td>Trypsin 0.25%, EDTA 0.02%</td><td>Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia</td><td>25200056</td><td>ASPC-1 세포의 경우</td></tr><tr><td>U-100 인슐린 주사기, 0.5mL, 29G(0.33mm) &times; 13mm 바늘</td><td>Terumo Medical Corporation, Elkton, MD, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><<tr><td>strong>절제 절차용 장비</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alm 자체 유지 견인</td><td></td><td></td>기 <td>일반 스테인레스 스틸 미세 수술 도구 세트</td></tr><tr><td>자동 클립 상처 클립 9mm</td><td>Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW</td><td>500346</td><td></td></tr><tr><td>Basic dressing pack</td><td>Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia</td><td>08-559NP</td><td></td></tr><tr><td>손잡이가 있는 일회용 스테인리스 스틸 메스 블레이드, 크기 15</td><td>Livingstone International, Mascot, NSW,</td> <td>SCP15</td><td></td></tr><tr><td>Gilles 가는 이빨 집게 12cm</td><td></td><td></td><td>일반 스테인리스 스틸 미세 수술 기구 세트</td></tr><tr><td>휴대용 고온 미세 팁 소작</td><td>Bovie Medical Corporation, Melville, NY, USA</td><td>AA01</td><td></td></tr><tr><td>수술 및 수술 후 회복 중 체온 유지를 위한 온열 매트</td><td>일반</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina II 생물 발광 이미징 장치</td><td>캘리퍼스 생명 과학, 홉킨턴, 매사추세츠, 미국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>보석 집게 11.5cm</td><td></td><td></td><td>일반 스테인레스 스틸 미세 수술 기구 세트</td></tr><tr><td>마이크로 바늘 홀더 (둥근 손잡이) 15cm 스트레이트</td><td></td><td></td><td>일반 스테인레스 스틸 미세 수술 기구 세트</td></tr><tr><td>마이크로 가위 (둥근 손잡이) 15cm 스트레이트</td><td></td><td></td><td>일반 스테인레스 스틸 미세 수술 기구 세트</td></tr><tr><td>폴리글리콜산 봉합사, 크기 USP 5/0 13mm 반원 원형 바늘</td><td>Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia</td><td>C1049407</td><td></td></tr><tr><td>휴대용 저울</td><td>정밀 저울, Bradford, MA, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>반사 상처 클립 적용기 및 클립 제거기</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA</td><td>500345</td><td></td></tr><tr><td>원형 바디 혈관 확장기 15cm, 팁 0.1 mm 일반</td><td></td><td></td><td>스테인레스 미세 수술 기구 세트</td></tr><tr><td>티타늄 " 웩 스타일" Ligaclip, 소형</td><td>HZMIM, 항저우, 중국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>개방 수술용 티타늄 Ligaclip 어플리어, 소형</td><td>HZMIM, 항저우, 중국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>휘발성 마취기, 기화기 및 유도 챔버 포함</td><td>일반</td><td></td><td>일반 기화기 및 유도 챔버</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><강한>절차용 약물</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% w/w 에탄올 용액</td><td>Sigma-Aldrich Pty Ltd, Castle Hill, NSW, Australia</td><td></td><td>외과용 피부 제제로 국소 적용</td></tr><tr><td>부프레노르핀 0.3 mg/mL</td><td>Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia</td><td></td><td>투여량: 0.05 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>D-Luciferin (1 U/g)</td><td>PerkinElmer, Inc., Waltham, MA, USA</td><td>122799</td><td>PBS에서 15mg/mL로 희석합니다. 투여량: 150 mg/kg i.p</td></tr><tr><td>Enrofloxacin 50 mg/mL</td><td>Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia</td><td></td><td>투여량: 5 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Flunixin 50 mg/mL</td><td>Norbrook Laboratories Australia, Tullamarine, VIC, Australia</td><td></td><td>투여량: 2.5 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Zoetis Australia Pty Ltd., Rhodes, NSW, Australia</td><td></td><td>용량 (산소로 기화) : 4 % 유도, 3 % 유지 보수</td></tr><tr><td>케타민 100 mg / mL</td><td>Maylab, Slacks Creek, QLD, Australia</td><td></td><td>용량 : 80 mg / kg ip.</td></tr><tr><td>포비돈-요오드 10% w/v 용액</td><td>Perrigo Australia, Balcatta, WA, Australia</td><td>RIO00802F</td><td>외과적 피부 제제로 전방 복부에 국소적으로 도포</td></tr> 리<tr><td>프레시 눈 연고(액상 파라핀 42.5% w/w, 연백색 파라핀 57.3% w/w)</td> <td>Allergan Australia Pty Ltd, Gordon, NSW, Australia</td><td></td><td>양쪽 눈에 적용</td></tr><tr><td>염화나트륨 0.9% w/v</td><td>Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, 호주</td><td>9481P</td><td>투여량: 900 &mu; 엘 s.c.</td></tr><tr><td>주사용 물 BP</td><td>Pfizer Australia, Sydney, NSW, Australia</td><td></td> 약물 <td>희석용</td></tr><tr><td>Xylazine 20 mg/mL</td><td>Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia</td><td></td><td>투여량: 10 mg/kg i.p.</td></tr></tbody></table>

췌장암의 정형소 절제술 마우스 모델

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

췌장암(PC)의 수술을 고려중인 환자에서 보조 및/또는 신아주반트 요법을 연구하는 만족스러운 동물 모델의 부족이 있습니다. 이 결핍을 해결하기 위해, 우리는 말단 pancreatectomy 및 비장 절제술 다음에 PC의 직교 이식을 포함하는 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 보조 및 네오 보조 제 설정에서 다양한 치료 접근법의 연구에 안전하고 적절하게 유연하다는 것이 입증되었습니다.
본 모델에서 췌장종양은 인간 췌장암세포(luciferase-tagged AsPC-1) 및 인간암 관련 췌장 스텔레이트 세포를 Balb/c 아티믹 누드 마우스의 황실 췌장에 이식하여 먼저 생성된다. 3 주 후, 암은 재복복절, 해장 판 절제술 및 비장 절제술에 의해 제복됩니다. 이 모델에서, 생물 발광 화상 진찰은 암 발달의 진행 및 절제술/처리의 효력을 따르기 위하여 이용될 수 있습니다. 절제술 후 보조 요법을 받을 수 있습니다. 대안적으로, 네오아드주반트 치료는 절제 전에 투여될 수 있다.
45마우스의 대표적인 데이터가 제시된다. 모든 마우스는 hemostasis의 문제 없이 성공적인 말단 pancreatectomy/비장 절제술을 겪었습니다. 5mm를 초과하는 거시적 근위 췌장 마진은 43(96%)에서 달성되었습니다. 마우스. 췌장 절제술의 기술적 성공률은 100%였으며 0%의 조기 사망률과 이환율이었습니다. 절제술 후 일주일 동안 동물중 누구도 죽지 않았습니다.
요약하자면, 우리는 임상 시나리오를 모방하는 마우스에 있는 췌장암의 외과 절제술 모형을 위한 강력하고 재현가능한 기술을 기술합니다. 이 모델은 보조 및 신아주반트 치료의 테스트에 유용할 수 있다.

59마리의 연속 마우스가 이식 수술을 받았습니다. 총 누출은 8명(14%)에서 발생했습니다. 마우스. 주사 시의 누설 정도는 프로토콜 섹션에 상술한 바와 같이 추정된다. 이러한 이식된 종양이 증가할 수 있도록 3주 후, 절제 전 생물발광 이미징은 절제 전에 총 전이성 질환을 가진 마우스를 배제하기 위해 수행되었다. 45명 (76%) 마우스는 외과 절제술을 받았습니다.
모든 45 (100%) 마우스는 해모증의 문제 없이 성공적인 말단 판절제술/비장 절제술을 받았습니다. 5mm를 초과하는 거시적 근위 췌장 마진은 43(96%)에서 달성되었습니다. 마우스.
절제술 시, 지역 전이9/45 (20%)에서 발견되었습니다. 마우스 – 주로 봉합사 선 (1 차 종양으로 불연속) 9의 3 위장의 큰 곡선에 추가 고립 된 결절을 보여주는 하나 간상한 결절을 보여주는 하나. 1차 췌장종양은 5명(11%)에서 봉합사라인을 부착하였다. 마우스와 간을 1...

임상 맥락에서, 국소췌암을 가진 환자는 부주 처리를 선행한 pancreatectomy를 겪게 될 것입니다. 여기에서 보고된 이 프로토콜은 말단 판생성 절제술 및 비장 절제술다음에 췌장암의 정형소 이식을 통해 누드 마우스에서 이 임상 시나리오를 모델링하는 안전하고 효과적인 방법을 확립하는 것을 목표로 합니다.

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...

이 프로토콜은 마우스의 췌장암에 대한 강력하고 재현 가능한 외과적 절제 모델을 설명하며, 이는 보조 요법 및 선행 요법을 테스트하는 데 사용될 수 있습니다. 이 기술은 인간 췌장암을 재현하는 데 효과적인 동시 감염 orthotopic 모델과 안전하고 효과적인 췌장 절제 기술을 결합합니다. 면역결핍 모델이 이 프로토콜에 기술되어 있지만, C57 블랙 식스 마우스에 이식된 KPC 종양 세포를 사용하는 대안적인 면역 역량 모델을 수행할 수 있습니다.이 대안은 면역 요법을 테스트하는 데 유용할 것입니다. 먼저 마취된 마우스를 누운 자세로 멸균 필드에 놓고 포비돈 요오드를 바르고 피부 준비를 위해 70% 에탄올을 바르십시오. 복부의 왼쪽 두개골 사분면을 세로로 절개하여 피부를 절개하고 겸자 사이의 근육층을 절개합니다.세포 현탁액이 있는 주사기를 주사 장치에 장착한 후 개복술 절개 부위에 지갑 끈 면봉을 놓고 면봉 구멍을 통해 비장과 췌장 꼬리를 외부로 내압합니다. 지갑 끈을 부드럽게 조이고 면봉을 조이고 췌장 꼬리를 노출시켜 주사를 맞고 거즈가 췌장을 원주에 접촉하지만 수축시키지 않도록 합니다. 집게를 사용하여 췌장의 꼬리를 잡고 부드럽게 측면 장력을 가합니다.바늘로 췌장을 뚫고 베벨이 위로 올라가 베벨이 복막에 완전히 들어갈 때까지 바늘 끝을 약간 위로 들어 올리면서 전진시킵니다. 췌장의 실질에 세포 현탁액을 느리고 통제된 방식으로 주입합니다. 주입 후에는 누출을 최소화하기 위해 빼내기 전에 몇 초 동안 바늘을 제자리에 고정하십시오.포비돈 요오드를 적신 면봉을 사용하여 해당 부위를 조심스럽게 두드려 실수로 누출된 세포 현탁액을 흡수합니다. 비장과 췌장을 다시 정소 위치로 교체하고 5-0 폴리글리콜산 봉합사로 복벽을 닫습니다. 클립으로 피부를 닫습니다.복부의 왼쪽 두개골 사분면의 피부를 세로로 절개합니다. 바람직하게는 이전 절개 부위를 통해 이루어진다. 아래에 있는 근육질의 복벽에서 피부를 퉁툭하게 절개하고 상처를 벌리기 위해 모든 자가 고정 견인기를 놓습니다.겸자 사이의 근육층을 이전 수술의 봉합선의 한쪽으로 절개합니다. 그런 다음 절개 부위를 확장하여 이전의 봉합선 전체를 절제합니다. 비장과 췌장을 두개골로 수축시켜 외부화합니다.이 경우, 종양의 하부에 부착된 일부 유착이 발견되었습니다. 이것은 소작으로 나뉘었습니다. 결장은 췌장의 꼬리 쪽에 필름 유착에 의해 부착되어 있는 것을 발견할 수 있습니다.이것이 발견되면 대장을 퉁명스럽게 절개하십시오. 췌장 몸체의 비장 혈관에 한 쌍의 집게를 조심스럽게 통과시켜 결찰을 위해 췌장 부분을 노출시킵니다. 종양 근위부의 췌장을 티타늄 족쇄 클립으로 접합한 다음 소작으로 원위부의 췌장을 절제합니다.또는 췌장 그루터기를 제어하기 위해 절제 전에 5-0 폴리글리콜산 봉합사와 연속적으로 췌장을 결찰합니다. 췌장을 꼬리 쪽으로 조심스럽게 수축시키고 비장의 두개골과 위 사이의 위장 비장 혈관을 소작합니다. 혈관은 작으며 배가 꺾이거나 부적절하게 소작되면 쉽게 출혈이 발생할 수 있음을 명심하십시오.이러한 혈관은 복강 속으로 수축하여 출혈을 유발할 수 있으며, 이는 조절하기 어려울 수 있습니다. 검체를 제거하고 수술 부위를 검사하여 지혈을 확인합니다. 5-0 폴리글리콜산 봉합사로 복벽을 연속적으로 닫고 클립으로 피부를 닫습니다.이식 수술을 받은 59마리의 연속 마우스 중 8마리의 마우스에서 총 누출이 발생했습니다. 종양이 자란 지 3주가 지난 후, 절제 전 생물발광 영상을 통해 심각한 전이성 질환이 있는 마우스를 외과적 절제에서 제외할 수 있었습니다. 이로 인해 45마리의 마우스가 췌장 절제술을 진행했습니다.이 절차는 100 %의 마우스에서 성공적으로 수행되었습니다. 5mm 이상의 거시적 근위 췌장 가장자리가 이 쥐 중 43마리에서 달성되었습니다. 절제 당시, 45마리의 마우스 중 9마리에서 국소 전이가 발견되었다.봉합선으로의 전이 외에도 3마리의 마우스에서 위의 더 큰 곡선에 있는 고립된 전이성 결절이 관찰되었고 1마리의 마우스에서는 간에 캡슐하 결절이 관찰되었습니다. 국소 추가 췌장 침입은 6마리의 마우스에서 발생했으며, 5마리의 마우스에서는 봉합선으로, 1마리의 마우스에서는 간으로 직접 침입했습니다. 절제 일주일 후, 32마리의 마우스에서 최대 방사 비율이 10 미만으로 나타났는데, 이는 잔류 질환이 적거나 전혀 없음을 나타냅니다.마취 유도부터 봉합까지 평균 수술 시간은 22분이었다. 절제 절차의 핵심 단계는 비장 혈관과 췌장에 대한 무혈 배아 평면을 인식하는 것입니다. 이 평면을 절개하면 후속 결찰을 위해 췌장의 한 부분이 확보됩니다.절제 후, 마우스는 보조 요법으로 치료할 수 있습니다. 그런 다음 지역 동물 윤리 프로토콜에 따라 부검 결과 및 동물 생존과 함께 생물 발광 이미징을 사용하여 질병의 진행 상황을 평가할 수 있습니다.

an-orthotopic-resectional-mouse-model-of-pancreatic-cancer

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

이게 맹장에 피하 종양의 조각의 cecal 벽이나 이식으로 암 세포 현탁액의 주입 : 두 기술이 모델을 확립하는 데 사용할 수 있습니다. 이 모델은 대장암의 자연 진행을 공부하고 대장암에 대한 새로운 치료 요원을 테스트하는 데 유용합니다.

대장암의 Orthotopic 마우스 모델

이 비디오는 췌장암 발병을 위해 암성 기증자의 종양 조각을 비암성 수용자 마우스의 췌장으로 이식하는 단계적 수술 방법을 설명합니다. 정소적으로 이식된 PDAC는 기존의 피하(SC) 모델보다 인간 췌장암의 조직 미세환경을 더 정확하게 재현할 수 있습니다.

정소성 동종이식 종양 이식: 췌장 종양 마우스 모델을 생성하는 기술

이 비디오는 종양 진행의 비침습적 모니터링을 위해 국소 세포 전달 및 생체 내 생물 발광 이미징을 위해 Matrigel을 활용하는 췌장암의 정소성 모델을 보여줍니다. 정소성 모델은 신유전 및 이종 이식 모델 모두에 적합하며 원발성 췌장 종양의 성장 및 전이에 대한 새로운 항암 치료제의 영향을 조사하기 위한 전임상 시험에 사용할 수 있습니다.

생물 발광 직소성 췌장암 마우스 모델: 마우스의 암 진행을 모니터링하기 위한 비침습적 기술

췌장암 생물학의 개선 이해는 매우 췌장암을 치료하는 더 나은 치료 옵션의 개발을 가능하게하기 위해 필요합니다. 이러한 요구를 해결하기 위해, 우리는 사용하여 암 진행의 비 침습 모니터링을 허용 췌장암의 동소 모델을...

췌장암의 진행 발광 동소 모델

간 전이 전임상, 뮤린 모델 hemispleen 주입 기법을 통해 수행 하였다.

간 전이의 전임상 쥐과 모델

이 프로토콜의 목표는 마우스의 정소성 췌장 종양 이종 이식편에 동적 대비 강화 자기 공명 영상(DCE-MRI)을 적용하는 것입니다. DCE-MRI는 표적 조직의 미세혈관 구조를 분석하는 비침습적 방법이며, 새로운 요법 후 종양의 혈관 반응을 평가하는 데 유용합니다.

동소 이식 췌장 암 마우스 모델의 동적 대비 강화 된 자기 공명 영상

Balb-c Ola Hsd-Fox1nu 마우스의 췌장에 녹색 형광 단백질 발현 췌장암 세포(PANC-1 GFP)를 항소적으로 이식하여 종양 진행 및 전이를 평가하는 절차가 여기에 나와 있습니다.

췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델

돌이킬 수 없는 electroporation (분노) 로컬 고급 췌장암의 치료에 사용 하는 비 열 제거 기술입니다. 비교적 새로운 기술 이기 때문에, 종양 성장에 분노의 효과 제대로 이해 된다. 췌장암에 대 한 분노의 효과 공부 하 고 용이 하 게 syngeneic 마우스 모델을 개발 했습니다.

돌이킬 수 없는 Electroporation의 효과 공부 하는 Syngeneic 췌 장 암 마우스 모델

우리는 모린 유래 췌장 선암 세포주를 직접 네이티브 종양 부위로 유도하는 초음파 유도 이식프로토콜을 설명합니다. 이 접근법은 주사 후 2-4주 이내에 초음파 스캐닝에 의해 검출가능한 췌장 종양을 초래하고, 외과 정형외과 이식에 비해 각막벽에 종양 세포 파종을 현저히 감소시켰다.

뮤린 췌장 연성 선암의 초음파 유도 정형 외 이식

이 프로토콜은 정형 외과 췌장 종양의 외과 생성 및 갓 단송된 뮤린 췌장 종양의 급속한 소화를 기술합니다. 소화 후, 실행 가능한 면역 세포 집단은 유세포 세포 분석에 의한 세포내 사이토카인 검출을 위한 T 세포의 생체내 자극을 포함하는 추가하류 분석을 위해 사용될 수 있다.

종양 침투 T 세포 독성의 정형 외 췌장 종양 및 Ex 생체 특성의 생성

췌관 선암종(PDAC)의 Syngeneic mouse orthotopic 동종이식편은 질병 아형의 생물학, 표현형 및 치료 반응을 요약합니다. 빠르고 재현 가능한 종양 진행으로 인해 전임상 연구에 널리 사용됩니다. 여기에서는 syngeneic murine PDAC 배양을 췌장에 주입하여 이러한 모델을 생성하는 일반적인 방법을 보여줍니다.

췌장암을 모델링하기 위한 Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts

학습하세요 췌장암 정형소 절제술 마우스 모델을 통해 보조 및 신보조 요법을 테스트하는 방법을. 이 기법은 정위 이식 모델과 안전한 췌장 절제술을 결합하여 인간 췌장암을 효과적으로 재현합니다.

췌장암의 정형소 절제술 마우스 모델

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