Name: 폐 질환을 치료하기 위해 신생아 설치류에 약물을 기관 내 점적하는 최소 침습적 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 21 s
Description: 배우세요 신생아 설치류의 기관 내 약물 점적 최소 침습 기법을 통해 폐 질환 연구의 정확성과 생존율을 향상시키는 방법을. 직접 시각화 기술로 통증과 출혈을 최소화합니다.

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이 작업은 NICHD에서 AH까지 R01HD090887-01A1에 의해 부분적으로 지원되었습니다. 저자들은 또한 Peter Mc Farlane 박사의 실험실에서 흡입 마취 / 가열 패드 시스템과 같은 시설을 제공합니다. 캐서린 메이어 (Catherine Mayer)의 시스템 구축에 대한 귀중한 도움을 주셔서 감사합니다. 연구 설계, 수집, 분석 및 데이터 해석 또는 원고 작성에서 자금 조달 기관이 아무런 역할을하지 않았습니다.

모든 실험은 Case Western Reserve University의 Institutional Animal Care and Use Committee (protocol # 2020-0035)의 승인을 받았습니다. 모든 동물을 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 NIH 지침에 따라 처리하였다.
1. 동물
<ol><li>상업적으로 임신 한 Sprague Dawley 쥐를 얻습니다.</li>
	<li>14 h / 10 h 밝은 어둠주기와 45-60 % 상대 습도로 승인 된 수의학 시설에서 동물을 유지하십시오.</li>
</ol>2. 시험 화합물의 제조
<ol><li>Evans 블루 염료를 시험 화합물로 사용하여 기관내 점안 절차의 효능을 평가하십시오.</li>
	<li>인산염 완충 식염수 (pH 7.2)에서 염료의 0.25 % (w / v) 용액을 준비하고 0.45 μm 시린지 필터를 사용하여 필터 멸균하십시오.</li>
</ol>3. 마취의 투여
<ol><li>작은 쥐 신생아에게 적합한 변형 된 전달 시스템을 사용하여 가스 마취 (100 % 산소에서 3 % 이소플루란)를 사용하여 쥐 새끼를 마취하십시오.</li>
	<li>꼬리와 페달 반사 신경의 손실과 얕은 호흡이 있는지 확인하여 절차를 수행하기위한 마취의 적절한 깊이를 확인하십시오.</li>
</ol>4. 기관내 점안 (ITI)
<ol><li>ITI를 위해 출생 후 5 일째 (PN 5)에 쥐 새끼를 사용하십시오. PN 5 래트 강아지의 평균 체중은 12 그램이다.</li>
	<li>실험실 라벨링 테이프를 사용하여 기울어 진 평평한 플랫폼에서 마취 된 쥐 강아지를 제지하십시오. 강아지는 수핀 위치에서 약 45 °의 각도로 억제됩니다.</li>
	<li>신생아의 입을 열고 무딘 포셉을 사용하여 혀를 한쪽으로 부드럽게 당깁니다.</li>
	<li>이토스코프에 연결된 직경 2mm의 작은 이토스코프 검경을 사용하여 혀를 부드럽게 잡고 후두를 적절하게 시각화하십시오.</li>
	<li>목구멍 조명기 시스템, 즉 작동 이토스코프와 돋보기 렌즈를 사용하여 성대를 올바르게 시각화하십시오 (그림 1).</li>
	<li>동물을 경사면에 45° 각도로 배치합니다. 마우스 케이지의 유선 막대 뚜껑이 사용됩니다(그림 2). 참고 : 동물을 45 ° 각도로 배치하면 epiglottis의 간섭없이 기관 개구부를 더 잘 시각화 할 수 있습니다.</li>
	<li>웨스턴 블롯 젤을 로딩하는 데 사용되는 긴 각도의 피펫 팁을 가져 가십시오. 수술 블레이드를 사용하여 피펫 팁의 바닥을 자르면 1cc 주사기 팁에 잘 맞습니다.</li>
	<li>장각형 피펫 팁에 장착된 멸균 1 mL 주사기를 사용하여 30-50 μL의 물질을 폐로 전달하십시오. 주사기를 반전시키고 거의 0.9 cc 공기를 피펫 팁에 연결된 1 mL 주사기 내로 흡입한 다음, 전달하고자 하는 염료 또는 물질을 첨가한다. 이것은 도 3에 도시된 바와 같이 염료가 투여된 후에 염료 뒤의 공기가 기관 내로 밀려나게 한다. 기관내 투여는 후두 내강(성대)을 시각화하고 주사기에 장착된 피펫 팁을 기관 내강에 삽입함으로써 달성됩니다.</li>
	<li>이토스코프의 검경을 사용하여 혀를 잡고 성대를 노출시킵니다. 검경은 후두경의 칼날 역할을합니다. 피펫 팁을 30 ° 각도로 구부려 원뿔 모양의 사경을 통해 기관 개구부로 약제를 쉽게 도입 할 수 있습니다.</li>
	<li>피펫 팁을 기관 개구부에 도입하여 성대를 넘어 약 2mm 지점까지 삽입합니다. 주사기의 피스톤을 밀어 도 3에 도시된 바와 같이 작동 이토스코프의 검경을 통해 염료 또는 약물을 투여한다. 약제 투여 직후에 폐에 공기를 도입하면 물질이 후두강으로 되돌아 오는 것을 방지합니다.</li>
	<li>강아지를 염료 또는 일반 식염수로 투여 한 후 호흡 운동이 규칙적 일 때까지 강아지를 통합 순환 유체 가열 패드 (38 ° C)에 놓습니다. 마취에서 완전히 회복 된 후, 강아지를 댐과 재결합하십시오.</li>
</ol>5. ITI 전달의 특성화
<ol><li>ITI 후, 과도한 마취 (케타민 100 mg / kg 및 자일라진 10 mg / kg) / 티오펜톤을 투여 후 적절한시기에 삼출시켜 쥐 새끼를 안락사시킵니다. 안락사는 효능을 입증하기 위해 폐 조직을 수집하는 실험의 일부로서 수행되었다.</li>
	<li>안락사 된 쥐 강아지를 해부 보드에 고정시키고 70 % 에틸 알코올로 가슴과 복부를 닦으십시오.</li>
	<li>폐 전체에 걸쳐 염료의 분포를 평가하려면 멸균 기술을 사용하여 동물에서 폐를 제거하고 이미징에 적합한 폐를 표시하십시오 (그림 4A, B).</li>
</ol>

<ol><li>Prakash, Y. S. Pulmonary Cell Biology Lab: Neonatal Lung Disease. Mayo Clinic. , Available from: 
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<li>Martínez-Burnes, J., López, A., Lemke, K., Dobbin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transoral+intratracheal+inoculation+method+for+use+with+neonatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transoral intratracheal inoculation method for use with neonatal rats.</a> Comparative Medicine. 51 (2), 134-137 (2001).</li>
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<li>Nardiello, C., Mižíková, I., Morty, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+ahead%3A+where+to+next+for+animal+models+of+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Looking ahead: where to next for animal models of bronchopulmonary dysplasia.</a> Cell and Tissue Research. 367 (3), 457-468 (2017).</li>
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<li>Moreira, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+of+human+umbilical+cord+Wharton%27s+jelly+mesenchymal+stromal+cells+restores+lung+alveolarization+and+vascularization+in+experimental+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery of human umbilical cord Wharton's jelly mesenchymal stromal cells restores lung alveolarization and vascularization in experimental bronchopulmonary dysplasia.</a> Stem Cells Translational Medicine. 9 (2), 221-234 (2020).</li>
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<li>Linderholm, A. L., Franzi, L. M., Bein, K. J., Pinkerton, K. E., Last, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+comparison+of+intranasal+and+intratracheal+administration+of+coarse+PM+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Pharmacology%2C+Toxicology+and+Genotoxicology%22%5BJournal%5D)">A quantitative comparison of intranasal and intratracheal administration of coarse PM in the mouse.</a> Integrative Pharmacology, Toxicology and Genotoxicology. 1 (1), 5-10 (2015).</li>
<li>Guerra, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-tracheal+administration+of+a+naked+plasmid+expressing+stromal+derived+factor-1+improves+lung+structure+in+rodents+with+experimental+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Research%22%5BJournal%5D)">Intra-tracheal administration of a naked plasmid expressing stromal derived factor-1 improves lung structure in rodents with experimental bronchopulmonary dysplasia.</a> Respiratory Research. 20 (1), 255(2019).</li>
<li>Thomas, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+particle+size+on+the+pathology+and+efficacy+of+vaccination+in+a+murine+model+of+inhalational+anthrax%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Influence of particle size on the pathology and efficacy of vaccination in a murine model of inhalational anthrax.</a> Journal of Medical Microbiology. 59, Pt 12 1415-1427 (2010).</li>
<li>Sakurai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+combination+of+the+aerosolized+PPAR-%CE%B3+agonist+pioglitazone+and+a+synthetic+surfactant+protein+B+peptide+mimic+prevents+hyperoxia-induced+neonatal+lung+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neonatology%22%5BJournal%5D)">A combination of the aerosolized PPAR-γ agonist pioglitazone and a synthetic surfactant protein B peptide mimic prevents hyperoxia-induced neonatal lung injury in rats.</a> Neonatology. 113 (4), 296-304 (2018).</li>
<li>Rayamajhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-surgical+intratracheal+instillation+of+mice+with+analysis+of+lungs+and+lung+draining+lymph+nodes+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e2702(2011).</li>
<li>Brain, J. D., Knudson, D. E., Sorokin, S. P., Davis, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+distribution+of+particles+given+by+intratracheal+instillation+or+by+aerosol+inhalation%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Research%22%5BJournal%5D)">Pulmonary distribution of particles given by intratracheal instillation or by aerosol inhalation.</a> Environmental Research. 11 (1), 13-33 (1976).</li>
<li>Pritchard, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+distribution+of+dust+in+the+rat+lung+following+administration+by+inhalation+and+by+single+intratracheal+instillation%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Research%22%5BJournal%5D)">The distribution of dust in the rat lung following administration by inhalation and by single intratracheal instillation.</a> Environmental Research. 36 (2), 268-297 (1985).</li>
<li>Ruzinski, J. T., Skerrett, S. J., Chi, E. Y., Martin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deposition+of+particles+in+the+lungs+of+infant+and+adult+rats+after+direct+intratracheal+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Deposition of particles in the lungs of infant and adult rats after direct intratracheal administration.</a> Laboratory Animal Science. 45 (2), 205-210 (1995).</li>
<li>Sun, B., Curstedt, T., Song, G. W., Robertson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surfactant+improves+lung+function+and+morphology+in+newborn+rabbits+with+meconium+aspiration%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+the+Neonate%22%5BJournal%5D)">Surfactant improves lung function and morphology in newborn rabbits with meconium aspiration.</a> Biology of the Neonate. 63 (2), 96-104 (1993).</li>
<li>Nicholson, J. W., Kinkead, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+device+for+intratracheal+injections+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">A simple device for intratracheal injections in rats.</a> Laboratory Animal Science. 32 (5), 509-510 (1982).</li>
<li>Carlon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+transfer+into+the+mouse+lung+by+fetal+intratracheal+injection+of+rAAV2%2F6.2%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%3A+The+Journal+of+the+American+Society+of+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Efficient gene transfer into the mouse lung by fetal intratracheal injection of rAAV2/6.2.</a> Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18 (12), 2130-2138 (2010).</li>
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<li>Mowat, V., Alexander, D. J., Pilling, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+rodent+and+nonrodent+laryngeal+and+tracheal+bifurcation+sensitivities+in+inhalation+toxicity+studies+and+their+relevance+for+human+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">A comparison of rodent and nonrodent laryngeal and tracheal bifurcation sensitivities in inhalation toxicity studies and their relevance for human exposure.</a> Toxicologic Pathology. 45 (1), 216-222 (2017).</li>
</ol>

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기관 내 점안은 호흡기 질환 중재 및 질병 모델 개발을위한 기존 방법에 비해 몇 가지 이점을 제공하는 훌륭한 방법입니다. 그것은 빠른 방법이며 경험이 있으면 동물 당 2-3 분의 평균 속도로 수행 할 수 있습니다. 성공적인 삽관을위한 주요 고려 사항은 동물의 적절한 진정, 올바른 위치, 특히 머리뿐만 아니라 구강 인두의 사경의 배치 / 크기의 정확한 깊이입니다. 적절한 진정 작용은 운영자, 특히 초보자에게 충분한 작업 시간을 허용합니다. 45 ° 각도로 동물을 배치하는 것은 성대의 적절한 시각화를 위해 중요합니다. 적절한 깊이에 검경을 배치하면 절차 전반에 걸쳐 혀를 수축시키는 데 도움이되어 성대를 다시 잘 시각화 할 수 있습니다. 두 사람으로 구성된 팀이이 작업을 쉽게 조정할 수 있습니다. 하나는 동물의 마취와 케이징을 조정할 수 있고 다른 하나는 점안을 처리 할 수 있습니다. ITI의 가장 기술적으로 어려운 부분은 기관으로의 올바른 삽관입니다. 이 기술의 성공은 삽관 후 염료의 투여에 의해 확인됩니다. 튜브가 식도로 미끄러져...

조기에 태어난 신생아는 장기 환기와 같은 많은 중재 요법이 필요한 폐가 제대로 발달하지 못했습니다. 이러한 개입은 생존 한 신생아를 후속 후유증1의 높은 위험에 처하게합니다. 실험 동물 모델은 다양한 질병 상태를 시뮬레이션하고, 질병의 병리학을 연구하고, 치료 개입을 평가하는 데 중요한 도구 역할을합니다. 생쥐, 쥐, 토끼에서 조산기 양과 돼지에 이르기까지 광범위한 동물 모델을 사용할 수 있지만 생쥐와 쥐가 가장 많이 사용됩니다. 
생쥐와 쥐를 사용하는 주된 이점은 임신 기간이 비교적 짧고 비용이 절감된다는 것입니다. 그들은 또한 쉽게 이용할 수 있고, 질병이없는 환경에서 유지하기가 쉽고, 유전적으로 균질하며, 상대적으로 덜 윤리적 인 관심사를 가지고 있습니다 2,3. 설치류 모델의 또 다른 주요 장점은 출생시 신생아 강아지가 기관지 폐 이형성증을 일으키기 위해 진행되는 24 주 조산 신생아 인간 유아의 폐와 형태 학적으로 동등한 폐 발달의 후기 누소관 / 초기 적색 단계에 있다는 것입니다4. 또한, 폐 발달이 생후 첫 4주 이내에 완료로 급속히 진행됨에 따라, 합리적인 기간4에서 출생 후 폐 성숙을 연구하는 것이 타당하다. 이러한 장점에도 불구하고, 생쥐와 쥐 새끼의 작은 크기는 다양한 개입에 대한 우려의 원천이며, 이는 대부분의 연구자가 새끼5가 아닌 성인 동물을 사용하도록 강요합니다. 신생아 폐는 발달 단계에 있으며 자극제에 대한 신생아의 반응은 성인의 반응과 다릅니다. 이것은 인간 신생아 질병 상태를 연구하기 위해 신생아 동물 모델을 사용하는 것이 적절합니다.
폐에 약물 / 생물학적 제제를 투여하는 방법에는 여러 가지가 있습니다. 여기에는 비강 내6,7 또는 기관 내 8,9,10 점적과 에어로졸 흡입 11,12가 포함됩니다. 각 접근 방식에는 자체 기술적 과제, 장점 및 제한 사항13이 있습니다. 치료제의 기관내 투여 경로는 전신 효과를 우회하는 장기에서의 직접적인 치료 영향을 연구하는 것이 바람직하다. 이 경로는 또한 자극제로 인한 폐 병리학을 연구하는 데 사용될 수 있습니다. 이를 수행하는 침습적 및 최소 침습적 기술이 모두 있으며 성인에서 쉽게 수행 할 수 있습니다. 그러나 강아지에서는 동물의 크기가 작기 때문에 삽관 과정과 관련된 기술적 인 문제가 있습니다. 현재의 연구는 쥐 새끼에서 간단하고 일관성있는 비 외과 적 기관내 점안 (ITI) 방법을 제시하여 다양한 신생아 치료 중재의 효능을 연구하고 신생아 호흡기 질환을 시뮬레이션하는 동물 모델을 생성하는 데 사용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>에반스 블루 염료</td><td>Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA</td><td>314-13-6</td><td>폐에 약물 투여 확인</td></tr><tr><td>케타민 염산염</td><td>Hospira. Inc, Lake Forest, IL, USA</td><td>동물 보호 시설에서 조제</td><td>진정을 위해</td></tr><tr><td></td><td>Welch Allyn, Hillrom, Chicago, IL, USA</td><td>21770- 3.5V</td><td>성대 시각화용</td></tr><tr><td>Otoscope 충전식 핸들</td><td>Welch Allyn, Hillrom, Chicago, IL, USA</td><td>71050-C</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁(젤 로딩)</td><td>Fisherbrand</td><td>02-707-139</td><td>약물</td></tr> <tr><td>투여제지용 플랫폼(경사면)</td><td>동물 관리 시설</td><td>에서 분배</td><td>마우스 케이지의 유선 지붕을 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>3M Micropore Surgical White Paper(접착 테이프)</td><td>3M, St. Paul, MN, USA</td><td>1530-2</td><td></td></tr><tr><td>Luer Lock SyringeSyringes(1ml)</td><td>BD Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>NBD2515</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Hospira 약물 투여. Inc, 레이크 포레스트, 일리노이, 미국</td><td></td><td>진정제를 위해</td></tr></tbody></table>

폐 질환을 치료하기 위해 신생아 설치류에 약물을 기관 내 점적하는 최소 침습적 방법

A Minimally Invasive Method for Intratracheal Instillation of Drugs in Neonatal Rodents to Treat Lung Disease

신생아 설치류를 기관에 직접 주입 된 약물로 치료하는 것은 국소 투여 약물의 영향을 연구하는 데 유용한 도구가 될 수 있습니다. 이것은 계면활성제와 약물이 폐에 국부적으로 투여되기 때문에 직접적인 번역 영향을 미칩니다. 문헌에는 치료 실험에서 성인 생쥐와 쥐의 최소 침습적 경막 삽관을 설명하는 많은 간행물이 있지만, 신생아 쥐 강아지에서이 접근법은 부족합니다. 새끼의 기관지 영역 / 인두의 크기가 작기 때문에 후두 내강 (성대)의 시각화가 어려워 기관 내 약물 전달의 다양한 성공률에 기여합니다. 우리는 신생아 쥐 강아지의 효과적인 경구 삽관 - 비 외상성 및 최소 침습적 인 기술을 입증하여 약물의 연속 투여에 사용할 수 있습니다. 우리는 조명 시스템과 돋보기 렌즈가있는 운영 이토스코프를 사용하여 쥐 신생아의 기관 개방을 시각화했습니다. 그런 다음 피펫 팁에 연결된 1 mL 주사기를 사용하여 약물을 주입합니다. 전달 방법의 정확성은 에반스 블루 염료 투여를 사용하여 입증되었다. 이 방법은 훈련을 받기 쉽고 기관에 약물을 주입하는 효과적인 방법으로 작용할 수 있습니다. 이 방법은 또한 동물에서 질병 상태를 모사하기 위한 접종제 또는 제제의 투여에 사용될 수 있고, 또한, 다양한 폐 질환에 대한 세포 기반 치료 전략을 위해 사용될 수 있다.

에반스 블루의 점안은 모든 폐엽을 포함하는 염료의 다초점 분포를 밝혀냈다(그림 4A,B). 도 4에 나타난 바와 같이 우리의 결과는 모든 엽에 대한 분포의 효능을 입증한다. 사진은 염색체의 ITI 직후에 기관으로 촬영됩니다. 100 % 효능은 염료를 기관 내로 주입 한 다음 양쪽의 모든 엽으로 확산시킴으로써 달성되었습니다. 염료가 폐의 소엽 내에서 더 퍼질 것으로 예상됩니다. 반복적 인 투여를 통해 우리는 이것을 폐에 소엽과 모든 소엽에 전달하는 데 100 % 성공을 보장 할 수있었습니다. 우리는 어떤 염료도 위장이나 폐 외부에 도달하지 않도록했습니다. 이것은 폐에 100 % 투여하는 기술의 효능을 증언합니다. isoflurane 마취는 시술 후 새끼의 빠른 회복을 허용했습니다. 5 일째부터 쥐 새끼는이 절차를 용인하고 마취 후 수행하는 데 5 분 미만이 걸렸습니다. 일부 동물은 일시적인...

신생아 설치류의 기관에 약물을 직접 주입하는이 기술은 국소 투여 약물 또는 생물학이 신생아 폐 질환에 미치는 영향을 연구하는 데 중요합니다. 추가적으로, 이 방법은 또한 동물 모델에서 폐 손상을 유도하는데 사용될 수 있다.

Treatment of neonatal rodent with drugs instilled directly into the trachea could serve as a valuable tool to study the impact of a locally administered ...

이 프로토콜은 직접 시각화를 통해 다섯 일 된 신생아 쥐 강아지의 기관에 연구 자료를 주입 할 수 있음을 보여줍니다. 이 방법은 직접 시각화를 통해 연구 물질 또는 약물을 기관으로 투여하는 신뢰성을 향상시킵니다. 기관으로의 주사를 피함으로써,이 방법은 통증을 줄이고, 더 중요한 것은 기관으로의 출혈을 감소시켜 생존을 향상시킵니다.동물의 적절한 위치, 성대를 시각화하기위한 운영 자가경의 올바른 사용 및 폐로의 투여 효능을 포함하여이 프로토콜을 수행하기 위해서는 훌륭한 기술의 개발이 필요합니다. 이 절차를 시연하는 것은 내 실험실의 박사후 연구원 인 Tara Sudhadevi와 대학원생 인 Alison Ha가 될 것입니다. 실험을 시작하기 전에 마취 된 5 일 된 쥐 강아지에서 꼬리와 페달 반사의 손실을 확인하고 실험실 라벨링 테이프를 사용하여 45도에서 기울어 진 평평한 플랫폼의 수핀 위치에서 강아지를 억제하십시오.무딘 포셉을 사용하여 혀를 한쪽으로 부드럽게 당기고 직경 두 밀리미터의 이토스코프 검경을 사용하여 후두가 보이도록 혀를 부드럽게 잡으십시오. 정확한 크기의 사경과 함께 작동하는 이토스코프를 사용하여 이토스코프의 확대 렌즈를 통해 성대를 찾습니다. 기관 내 점안을 위해, 0.9입방 센티미터의 공기와 함께 긴 각의 젤 로딩 피펫 팁이 장착된 1밀리리터 주사기를 싣고 30 ~ 50 마이크로리터의 관심 물질을 적재하십시오.피펫 팁을 30도 각도로 구부리고 적재된 피펫 팁을 스펙큘럼을 통해 성대를 넘어 약 두 밀리미터까지 삽입합니다. 주사기의 피스톤을 밀어 관심 물질과 공기를 사경을 통해 성대에 투여하십시오. 모든 물질이 전달되면 강아지를 댐과 재결합하기 전에 정기적 인 호흡 할 때까지 모니터링하여 섭씨 38도 통합 순환 유체 가열 패드에 강아지를 놓습니다.폐 조직 샘플 내에서 물질의 분포를 평가하려면 안락사 된 쥐 강아지의 가슴과 복부를 70 % 에틸 알코올로 닦아내고 멸균 기술을 사용하여 시각적 평가를위한 표준 프로토콜에 따라 폐를 제거하십시오. 이 연구에서, 기관내 점안 기술의 효능은 에반스 블루 염료를 주입한 다섯 일 된 래트 강아지로부터 수집된 폐 조직의 육안 검사에 의해 평가되었다. 점안은 거의 100 % 효율적이었으며, 염료가 투여 즉시 폐로 퍼지고 폐 조직의 모든 엽에 분포했습니다.염료는 폐 외부의 어떠한 조직에서도 관찰되지 않았으며, 폐에 관심있는 치료법의 선택적 전달에 사용되는 기술의 능력을 확인했다. 동물을 처음에는 단단한 표면 위에 정확한 각도로 배치하는 것은 작동 오토 스코프를 사용하여 성대를 시각화하는 다음 단계의 성공에 필수적입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

폐 질환을 치료하기 위해 신생아 설치류에 약물을 기관내 주입하기 위한 최소 침습적 방법

Intratracheal instillations 직접 폐에 solutes을 제공합니다. 이 절차는 폐암의 말초 지역에 instillate의 전달을 대상으로하고, 따라서 종종 폐포를 공부하기위한 연구에 통합됩니다. 우리는 생쥐에서 intratracheal instillations을 수행하기위한 세부적인 생존 프로토콜을 제공합니다.

마우스 폐에 Solutes 직접 Tracheal 떨어뜨림

우리는 마우스 태아에 bioactive 대리인의 intratracheal 관리에 대한 새로운 수술 방법을 개발했습니다. 배달 경로는 일반적으로 사용되는 내부 - 양수 주입보다 태아 마우스 폐를 타겟으로 더 효율적입니다. 이 절차는 마우스 모델에서 설명되지 않은 날짜로되어 있습니다.

태아 마우스 모델에서 Bioactive 에이전트의 Intratracheal 관리를위한 소설 외과 접근

이 비디오는 삽관 및 폐엽에 박테리아 현탁액 설치를 통해 면역 능력이 있는 설치류 모델에서 폐 감염이 확립되는 것을 보여줍니다. 이 모델은 면역 능력이 있는 동물에서 항균 효능 연구를 가능하게 합니다.

면역 역량이 있는 설치류 모델에서 폐렴 연쇄상구균의 기관지 내 주입

인간 폐 질환의 상태를 본뜬 모델의 사용은 특정 질환의 병태 생리학 및 / 또는 병인을 연구 및 치료 적 개입을 개발에 중요하다. 여기에 직접 마우스의 폐에 외인성 물질을 제공 할 수있는 비 침습적 인 기관 내 삽관 방법이 제시된다.

비 침습적 기관 내 삽관 마우스 폐의 병리학 및 생리학을 연구하는

시약의 기관 내 삽관 매개 (IMIT) 점안 호흡기 질환뿐만 아니라 폐에 직접 치료 시약을 주액하는 방법을 연구 우수한, 비 침습적 방법이다. 이 임상 시험에 적합한 신속하고 재현성이 높은 방법이다.

삽관 매개 기관 내 (IMIT) 떨어 뜨림 : 비 침습적, 폐 별 전달 시스템

이 문서에서는 삽관을 통해 마우스 기관에 직접 블레오 마이신 관리를위한 신속하고 간단한 방법을 제공합니다. 이러한 방법의 주요 장점은 마스터 높은 재현성 쉽고, 특수 장비 나 긴 회복 시간을 요구하지 않는다는 점이다.

마우스의기도 신속 삽관 용 개선 된 방법

이 문서의 목적은 실험실 마우스의 정교한 삽관 방법을 설명하는 것입니다. 이 방법은 비침습적이며, 따라서 호흡기 기능의 연속 모니터링 및 / 또는 폐로의 치료 의 주입을 필요로하는 연구에 이상적입니다.

마우스에서 반복된 Orotracheal 삽관

설명된 것은 기간 신생아 쥐의 장내 주사를 통해 중간기질 기질 세포(MSC)의 장내 이식을 수행하기 위한 프로토콜이다. 이 기술은 그들의 효험을 평가하기 위하여 신생아 쥐 폐로 줄기 세포 및 약의 납품을 위한 임상적으로 실행 가능한 선택권입니다.

신생아 쥐 기간에 줄기 세포의 내 치 통 주입

이 프로토콜은 마우스를 최적으로 배치하고 카메라 기반 검이경을 경구로 삽입하면 성문을 시각화하고, 조직 외상을 최소화하면서 신속한 삽관을 수행하며, 폐에 액체를 일관되게 전달할 수 있는 방법을 보여줍니다.

쥐의 폐에 액체를 전달하기 위한 개선된 방법론: 소비자 검이경을 사용한 삽관

본 연구에서는 기본 후두경을 사용하여 쥐에서 ALI를 발달시키는 비침습적 기기관내 삽입 기법이 입증되어 LPS가 폐에 정밀히 전달되도록 합니다. LPS는 후두경을 이용한 기관내관 을 통해 주입됩니다. 폐 손상의 규모는 여러 시점에서 평가됩니다.

설치류에서 급성 폐 손상을 유도하기 위한 비침습적 기관내 지포폴리당(Lipopolysaccharide) 투여

배우세요 신생아 설치류의 기관 내 약물 점적 최소 침습 기법을 통해 폐 질환 연구의 정확성과 생존율을 향상시키는 방법을. 직접 시각화 기술로 통증과 출혈을 최소화합니다.

폐 질환을 치료하기 위해 신생아 설치류에 약물을 기관 내 점적하는 최소 침습적 방법

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