Name: 살아있는 세포의 원형질막에서의 분자 확산 분석을위한 스팟 변이 형광 상관 분광법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 56 s
Description: 학습하세요 살아있는 세포의 원형질막에서 분자 확산을 측정하는 스팟 변이 형광 상관 분광법(svFCS)을 이용한 세포막 조직 연구 방법. 이 비침습적 기술은 높은 시공간 해상도로 콜레스테롤이 지질 뗏목 나노 도메인에 미치는 영향을 분석합니다.

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SB, SM 및 DM은 CNRS, Inserm 및 Aix-Marseille University의 기관 자금 지원과 프랑스 국립 연구 기관 (ANR-17-CE15-0032-01 및 ANR-18-CE15-0021-02)과 프랑스 "Investissement d'Avenir"(ANR-10-INBS-04 France-BioImaging, ANR-11-LABX-054 labex INFORM)의 프로그램 보조금으로 지원되었습니다. KW는 생명 공학 및 나노 기술 분야에서 학제 간 환경 박사 과정 인 "BioTechNan"을 인정합니다. EB는 프로젝트 번호 2016/21/D/NZ1/00285에 따라 폴란드 국립 과학 센터 (NCN)와 프랑스 정부 및 폴란드 프랑스 대사관의 재정 지원을 인정합니다. MŁ는 폴란드 개발부 (CBR POIR.02.01.00-00-0159/15-00/19)와 국립 연구 개발 센터 (Innochem POIR.01.02.00-00-0064/17)의 재정 지원을 인정합니다. TT는 프로젝트 번호 2016/21/B/NZ3/00343에 따라 폴란드 국립 과학 센터 (NCN)와 브로츠와프 생명 공학 센터 (KNOW)의 재정 지원을 인정합니다.

<ol><li>Engelman, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membranes+are+more+mosaic+than+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Membranes are more mosaic than fluid.</a> Nature. 438 (7068), 578-580 (2005).</li>
<li>Newton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+ABC+kinases+by+phosphorylation%3A+protein+kinase+C+as+a+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22The+Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">Regulation of the ABC kinases by phosphorylation: protein kinase C as a paradigm.</a> The Biochemical Journal. 370, Pt 2 361-371 (2003).</li>
<li>Marguet, D., Lenne, P. F., Rigneault, H., He, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+in+the+plasma+membrane%3A+how+to+combine+fluidity+and+order%5BTitle%5D)+AND+%22The+EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Dynamics in the plasma membrane: how to combine fluidity and order.</a> The EMBO Journal. 25 (15), 3446-3457 (2006).</li>
<li>Edidin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+state+of+lipid+rafts%3A+From+model+membranes+to+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biophysics+and+Biomolecular+Structure%22%5BJournal%5D)">The state of lipid rafts: From model membranes to cells.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. , (2003).</li>
<li>Lingwood, D., Simons, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+rafts+as+a+membrane-organizing+principle%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lipid rafts as a membrane-organizing principle.</a> Science. , (2010).</li>
<li>He, H. T., Marguet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+nanodomains+in+living+cell+membrane+by+fluorescence+correlation+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Reviews+of+Physical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Detecting nanodomains in living cell membrane by fluorescence correlation spectroscopy.</a> Annual Reviews of Physical Chemistry. 62, 417-436 (2011).</li>
<li>Rossy, J., Ma, Y., Gaus, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+organisation+of+the+cell+membrane%3A+Do+proteins+rule+lipids%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">The organisation of the cell membrane: Do proteins rule lipids.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 20 (1), 54-59 (2014).</li>
<li>Nicolson, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Fluid+-+Mosaic+Model+of+Membrane+Structure%3A+Still+relevant+to+understanding+the+structure%2C+function+and+dynamics+of+biological+membranes+after+more+than+40+years%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+-+Biomembranes%22%5BJournal%5D)">The Fluid - Mosaic Model of Membrane Structure: Still relevant to understanding the structure, function and dynamics of biological membranes after more than 40 years.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Biomembranes. 1838 (6), 1451-1466 (2014).</li>
<li>Fujiwara, T., Ritchie, K., Murakoshi, H., Jacobson, K., Kusumi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospholipids+undergo+hop+diffusion+in+compartmentalized+cell+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Phospholipids undergo hop diffusion in compartmentalized cell membrane.</a> The Journal of Cell Biology. 157 (6), 1071-1081 (2002).</li>
<li>Kusumi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paradigm+shift+of+the+plasma+membrane+concept+from+the+two-dimensional+continuum+fluid+to+the+partitioned+fluid%3A+high-speed+single-molecule+tracking+of+membrane+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biophysics+and+Biomolecular+Structure%22%5BJournal%5D)">Paradigm shift of the plasma membrane concept from the two-dimensional continuum fluid to the partitioned fluid: high-speed single-molecule tracking of membrane molecules.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 34, 351-378 (2005).</li>
<li>Destainville, N., Salomé, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+and+correction+of+systematic+errors+due+to+detector+time-averaging+in+single-molecule+tracking+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Quantification and correction of systematic errors due to detector time-averaging in single-molecule tracking experiments.</a> Biophysical Journal. 90 (2), 17-19 (2006).</li>
<li>Wieser, S., Moertelmaier, M., Fuertbauer, E., Stockinger, H., Schütz, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Un%29confined+diffusion+of+CD59+in+the+plasma+membrane+determined+by+high-resolution+single+molecule+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Un)confined diffusion of CD59 in the plasma membrane determined by high-resolution single molecule microscopy.</a> Biophysical Journal. 92 (10), 3719-3728 (2007).</li>
<li>Axelrod, D., Koppel, D. E., Schlessinger, J., Elson, E., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mobility+measurement+by+analysis+of+fluorescence+photobleaching+recovery+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Mobility measurement by analysis of fluorescence photobleaching recovery kinetics.</a> Biophysical Journal. , (1976).</li>
<li>Petrášek, Z., Schwille, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+measurement+of+diffusion+coefficients+using+scanning+fluorescence+correlation+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Precise measurement of diffusion coefficients using scanning fluorescence correlation spectroscopy.</a> Biophysical Journal. , (2008).</li>
<li>Elson, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((40+Years+of+FCS%3A+How+it+all+began%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">40 Years of FCS: How it all began.</a> Methods in Enzymology. , (2013).</li>
<li>Elson, E. L., Magde, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+correlation+spectroscopy.+I.+Conceptual+basis+and+theory%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers%22%5BJournal%5D)">Fluorescence correlation spectroscopy. I. Conceptual basis and theory.</a> Biopolymers. , (1974).</li>
<li>Magde, D., Elson, E. L., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+correlation+spectroscopy.+II.+An+experimental+realization%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers%22%5BJournal%5D)">Fluorescence correlation spectroscopy. II. An experimental realization.</a> Biopolymers. , (1974).</li>
<li>Schwille, P., Haupts, U., Maiti, S., Webb, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+dynamics+in+living+cells+observed+by+fluorescence+correlation+spectroscopy+with+one-+and+two-photon+excitation%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Molecular dynamics in living cells observed by fluorescence correlation spectroscopy with one- and two-photon excitation.</a> Biophysical Journal. , (1999).</li>
<li>Bouchaud, J. P., Georges, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anomalous+diffusion+in+disordered+media%3A+Statistical+mechanisms%2C+models+and+physical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Physics+Reports%22%5BJournal%5D)">Anomalous diffusion in disordered media: Statistical mechanisms, models and physical applications.</a> Physics Reports. , (1990).</li>
<li>Yechiel, E., Edidin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micrometer-scale+domains+in+fibroblast+plasma+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Micrometer-scale domains in fibroblast plasma membranes.</a> Journal of Cell Biology. 105 (2), 755-760 (1987).</li>
<li>Salomé, L., Cazeils, J. L., Lopez, A., Tocanne, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+membrane+domains+by+FRAP+experiments+at+variable+observation+areas%5BTitle%5D)+AND+%22European+Biophysics+Journal%22%5BJournal%5D)">Characterization of membrane domains by FRAP experiments at variable observation areas.</a> European Biophysics Journal. 27 (4), 391-402 (1998).</li>
<li>Niv, H., Gutman, O., Kloog, Y., Henis, Y. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+K-Ras+and+H-Ras+display+different+interactions+with+saturable+nonraft+sites+at+the+surface+of+live+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Activated K-Ras and H-Ras display different interactions with saturable nonraft sites at the surface of live cells.</a> The Journal of Cell Biology. 157 (5), 865-872 (2002).</li>
<li>Wawrezinieck, L., Rigneault, H., Marguet, D., Lenne, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+correlation+spectroscopy+diffusion+laws+to+probe+the+submicron+cell+membrane+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Fluorescence correlation spectroscopy diffusion laws to probe the submicron cell membrane organization.</a> Biophysical Journal. 89 (6), 4029-4042 (2005).</li>
<li>Saxton, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+corralation+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Fluorescence corralation spectroscopy.</a> Biophysical Journal. , (2005).</li>
<li>Lenne, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+molecular+confinement+in+the+plasma+membrane+by+microdomains+and+the+cytoskeleton+meshwork%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Dynamic molecular confinement in the plasma membrane by microdomains and the cytoskeleton meshwork.</a> EMBO Journal. 25 (14), 3245-3256 (2006).</li>
<li>Ruprecht, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+contractility+triggers+a+stochastic+switch+to+fast+amoeboid+cell+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cortical contractility triggers a stochastic switch to fast amoeboid cell motility.</a> Cell. , (2015).</li>
<li>Billaudeau, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+the+plasma+membrane+organization+in+living+cells+by+spot+variation+fluorescence+correlation+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Probing the plasma membrane organization in living cells by spot variation fluorescence correlation spectroscopy.</a> Methods in Enzymology. 519, 277-302 (2013).</li>
<li>Mailfert, S., Hamon, Y., Bertaux, N., He, H. T., Marguet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+user%27s+guide+for+characterizing+plasma+membrane+subdomains+in+living+cells+by+spot+variation+fluorescence+correlation+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">A user's guide for characterizing plasma membrane subdomains in living cells by spot variation fluorescence correlation spectroscopy.</a> Methods in Cell Biology. 139, 1-22 (2017).</li>
<li>Rege, T. A., Hagood, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thy-1%2C+a+versatile+modulator+of+signaling+affecting+cellular+adhesion%2C+proliferation%2C+survival%2C+and+cytokine%2Fgrowth+factor+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+-+Molecular+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Thy-1, a versatile modulator of signaling affecting cellular adhesion, proliferation, survival, and cytokine/growth factor responses.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Cell Research. , (2006).</li>
<li>Cahuzac, N., et al. Fas ligand is localized to membrane rafts, where it displays increased cell death-inducing activity. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCahuzac%2C+N+%22Blood%22">Blood</a>. , (2006).</li>
<li>Guia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confinement+of+activating+receptors+at+the+plasma+membrane+controls+natural+killer+cell+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Signaling%22%5BJournal%5D)">Confinement of activating receptors at the plasma membrane controls natural killer cell tolerance.</a> Science Signaling. 4 (167), 21(2011).</li>
<li>Blouin, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycosylation-dependent+IFN-%CE%B3R+partitioning+in+lipid+and+actin+nanodomains+is+critical+for+JAK+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Glycosylation-dependent IFN-γR partitioning in lipid and actin nanodomains is critical for JAK activation.</a> Cell. 166 (4), 920-934 (2016).</li>
<li>Chouaki-Benmansour, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphoinositides+regulate+the+TCR%2FCD3+complex+membrane+dynamics+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Phosphoinositides regulate the TCR/CD3 complex membrane dynamics and activation.</a> Scientific Reports. , (2018).</li>
<li>Wawrezinieck, L., Lenne, P. F., Marguet, D., Rigneault, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+correlation+spectroscopy+to+determine+diffusion+laws%3A+application+to+live+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Biophotonics+Micro-+and+Nano-Imaging%22%5BJournal%5D)">Fluorescence correlation spectroscopy to determine diffusion laws: application to live cell membranes.</a> Biophotonics Micro- and Nano-Imaging. , (2004).</li>
<li>Masuda, A., Ushida, K., Okamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+fluorescence+correlation+spectroscopy+enabling+direct+observation+of+spatiotemporal+dependence+of+diffusion+constants+as+an+evidence+of+anomalous+transport+in+extracellular+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">New fluorescence correlation spectroscopy enabling direct observation of spatiotemporal dependence of diffusion constants as an evidence of anomalous transport in extracellular matrices.</a> Biophysical Journal. , (2005).</li>
<li>Humpolíčková, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+diffusion+laws+within+cellular+membranes+by+Z-scan+fluorescence+correlation+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Probing diffusion laws within cellular membranes by Z-scan fluorescence correlation spectroscopy.</a> Biophysical Journal. , (2006).</li>
<li>Benda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+determine+diffusion+coefficients+in+planar+phospholipid+systems+by+confocal+fluorescence+correlation+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">How to determine diffusion coefficients in planar phospholipid systems by confocal fluorescence correlation spectroscopy.</a> Langmuir. , (2003).</li>
<li>Ganguly, S., Chattopadhyay, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+depletion+mimics+the+effect+of+cytoskeletal+destabilization+on+membrane+dynamics+of+the+serotonin1A+receptor%3A+A+zFCS+study%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Cholesterol depletion mimics the effect of cytoskeletal destabilization on membrane dynamics of the serotonin1A receptor: A zFCS study.</a> Biophysical Journal. , (2010).</li>
<li>Wenger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusion+analysis+within+single+nanometric+apertures+reveals+the+ultrafine+cell+membrane+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Diffusion analysis within single nanometric apertures reveals the ultrafine cell membrane organization.</a> Biophysical Journal. 92 (3), 913-919 (2007).</li>
<li>Manzo, C., Van Zanten, T. S., Garcia-Parajo, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+fluorescence+correlation+spectroscopy+on+intact+living+cell+membranes+with+NSOM+probes%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Nanoscale fluorescence correlation spectroscopy on intact living cell membranes with NSOM probes.</a> Biophysical Journal. , (2011).</li>
<li>Regmi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planar+optical+nanoantennas+resolve+cholesterol-dependent+nanoscale+heterogeneities+in+the+plasma+membrane+of+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Planar optical nanoantennas resolve cholesterol-dependent nanoscale heterogeneities in the plasma membrane of living cells.</a> Nano Letters. , (2017).</li>
<li>Mueller, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FCS+in+STED+microscopy%3A+Studying+the+nanoscale+of+lipid+membrane+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">FCS in STED microscopy: Studying the nanoscale of lipid membrane dynamics.</a> Methods in Enzymology. , (2013).</li>
<li>Sezgin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+nanoscale+diffusion+dynamics+in+cellular+membranes+with+super-resolution+STED-FCS%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Measuring nanoscale diffusion dynamics in cellular membranes with super-resolution STED-FCS.</a> Nature Protocols. , (2019).</li>
<li>Wang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+straightforward+STED-background+corrected+fitting+model+for+unbiased+STED-FCS+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">A straightforward STED-background corrected fitting model for unbiased STED-FCS analyses.</a> Methods. , (2018).</li>
<li>Veerapathiran, S., Wohland, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+imaging+FCS+diffusion+law+in+the+presence+of+multiple+diffusive+modes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">The imaging FCS diffusion law in the presence of multiple diffusive modes.</a> Methods. , (2018).</li>
<li>Gupta, A., Phang, I. Y., Wohland, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+hop+or+not+to+hop%3A+exceptions+in+the+FCS+diffusion+law%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">To hop or not to hop: exceptions in the FCS diffusion law.</a> Biophysical Journal. , (2020).</li>
</ol>

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여기에서는 FCS 확산법 분석 덕분에 살아있는 세포에서 원형질막 조직의 역학을 해독하는 강력한 실험 접근법 인 표준 형광 현미경에서 svFCS 모듈의 구현을 설명했습니다. 개념적으로, svFCS는 간단한 원리에 기초한다: 조명 영역(23)의 크기를 변화시키면서 시간 영역에서의 형광의 상관관계 측정. 이 전략은 현미경 측정에서 나노스코픽 정보를 추론하는 데 중요한 역할을 했으며, 이는 정상 상태(25) 및 생리적 과정 30,31,32,33에서 원형질막 조직에 기여하는 주요 물리화학적 요소를 해독하는 데 도움이 된다. 전체적으로, 이러한 svFCS 분석은 다양한 세포 유형에서 지질 의존성 나노 도메인의 존재와 다른 신호 전달 사건을 튜닝하는 데 직접적인 영향을 미친다는 것을 명확하게 보여줍니다.
이 프레임 워크 내에는 광자 예산을 최적화하고 광학 수차를 최소화하기 위해 svFCS 설정을 구축하는 동안 고려해야 할 몇 가지 광학적 측면이 있습니다. 따라서 svFCS 측정을 수행할 때 튜브 렌즈를 제거할 수 있는 현미경을 사용하는 것이 좋습니다. 또한, 단일 아이리스는 svFCS 설정에서 중요한 역할을 합니다: 목표물의 뒤쪽 조리개에서 빔 크기를 변경하여 효과적인 허리 크기(즉, 유효 여기 볼륨)를 직접 변경합니다. 빔 직경은 가장 작은 허리 크기(34)를 얻기 위해 객관적인 뒷동공에 맞아야 한다. 허리 크기를 조정하는 데 도움이되는이 옵션은 광자 예산의 최적화를 보장하고 구현하기 쉽습니다. 마지막으로, 최소 수의 광학 부품이 광 경로를 따라 사용됩니다. 시스템이 덜 복잡할수록 손실되는 광자가 줄어 듭니다. 이러한 모든 옵션은 svFCS 실험의 견고성을 크게 향상시킵니다.
프로토콜 자체와 관련하여 몇 가지 중요한 단계를 고려해야합니다. 가장 중요한 것은 성공적인 svFCS 측정에 중요한 광 경로의 적절한 정렬입니다 (프로토콜, 섹션 2). 이는 2 nM Rh6G 용액으로부터의 형광 신호를 분석함으로써 쉽게 확인할 수 있으며, 이는 300 μW 레이저 조명 하에서 ∼200 kHz이어야 한다. 모든 홍채를 열어야 하며 ACF는 중요한 진폭(일반적으로 G0~1.5–2.0)을 가져야 합니다. 또 다른 중요한 점은 세포와 svFCS 분석을위한 준비에 관한 것입니다 (프로토콜, 섹션 4-8). 그들의 밀도는 관찰 될 분리 된 세포가 분석에 사용할 수 있도록 적응되어야합니다. 비부착성 세포는 폴리-L-라이신 용액을 사용하여 챔버형 커버글라스 상에 고정화되어야 한다. 세포 표지로부터의 형광 신호는 너무 강하지 않아야하며, 또는 맞추기 어려운 매우 평평한 ACF를 초래할 것이며, 적합 매개 변수는 중요한 오류로 부담됩니다. 또한, 세포의 비균질한 표지 및 형광 응집체는 svFCS 측정을 해석하기가 매우 어렵게 만든다. 마지막으로, 콜레스테롤 산화 효소 처리는 세포 생존율에 영향을 미치며, svFCS 분석은 치료 후 한 시간을 초과해서는 안됩니다. 또한 지지체에 부착되지 않기 때문에 상부 원형질막으로부터의 형광 변동을 기록하는 것이 더 좋으며, 지지체와의 물리적 상호 작용으로 인해 분자의 확산이 방해받을 위험이 없습니다.
svFCS 기술은 검출량을 조정하기 위한 양식의 다양성 때문에 다양한 접근법에서 사용하기 위한 충분한 진보가 있었고, 살아있는 세포에서 다양한 생물학적 과정을 연구할 수 있게 되었다. 여기 부피의 크기를 조정하는 대안은 가변 빔 확장기(35)를 사용하는 것이다. 또한, z 방향(36)을 따라 원형질막의 인터셉트로부터 형광 신호를 기록함으로써 조명 영역의 크기를 간단하게 변조할 수도 있다. 이것은 확산 법칙37,38을 도출하기 위해 이론적 틀이 개발 된 표준 공초점 현미경에서 수행 할 수 있습니다.
svFCS 방법이 원형질막의 불균질한 측면 조직의 특성화에 필요한 시공간 분해능을 제공하지만, 기하학적 감금 모드는 상호 배타적이지 않습니다. 한 방향 또는 다른 방향에서 t0의 편차는 배타적으로 지배적인 감금 모드(25)를 드러낸다. 더욱이, 본 svFCS 방법의 또 다른 중요한 한계는 고전적인 광학 회절 한계 (∼200 nm)로부터 기인한다. 이것은 의심할 여지없이 세포 원형질막 내에 분자를 가두는 도메인보다 더 크다. 따라서, 감금의 분석은 확산 법칙으로부터 외삽된 t0 값으로부터 추론된다.
이러한 단점은 대체 방법을 구현함으로써 극복되었습니다. 초기에, 나노애퍼처로 뚫린 금속 필름을 사용하는 것은 매우 작은 막 영역(즉, 75nm와 250nm 사이에서 변하는 반경의 단일 나노메트릭 개구들의 광학 회절 한계 이하)39를 조명할 수 있는 가능성을 제공하였다. 단리된 도메인 조직에 대한 이론적 확산 법칙으로부터 예측된 전이 정권이 따라서 보고되었고, 나노메트릭 멤브레인 이질성의 특징적인 크기의 정제와 지질 의존성 나노도메인39에 의해 점유된 표면적의 정량적 추정을 허용하였다. 대안적으로, 나노메트릭 조명은 또한 근거리 스캐닝 광학 현미경(40) 또는 평면 광학 나노안테나(41)를 사용하여 개발되었다. 보다 최근에, 자극 방출 고갈(STED)과 FCS의 결합은 매우 높은 공간 분해능으로 확산 법칙을 문서화하는 강력하고 민감한 도구를 제공하였다. 이 STED-FCS는 단기간 내에 발생하는 나노스케일의 분자 확산 특성에 대한 액세스를 허용하여, 원형질막(42,43)에서 지질 프로브의 동적 조직에 대한 연구를 가능하게 한다. 그러나, STED 공정에서 형광의 불완전한 억제는 FCS에서의 자기상관곡선의 분석에 도전한다.
이러한 어려움을 극복하기 위해 새로운 피팅 모델이 개발되어 확산 시간 및 평균 분자 수 측정(44)의 정확도가 향상되었다. 마지막으로, 원형질막에서의 느린 분자 확산을 위해, svFCS 원리는 이미지 상관 분광법(45)에 의해 기록된 데이터에 적용될 수 있다. 최근에, 원자력 현미경 (AFM)과 이미징 총 내부 반사-FCS (ITIR-FCS)의 결합이 나노 도메인(46)의 고밀도로 인해 원형질막, 특히 퍼콜레이션 임계 막 구성 근처에서 분자 확산을 방해하는 메커니즘의 성질의 개선에 기여한다는 것이 입증되었다.
결론적으로, svFCS에 의한 확산 법칙을 확립하는 것은 동적 집단 지질 및 막 단백질의 연관성에 의해 생성 된 국소 이질성을 추론하기위한 실험 증거를 제공했다. Wohland와 동료(46)가 언급 한 바와 같이, "FCS 확산 법 분석은 동적 정보로부터 해결 한계 이하의 구조적 및 조직적 특징을 추론하는 데 유용한 도구로 남아 있습니다." 그럼에도 불구하고, 우리는 원형질막에서 발생하는 분자 사건의 역학에 대한 더 나은 이해를 허용해야하는 확산 법칙의 해석을 개선하기위한 새로운 모델을 개발해야합니다.

원형질막 조직의 복잡성 세포막 조직에 대한 현재의 이해는 몇 가지 측면1을 고려해야합니다. 첫째, 복합 지질 조성은 세포 유형뿐만 아니라 단일 세포 (막 소기관 / 원형질막) 내에서도 다양합니다. 게다가, 관련 또는 내재적 막 단백질은 대부분 동적 다량체 복합체로 조직되며, 막의 외부로 연장되는 큰 도메인이 막횡단 도메인 단독보다 훨씬 큰 면적을 차지한다. 더욱이, 막-관련 단백질은 단백질 기능을 조절하는데 역할을 하는 특이적 지질-결합 또는 지질-상호작용 능력을 나타낸다. 이들은 지질의 국소 조성 및 접근성에 직접적으로 의존한다2.
마지막으로, 막 단백질의 본질적인 비대칭 구조와 지질의 분포로 인해 두 막 전단지 사이에서 상당한 수준의 비대칭이 관찰됩니다. 실제로, 합성과 가수분해 사이의 지질 대사 균형은 전단지 사이의 지질 플립 플롭과 결합하여 그러한 비대칭 분포를 생성합니다. 이중층을 가로지르는 임의의 수송은 멤브레인의 소수성 내부를 통해 극성 헤드 그룹을 이동시키는 데 필요한 자유 에너지에 의해 제약되기 때문에, 그것은 일반적으로 선택적 수송기에 의해 보조된다. 각 세포 유형에 대해 비대칭은 단단히 유지되는 경향이 있습니다. 전체적으로, 이들 인자는 원형질막(3,4)의 측방향 불균질성 또는 구획화에 기여한다.
우리는 이중층 내부 및 전반에 걸친 고유 한 분자 확산을 고려하여 원형질막의 이러한 표현을 풍부하게하며, 이는 열 번째에서 수백 나노 미터 및 마이크로 초에서 초까지의 규모로 동적 측면 이질성에 기여합니다. 예를 들어, 지질 의존성 막 나노 도메인 - 콜레스테롤로 정의 된 소위 지질 뗏목과 스핑고지질이 풍부한 신호 전달 플랫폼 -은 원형질막 5,6의 구획화에 기여합니다. 그러나, 막 조직에 대한 현재의 견해는 지질 뗏목에만 국한되지 않는다. 막 나노도메인은 조성, 기원 및 기능에서 더 복잡하고 이질적이다. 여전히, 원형질막에서의 그들의 존재는 긴밀하게 조정되어야 하고, 단백질과 지질 사이의 동적 상호작용은 막 나노 도메인 1,3,7,8의 공간 분포 및 화학적 변형에 중요한 것으로 보인다.
svFCS 원리와 원형질막의 조직을 조사하기 위한 그것의 응용 주로 생물물리학적 기술을 통해 막 도메인의 분석에서 많은 진전이 이루어졌지만, 원형질막의 국소 조직을 지시하는 결정인자는 적절한 공간적, 시간적 분해능으로 정제될 필요가 있다. 개별 분자 추적에 기반한 결정인자는 우수한 공간 정밀도를 제공하고다양한 동작 모드의 특성화를 허용하지만 9,10,11,12의 다양한 모드의 특성화를 허용하지만 고전적인 낮은 카메라 프레임 속도로 제한된 시간 해상도를 가지며 상당한 수의 궤적을 기록하기 위해 더 많은 실험적 노력이 필요합니다. 대안적으로, 막 성분의 확산 계수는 광표백 후 형광 회수 (FRAP)13 또는 형광 상관 분광법 (FCS)14에 의해 평가될 수 있다. 후자는 주로 높은 감도와 선택성, 현미경 탐지량, 낮은 침습성 및 넓은 동적 범위15로 인해 더 많은 주목을 받았습니다.
FCS의 개념적 기초는 약 50 년 전16,17 년 전에 Magde와 동료들에 의해 소개되었습니다. 이는 높은 시간적 분해능(μs에서 s까지)을 갖는 형광 방출의 변동을 기록하는 것에 기초한다18. 현대 버전에서, 살아있는 세포에서의 측정은 관심 영역 내에 위치된 작은 공초점 여기 부피 (~0.3 펨톨리터)에 의해 수행된다 (예를 들어, 원형질막에서); 관찰 부피의 안팎으로 들어가는 형광 분자를 확산시킴으로써 생성된 형광 신호는 매우 높은 시간적 분해능(즉, 검출기 상의 각 광자의 도착 시간)으로 수집된다. 이어서, 신호는 자기상관 함수(ACF)를 생성하기 위해 계산되고, 이로부터 분자가 초점 부피 내에 머무르는 평균 시간td(확산 시간)가 추출되고, 입자의 평균 수와 함께, ACF의 진폭에 반비례하는 관찰 부피에 존재하는 (N)이 추출된다. 이 마지막 파라미터는 관찰 부피 내의 분자 농도에 대한 유용한 정보일 수 있다.
그 이후로, 바이오 포토닉스에서 빠르게 발전하는 계측 덕분에 점점 더 많은 FCS 양식이 구현되어 살아있는 시스템에서 발생하는 역동적 인 현상에 대한 설명이 가능해졌습니다. 그럼에도 불구하고, 분자 종은 확산 계수 값의 더 겹치는 분포를 경험할 것이며, 이는 일반적으로 분자가 시간19에서 비선형 관계로 확산되는 변칙적 확산 특성에 의해 반영되며,이 변칙적 인 하위 확산의 생물학적 의미를 식별하는 데 어려움이 있습니다. 과거에는 FRAP에 의한 분자 확산을 단지 하나의 영역이 아닌 다양한 크기의 영역으로부터 기록함으로써 이러한 어려움이 다소 극복되어 추가적인 공간 정보를 제공하였다. 이것은 예를 들어, 막 마이크로도메인20,21,22의 개념화를 가능하게 하였다.
FCS 측정(즉, 소위 스폿 변동 형광 상관 분광법(svFCS))에 대한 이 전략의 번역은 관찰의 초점 부피의 크기를 변화시킴으로써 확립되었고, 형광의 변동이 상이한 공간 스케일(23)에 기록될 수 있게 하였다. 따라서, svFCS 접근법은 연구된 분자의 분자 확산 모드 및 막 분할의 유형(단리된 대 인접 도메인(24))의 확인 및 결정을 허용하는 간접적인 공간 정보를 제공한다. 확산 시간td를 허리(ω) 값에 의해 정의된 다양한 공간 스케일의 함수로서 플로팅함으로써, 이 경우23,25의 검출 빔 반경 크기에 대응하나, 주어진 생리학적 조건에서 주어진 분자의 확산 법칙을 특성화할 수 있다. 따라서, svFCS는 시간 영역(26)에서 단일 입자 추적에 대한 완벽한 아날로그이다. 브라운 확산 제약 하에서, 확산 시간td와 허리 ω 사이의 엄격한 선형 관계를 기대해야 한다(그림 1)23,25. 이 계획으로부터의 확산 법칙의 편차의 기원은 세포 골격 메쉬 워크, 분자 우집, 나노 도메인에서의 동적 분할 또는 이들 및 기타 효과의 임의의 조합과 같은 비독점적 인 이유에 기인 할 수 있으며 (그림 1), 실험적으로 테스트 할 필요가 있습니다25.
여기에서는 처음부터 구축된 맞춤형 svFCS 광학 시스템을 매일 사용하는 데 필요한 모든 제어 체크포인트를 제공하며, 이는 실험적 접근 방식에 대한 이전 프로토콜 리뷰27,28을 보완합니다. 또한, 개념 증명으로서, 우리는 지질-래프트 나노도메인29에 국한된 것으로 알려진 원형질막 글리코실포스파티딜이노시톨-앵커드 단백질인 Thy1-GFP에 대한 svFCS 확산법(DL)의 확립을 위한 설정, 세포의 준비, 데이터 수집 및 분석의 교정에 관한 지침을 제공한다. 마지막으로, 우리는 콜레스테롤 옥시다제 처리에 의한 지질 - 뗏목 나노 도메인의 부분적 불안정화가 Thy1-GFP의 확산 특성에 어떻게 영향을 미치는지 보여줍니다. 또한 svFCS 설정을 처음부터 빌드하는 방법에 대한 자세한 설명은 보충 자료에 나와 있습니다.

<table><tbody><tr><td></td><td>SM1-나사산 리테이닝 링용 Aligment tool 스패너 렌치</td><td>Thorlabs</td><td>SPW602</td></tr><tr><td>Avalanche Photodiode 및 Single Photon Counting Module (SPCM)</td><td>Single-Photon Counting Module, Avalanche Photodiode</td><td>Excelitas</td><td>SPCM-AQRH-15</td></tr><tr><td></td><td>BNC 50 &Omega; 플러그 to 50 &Omega; 플러그 리드 2 m</td><td>RS Components</td><td>742-4315</td></tr><tr><td></td><td>동축 케이블 415 Cinch 커넥터, RG-316, 50 &Omega; 커넥터 포함, 1.22m, RoHS2</td><td>RS 구성 요소</td><td>885-8172</td></tr><tr><td></td><td>티 50&Omega; RF 어댑터 BNC 플러그-BNC 소켓 0 &rarr; 1GHz</td><td>RS 구성 요소</td><td>546-4948</td></tr><tr><td></td><td>Brennenstuhl 2.5 m, 8 소켓 유형 E &ndash; 프랑스어 확장 리드, 230 V</td><td>RS 구성 요소</td><td>768-5500</td></tr><tr><td></td><td>마스코트, 6W 플러그인 전원 공급 장치 5V dc, 1.2A, 1 출력 스위치 모드 전원 공급 장치, 유형 C</td><td>RS 구성 요소</td><td>452-8394</td></tr><tr><td></td><td>Crystek CCSMACL-MC-24 참조 발진기 전원 케이블 RF 어댑터</td><td>RS 구성 요소</td><td>792-4079</td></tr><tr><td>형광 필터링</td><td>535/70 ET 대역통과, AOI 0&deg; 크로마 직경 25 mm</td><td>AHF 필터</td><td>F47-539</td></tr><tr><td></td><td>레이저 빔스플리터 zt488 RDC, AOI 45&deg; Chroma 25.5 x 36 x 1 mm</td><td>AHF 필터</td><td>F43-088</td></tr><tr><td></td><td>496/LP BrightLine HC 롱패스 필터, AOI 0°C; 크로마 직경 25</td><td>AHF 필터</td><td>F37-496</td></tr><tr><td>하드웨어 상관기</td><td>80MHz 디지털 상관기</td><td>Correlator.com</td><td>Flex02-12D</td></tr><tr><td>레이저</td><td>LASER LASOS LDM-XT 광섬유 결합, 488 nm, 65 mW</td><td>Lasos</td><td>BLD-XT 488100</td></tr><tr><td>레이저 안전</td><td>고성능 블랙 마스킹 테이프, 1" x 180' (25 mm x 55 m) 롤</td><td>Thorlabs</td><td>T743-2.0</td></tr><tr><td></td><td>렌즈 티슈, 소책자당 25매, 소책자 5</td>개 <td>Thorlabs</td><td>MC-5</td></tr><tr><td></td><td>레이저 보안경, 밝은 주황색 렌즈, 48% 가시광선 투과</td>율 <td>Thorlabs</td><td>LG3B</td></tr><tr><td>현미경</td><td>Zeiss Axiovert 200M 전동 도립 형광 현미경 미세 및 거친 초점, 반사경 터렛 회전, 대물렌즈 노즈피스 회전, 카메라 포트 전환 및 내부 광 셔터</td><td>Carl Zeiss</td><td></td></tr><tr><td></td><td>C-Apochromat 40x/1,2 W Kor.FCS (D=0.14-0.19 mm) (WD=0.28 mm at D=0.17 mm)용으로 선택됨, UV-VIS-IR</td><td>Carl Zeiss</td><td>421767-9971-711</td></tr><tr><td></td><td>어댑터 W0.8 / M27x0.75 H "5"</td><td>Carl Zeiss</td><td>000000-1698-345</td></tr><tr><td></td><td>Middle ring W0.8 - W0.8 H "5"</td><td>Carl Zeiss</td><td>000000-1698-347</td></tr><tr><td>광학 경로</td><td>D25.4mm Mirror, Protected Silver</td><td>Thorlabs</td><td>PF10-03-P01</td></tr> (영문)<tr><td></td><td>D25.4mm, F=60.0.mm, 보이는 Achromat</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-060-A</td></tr><tr><td></td><td>D25.4mm, F=35.0.mm, 보이는 Achromat</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-035-A</td></tr><tr><td></td><td>25 &micro; m 장착 핀홀</td><td>Thorlabs</td><td>P25S I</td></tr><tr><td></td><td>25.4mm 장착 제로, 주문 1/2 Waveplate 488 nm</td><td>Thorlabs</td><td>WPH10M-488 (HWP)</td></tr><tr><td></td><td>20mm 편광 빔스플리터 큐브 420-680 nm</td><td>Thorlabs</td><td>PBS201</td></tr><tr><td></td><td>회전 스테이지 56 mm x 26 mm 나사산 ID</td><td>Thorlabs</td><td>RSP1/M</td></tr><tr><td></td><td>52 mm x 52 mm 동역학 플랫폼 마운트</td><td>Thorlabs</td><td>KM100B/M</td></tr><tr><td></td><td>조정 가능한 프리즘 클램프</td><td>Thorlabs</td><td>PM3/M</td></tr><tr><td></td><td>빔 블록 - 활성 영역 19mm x 38mm</td><td>Thorlabs</td><td>LB1/M</td></tr><tr><td></td><td>조리개 다이어프램 1mm - 25mm 조리개</td><td>Thorlabs</td><td>ID25/M</td></tr><tr><td></td><td>왼손잡이용 동역학적 원통형 렌즈 마운트</td><td>Thorlabs</td><td>KM100CL</td></tr><tr><td></td><td>1" 광학 홀더, M4 탭</td><td>Thorlabs</td><td>MFF101/M</td></tr><tr><td></td><td>1" 스택 가능한 렌즈 튜브</td><td>Thorlabs</td><td>SM1L03</td></tr><tr><td></td><td>스택 가능한 렌즈 마운트는 1" 광학 사용 가능한 깊이 &frac12;</td><td>Thorlabs</td><td>SM1L05</td></tr><tr><td></td><td>1"광학 사용 가능한 깊이 2"용 스택형 렌즈 마운트</td> <td>Thorlabs</td><td>SM1L20</td></tr><tr><td></td><td>소형 광학 레일 600mm, 메트릭</td><td>Thorlabs</td><td>RLA600/M</td></tr><tr><td></td><td>소형 광학 레일 75mm, 메트릭</td><td>Thorlabs</td><td>RLA075/M</td></tr><tr><td></td><td>소형 광학 레일 150mm, 메트릭</td><td>Thorlabs</td><td>RLA150/M</td></tr><tr><td></td><td>레일 캐리어, 카운터보어 홀 1"x 1"</td><td>Thorlabs</td><td>RC1</td></tr><tr><td></td><td>레일 캐리어, 수직 도브테일</td><td>Thorlabs</td><td>RC3</td></tr><tr><td></td><td>고정밀 번역 렌즈 마운트 1인치</td><td>Thorlabs</td><td>LM1XY/M</td></tr><tr><td>&frac12; " (12mm) 도브테일 번역 스테이지</td><td>Thorlabs</td><td>DT12/M</td>레일 클램프 Thorlabs CL6<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>메트릭 XYZ 변환 스테이지 (PT102 포함)</td> <td>Thorlabs</td><td>PT3 / M</td></tr><tr><td></td><td>블랙 고무 직물</td><td>Thorlabs</td><td>BK5</td></tr><tr><td></td><td>볼 드라이버 키트 / 6 도구</td><td>Thorlabs</td><td>BD-KIT / M</td></tr><tr><td></td><td>어댑터 외부 M6 x 1.0 스레드 및 외부 M4 x 0.7 스레드</td><td>Thorlabs</td><td>AP6M4M</td></tr><tr><td></td><td>장착베이스, 25mm x 58mm x 10mm, 5 팩</td><td>Thorlabs</td><td>BA1S / M-P5</td></tr><tr><td></td><td>25.4mm 광학</td><td>Thorlabs</td><td>LMR1/M</td></tr><tr><td></td><td>SM1 FC/APC 어댑터</td>용 <td>렌즈 마운트 Thorlabs</td><td>SM1FCA</td></tr><tr><td></td><td>1인치 광학</td><td>Thorlabs</td><td>KM100</td></tr><tr><td></td><td>실리콘 파워 헤드, 400-1100nm, 50mW</td><td>Thorlabs</td><td>S120C</td></tr><tr><td></td><td>12.7mm 포스트 홀더, 스프링 장착 육각 잠금 나비 나사, L=50mm, 5팩</td><td>Thorlabs</td><td>PH50/M-P5</td></tr><tr><td></td><td>포스트 홀더, 스프링 장착 육각 잠금 나비 나사, L=20mm</td><td>Thorlabs</td><td>PH20/M</td></tr><tr><td></td><td>12.7mm x 50mm 스테인리스 스틸 광학 포스트, M4 스터드, M6 탭 구멍, 5팩</td><td>Thorlabs</td><td>TR50/M-P5</td></tr><tr><td></td><td>12.7mm x 75mm 스테인리스 스틸 광학 포스트, M4 스터드, M6 탭 구멍, 5팩</td><td>Thorlabs</td><td>TR75/M-P5</td></tr><tr><td></td><td>USB 전력 및 에너지 미터 인터페이스</td><td>Thorlabs</td><td>PM100USB</td></tr><tr><td></td><td>12.7mm x 30mm 스테인리스 스틸 광학 포스트, M4 스터드, M6 탭 구멍</td><td>Thorlabs</td><td>TR30/M</td></tr><tr><td></td><td>12.7mm x 20mm 스테인리스 스틸 광학 포스트, M4 스터드, M6 탭 구멍</td><td>Thorlabs</td><td>TR20/M</td></tr><tr><td></td><td>길이 750mm 구조 레일(감지 상자)</td><td>Thorlabs</td><td>XE25L750/M</td></tr><tr><td></td><td>350mm 길이의 구조용 레일(감지 상자)</td><td>Thorlabs</td><td>XE25L350/M</td></tr><tr><td></td><td>25mm 레일용 퀵 코너 큐브</td><td>Thorlabs</td><td>XE25W3</td></tr><tr><td></td><td>25mm 레일용 직각 브래킷</td><td>Thorlabs</td><td>XE25A90</td></tr><tr><td></td><td>검은색 포스터보드 20" x 30"(508mm x 762mm), 1/16"(1.6mm) 두께, 5</td>장 <td>Thorlabs</td><td>TB5</td></tr><tr><td></td><td>힌지 25mm 레일 인클로저</td><td>용Thorlabs</td><td>XE25H</td></tr><tr>25mm<td></td><td>레일 인클로저용 뚜껑 정지</td><td>Thorlabs</td><td>XE25LS</td></tr><tr><td></td><td>M4 캡 스크류 키트</td><td>Thorlabs</td><td>HW-KIT1/M</td></tr><tr><td></td><td>M6 캡 스크류 키트 및 하드웨어 키트</td><td>Thorlabs</td><td>HW-KIT2/M</td></tr><tr><td></td><td>테이블 클램프, L-Shape, 5 Pack</td><td>Thorlabs</td><td>CL5-P5</td></tr><tr><td></td><td>SM1 링 작동 아이리스 다이어프램 (&Oslash; 0.8 - &오슬래시; 12 mm)</td><td>Thorlabs</td><td>SM1D12D</td></tr><tr><td></td><td>&Oslash; 1" SM1 장착 젖빛 유리 정렬 디스크 w/&Oslash; 1mm 구멍</td><td>Thorlabs</td><td>DG10-1500-H1-MD</td></tr><tr><td></td><td>벌집 광학 테이블 상판, Standa</td><td></td><td>Standa 1HB10-15-12</td></tr><tr><td></td><td>광학 테이블 지원,</td><td>Standa Standa</td><td>1TS05-12-06-AR</td></tr><tr><td>샘플 나노 포지셔닝</td><td>정밀 XYZ 나노 포지셔닝</td><td>Physik Instrumente</td><td>PI P527-3.CD</td></tr><tr><td></td><td>디지털 멀티 채널 Piezo Co, 3 채널, -30 - 130 V Sub-D 커넥터, 정전 용량 센서,</td> <td>Physik Instrumente</td><td>PI E727-3.CD</td></tr><tr><td>온도 챔버</td><td>Zeiss 200M 도립 현미경 인큐베이터 시스템 MATT BLK</td><td>디지털 픽셀</td><td></td></tr><tr><td></td><td>듀얼 채널 마이크로 프로세서 온도 컨트롤러</td><td>디지털 픽셀</td><td>DP_MTC_2000_DUO</td></tr><tr><td></td><td>2 개의 무진동 히터 모듈</td><td>디지털 픽셀</td><td>DP_150_VF</td></tr><tr><td></td><td>PT100 온도 센서</td><td>디지털 픽셀</td><td>DP_P100_TS</td></tr><tr><td>Biological Reagents and Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cell culture and transfection</td><td>Cos7 cells</td><td>ATCC&reg;</td><td>CRL-1651&거래;</td></tr><tr><td></td><td>8-웰 Lab-Tek 챔버</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>155411PK</td></tr><tr><td></td><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11965092</td></tr><tr><td></td><td>소 태아 혈청</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16000044</td></tr><tr><td></td><td>L-글루타민</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25030081</td></tr><tr><td></td><td>PBS 완충액</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190144</td></tr><tr><td></td><td>PenStrep</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td></tr><tr><td></td><td>PolyJet 트랜스펙션 시약</td><td>SignaGen Laboratories</td><td>SL100688</td></tr><tr><td>콜레스테롤 함량 측정</td><td>Amplex 적색 콜레스테롤 분석 키트</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A12216</td></tr><tr><td></td><td>프로테아제 억제제 칵테일</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>87786</td></tr><tr><td></td><td>포스파타제 억제제 칵테일</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>78420</td></tr><tr><td></td><td>ROTI Nanoquant Working Solution</td><td>Roth</td><td>K880</td></tr><tr><td></td><td>GloMax Discover Microplate Reader</td><td>Promega</td><td>GM3000</td></tr><tr><td>svFCS 측정</td><td>HBSS 버퍼</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14025092</td></tr><tr><td></td><td>Hepes 버퍼</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td></tr><tr><td></td><td>콜레스테롤 산화효소</td><td>시그마-알드리치</td><td>C8868</td></tr><tr><td></td><td>로다민 6G</td><td>시그마-알드리치</td><td>83697-1G</td></tr></tbody></table>

살아있는 세포의 원형질막에서의 분자 확산 분석을위한 스팟 변이 형광 상관 분광법

Spot Variation Fluorescence Correlation Spectroscopy for Analysis of Molecular Diffusion at the Plasma Membrane of Living Cells

원형질막 조직과 관련된 것을 포함하여 살아있는 세포의 동적 생물학적 과정은 각각 나노미터에서 마이크로미터 및 마이크로초에서 분에 이르는 다양한 공간적 및 시간적 스케일에서 발생한다. 이러한 광범위한 생물학적 과정은 기존의 현미경 검사 접근법에 도전합니다. 여기에서는 맞춤형 클래식 형광 현미경을 사용하여 스팟 변동 형광 상관 분광법 (svFCS) 측정을 구현하는 절차를 자세히 설명합니다. 이 프로토콜에는 svFCS 설정의 특정 성능 검사 및 생리적 조건 하에서 살아있는 세포의 원형질막에서 svFCS에 의한 분자 확산 측정에 대한 지침이 포함됩니다. 또한, 우리는 콜레스테롤 산화 효소 처리에 의해 원형질막 뗏목 나노 도메인을 파괴하는 절차를 제공하고 svFCS 분석에 의해 원형질막의 측면 조직의 이러한 변화가 어떻게 밝혀 질 수 있는지 보여줍니다. 결론적으로, 이러한 형광 기반 방법은 적절한 공간 및 시간적 분해능을 갖는 원형질막의 측방향 조직에 대한 전례 없는 세부사항을 제공할 수 있다.

Cos-7 세포에서 발현된 Thy1-GFP에 대한 DL을 생성하였다(도 4, 검정 사각형). 확산 법칙은 양의 t0 값 (19.47 ms ± 2 ms)을 가지며, 이는 Thy1-GFP가 원형질막의 나노 도메인 구조에 국한되어 있음을 나타냅니다. Thy1-GFP를 발현하는 세포의 콜레스테롤 옥시다제 처리는 DL t0 값이 1.34 ms ± 7.36으로 이동되는 결과를 가져왔다 (도 4, 회색 사각형). 이 관찰은 Thy1-GFP 감금의 본질이 콜레스테롤 함량에 의존하고 지질 뗏목 나노 도메인과 관련이 있음을 확인합니다. 이들 두 확산 법칙은 t0 및 Deff 값의 관점에서 위에서 설명된 통계적 검정(단계 9.1.3 참조)에 따라 상이함을 나타내었다. 또한, 우리는 처리되지 않은 Cos-7 세포에서 COase로 처리 된 세포와 비교하여 총 세포 콜레스테롤의 농도를 평가했습니다. COase 처리 시 총 콜레스테롤 함량의 작지만 유의한 감소가 관찰됩니다(그림 5). 이 효소는 원형질막의 외부 전단지에서 접근 할 수있는 콜레스테롤 풀에서만 작용하기 때문에 콜레스테롤의 관찰 된 감소는 원형질막과 관련이 있으며 지질 뗏목 나노 도메인의 불안정화를 초래한다고 가정합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61823/61823fig01.jpg"> 그림 1: 다양한 형태의 막 조직에 대해 스팟 변동 FCS에 의해 확립된 시뮬레이션된 형광 상관 분광법(FCS) 확산 법칙. (상부 패널) 막 조직의 개략적 표현 - (A) 자유 확산, (B) 메쉬 워크 장벽 및 (C) 트랩 / 도메인 감금 - 단일 분자 (빨간색)에 대해 그려진 궤적. 파란색 원은 허리 ω의 멤브레인과 레이저 빔의 교차점을 나타냅니다. (하부 패널) FCS 확산 법칙은 확산 시간 td를 제곱 반지름 ω2의 함수로 플로팅함으로써 표현된다. 확산 법칙 돌출부(녹색 점선)는 자유 확산의 경우에 (A) 원점(t0=0)에서 시간 축을 인터셉트하고; (B) 메쉬 워크 장벽이있을 때 음축 (t0 &lt; 0)에서, 또는 트랩과 도메인 (지질 뗏목)이있을 때 양축 (t0 &gt; 0)에서 (C). D는 브라운 운동에 대한 측면 확산 계수이고; Deff, 유효 확산 계수; D마이크로, 메쉬워크 트랩 내부의 미세한 확산 계수; D에서, 도메인 내부의 확산 계수; Dout, 외부 도메인 확산 계수; L, 정사각형 도메인의 측면의 크기; 및 rD, 원형 도메인의 반지름. 이 그림은 그분과 마르게트6에서 수정되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61823/61823fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61823/61823fig2v2.jpg"> 그림 2: svFCS 하드웨어 제어의 개략도 컴퓨터는 직렬(현미경, 외부 셔터), USB(XYZ 압전 스테이지, 상관기) 및 PCI(수집 보드)와 같은 다양한 통신 프로토콜을 통해 모든 장치를 제어합니다. DAQ : 데이터 수집 보드, APD : 눈사태 광 다이오드, SPCM : 단일 광자 계수 모듈, DO : 디지털 출력. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61823/61823fig2v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61823/61823fig03.jpg"> 그림 3: svFCS 설정의 여기 및 방출 광 경로의 개략도. svFCS 셋업은 네 개의 모듈을 포함한다: (1) 광섬유 488nm 레이저의 출력이 시준되고, (2) 반파 플레이트와 편광 빔 스플리터의 조합이 광전력을 설정하고, (3) 튜브-렌즈 프리 전동 현미경을 통해 진행한 후 샘플에 초점을 맞춘 레이저 빔, 및 (4) 단일 광자 계수 모듈에 결합된 애벌런치 광 다이오드 상으로의 공초점 형상 검출 경로를 통해 형광이 검출되고, 하드웨어 상관기에 신호를 전달합니다. 단순성은 시스템에 감도, 견고성 및 사용 편의성을 제공합니다 ( 보충 자료에 널리 언급되어 있음). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61823/61823fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61823/61823fig04.jpg"> 도 4: Cos-7에서 발현된 Thy1-GFP의 확산 분석으로부터 생성된 svFCS 확산 법칙. svFCS 처리하지 않고 Cos-7 세포의 확산 법칙 (NT, 검은 사각형) 및 콜레스테롤 산화 효소 처리 후 (COase, 회색 원). 그래프의 삽입물은 제시된 두 개의 svFCS 확산 법칙 사이의 유의한 차이에 대한 통계적 테스트를 나타낸다(Mailfert et al.28에 따름). 테스트 값(T)은 두 확산 법칙이 다를 때 3.8로 설정된 임계값을 초과해야 합니다. 높을수록 확산 법칙의 차이가 커집니다. T의 값은 색상으로 구분됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61823/61823fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61823/61823fig05.jpg"> 그림 5: Cos-7 세포에서 총 콜레스테롤 함량 비교. Cos-7 세포는 1시간 동안 비처리(NT) 또는 1U/mL의 콜레스테롤 산화효소(COase)로 처리되었다. 데이터는 삼중으로 한 실험의 예를 나타낸다. 두 꼬리, 짝을 이루지 않은 t-검정을 사용하여 통계적 차이를 평가하였다(α=0.05). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61823/61823fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
물자의 표: svFCS 설정에 필요한 광학 요소 목록입니다.
보충 자료: 이 문서에서는 처음부터 svFCS 설정을 빌드하는 방법에 대해 설명합니다. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61823/61823_R1_Supp%20Mat_final.docx" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

이 기사는 살아있는 세포의 원형질막에서 분자 확산을 측정하기 위해 스팟 변이 형광 상관 분광법 (svFCS) 현미경을 구축하는 방법에 대한 프로토콜을 제시하는 것을 목표로합니다.

Dynamic biological processes in living cells, including those associated with plasma membrane organization, occur on various spatial and temporal scales, ...

원형질막 측면 조직에 대한 현재 견해는 불완전합니다. 이러한 이유로 Spot Variation Fluorescence Correlation Spectroscopy와 같은 새롭고 혁신적인 기술을 구현하는 것이 중요합니다. 이것은 뛰어난 시간 및 공간 해상도를 특징으로 하는 매우 강력한 기술입니다.또한, 비침습적이며 생리학적 조건에서 세포막을 연구할 수 있습니다. 실험을 실행하기 전에 매일 모든 홍채 다이어프램을 열고 파워 미터를 사용하여 첫 번째 홍채가 완전히 열린 상태에서 레이저 출력을 측정합니다. 중간 플레이트를 돌려 최대 전력을 찾습니다.레이저 출력이 평소보다 낮으면 조리개를 사용하여 정렬을 확인하고 필요에 따라 L1과 M1을 번갈아 이동합니다. 그런 다음 실험 노트북에서 전력 값을 기록해 둡니다. 검출 경로를 확인하려면 물, 커버 슬립 및 2개의 나노몰 로다민 6G 용액 방울을 대물렌즈에 놓습니다.그런 다음 상관기 소프트웨어를 시작하고 데이터를 기록합니다. 자동 상관 관계 기능은 낮은 양의 노이즈, 작은 폐기물 크기 및 초당 분자당 높은 계수율을 표시해야 합니다. 스폿 크기를 보정하려면 세포 배양 코드 커버 슬립을 수침 대물렌즈에 놓고 200마이크로리터의 2나노몰 로다민 6G 용액을 커버 슬립에 추가합니다.488나노미터 레이저 빔 출력을 300마이크로와트로 조정하고 소프트웨어에서 svFCS 조명 감지 현미경 포트를 선택합니다. APD를 켜고 신호가 떨어질 때까지 홍채를 열어 최소한의 폐기물 크기를 얻거나 더 큰 폐기물 크기를 얻으려면 조리개를 닫습니다. 약 10, 20초 자동 상관 관계 함수를 기록하여 통계적 재현성을 높이고 APD를 끕니다.적절한 데이터 분석 프로그램에서 분자 응집체로 인한 강한 변동이 있는 런을 확인하고 폐기한 다음 유지된 자동 상관 함수의 평균을 3D 확산 모델에 맞추고, 피팅 매개변수에서 평균 확산 시간을 추출하고, 데이터를 TXT 파일로 저장합니다. svFCS 분석의 경우 2-4마이크로와트 사이의 전력을 공급받는 488나노미터 빔을 조정하고 섭씨 37도에서 10분 동안 샘플을 평형화합니다. svFCS 조명 감지 현미경 포트와 APD를 선택합니다.그런 다음 선택한 셀의 XY 스캔과 Z 스캔을 수행합니다. 세포 상단에 있는 원형질막을 선택하여 최대 형광 강도에서 공초점 지점을 찾고 데이터 수집을 시작합니다. 상관자 소프트웨어에서 20개의 시리즈 1개, 5초 실행을 기록합니다.마지막 실행 후 APD를 끄고 설명된 대로 예기치 않은 실행을 삭제합니다. 평균 자동 상관 관계 함수를 2종 2D 확산 모델에 맞추고 피팅 매개변수를 이전에 저장한 TXT 파일에 저장합니다. 관심 세포가 모두 기록되면 200-400나노미터 사이의 폐기물 크기를 4개 이상 분석하여 단일 확산 법칙을 확립합니다.그런 다음 MATLAB에서 최소 4개의 폐기물 크기 실험에 해당하는 모든 TXT 파일이 포함된 폴더를 선택하고 제곱 폐기물에 대한 확산 시간을 플로팅합니다. 이 그림에서는 Cos7 세포에서 발현되는 Thy1-GFP에 대한 확산 법칙을 관찰할 수 있습니다. 확산 법칙은 양의 시간 0 값을 가지며, 이는 Thy1-GFP가 원형질막의 나노 도메인 구조 내에 국한되어 있음을 나타냅니다.이 분석에서 Thy1-GFP를 발현하는 세포의 콜레스테롤 산화효소 처리는 확산 법칙 시간 0 값을 7.36 플러스 또는 마이너스 1.34 밀리 초로 이동시켰다. Thy1-GFP 감금의 특성은 콜레스테롤 함량에 따라 달라지며 지질 뗏목 나노 도메인과 관련이 있음을 확인합니다. 총 콜레스테롤 함량의 작지만 유의한 감소는 콜레스테롤 산화효소 처리에서도 관찰되었습니다.이 효소는 원형질막의 바깥쪽 소엽에서 접근할 수 있는 콜레스테롤 풀에만 작용하기 때문에 이러한 데이터는 관찰된 콜레스테롤 감소가 원형질막과만 관련이 있으며 지질 뗏목 나노 도메인의 불안정화를 유발한다는 것을 시사합니다. 이 절차를 시도할 때 가장 중요한 것은 svFCS 시스템의 적절한 보정과 분석을 위한 세포 준비입니다. svFCS는 세포막 조직을 연구하는 훌륭한 도구입니다.그러나 세포 내 분자의 확산을 분석하는 데에도 사용할 수 있습니다. 이 기술은 암세포와 같은 살아있는 세포에 대한 잠재적 약물의 영향을 결정하기 위해 생물 의학에서 성공적으로 구현될 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

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