Name: 뮤린 테일 림프부종 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 38 s
Description: 학습하세요 뮤린 테일 림프부종 모델 수립 방법과 조직 나노전환 기술을 활용한 유전자 전달 기법을 통해 임상 적용 가능한 림프부종 치료 전략 개발의 기초를 마련하는 과정을 탐색하세요.

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이 작품은 미국 성형 외과 의사 학술 장학금 협회와 국방부 W81XWH2110135가 AHH에 제공하는 보조금 기금에 의해   지원되었습니다. 미적 수술 교육 및 연구 재단은 CKS에 NIH U01DK11909, R01NS042617 및 R01DK125835에 보조금을 지급합니다.

이 프로토콜은 기관의 동물 연구 윤리 위원회의 지침을 따릅니다. 모든 동물 실험은 인디애나 대학 의과 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었습니다. 동물들은 음식과 물 광고 리비툼으로 12시간 밝은 어두운 주기 아래에 보관되었습니다.
1. 마우스 꼬리 림프제의 외과 중단
<ol><li>동등한 성별 분포의 8 주 된 C57BL/6 마우스를 사용 하십시오.</li>
	<li>전신 마취 하에 마우스를 100% 산소로 3-4% 이소플루란으로 유도 챔버에 놓고 시술 중에 1-3%의 유지 보수 체이션을 유지합니다.</li>
	<li>통증 조절을 위해 0.5 mg/kg 지속 방출(SR) 부프레노르핀을 피하로 투여하십시오. 참고: 추가 진통제 투여 후 투여: 카프로펜 은 적어도 48 h에 대 한 매 24 시간 및 부피바카인 한 번 절개가 만들어진 후 또는 절개를 닫기 전에, 피부 가장자리에 떨어지는 에 의해 적용 (4 – 6 시간까지 지속).</li>
	<li>마우스를 등쪽으로 배치하고 70 %의 이소 프로필 알코올로 꼬리를 준비합니다.</li>
	<li>캘리퍼를 사용하여 꼬리의 기지에서 20mm부터 시작하는 5mm 증분에서 절차 전에 꼬리 직경을 측정합니다. 이러한 측정은 잘린 콘방정식(37)을사용하여 볼륨을 계산하는 데 사용됩니다.</li>
	<li>베이스에서 20mm 떨어진 꼬리에 3mm 할례 절개를 표시합니다.</li>
	<li>멸균 수술 블레이드 (크기 15)로 세심한 3mm 전체 두께 의 피부 절개를 수행하여 모든 근본적인 혈관을 수술 미세 배율하에서 그대로 유지합니다. 우수한 할례 마크(꼬리 베이스로부터 20mm)를 먼저 진피를 통과한 다음, 일주 전체 두께 절개 3mm 단장절에 첫 번째 절개한다.<ol>
<li>수직 전체 두께의 수직 절개를 사용하여 두 절개를 연결합니다. 이쑤시개 미세 픽업을 사용하여 최첨단을 파악하고 현미경을 사용하여 혈관 평면 깊숙한 곳까지 진피와 피상적 인 정맥 내림탈을 조심스럽게 해부하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>0.1 mL의 이소술판 블루(1%)를 꼬리 끝에 피하한다.</li>
	<li>수술 현미경의 밑에 측면 꼬리 정맥에 인접한 2개의 림프 채널을 확인합니다. 림프제 는 이소술판 주입 때문에 파란색으로 나타납니다. 직선 미세 수술 가위를 사용하여 림프액을 트랜스캐트합니다. 가위를 사용하여 측면 정맥과 림프절 사이의 평면을 조심스럽게 해부합니다. 그런 다음 림프 용기와 측면 정맥 사이에 한 가위 블레이드의 끝을 통과하고 림프혈관을 트랜스포우기 위해 블레이드를 닫습니다.</li>
	<li>무균 부착 투명 드레싱으로 꼬리 상처를 입습니다. 매일 수술 후 절개를 확인하여 감염되거나 출혈이 발생하지 않도록 하고 2주 동안 상처 치료를 제공합니다.</li>
	<li>꼬리에 더 이상의 부상을 방지하고 수술 합병증으로 이어질 것 서로를 물에서 동물을 방지하기 위해 동물을 노래하는 집.</li>
</ol>2. 레이저 반점 대비 이미징을 갖춘 꼬리 혈관 평가
<ol><li>1.2 단계에서와 같이 마우스를 마취합니다.</li>
	<li>꼬리 혈관을 시각화하는 레이저 반점 대비 이미징을 사용하려면 폭을 0.8cm로 설정하고 높이는 1.8cm로, 포인트 밀도를 높고, 프레임 속도는 44개의 이미지/초로, 30초로, 색상 사진을 10초당 1로 설정합니다.</li>
	<li>간부와 동맥 관류를 평가하여 가부장제에 대해 평가합니다. 질적으로 흐름의 연속성을 시각화해야 합니다.</li>
</ol>3. 근적외선 레이저 혈관 조영술 기능 성 림프 평가
<ol><li>1.2 단계와 같이 동물을 마취</li>
	<li>내도시닌 그린(ICG)(ICG)(25 mg/10 mL)을 재구성하고 팁 근처의 탈산 마우스 꼬리에 피하로 0.1mL을 투여한다.</li>
	<li>방 조명을 어둡게 합니다. 근거리 레이저 혈관 조영술을 버퍼링 설정에 놓고 라이브 캡처를 배치합니다.</li>
</ol>4. TNT를 사용하여 마우스 꼬리에 핵산화물의 초점 전달
<ol><li>1.2 단계에서와 같이 동물을 마취합니다.</li>
	<li>국소 피부 각질 제거 크림을 사용하여 마우스 꼬리를 각질 제거합니다.</li>
	<li>마우스 꼬리를 콜라게나제 용액(10 mg/mL)에 37°C에서 5분간 담급니다.</li>
	<li>TNT2.0 칩저장소(35)에DNA를 적재한다.</li>
	<li>TNT2.0 실리콘 칩 장치를 꼬리와 접촉하는 나노니들로 꼬리에 전달되는 원하는 초점 부위위에 놓습니다.</li>
	<li>저수지에 양수 전기 프로브를 배치합니다. 음의 프로브를 30G 바늘에 부착하고 바늘을 꼬리에 피하하여 전달 부위에 삽입합니다.</li>
	<li>정사각형 파 펄스 전기 자극 (10 x 10 ms 펄스, 250 V, 10 mA)를 적용합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Kataru, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+secondary+lymphedema%3A+chicken+or+egg%5BTitle%5D)+AND+%22Translation+Research%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and secondary lymphedema: chicken or egg.</a> Translation Research. 209, 68-76 (2019).</li>
<li>Brayton, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+prevalence+and+treatment+benefits+in+cancer%3A+impact+of+a+therapeutic+intervention+on+health+outcomes+and+costs%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lymphedema prevalence and treatment benefits in cancer: impact of a therapeutic intervention on health outcomes and costs.</a> PLoS One. 9 (12), 114597(2014).</li>
<li>Mendoza, N., Li, A., Gill, A., Tyring, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filariasis%3A+diagnosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatology+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Filariasis: diagnosis and treatment.</a> Dermatology and Therapy. 22 (6), 475-490 (2009).</li>
<li>Rockson, S. G., Rivera, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+the+population+burden+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Estimating the population burden of lymphedema.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1131, 147-154 (2008).</li>
<li>Soran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer-related+lymphedema--what+are+the+significant+predictors+and+how+they+affect+the+severity+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Journal%22%5BJournal%5D)">Breast cancer-related lymphedema--what are the significant predictors and how they affect the severity of lymphedema.</a> Breast Journal. 12 (6), 536-543 (2006).</li>
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<li>Hassanein, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+Inferior+Epigastric+Artery+Vascularized+Lymph+Node+Transfer%3A+A+Simple+and+Safe+Option+for+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plastic%2C+Reconstructive%2C+Aesthetic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Deep Inferior Epigastric Artery Vascularized Lymph Node Transfer: A Simple and Safe Option for Lymphedema.</a> Journal of Plastic, Reconstructive, Aesthetic Surgery. 73 (10), 1897-1916 (2020).</li>
<li>Hassanein, A. H., Sacks, J. M., Cooney, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+perioperative+lymphatic-venous+anastomosis+localization+using+transcutaneous+vein+illumination%2C+isosulfan+blue%2C+and+indocyanine+green+lymphangiography%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Optimizing perioperative lymphatic-venous anastomosis localization using transcutaneous vein illumination, isosulfan blue, and indocyanine green lymphangiography.</a> Microsurgery. 37 (8), 956-957 (2017).</li>
<li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema%3A+Surgical+and+Medical+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138, 3 Suppl 209-218 (2016).</li>
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<li>Cook, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immediate+Lymphatic+Reconstruction+after+Axillary+Lymphadenectomy%3A+A+Single-Institution+Early+Experience%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Immediate Lymphatic Reconstruction after Axillary Lymphadenectomy: A Single-Institution Early Experience.</a> Annals of Surgical Oncology. , (2020).</li>
<li>Cook, J. A., Hassanein, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ASO+Author+Reflections%3A+Immediate+Lymphatic+Reconstruction%3A+A+Proactive+Approach+to+Breast+Cancer-Related+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">ASO Author Reflections: Immediate Lymphatic Reconstruction: A Proactive Approach to Breast Cancer-Related Lymphedema.</a> Annals of Surgical Oncology. , (2020).</li>
<li>Johansson, K., Branje, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arm+lymphoedema+in+a+cohort+of+breast+cancer+survivors+10+years+after+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oncologica%22%5BJournal%5D)">Arm lymphoedema in a cohort of breast cancer survivors 10 years after diagnosis.</a> Acta Oncologica. 49 (2), 166-173 (2010).</li>
<li>Johnson, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+Incidence+After+Axillary+Lymph+Node+Dissection%3A+Quantifying+the+Impact+of+Radiation+and+the+Lymphatic+Microsurgical+Preventive+Healing+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema Incidence After Axillary Lymph Node Dissection: Quantifying the Impact of Radiation and the Lymphatic Microsurgical Preventive Healing Approach.</a> Annals of Plastic Surgery. 82, 4S Suppl 3 234-241 (2019).</li>
<li>Gartner, R., Mejdahl, M. K., Andersen, K. G., Ewertz, M., Kroman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+in+self-reported+arm-lymphedema+in+Danish+women+treated+for+early-stage+breast+cancer+in+2005+and+2006--a+nationwide+follow-up+study%5BTitle%5D)+AND+%22Breast%22%5BJournal%5D)">Development in self-reported arm-lymphedema in Danish women treated for early-stage breast cancer in 2005 and 2006--a nationwide follow-up study.</a> Breast. 23 (4), 445-452 (2014).</li>
<li>Shin, W. S., Rockson, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+the+molecular+and+mechanistic+study+of+lymphatic+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Animal models for the molecular and mechanistic study of lymphatic biology and disease.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1131, 50-74 (2008).</li>
<li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li>
<li>Olszewski, W., Machowski, Z., Sokolowski, J., Nielubowicz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+lymphedema+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Experimental lymphedema in dogs.</a> Journal of Cardiovascular Surgery. 9 (2), 178-183 (1968).</li>
<li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail%3A+Lymphatic+hyperplasia%2C+VEGF-C+upregulation%2C+and+the+protective+role+of+MMP-9%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li>
<li>Tabibiazar, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+manifestations+of+experimental+lymphatic+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Inflammatory manifestations of experimental lymphatic insufficiency.</a> PLoS Medicine. 3 (7), 254(2006).</li>
<li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li>
<li>Zampell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+deficiency+worsens+inflammation+and+lymphedema+after+lymphatic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor deficiency worsens inflammation and lymphedema after lymphatic injury.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 302 (4), 709-719 (2012).</li>
<li>Gardenier, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diphtheria+toxin-mediated+ablation+of+lymphatic+endothelial+cells+results+in+progressive+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Diphtheria toxin-mediated ablation of lymphatic endothelial cells results in progressive lymphedema.</a> JCI Insight. 1 (15), 84095(2016).</li>
<li>Weiler, M. J., Cribb, M. T., Nepiyushchikh, Z., Nelson, T. S., Dixon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+tail+lymphedema+model+for+observing+lymphatic+pump+failure+during+lymphedema+development%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A novel mouse tail lymphedema model for observing lymphatic pump failure during lymphedema development.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10405(2019).</li>
<li>Avraham, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2+differentiation+is+necessary+for+soft+tissue+fibrosis+and+lymphatic+dysfunction+resulting+from+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Th2 differentiation is necessary for soft tissue fibrosis and lymphatic dysfunction resulting from lymphedema.</a> FASEB J. 27 (3), 1114-1126 (2013).</li>
<li>Zampell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%28%2B%29+cells+regulate+fibrosis+and+lymphangiogenesis+in+response+to+lymphatic+fluid+stasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD4(+) cells regulate fibrosis and lymphangiogenesis in response to lymphatic fluid stasis.</a> PLoS One. 7 (11), 49940(2012).</li>
<li>Arruda, G., Ariga, S., de Lima, T. M., Souza, H. P., Andrade, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+mouse-tail+lymphedema+model%5BTitle%5D)+AND+%22Lymphology%22%5BJournal%5D)">A modified mouse-tail lymphedema model.</a> Lymphology. 53 (1), 29-37 (2020).</li>
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</ol>

저자는 경쟁적인 이해 상충이 없습니다.

림프부종은 1 차 (선천성) 또는 이차 (iatrogenic 림프) 상해38,39로분류된다. 이차 림프부종은케이스 39의 99%를포함합니다. 이차 림프부종은 가장 일반적으로 감염에 의해 발생 (filariasis) 또는 림프절절제술 또는방사선을가진 사후 종양학 치료4,39. 림프절및 방사선으로 치료된 동물의 70%가 림프부종2,16을획득하지 않기 때문에 번역 동물 모델은 이차 림프부종에 도전적이다. 또한, 황체형 림프부종은 림프 후 지연 된 발병 (1 년)을 나타낸다. 림프부종의 마우스 꼬리 모델은 이러한 장애물을 극복, 초점 꼬리 림프 절제를 겪고 모든 마우스는 절차 후 일...

림프부종은 림프 기능 장애로 인한 사지 부종입니다. 영향 받은 사지는 액체의 축적 때문에 확대합니다, 지방, 및 섬유증1. 림프부종은 전 세계적으로2억5천만 명에게 영향을 미치며2,3,4. 유방암, 흑색종, 부인과/비뇨기과 종양, 또는 육종과 같은 고체 악성 종양치료를 받는 환자의 20~40%가 림프부종2,4,5를개발하는 것으로 추정된다. 림프부종으로부터의 이환율은 재발성 감염, 통증 및 기형6을포함한다. 이 점진적인 평생 질병에 대한 치료법은 없습니다. 현재 치료법은 variaby 효과적인7및 물리 치료사에 의한 압축, 완전한 충혈 치료, 절제 절차 및 혈관 성 림프 우회7,8,9,10,11,12,13,14를포함하는 미세 수술 수술을 포함한다. 림프부종에 대한 이상적인 치료는 아직 발견되지 않았습니다.
림프부종의 메커니즘과 치료를 공부하는 것은 제한되어 있습니다. 림프손상(15,16)에 이어 1년 동안 평균 지연개시가 발생하고 방사선 및 수술로 이단성 모욕을 경험하는 대부분의 개인은 림프부종4,6,17을개발하지 않는다. 개, 양, 돼지 를 포함한 대형 동물 모델이18,19,20으로설명되었지만 마우스 꼬리 모델은 용이성, 비용 및 재현성으로 인해 가장 널리 적용되었습니다. 림프부종을 조사하기 위한 마우스 모델은 꼬리 모델, 디프테리아 독소 매개 림프절 제절, 및 축액 또는 포플라이트 림프절 해부21,22,23,24,25,26을포함한다. 대부분의꼬리 모델은꼬리(22)의기저 부근에서 수행되는 림프채널 클리핑으로 초점, 전체 두께 피부 절제를 사용하며, 이로 인해 사람의 림프부종(24,27,28,29)과유사한 꼬리 부종 및 조직학적 특징이 생긴다. 그러나, 표준 뮤린 테일 모델은 전형적으로 20일 이내에 자발적으로 해결되며 주기적인 꼬리괴사(30)를동반한다. 림프부종 마우스 꼬리 모델은 15주 이상 지속적인 림프부종을 연장하고, 확인된 동맥 및 정맥 안식처를 보여주며, 기능성 림프 기능 장애 평가를 허용합니다.
림프부종의 뮤린 테일 모델은 림프부종을 치료하는 새로운 치료법의 평가를 허용합니다. 유전자 기반 전략은 바이러스벡터(31)및32에의해 중재된 마우스 모델에서 사용되어 왔다. 우리는 또한 림프부종 마우스 꼬리에 유전화물 전달을 위한 새로운 조직 나노 트랜스페션 기술 (TNT)를 사용합니다. TNT는 급속집중전기장33,34,35,36에서나노채널을 이용한 칩을 이용한 직접, 경피유전자전달을용이하게 한다. 본 모델은 TNT2.0을 사용하여 마우스꼬리(35)의림프 손상 부위에 잠재적인 유전자 기반 치료제의 초점 전달을 허용하는 것을 포함한다.

<table><tbody><tr><td>Tegaderm 필름</td><td></td><td>1626W</td><td></td></tr><tr><td>외과 현미경</td><td>Leica, Wetzlar, 독일</td><td>MSV266</td><td></td></tr><tr><td>접착 드레싱 (Tegaderm)</td> <td>3M, 세인트 폴, 미네소타</td>.<td>1626W</td><td></td></tr><tr><td>레이저 스페클 (Pericam PSI 시스템)</td><td>Perimed AB, Stockholm, Sweden)</td><td>PSIZ</td><td></td></tr><tr><td>근적외선 레이저 (LUNA)</td><td>Stryker (Formerly Novadaq Technologies, Toronto, Canada)</td><td>LU3000</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 마우스</td><td>Jackson Laboratories</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Adson Forceps - 1x2 Teeth</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc.</td><td>11019-12</td><td></td></tr><tr><td>V-Hook</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc. (브이훅 파인 사이언스 툴스) Inc.</td><td>18052-12</td><td></td></tr><tr><td>메스 SS NO15</td><td>Fischer Scientific</td><td>29556</td><td></td></tr><tr><td>일회용 바늘 30GX1</td><td>Fischer Scientific</td><td>305128</td><td></td></tr><tr><td>작동 가위</td><td>Fischer Scientific</td><td>12-460-796</td><td></td></tr><tr><td>Surgi-Or Jeweler's Forceps, Sklar 4-1/2 in</td><td>Fischer Scientific</td><td>50-118-4255</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위 - 스트레이트/샤프-샤프/ 8mm 커팅 엣지</td><td>파인 사이언스 도구 (미국) Inc.</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Cardiogreen</td><td>Sigma</td><td>I2633-25MG</td><td></td></tr><tr><td>IsosulfanBlue (림파주린)&nbsp; 50 mg/5ml</td><td>마일란</td><td>67457-220-05</td><td></td></tr></tbody></table>

뮤린 테일 림프부종 모델

A Murine Tail Lymphedema Model

림프부종은 림프 기능 장애로 인한 사지 부종입니다. 영향 받은 사지는 액체의 축적 때문에 확대합니다, 지방, 및 섬유증. 이 질병에 대한 치료법은 없습니다. 꼬리 의 밑면 근처에서 초점 전체 두께 피부 절제를 사용하는 마우스 꼬리 모델은 꼬리 부종을 초래하여 림프부종을 연구하는 데 사용되었습니다. 그러나, 이 모형은 혈관 포함 및 결과적인 꼬리 괴사 및 초기 꼬리 팽윤 해상도 귀착될 수 있습니다, 그것의 임상 번역성을 제한하. 만성 뮤린 꼬리 림프부종 모델은 15 주 이상 지속적인 림프부종과 꼬리에 신뢰할 수있는 관류를 유도합니다. 전통적인 뮤린 꼬리 림프부종 모델의 개선은 1) 정밀한 전체 두께 절제 및 림프 클리핑 을 포함 수술 현미경을 사용하여, 2) 고해상도 레이저 반글을 사용하여 수술 후 동맥 및 정맥 관류의 확인, 3) 적외선 레이저 림프 촬영 근처 indocyanine 녹색을 사용하여 기능 평가. 우리는 또한 마우스 꼬리 혈관에 유전화물의 새로운 비 바이러스, 경피, 초점 전달을 위한 조직 나노 트랜스페션 기술 (TNT)를 사용합니다.

지속적인 림프부종에 대한 마우스 꼬리 모델에 대한 기술은 도 1에도시된다. 그림은 마우스 꼬리 모델의 관련 해부학을 나타낸다. 도 2는 림프부종 유도 후 마우스 꼬리에서 점진적인 붓기와 지속성 림프부종을 보여줍니다. 잘린 원뿔 방정식에 의해 계산된 마우스 꼬리 부피는 주 4에서 피크를 6주차로 정점에 그었으며, 그 다음으로 15주차까지 지속되는 점진적인 개선이 뒤따릅니다. 꼬리 부피는 모델에서 림프부종에 대한 치료 적 개입의 효과를 평가하기 위한 결과 변수로 사용될 수 있다. 도 3에서,꼬리 혈관 의 자식의 평가를 위한 고해상도 레이저 반점이 관찰될 수 있다. 이것은 웰빙이 정맥 부상보다는 림프 기능 장애에 이차적임을 보장하기 위해 모델에 엄격함을 추가합니다. 내정간섭의 효력은 그 때 잠재적으로 더 중대한 신뢰를...

림프부종은 림프 기능 장애로 인한 사지 부종입니다. 우리는 림프부종의 만성 뮤린 꼬리 모델과 꼬리에 유전화물 전달을위한 조직 나노 트랜스펙션 기술 (TNT)의 새로운 사용을 설명합니다.

Lymphedema is extremity swelling caused by lymphatic dysfunction. The affected limb enlarges because of accumulation of fluid, adipose, and fibrosis. ...

림프부종은 치료법이 없는 만성 질환입니다. 그것은 유방암의 처리에 있는 axillary 림프절 수술 및 방사선이 있던 환자의 1/3에 영향을 미칩니다. 유효한 동물 모형을 갖는 것은 새로운 처리 전략의 기계장치 그리고 발달을 이해하는 것을 용이하게 합니다.림프부종의 마우스 꼬리 모델은 빠른 발병으로 안정적이고 재현 할 수 있습니다. 그것은 인간 림프부종과 일치하는 조직학적 변화를 나타낸다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 박사 후 박사 학위인 Ganesh Mohan 박사가 될 것입니다.시작하려면 8주 된 세이드 마우스를 엄격하게 배치하고 70 %의 이소 프로필 알코올로 꼬리를 준비하십시오. 캘리퍼를 사용하여 꼬리 기저에서 20mm부터 시작하는 5mm 단위로 꼬리 직경을 측정합니다. 기지에서 20밀리미터 떨어진 꼬리에 3밀리미터 의 할례 절개를 표시합니다.수술 현미경 배율하에서, 모든 근본적인 혈관을 그대로 남겨 둔 세심한 3밀리미터 전체 두께의 피부 절제를 수행합니다. 첫 번째 절개에 3 밀리미터 단면 에 할례 전체 두께 절개 다음 진피를 통해 먼저 우수한 할례 마크를 절개. 수직 전체 두께의 수직 절개를 사용하여 두 절개를 연결한 다음, 이쑤시개의 미세 픽업을 사용하여 앞가장자리를 파악하고 아바실 평면 내에서 진피와 피상적 인 마이크로 가위가있는 정맥 내림탈에 깊이 해부합니다.꼬리 끝에 1%이소황판 블루 피하의 0.1 밀리리터를 주입합니다. 측면 꼬리 정맥에 인접한 주입으로 인해 파란색으로 나타나는 두 림프 채널을 식별합니다. 림프액을 조심스럽게 분리하여 측면 정맥과 림프사이의 평면을 직선 미세 수술 가위로 해부합니다.림프용기와 측면 정맥 사이에 가위 블레이드 한 개 끝을 전달하고 블레이드를 닫아 림프혈관을 변형시합니다. 완료되면, 멸균 부착 투명 주소로 꼬리 상처를 드레스. 팁 근처의 실산 마우스 꼬리에 인도시아닌 녹색 0.1 밀리리터를 피하로 투여하십시오.실내 조명을 어둡게 한 다음 적외선 레이저 혈관 조영술 근처에 버퍼링 설정에 배치하고 라이브 이미징을 수행합니다. 꼬리 끝에 이소술판 블루를 투여 한 후 림프제는 파란색을 나타냈다. 인접한 측면 정맥이 보존되는 동안 림프제가 중단되었습니다.림프부종 유도 후 마우스 꼬리에 있는 점진적인 팽윤 및 지속적인 지속적인 림프부종은 여기에서 도시된다. 잘린 콘 방정식에 의해 계산된 마우스 꼬리 부피는 4주차에 정점을 찍은 후 6주차까지 고원화되었고, 그 다음으로 15주차까지 점진적으로 개선되었습니다. 고해상도 레이저 반점 대비 이미징은 꼬리 혈관 의 자식의 평가를 위해 부상당한 측면 정맥과 그대로 측면 정맥을 보여주는 림프부종 꼬리 모델에서 마우스 꼬리 관류를 확인하기 위해 수행되었다.근적외선 레이저 림프항기그래피는 수술 후 수술 부위를 넘어 수술 전 임파와 ICG 트랜지션을 시연하여 부종이 림프 기능 장애로 인한 것을 확인했습니다. 조직 나노 트랜스펙션 기술을 이용한 유전적 화물 전달의 효율은 뮤린 꼬리에 형광중하중염을 표시한 DNA를 전달함으로써 입증되었다. 마우스 꼬리 림프부종 모델과 ICG 근적외선 레이저 혈관 조영술에 대한 적응을 사용하는 것은 임상적으로 번역 가능하고 치료에 영향을 미치는 흥미로운 동물 모델입니다.

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

가까운 적외선 형광 (NIRF)를 사용하여 최근 개발 된 이미징 기술은 림프 시스템의 암 전이에서 활약 역할, 면역 반응, 상처 수리 및 기타 림프 - 관련 질병을 명료하게하다하는 데 도움이 될 수 있습니다.

마우스의 림프 Vasculature의 비 침습적 광학 이미징

이 비디오에서는 마우스 모델의 꼬리 정맥을 통해 흑색종 세포를 정맥 주사합니다. 흑색종 세포는 순환계를 통해 더 멀리 이동하면서 멀리 떨어진 미세환경에 적응하고 폐와 같은 장기에 전이를 일으킵니다.

실험적 전이성 흑색종 마우스 모델: 폐 내 흑색종 세포의 전이 가능성을 연구하기 위한 플랫폼

이 비디오는 쥐 꼬리 림프 부종을 생성하는 생체 내 기술에 대해 설명합니다. 이 모델은 림프부종에 대한 메커니즘과 치료법을 연구하는 데 적용됩니다.

쥐꼬리 림프부종 모델: 쥐꼬리에서 지속적인 림프부종을 생성하는 생체 내 기술

이 비디오는 마우스 모델에서 서혜부 배출 림프절의 외과적 분리 절차를 보여줍니다. 복부 부위를 절개하면 서혜부 림프절에 접근할 수 있으며, 이 림프절은 외과적으로 적출됩니다. 채취된 반투명 서혜부 림프절은 면역학 연구에 사용할 수 있습니다.

쥐 모델에서 사타구니 배출 림프절 수확

이 동물 모델은 연구원이 적어도 8 주 지속되는 마우스의 뒷다리에 있는 통계적으로 유의한 이차 림프부종을 유도하는 것을 가능하게 합니다. 이 모델은 림프부종의 병리생리학을 연구하고 새로운 치료 옵션을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

마우스의 힌들보에서 보조 림프부종을 유도하기위한 개정 된 방법

흡혈류 혈관의 외과 봉합에 의한 림프 흐름을 차단하는 프로토콜이 제시된다.

마우스에서 흡개 성 림프혈관을 봉합하여 림프 흐름 차단

여기에서, 우리는 독특하게 디자인된 온난화/억제 장치를 사용하여 설치류 꼬리 정맥 주사를 위한 효과적이고 효율적인 방법을 제시합니다. 혈관 확장 및 억제 과정의 개시를 간소화함으로써,이 프로토콜은 최소한의 고통을 가진 동물의 큰 그룹의 정확하고 적시에 정맥 주사를 허용합니다.

뮤린 곰팡이 패혈증 모델에서 효율적인 꼬리 정맥 주사를위한 현대 온난화 / 억제 장치

흑색 종은 다른 장기로 빠르게 퍼지는 매우 공격적인 질병입니다. 이 프로토콜은 전이성 흑색종의 Braf/Pten 마우스 모델에서 사타구니 림프절의 부피를 모니터링하기 위해 3D 렌더링과 결합된 초고주파 초음파 이미징의 적용을 설명합니다.

흑색종의 Braf/Pten 유전자 조작 마우스 모델에서 초고주파 초음파 이미징에 의한 림프절 부피 분석

여기에 제시된 실험 설계는 림프절(LN) 전이 중 항원 특이적 CD8+ T 세포 연구에 유용한 생식 모델을 제공하며, 이는 방관자 CD8+ T 세포의 섭동을 배제합니다.

종양 형성 중 항원 특이적 CD8+ T 세포의 역학을 평가하기 위한 배액 림프절 전이 모델

이 프로토콜은 유도 화학 요법에 대한 반응의 역학을 기반으로 급성 림프구성 백혈병의 재발을 생성하기 위한 마우스 모델을 설명하는 것을 목표로 합니다.

급성 림프구성 백혈병에 대한 유도 화학 요법에 대한 백혈병 재발의 쥐 모델

학습하세요 뮤린 테일 림프부종 모델 수립 방법과 조직 나노전환 기술을 활용한 유전자 전달 기법을 통해 임상 적용 가능한 림프부종 치료 전략 개발의 기초를 마련하는 과정을 탐색하세요.

뮤린 테일 림프부종 모델

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