제브라피시에서 장기간 고혈당증을 생산하는 포도당에 대체 침수

이 프로토콜은 제2형 당뇨병에서 볼 수 있는 고혈당을 모방하는 상승 및 가을 패턴에서 얼룩말 물고기에 있는 고혈당증을 유도합니다. 이 기술의 주요 장점은 고혈당증이 고혈당어에서 관찰되는 변경의 원인이되도록 하는 비침습적 기술이라는 것입니다. 이 프로토콜은 잠재적으로 고혈당증의 합병증을 대상으로 치료 방법 또는 제약을 탐구하는 데 사용할 수 있습니다.

이 프로토콜에는 많은 단계가 있지만 단계를 올바르게 수행하고 주의를 기울여 두 번째 특성이 되어야 합니다. 그러나, 항상 전체 프로토콜을 통해 부드럽고 인도적으로 동물을 치료하는 것을 기억하십시오. 먼저 각 실험 그룹에 대해 6개의 탱크를 설정합니다.

총 물고기 수가 20리터 미만이고 4리터 탱크가 20리터 미만인 경우 두 리터 탱크를 사용하십시오. 두 탱크, 하우징 탱크 및 다른 용액 탱크 중 하나를 레이블. 수온을 유지하기 위해 탱크를 28 ~29도의 수조에 보관하십시오.

첫날에는 물고기를 각각의 치료 용액에 24시간 동안 넣습니다. 둘째 날, 물고기를 치료 용액에서 물로 24 시간 동안 옮기. 셋째 날에는 물고기를 물에서 처리 솔루션으로 옮기습니다.

실험의 나머지 부분에 대해 이러한 번갈아 노출을 계속합니다. 매일 물 처리 제어 물고기를 물에서 물로 옮기는 것입니다. 실험 기간 동안 매일 동일한 2시간 기간 내에 물고기를 먹이고 옮기는지 확인합니다.

각 처리군에서 물고기를 하우징 탱크에서 표준 어망을 이용하여 해당 용액 탱크로 이송한다. 물고기가 들어 있는 탱크를 수조에 다시 놓고 공기석과 탱크 뚜껑을 교체합니다. 이 탱크는 이제 하우징 탱크이며 이전에 물고기를 잡은 탱크가 이제 솔루션 탱크입니다.

오래된 용액을 버리고 탱크 뚜껑, 공기 선, 공기 돌 및 그물과 함께 탱크를 청소하여 포도당과 매니톨이 축적되는 것을 방지하십시오. 각 처리 조건에 물과 전용 스폰지를 사용하여 탱크를 올바르게 청소하십시오. 새로 청소된 용액 탱크를 종이 타월로 건조시키고 이 탱크를 사용하여 다음 날용액을 준비하십시오.

다른 품목이 적절한 치료 그룹에 의해 건조되고 분리되었는지 확인하십시오. 설탕 용액을 준비하려면 각 솔루션 탱크에 2~4리터의 시스템 워터를 채웁니다. 최고 적재 스케일을 사용하여 정확한 양의 포도당과 매니톨을 측정하고 각 화학 물질에 대해 별도의 계량 보트를 분리합니다.

계량 된 포도당 또는 매니톨 알리쿼트를 적절한 깨끗한 용액 탱크에 추가하십시오. 설탕이 완전히 녹을 때까지 별도의 유리 저어막대로 용액을 저어줍니다. 그런 다음 용액 탱크를 수조에 반환하고 해당 뚜껑으로 덮습니다.

물 용액을 준비하려면 실험 용수로 실험 용액 탱크를 수조로 채우고 해당 뚜껑으로 덮습니다. 혈당 값은 4 주 및 8 주 포도 당 치료 후 크게 상승 했다. 고혈당증을 통해 처리된 물과 매니톨 처리군 모두에서 대조군 평균의 3배로 정의됩니다.

고혈당증의 4 주 후에 집합된 망막 조직은 신경교 섬유 산성 단백질 또는 GFAP 수준에 있는 증가가 있었습니다. GFAP 발현은 당뇨병 성 망막병증에서 변경되는 망막에 있는 뮬러 신경교 세포에서 관찰됩니다. GFAP의 이러한 증가는 핵인자 카파B 수준의 증가와 관련이 있었습니다.

유도된 고혈당증이 염증 반응 및 반응성 글리오증을 유발한다는 것을 시사합니다. ERG 는 4 주 간의 치료 후 기록매니톨 치료 제어에 비해 포도당 치료 망막에서 감소 된 반응을 확인했습니다. 광수용체와 양극성 세포 성분의 진폭은 고혈당어에서 감소하였다.

이 절차는 고혈당증의 다른 시험에 의해 보충 될 수있다. 예를 들어, 메모리 분석법은 인지 적자를 보거나 시력 기반 합병증을 평가하기 위해 광두운동 반응과 같은 시각적 기반 반응을 기록하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술이 확립되면, 우리의 실험실은 얼룩말 물고기 모형에 있는 고혈당 유도한 합병증을 연구하기 위하여 그것을 사용할 수 있었습니다.

우리는 처리의 4 주 후에, 상대적으로 빨리 이 합병증을 관찰했습니다.