Name: 태아 및 성인 신경 줄기 세포의 고함량 선별 분화 및 성숙 분석- 유래 올리고드로시테 전구체 세포 배양 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: 배우세요 신경 줄기 세포에서 올리고드로시테 전구체 세포와 성상교세포를 분화시키는 고함량 선별 분석 기법입니다. 이 방법은 수초 형성 및 재생 연구에 활용됩니다.

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MIUR 국가 기술 클러스터 프로젝트 IRMI (CTN01_00177_888744) 및 지역 에밀리아 로마냐, Mat2Rep, POR-FESR 2014-2020에 의해 지원.
실험 작업을 주최하기위한 IRET 재단에 특별한 감사.

본 명세서에 기재된 모든 동물 프로토콜은 유럽 공동체 협의회 지침(86/609/EEC)에 따라 수행되었으며 실험실 동물의 치료 및 사용에 대한 NIH 가이드에발표된 지침을 준수하였다.
1. 솔루션 및 시약
<ol><li>표준 매체 준비: DMEM/F12 글루타맥스 1배; 8 mmol/L HEPES; 100 U/100 μg 페니실린/연쇄 절제술 (1% P/S); 1x B27; 1x N-2.</li>
	<li>신경권 배지 준비: 10 ng/mL bFGF를 추가; 표준 매체에 10 ng/mL EGF.</li>
	<li>올리고스피어/OPC 배지 준비: 10 ng/mL bFGF를 추가하십시오. 표준 매체에 10 ng/mL PDGF-AA.</li>
	<li>올리고드엔드로티 분화 배지 준비: 50nM T3를 추가하십시오. 10 ng/mL CNTF; 1x N-아세틸-L-시스테인 (NAC) 표준 매체.</li>
	<li>비 효소 해리 버퍼 를 준비 : 비 효소 해리 버퍼에 1 % P / S를 추가하고 얼음을 차갑게 유지합니다.</li>
	<li>자당 용액 준비: HBSS, 0.3 g/mL 자당.</li>
	<li>BSA 세척 용액 준비: EBSS, 40 mg/mL BSA, 0.02 mL/l HEPES.</li>
	<li>효소 해리 버퍼 준비: HBSS, 5.4 mg/mL D-포도당, 15 mmol/L HEPES, 1.33 mg/mL 트립신, 0.7 mg/mL Hyaluronidase, 80 U/mL DNase.</li>
	<li>세포사구믹 준비: TGF-β1, TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-17, IFN-γ(각각 20ng/mL).</li>
	<li>시토카인 믹스 차량 준비: 주식의 0.04%(글리세롤/100nM 글리신/25 nM Tris, pH 7.3).</li>
	<li>산소 포도당 박탈 배지 준비: DMEM w/o 포도당을 사용 하 여 표준 매체. 바람직한 포도당 박탈 조건의 스트링성에 따라, 포도당 관련 화합물(예를 들어, B27의 D-Galactose)을 피하기 위해 배지에서 B27 및/또는 N2도 제거할 수 있다.</li>
</ol>2. 해부 및 NSC 격리
참고: 태아와 성인 NSC는 수정된 Ahlenius 및 Kokaia 프로토콜9에 따라 E13.5 태아 전뇌 또는 2.5개월 된 성인 심실 영역(SVZ)으로부터 격리되었습니다.
<ol><li>태아 NSC 문화 참고: 해부를 시작하기 전에, 비 효소 해리 버퍼의 150 μL을 포함하는 1.5 mL 튜브를 각각 준비; 페트리 요리를 청소하고 얼음 차가운 HBSS를 추가합니다.<ol>
<li>E13.5 - 14.5에서 배아를 수집하여 시간 제임신 마우스로부터 14.5마리의 배아를 수집하고 차가운 HBSS를 함유한 페트리 접시에 놓습니다.</li>
		<li>집게를 사용하여 배아를 참수하십시오.</li>
		<li>배아의 머리를 얼음 차가운 PBS가 들어있는 깨끗한 페트리 접시에 놓고 돋보기 또는 입체 스코프를 사용하여 집게로 두개골에서 피부를 제거하십시오.</li>
		<li>일단 뇌가 피부를 보이고 지워지면, 집게로 측면에 압력을 가하여 짜내라.</li>
		<li>소뇌를 제거하고 전뇌만 유지하고 집게로 수막을 제거하십시오.</li>
		<li>비 효소 해리 버퍼에 격리 된 조직을 배치하고 다른 배아와 해부 단계를 반복한다. 버퍼를 포함하는 각 관에 2-3 동물에서 조직을 삽입합니다.</li>
		<li>연속 흔들림하에서 15분 동안 37°C에서 배양합니다.</li>
		<li>인큐베이션 후 표준 매체850 μL을 추가하고 서스펜션이 덩어리가 없을 때까지 파이펫팅하여 혼합합니다.</li>
		<li>비 해리 조직이 여전히 보이는 경우, 튜브의 바닥에 예금 될 때까지 RT에서 2 분 기다립니다.</li>
		<li>해리가 완료되면 세포를 계산하고 T-25 또는 10-30 mL의 신경권 배지를 포함하는 T-45 플라스크에서 10-50 세포/μL의 밀도로 현탁액으로 플레이트, 세포 접착을 피하기 위해 수직 위치에 보관.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
성인 NSC 문화
	<ol>
<li>자궁 경부 탈구로 동물을 희생하십시오.</li>
		<li>얼음 차가운 HBSS를 포함하는 50 mL 관에 있는 4-5 마우스에서 두뇌를 수집합니다.</li>
		<li>차가운 멸균 표면에 뇌를 놓습니다. 이를 위해 물로 채워진 T-25 플라스크를 사용하여 하룻밤 동안 -20 °C에 놓습니다. 실험 시 플라스크를 멸균 알루미늄 호일로 덮습니다.</li>
		<li>뇌 복부 측면을 로스트로-코살 방향으로 아래쪽으로 놓고 면도날을 사용하여 후각 전구를 제거합니다.</li>
		<li>면도날을 사용하여 피질에서 광학 치아마에 이르기까지 두께 1mm의 2-3 개의 관상 슬라이스를 잘라냅니다.</li>
		<li>차가운 표면에 슬라이스를 벤트로-등갈 자세로 놓고 코퍼스 캘로섬과 두 개의 측면 심실을 식별합니다.</li>
		<li>돋보기 안경이나 스테레오스코프를 사용하여 측면 심실의 벽을 분리하여 코퍼스 캘로섬의 조각을 운반하지 않도록 주의하십시오.</li>
		<li>효소 해리 버퍼(5-10mL)에 격리된 조직을 넣고 15분 동안 37°C에서 배양한다.</li>
		<li>용액을 여러 번 섞고(최소 50개 이상)에 다시 배양하고 37°C에서 10분 동안 배양합니다.</li>
		<li>표준 배양 배지의 5mL를 추가하여 트립신을 중화하고 70 μm 필터를 사용하여 용액을 필터링합니다.</li>
		<li>400 x g에서5 분 동안 필터링 된 솔루션을 원심 분리합니다.</li>
		<li>자당 용액과 원심분리기에서 500 x g에서 10분 동안 펠릿을 다시 분리합니다.</li>
		<li>BSA 세척 용액및 원심분리기에서 펠릿을 400 x g에서 7분 동안 재차 중단합니다.</li>
		<li>표준 배양 배지에서 펠릿을 재중단하고, 세포를 계산하고, 위에서 설명한 대로 도금을 수행한다(단계 2.1.10).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 1차 신경구
<ol><li>성장 인자 (bFGF/EGF) 때마다 추가 2 일.</li>
	<li>매 4-6 일 (세포 밀도에 따라), 다음과 같이 매체의 절반을 변경:<ol>
<li>전체 셀 서스펜션을 15 또는 50mL 튜브로 전송합니다.</li>
		<li>원심 분리기 는 400 x g에서5 분 동안.</li>
		<li>볼륨의 절반을 제거합니다.</li>
		<li>동일한 양의 신선한 매체를 추가하고, 파이펫팅으로 부드럽게 섞고, 성장 인자를 추가합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 올리고스피어
참고: 올리고덴드로시테 분화는 수정과 함께 첸 프로토콜10에 따라 수행됩니다.
<ol><li>신경구가 직경 100-150 μm에 도달하면 통과 할 준비가되어 있습니다. 이렇게 하려면 전체 셀 서스펜션을 15 또는 50mL 튜브로 옮기고 원심분리기를 400 x g에서 5분 동안 이송합니다.<ol>
<li>반전된 송신광 현미경을 사용하여 구체의 사진을 찍고 ImageJ 소프트웨어로 열면 직경을 빠르게 평가합니다.</li>
		<li>분석 메뉴를 클릭하고 도구 창에서 배율 막대를 선택합니다.</li>
		<li>150 μm을 미크론의 너비로 설정하고 스케일 바를 구체와 비교합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>반전으로 전체 부피를 제거하고 신선한 표준 배양 배지의 180 μL에서 펠릿을 다시 분리합니다. 파이펫은 구체의 분리를 허용하는 50 배.</li>
	<li>신선한 표준 배양 배지의 810 μL을 추가하고, 세포를 계산하고, 신경구에 대해 설명된 대로 다시 플레이트합니다.</li>
	<li>bFGF/PDGF-AA 를 추가 10 ng/mL 마다 2 일.</li>
	<li>매 4-6 일 (세포 밀도에 따라), 다음과 같이 매체의 절반을 변경:</li>
	<li>전체 셀 서스펜션을 15 또는 50mL 튜브로 전송합니다.</li>
	<li>원심 분리기 는 400 x g에서5 분 동안.</li>
	<li>볼륨의 절반을 제거합니다.</li>
	<li>동일한 양의 신선한 매체를 추가하고, 파이펫팅으로 부드럽게 섞고, 성장 인자를 추가합니다.</li>
</ol>5. 플레이트 코팅
<ol><li>폴리-D, L-ornithine/라미닌 코팅: OpC를 도금하기 최소 2일 전에 PBS로 희석된 50μg/mL 폴리-D, L-ornithine 용액을 각 우물(40μL/well 96웰 플레이트용)에 추가하고 RT에서 하룻밤 사이에 배양합니다.</li>
	<li>다음 날, 액체를 제거하고 증류 살균 물로 세 번 세척하십시오.</li>
	<li>하룻밤 동안 RT에서 접시를 건조하게하십시오. 다음 날, PBS(5 μg/mL; 40 μL/96웰 플레이트용 40 μL/well)로 희석된 라미닌 용액을 추가하고 37°C에서 2시간 동안 배양한다.</li>
</ol>6. 셀 시드
<ol><li>올리고스피어가 직경 100-150 μm에 도달하면 폴리 D, L-ornithine/라미닌 코팅 플레이트에 해리되고 시드될 준비가 되어 있습니다. 이렇게 하려면 전체 셀 서스펜션을 15 또는 50mL 튜브로 옮기고 원심분리기를 400 x g에서 5분 동안 이송합니다(4.1 단계에서 나타낸 대로)</li>
	<li>반전으로 전체 부피를 제거하고 신선한 표준 배양 배지의 180 μL에서 펠릿을 다시 분리합니다. 파이펫은 구체의 분리를 허용하는 50 배.</li>
	<li>신선한 표준 배양 배지의 810 μL을 추가하고 세포를 계산합니다.</li>
	<li>우물에서 라미닌 용액을 제거하고 3,000 셀/cm2 밀도(96웰 플레이트의 경우 100 μL/well)로 세포를 플레이트로 플레이트합니다.</li>
</ol>7. OPC 차별화 유도
<ol><li>3일 후, 전체 배지를 제거하고 동일한 부피를 올리고드엔드로시테 분화 배지를 추가한다.</li>
	<li>매체의 절반을 4일마다 변경하고 2일마다 신선한 차별화 믹스(T3/CNTF/NAC)를 추가합니다.</li>
</ol>8. 염증 매개 분화 블록의 유도
<ol><li>신경권 해리 및 올리고스피어 생성 후(섹션 4), 사이토카인 믹스를 배양 배지에 추가하고 전체 구체 형성 단계에 대해 사이토카인에 노출된 올리고스피어를 유지한다. 참고: 세포를 형성하는 구체의 경우 10-50개의 세포/μL에서 시드되기 때문에 부피는 셀 수에 따라 달라집니다.</li>
	<li>매체를 변경해야 하는 경우 전체 볼륨을 변경하고 사이토카인 믹스를 한 번 더 추가합니다.</li>
</ol>9. 산소 포도당 박탈 세포 죽음의 유도
<ol><li>-1 DIV (멀티웰 플레이트에서 세포 파종 후 2 일)에서 매체를 제거하고 새로운 멀티웰 플레이트에 보존하십시오.</li>
	<li>OGD 매체(OGD 그룹) 또는 신선한 매체(대조군)의 절반 부피(96웰 플레이트의 경우 50 μL)를 추가합니다. 부피의 절반 양은 액체와 공기 사이의 산소 교환을 줄이기 위해 사용됩니다.</li>
	<li>OGD 그룹 배양을 95%N2 및 5% CO2로포화된 밀폐 저산소증 챔버에 놓습니다. 챔버의 포화를 달성하기 위해, 챔버 파이프를 닫기 전에 가스 혼합물이 25 l / 분에서 6 분 동안 흐르게하십시오.</li>
	<li>인큐베이터에서 저산소 챔버를 3시간 동안 배양한다. 9.1 단계에서 제거 및 보존된 배지를 포함하는 대조군 및 플레이트도 인큐베이터에 남아 있어야 한다.</li>
	<li>포도당이 없는(OGD 그룹) 또는 새로운 배지(대조군)를 제거하고 9.1단계에서 제거및 보존된 배지를 추가한다.</li>
</ol>10. 면역 세포 화학
<ol><li>원하는 시점에서, RT에서 20 분 동안 감기 4 % 파라 포름 알데히드로 세포를 고정합니다.</li>
	<li>PBS로 두 번 씻으시면 (RT에서 세척할 때마다 10분 배양).</li>
	<li>차단 용액 (PBS 트리톤 0.3 % 1 % BSA 및 1 % 당나귀 / 염소 일반 세럼을 포함하는 PBS 트리톤 0.3 %)에서 RT에서 1 h를 배양하십시오.</li>
	<li>1차 항체 믹스(표1)를배양하여 PBS 트리톤 0.3%, 하룻밤 4°C로 희석한다.</li>
	<li>PBS로 두 번 씻으시면 (RT에서 세척할 때마다 10분 배양).</li>
	<li>PBS 트리톤에서 희석된 이차항체(표 1)용액을 37°C에서 30분 동안 30분 동안 0.3% 첨가한다.</li>
	<li>PBS로 두 번 씻으시면 (RT에서 세척할 때마다 10분 배양).</li>
</ol>11. 세포 생존가능성, 계보 조성 및 계보 특이적 세포 사멸의 HCS 분석
참고: HCS 대표 이미지와 워크플로우는 그림 2A, B에표시됩니다.
<ol><li>소프트웨어의 메인 메뉴(HCS Studio v 6.6.0)에서 구획 분석 알고리즘을 선택하고 메인 메뉴에서 스캔을 선택하여 분석/스캔 플레이트를 개발한다.</li>
	<li>iDev 창에서 새 값을 선택한 다음 분석 개발 템플릿에서 일반 강도 측정 도구를 선택합니다.</li>
	<li>10배 목표를 선택하여 메뉴의 오른쪽에 만들기를 클릭합니다.</li>
	<li>이렇게 하면 수집 구성 메뉴가 열립니다. 이 창에서, 다음 매개 변수를 선택: (a) 채널의 수: Hoechst 핵 염색에 대한 첫 번째 (BGRFR_386) 및 반응 (b)에 사용되는 각 계보 별 마커에 대한 하나 채널에 대한 소프트웨어 초점을 선택하고 1 (c) 목록에서 플레이트 모델을 선택한다.</li>
	<li>획득 메뉴에서 다른 우물과 다른 필드의 염색 품질을 살펴보고 메뉴에서 고정 노출 시간을 선택하여 노출 시간을 수동으로 선택합니다.</li>
	<li>인수 매개 변수가 설정되면 메뉴 상단의 Mini 검사를 선택하고 실험 조건당 2개의 우물에서 웰당 10개의 필드를 선택합니다. 이렇게 하면 전체 플레이트에 대한 필드의 하위 집합에 있는 모든 분석 매개 변수를 설정할 수 있습니다.</li>
	<li>미니 스캔이 완료되면 분석 알고리즘을 구성하려면 분석 매개 변수 구성을 클릭합니다.</li>
	<li>창 의 오른쪽에 있는 그룹 구성을 클릭하고 미니스캔의 우물을 드래그 앤 드롭합니다. 그룹 하위 섹션의 추가 단추를 클릭하여 다른 그룹을 구성합니다.</li>
	<li>전체 알고리즘을 개발하기 위해 창 단계의 왼쪽에 있는 워크플로우를 단계별로 따르십시오. 먼저 각 채널에 대한 프로세스 이미지를 선택하고 배경 제거및 원하는 수준에서 클릭합니다.</li>
	<li>먼저 핵 염색에 의한 핵을 식별하고 선택한다. 1차 개체 식별을 클릭합니다 – 채널 1을 클릭하여 실제 핵을 선택하고 유물과 파편을 분석하지 마십시오. 이를 위해 핵 염색의 대표적인 그림을 확대하고 핵이 소프트웨어에 의해 만들어진 경계에 잘 둘러싸여 있는지 확인하십시오. 임계값 값을 변경하고 단일 핵을 더 잘 식별하기 위해 세분화 알고리즘을 적용할 수 있습니다.</li>
	<li>핵이 올바르게 정의되면 다음 단계를 클릭합니다. 각 필드 이미지의 경계에서 핵 분석을 피하려면 Object.BorderObject.Ch1을 선택합니다. Object.Area.Ch1을 선택하고 히스토그램의 "낮음" 및 "높음" 막대를 이동하여 집계 또는 아티팩트에 해당하는 식별된 모든 파편 또는 큰 물체를 제거합니다.</li>
	<li>선택한 매개 변수가 모두 맞는지 확인하려면 모든 실험 조건의 모든 미니 스캔 대표 이미지를 확인합니다.</li>
	<li>특정 계보 마커에 해당하는 각 채널의 반점 식별을 클릭하고 링 값: 너비 = 3 및 거리 = 0을 선택합니다. 이것은 세포 플라즈마 형광의 식별을 허용할 것입니다. 세포 밀도에 따라 이러한 값을 조정할 수 있습니다. 소프트웨어는 자동으로 인접 한 링 사이의 중복을 방지 합니다.</li>
	<li>워크플로에서 참조 수준을 선택하여 분석을 빌드합니다. 기준 수준의 설정은 고리에 의해 확인된 세포 플라즈마 형광에 기초하여 핵 크기 및 핵 염색 강도 및 특정 마커 양성 세포의 응축된 핵의 자동 계수를 허용할 것이다.</li>
	<li>Object.Area.Ch1을먼저 클릭합니다. 미니 스캔 이미지에서 응축된 핵을 선택하고 히스토그램의 "LOW" 막대를 이동하여 이 크기 하에서 모든 핵을 "응축"으로 선택합니다.</li>
	<li>개체를 클릭합니다.AvgIntensity.Ch1. 미니 스캔 이미지에서 응축된 핵을 선택하고 히스토그램의 "HIGH" 막대를 이동하여 이 형광 강도 위의 모든 핵을 "응축"으로 선택합니다.</li>
	<li>계보 특정 마커의 각 채널에 대해 Object.RingAvgIntensity를 클릭합니다. 미니 스캔 이미지에서 양수 셀을 선택하고 히스토그램의 "HIGH" 막대를 이동하여 이 형광 강도 위의 모든 세포를 "양수"로 선택합니다.</li>
	<li>선택한 매개 변수가 모두 맞는지 확인하려면 모든 실험 조건의 모든 미니 스캔 대표 이미지를 확인합니다.</li>
	<li>맨 위 메뉴에서 인구 특성화를 선택하고 이벤트 하위 계층을 선택합니다.</li>
	<li>유형 1 이벤트로 왼쪽 목록에서 ObjectAreaCh1을 선택한 다음 AND > 버튼을 클릭한 다음 ObjectAvgIntensityCh1을선택합니다. 이것은 낮은 면적과 고강도의 조합으로 응축된 핵의 확인을 허용할 것입니다.</li>
	<li>동일한 창에서 모든 검사 제한을 선택 해제합니다.</li>
	<li>상위 메뉴에 저장할 기능 선택(을 클릭하여 분석에 보관할 매개 변수를 선택)을 클릭합니다.</li>
	<li>잘 기능을 선택하고 왼쪽 목록에서 원하는 매개 변수만 오른쪽으로 이동합니다: (a) 선택한ObjectCountPErValidField (b) %EventType1ObjectCount(c) %High_RingAvgIntensity(특정 계보 마커의 각 채널에 대해). 참고: 이 분석은 총 세포 수, 응축된 핵의 백분율 및 전체 세포 수에 대해 분석된 각 마커에 대한 계보 특이적 양성 세포의 백분율을 판독할 수 있게 한다. 상사 세포에서만 상이한 계보의 백분율이 필요한 경우, 채널에 대한 값 "High_RingAvgIntensity"를 유지하고 죽은 세포의 백분율을 빼고 나서 총 세포 수의 백분율을 다시 계산할 수 있다.<ol>
<li>대안적으로, 핵 검증(steps 11.11)에서 응축된 핵(steps 11.14-11.15)을 식별하는 데 사용되는 동일한 파라미터를 설정하는 분석으로부터 죽은 세포를 제거할 수 있다.</li>
	</ol></li>
	<li>메인 탑 메뉴에서 스캔 플레이트를 선택하고 분석할 우물을 식별하려면 상단 섹션의 스캔 설정 하위 메뉴의 플레이트 기호를 클릭합니다.</li>
	<li>실험 이름과 설명의 이름을 작성하고 모든 설정이 완료되면 재생 기호를 누릅니다.</li>
</ol>

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<li>Baldassarro, V. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+nuclear+receptors+in+the+differentiation+of+Oligodendrocyte+Precursor+Cells+derived+from+fetal+and+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">The role of nuclear receptors in the differentiation of Oligodendrocyte Precursor Cells derived from fetal and adult neural stem cells.</a> Stem Cell Research. 37, 101443(2019).</li>
<li>Fernández, M., Baldassarro, V. A., Sivilia, S., Giardino, L., Calzà, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+severely+alters+thyroid+hormone+signaling+in+the+central+nervous+system+during+experimental+allergic+encephalomyelitis+in+rat%3A+direct+impact+on+OPCs+differentiation+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Inflammation severely alters thyroid hormone signaling in the central nervous system during experimental allergic encephalomyelitis in rat: direct impact on OPCs differentiation failure.</a> Glia. 64, 1573-1589 (2016).</li>
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myelination/remyeliination 프로세스및 탈근 이벤트의 복잡한 특성은 예측 시험관 시스템의 개발을 매우 어렵게 만듭니다. 체외 약물 선별 시스템에서 가장 널리 사용되는 것은 주로 인간 세포주 또는 1차 순수 OL 배양이며, 보다 복잡한 공동 배양 또는 organotypic시스템(15)의사용이 증가하고 있다. 이러한 시스템이 높은 콘텐츠 기술과 결합되어 있더라도, 순수한 OL 문화는 스크리닝플랫폼(16)을개발할 때 선택의 여지가 남아 있다.
여기에 설명된 자발적인 혼합 배양은 모든 주요 변수를 고려하는 체외 계통에서 유용한 것을 나타냅니다: 생리적 T3 매개 OPC 분화, 프로세스를 가진 병리학적 방해, 다른 세포 구성 요소 및 연령 관련 차이. 절차는 세포의 기원 (동물의 나이)과 스페로이드 형성 및 조작으로부터 파생되는 다수의 변수를 포함합니다. 사실, 중요한 단계는 조직으로...

중추신경계(CNS)에서 미엘린 형성 세포(oligodendrocytes, OLs) 및 그들의 전구체(oligodendrocyte 전구체 세포, OpC)는 발달 근생, peri 및 산후 기간 동안 발생하는 과정, 그리고성년1에서골린 회전율 및 수리(재제동)에 대한 책임이 있다. 이 세포는 고도로 전문화되어 해부학적으로 그리고 다른 모든 신경교 및 신경 성분과 기능적으로 상호 작용하여 CNS 구조 및 기능의 근본적인 부분을 만듭니다.
탈제 이벤트는 다른 CNS 부상과 질병2에관여하고, 주로 개발 및 성인기 동안 다인적 메커니즘의 방법으로 OpC와 OLs에 작용합니다. 미분화 전구체는 분화 요인에 의해 구동되며, 주로 갑상선 호르몬(TH)을 구분하여 OPC가 증식을 유도하는 특정 자극에 인식하고 반응하도록 유도하는 동기화된 과정3, 비골암축으로의 이동, 그리고 성숙한 OLs로의 분화로 전환하여 골린 시스4를차례로 개발한다. 이러한 모든 프로세스는 미세하게 제어되며 복잡한 환경에서 발생합니다.
근생, 재생물 및 탈량 이벤트의 복잡한 특성으로 인해, 기본 메커니즘을 연구하고 주요 세포 플레이어에 초점을 맞춘 새로운 치료 전략을 개발하기 위해 단순화되고 신뢰할 수있는 시험관 내 방법에 대한 큰 필요성이 있다: OPC5.
체외 계통이 신뢰할 수 있도록, 셀룰러 환경의 복잡성, 연령 관련 세포 내재성 차이, 생리적 TH 매개 분화 분화, 병리학 적 메커니즘 및 데이터6의견고성 등 여러 가지 요인을 고려해야합니다. 실제로, 현장에서 충족되지 않은 필요는 고립 된 순수 OPC 문화의 사용을 통해 성공적으로 달성되지 않은 생체 내 상태의 복잡성을 모방한 모델입니다. 또한, 탈밀증 사건의 두 가지 주요 구성 요소, 염증 및 저산소증/허혈 (HI), 직접 간접적으로 APC의 생리적 분화 및 성숙에 영향을 미칠 수있는 다른 세포 구성 요소를 포함, 지나치게 단순화 된 체외 모델에서 공부 할 수없는 측면.
예측이 매우 높은 문화 시스템에서 시작하여 보다 일반적인 과제는 강력하고 신뢰할 수 있는 데이터를 생산하는 것입니다. 이러한 맥락에서, 세포 기반고함량 스크리닝(HCS)은 가장 적합한 기술7이며,우선 전체 문화를 자동 워크플로우로 분석하여 대표 분야를 선택하는 편견을 피하고, 둘째는 이미징 기반고함량 데이터8의자동 및 동시 생성을 얻는 것입니다.
주요 필요는 시험관 내 단순화와 생체 모방 복잡성 사이의 최상의 균형을 달성하는 것입니다 감안할 때, 여기서 우리는 태아 전뇌와 성인 하위 심실 영역 (SVZ)에서 분리 된 신경 줄기 세포 (NSC)에서 파생 된 OpC를 얻기위한 매우 재현 가능한 방법을 제시한다. 이 체외 모델은 다능 NSC에서 성숙한/마일리네팅 OL에 이르기까지 전체 OPC 분화 과정을 생리적인 TH 의존적 방식으로 포괄합니다. 결과 배양은 주로 CPC와 성상 세포를 분화하는 자발적인 공동 배양으로 인해 뉴런의 비율이 낮은 동적으로 차별화/maturating 시스템입니다. 이 1 차 배양은 생체 내 환경에서 복합체를 더 잘 모방하고 줄기 세포 파생은 간단한 조작을 통해 원하는 세포 혈통 농축을 얻을 수 있게 합니다.
1차 OpC의 세포주 또는 순수 배양을 이용한 다른 약물 선별 전략과는 달리, 여기서 설명된 방법은 바람직한 세포 유형에 초점을 잃지 않고 복잡한 환경에서 병리학적 간섭 또는 치료 분자의 효과에 대한 연구를 허용한다. 설명된 HCS 워크플로우는 세포 생존가능성 및 계보 사양뿐만 아니라 계보별 세포 사멸 및 형태학적 매개변수에 대한 분석을 허용합니다.

<table><tbody><tr><td>96웰 플레이트 - 처리되지 않은</td><td>NUNC</td><td>267313</td><td></td></tr><tr><td>B27 보충제(100x)</td><td>GIBCO</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>basic 섬유아세포 성장 인자(bFGF)</td><td>GIBCO</td><td>PHG0024</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>섬모 신경친화성 인자(CNTF)</td><td>GIBCO</td><td>PHC7015</td><td></td></tr><tr><td>포도당 없는 DMEM</td><td>GIBCO</td><td>A14430-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 GlutaMAX</td><td>GIBCO</td><td>31331-028</td><td></td></tr><tr><td>DNase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5025-150KU</td><td></td></tr><tr><td>EBSS</td><td>GIBCO</td><td>14155-048</td><td></td></tr><tr><td>표피 성장 인자(EGF)</td><td>GIBCO</td><td>PHG6045</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>GIBCO</td><td>14170-088</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>GIBCO</td><td>15630-056</td><td></td></tr><tr><td>히알루로니다아제</td><td>시그마-알드리치</td><td>H3884</td><td></td></tr><tr><td>IFN-&감마;</td><td>오리진</td><td>TP721239</td><td></td></tr><tr><td>IL-17A</td><td>오리진</td><td>TP723199</td><td></td></tr><tr><td>IL-1&beta;</td><td>Origene</td><td>TP723210</td><td></td></tr><tr><td>IL-6</td><td>Origene</td><td>TP723240</td><td></td></tr><tr><td>laminin</td><td>GIBCO</td><td>23017-051</td><td></td></tr><tr><td>N-아세틸-L-시스테인</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>N2 supplement (50x)</td><td>GIBCO</td><td>17502-048</td><td></td></tr><tr><td>Non-enzymatic dissociation buffer</td><td>GIBCO</td><td>13150-016</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO</td><td>70011-036</td><td></td></tr><tr><td>페니실린 / 스트렙토마이신</td><td>시그마-알드리치</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>혈소판 유래 성장 인자 (PDGF-AA)</td><td>GIBCO</td><td>PHG0035</td><td></td></tr><tr><td>폴리-D,L-오르니틴</td><td>시그마-알드리치</td><td>P4957</td><td></td></tr><tr><td>TGF-&베타; 1</td><td>Origene</td><td>TP720760</td><td></td></tr><tr><td>TNF-&알파;</td><td>오리겐</td><td>TP723451</td><td></td></tr><tr><td>트리요오드티로닌</td><td>시그마-알드리치</td><td>T2752-1G</td><td></td></tr><tr><td>트립신</td><td>시그마-알드리치</td><td>T1426</td><td></td></tr></tbody></table>

태아 및 성인 신경 줄기 세포의 고함량 선별 분화 및 성숙 분석- 유래 올리고드로시테 전구체 세포 배양

High-Content Screening Differentiation and Maturation Analysis of Fetal and Adult Neural Stem Cell-Derived Oligodendrocyte Precursor Cell Cultures

복잡한 질병에서 치료 전략의 효능을 평가하기 위한 약물 선별 기술 개발의 주요 장애물은 생체 내 단순화와 생체 내 환경에서 복잡한 복합체를 재현하는 것 사이의 균형을 맞추는 것이며, 모든 선별 전략에 의해 공유되는 주요 목표와 함께 생체 변환에 대한 예측이 매우 중요합니다.
탈근성 질환 분야에서, 약물 선별 전략의 대부분은 신생아 동물의 고립 된 1 차 성 올리고 드로시테 전구체 (OpC)의 불멸의 세포주 또는 순수한 배양에 기초하여 연령과 관련된 차이의 부족과 실제 병리학 적 상태 또는 복잡성으로 인해 강한 편견으로 이어진다.
여기서 는 신경 줄기 세포 (NSC)에서 파생 된 OpC의 생리적 분화 / 성숙을 모델링하기위한 체외 시스템의 설정을 보여 주며, 탈근 질환의 전형적인 병리학 적 조건을 모방하기 위해 쉽게 조작됩니다. 또한, 이 방법은 태아와 성인용 두뇌로부터의 격리를 포함하며, 성상세포도 포함하는 자발적인 공동 배양에서 OPC에서 성숙한 올리고드로키테스(OLs)로 동적으로 차별화되는 시스템을 제공합니다. 이 모델은 생리학적으로 갑상선 호르몬 매개 myelination 및 myelin 수리 과정과 유사하여 질병 메커니즘을 모델링하는 병리학적 간섭을 첨가할 수 있습니다. 우리는 탈수성 질환 (즉, 저산소증 / 허혈및 염증)의 두 가지 주요 구성 요소를 모방하는 방법을 보여줍니다, 발달 골수화및 성인 myelin 수리에 미치는 영향을 재현하고 전체 계정에 시스템의 모든 세포 구성 요소를 복용, OpC를 차별화에 초점을 맞추고있는 동안.
이 자발적인 혼합 모델은 세포 기반고함량 선별 기술과 결합되어 탈량에 관련된 병리학 적 과정을 퇴치하고 재myelination을 유도하기위한 치료 전략을위한 강력하고 신뢰할 수있는 약물 선별 시스템을 개발 할 수 있습니다.

배양의 첫 번째 단계는 시드 밀도와 구체가 태아 또는 성인 기원인지 여부에 따라 지속 시간이 다를 수 있습니다. 더욱이, 올리고스피어는 신경구(도1B)에비해 두 배로 감소된 인구를 표시한다. 더욱이, 성인 조직에서 구체 생산은 느리고 파종 밀도에 따라 1-2주가 걸릴 수 있는 태아에 비해 올리고스피어를 생성하는 데 2-3주가 걸릴 수 있다.
일단 시드되면, 배양의 전체 분화 단계는 혈통 특정 항체를 사용하여 모니터링될 수 있다. 이 프로토콜의 목적은 분화의 최종 단계를 연구하는 것이므로 0 DIV의 배양 조성은 제시되지 않습니다. 그러나, 제1 배양단계에서, 세포는 신경 전구체를 나타내는 여전히 네신 양성이 될 것이며, 세포의 대부분은 NG2 양성(OpC)11이다. PREOL 단계에 대응하는 CNPase 양성 세포는 T3 매개 분화 유도 후 3~6일 후에 검출될 것이며, MBP 양성 ...

우리는 성숙한 올리고드로시테스로 분화하는 태아 또는 성인 신경 줄기 세포에서 유래한 성상세포및 올리고드엔드로시테 전구세포의 혼합 배양, 유해자극의 시험관내 모델링을 설명한다. 셀 기반 고함량 선별 기술과 결합은 신뢰할 수 있고 견고한 약물 선별 시스템을 구축합니다.

The main hurdle in developing drug screening techniques for assessing the efficacy of therapeutic strategies in complex diseases is striking a balance ...

이 프로토콜은 신경 줄기 세포 유래 자발적 혼합 배양의 연령별 절연을 결합하여 올리고원드로시테 전구체 세포 및 성상세포를 분화하고, 병리학적 조건을 모방한 분석, 고함량의 판독을 결합합니다. 이러한 특성은 생리적 및 병리학 적 조건과 성상 세포의 기여를 고려하는 미세 환경에서 발달 근상화 및 성인 재마일화를 분분적으로 연구 할 수 있게합니다. 배아 일 13.5에서 14.5 태아 전뇌에서 신경 줄기 세포 절연을 위해, 얼음 차가운 PBS와 깨끗한 페트리 접시에 배아의 머리를 배치하고 배율아래 두개골에서 피부를 제거하기 위해 집게를 사용합니다.뇌가 피부를 보이고 지워지면 집게를 사용하여 두개골에서 뇌를 짜내고 소뇌를 제거하십시오. 집게를 사용하여 수막을 제거하고 분리된 조직을 비 효소 해리 버퍼에 놓습니다. 모든 뇌 조직이 고립되면 1.5 밀리리터 튜브 당 비 효소 해리 버퍼의 150 마이크로 리터에서 2 ~ 3 개의 샘플을 당기고 연속 흔들림으로 37 도에서 15 분 동안 튜브를 배양하십시오.인큐베이션이 끝나면 각 튜브와 파이펫에 표준 매체 850 마이크로리터를 추가하여 서스펜션이 덩어리가 없는 때까지 혼합합니다. 비 해리 조직이 여전히 보이는 경우, 조직이 튜브의 바닥에 정착 할 수 있도록 샘플을 2 분 동안 휴식을 허용합니다. 해리가 완료되면, T25 또는 T45 플라스크에서 신경권 배지 농도의 10~30밀리리터에서 마이크로리터당 10~50개의 세포의 밀도로 플레이트 세포를, 세포 배양배기에서 플라스크를 수직 위치에 배치하여 세포 부착을 방지한다.2.5개월 된 성인 생쥐에서 뇌를 4-5마리의 성인 마우스를 얼음 차가운 HBSS 50밀리리터 튜브에 넣고 1개의 뇌, 복부 면을 아래로 내려 놓고, 멸균 알루미늄 호일 덮인 플라스크의 로스트랄-코멀 방향으로 하룻밤 동안 차가운 물을 영하 20도로 채우십시오. 면도날을 사용하여 후각 전구를 제거하고 피질에서 광학 치아마로 2~3개의 1mm 두께의 관상 동맥 조각을 잘라냅니다. 차가운 표면에 슬라이스를 벤트로-등갈 위치에 놓고 코퍼스 캘로섬과 두 개의 측면 심실을 식별합니다.배율을 사용하여, 측면 심실의 벽을 분리하고, 코퍼스 캘로섬의 조각을 포함하지 않도록 주의하고, 37섭씨37도에서 15분 동안 효소 해리 버퍼의 5~10 밀리리터에 고립된 조직을 배치한다. 인큐베이션이 끝나면 조직을 50회 이상 배관한 후 37도에서 샘플을 추가로 10분 동안 배양합니다. 인큐베이션의 끝에서, 표준 배양 배지의 5 밀리리터로 트립신을 중화시키고 70 미크론 필터를 통해 조직 현탁액을 필터링한다.400배 g에서 5분간 여과된 용액을 원심분리하고, 두 번째 원심분리를 위해 자당용의 펠릿을 다시 중단한다. 원심분리의 끝에서, 또 다른 원심분리를 위해 소 세럼 알부민 세척 용액의 펠릿을 다시 중단한 다음, 수직 T-25 또는 T-45 플라스크에서 세포를 계산하고 플레이트하기 위한 표준 배양 배지에서 펠릿을 다시 중단한다. 1 차적인 신경권 분화를 위해, 신경 줄기 세포 배양에 기본적인 섬유아세포 및 내피 성장 인자를 2일마다 추가하십시오.신경구가 100-500 미크론 직경에 도달하면 표준 프로토콜에 따라 기계적 해리로 세포를 통과합니다. 올리고스피어 분화의 경우, 혈소판 유래 인자-AA에서 기본 섬유아세포 성장 인자를 2일마다 치료한다. 올리고스피어가 100-150미크론 직경에 도달하면 표준 프로토콜에 따라 기계적 해리에 의해 구체를 해리시키고 세포 현탁액을 평방 센티미터 당 3000 셀 밀도에서 다각DL-ornithine 라미닌 코팅 플레이트에 시드한다.3 일 후, 올리고드 로시테 분화 매체의 동일한 볼륨으로 각 문화의 상체를 교체. 염증 매개 분화 블록 유도를 수행하기 위해, 신경구 해리 후 및 올리고스피어 생산 중에, 배양 배지에 관심의 사이토카인 혼합을 추가한다. 산소-포도당 박탈 세포 죽음을 유도하기 위하여는, 다중 우물 판으로 파종한 후에 2 일, 다중 우물판의 개별 우물로 각 배양에서 상체원을 전송합니다.OGD 배지의 절반을 우물에 추가하고, 95%의 질소와 5%의 이산화탄소로 포화된 밀폐 저산소실로 배양을 옮긴다. 세포 배양 인큐베이터에 챔버를 배치합니다. 3시간 후, 챔버내의 배지를 다중 음양판에서 따로 정한 매체로 교체한다.셀 염색의 품질을 확인한 후, 고함량 스크리닝 소프트웨어의 획득 메뉴에서 고정 노출 시간 및 미니 스캔을 선택하고, 실험 조건당 웰 당 10개의 필드와 2개의 웰을 선택하여 필드의 하위 집합에서 분석 파라미터를 전체 플레이트에 대해 설정할 수 있도록 한다. 워크플로를 단계별로 수행하여 전체 알고리즘을 개발합니다. 각 채널에 대한 프로세스 이미지를 선택하고 배경 제거를 클릭하여 원하는 신호 수준을 선택합니다.핵 염색에 의해 핵을 식별하고 선택하려면 기본 개체 식별을 클릭하고 임계값을 조정하여 단일 핵을 식별하고 기본 개체 유효성 검사를 클릭하여 개체 영역 및 위치에 따라 임계값을 설정합니다. 특정 계보 마커에 해당하는 각 채널의 반점을 식별하고, 순환 플라즈마 형광을 식별할 수 있도록 링 값 너비를 3대에서 0으로 설정합니다. 워크플로우에서 참조 수준을 선택하여 분석을 구축하고 핵 크기와 핵 염색 강도 및 링에 의해 확인된 세포 플라즈마 형광에 기초한 특정 마커 양성 세포의 응축된 핵을 자동 계수할 수 있도록 한 다음 재생을 클릭합니다.배양의 첫 번째 단계 동안, 신경 줄기 세포는 그들의 네신 발현을 유지합니다. 세포의 대다수는 또한 NG2 양성이다. 사전 올리고드엔드로시테 단계에 대응하는 CNPase 양성 세포는 T3 중재 분화 유도 후 3~6일 후에 검출할 수 있으며, 성숙한 MBP 양성 올리고드로시트는 시험관내에서 6~12일 후에 상당한 비율로 나타난다.고함량 스크리닝 분석은 핵 염색 및 형광 강도 분석을 통해 배양 내의 단일 세포를 검출할 수 있게 한다. 분화 단계의 끝에 있는 문화의 조성은 배양이 태아 또는 성인 기원인지, 태아 배양이 T3 매개 분화에 더 반응하고 성숙한 올리고드로키테스의 더 높은 비율에 도달하는 지에 따라 다릅니다. 신경줄기 세포 유래 올리고드엔드로시테 전구체 세포가 고밀도로 종향될 때, 그들은 골재하고, 성상세포를 복제하여 급속하게 컨리치 세포 층을 생성하여 성숙한 올리고드로키테스의 특징적인 거미 순 형상의 관찰을 방지한다.염증 매개, 분화 차단은 CNPase와 MBP가 태아와 성인 문화 모두에서 염색에 의해 검출된 바와 같이, 전및 성숙한 올리고드로시테의 강한 감소를 유도합니다. 올리고드렌드로시테 전구세포의 수가 증가하면 사이토카인 처리성인 배양에서도 발생한다. 태아와 성인 올리고드로시테 전구체 세포는 염증성 사이토카인 노출과 동일하게 보이지만, 태아 유래 배양만이 산소-포도당 박탈 독성에 민감합니다.이 방법은 모든 종류의 올리고드엔드로시테 전구체 세포, 분화 및 성숙 간섭 과정으로 구현될 수 있으며, 근생 또는 재명료에 영향을 미치는 질병을 퇴치하기 위한 새로운 전략을 테스트할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

우리는 작은 분자 기반 oligodendrocyte 전구체 세포 (OPCs)에 마우스 배아 줄기 세포의 차별 화를위한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 차별화 후 30 일에 의해 고효율 Olig2 + NG2 + OPCs를 생성합니다. 우리는 또한 행동 잠재력을 불 수있다 "급상승"OPCs를 생성하는 방법을 설명합니다.

Oligodendrocyte 엽 성의 전구 물질로 배아 줄기 세포의 분화

이 문서는 성숙 oligodendrocytes (OLs)를 생산하는 차별화 기본 문화에 murine oligodendrocyte 전구체 세포 (OPCs)의 풍부한 인구를 유도하는 방법을 설명합니다. 또한,이 보고서는 생산 기술에 대해 설명합니다 murine 마우스 등의 루트 신경절의 뉴런 (DRGNs)의 neurite 침대에 마우스 OPCs을 심는 공동 문화 myelinating.

포스트 - 나탈 Murine 조직의 공동 문화를 Myelinating 풍부한 Oligodendrocyte 문화와 Oligodendrocyte / 신경 세포의 유도

기본, 인간 태아 뇌 유래, multipotential 전구 세포는 세포 분열 따위에 의해...

인간 태아 뇌에서 전구 - 파생 Oligodendrocyte 문화 시스템

이 비디오는 성체 쥐의 뇌에서 외측 심실 벽을 분리하고 효소 조직 해리를 수행하여 단일 세포를 얻기 위한 자세한 프로토콜을 보여줍니다. 그런 다음 이러한 세포는 신경 줄기 세포의 증식을 선택적으로 강화하고 희소돌기아교세포와 성상세포의 공동 배양으로의 분화를 촉진하는 특정 배양 조건에 적용됩니다.

성체 마우스 신경 줄기세포에서 혼합 희소돌기아교세포와 성상교세포 배양 획득

이 동영상은 인간 배아 줄기 세포에서 희소돌기아교세포 전구세포(OPC)를 생성한 후 OPC가 희소돌기아교세포로 성숙하는 과정을 보여줍니다. 이러한 희소돌기아교세포(oligodendrocyte)를 생성하는 과정은 알츠하이머병을 포함한 신경퇴행성 질환의 연구와 치료를 개선할 수 있는 수많은 길을 열어줍니다.

인간 배아 줄기 세포를 희소돌기아교세포로 분화

이 비디오는 인간 유도 뉴런(iN)과 유도 희소돌기아교세포 전구세포(iOPC)의 공동 배양 확립을 보여줍니다. iNm은 공동 배양에서 iOPC와 혼합된 다음 두 iNm이 뉴런으로, iOPC가 희소돌기아교세포로 성숙하는 것을 지원하기 위해 배양됩니다. 뉴런은 다른 뉴런 및 희소돌기아교세포와 시냅스 연결을 형성하는 반면, 희소돌기아교세포는 뉴런의 축삭돌기 주위에 수초를 발달시킵니다.

뉴런-희소돌기아교세포 상호작용을 모델링하는 공동 배양 방법

분화된 인간 신경 줄기세포(hNSCs)에서 miRNA의 변화를 특성화하기 위한 목적으로 3차원 시스템에서의 hNSC 분화, miRNA PCR 어레이에 의한 microRNA 발현 변화 평가, miRNA 표적 예측을 위한 컴퓨터 분석 및 이중 루시페라제 분석에 의한 검증에 대해 설명합니다.

3 차원 문화, 마이크로 RNA의 분석 및 추정 적 표적 유전자에 인간의 신경 줄기 세포 라인의 차별화

희소돌기아교세포는 중추신경계의 수초세포입니다. 이 프로토콜은 쥐 피질에서 전구체인 희소돌기아교세포 전구 세포를 분리 및 배양하는 방법과 실험 요인에 따라 체외에서 희소돌기아교 형성을 평가하기 위한 빠르고 신뢰할 수 있는 정량적 방법을 설명합니다.

쥐 희소 돌기 아교 세포 전구 문화의 준비 및 Oligodendrogenesis의 정량화 이중 적외선 형광 스캔을 사용하여

우리는 생체 외에서 문화에 대 한 셀의 신속 하 고 특정 격리 수 있는 기본 마우스 oligodendrocytes의 immunomagnetic 절연을 설명 합니다.

마우스 기본 Oligodendrocytes의 신속 하 고 구체적인 Immunomagnetic 절연

여기서 제시된 것은 인간 배아 줄기 세포의 단일 세포 배양및 이들의 후속 분화를 신경 전구 세포로 의하기 위한 프로토콜이다. 이 프로토콜은 간단하고 견고하며 확장 가능하며 약물 스크리닝 및 재생 의학 응용 분야에 적합합니다.

인간 배아 줄기 세포의 단세포 배양을 이용한 효율적인 신경 분화

신경 퇴행의 뉴런-아교 세포 상호 작용은 부적절한 도구와 방법으로 인해 잘 이해되지 않습니다. 여기에서는 인간 만능 줄기 세포에서 유도 뉴런, 희소돌기아교세포 전구세포 및 희소돌기아교세포를 얻기 위한 최적화된 프로토콜을 설명하고 알츠하이머병에서 세포 유형 특이적 기여를 이해하는 데 있어 이러한 방법의 가치에 대한 예를 제공합니다.

뉴런-희소돌기아교세포 상호작용 모델링을 위한 만능줄기세포로부터 인간 뉴런 및 희소돌기아교세포 생성

배우세요 신경 줄기 세포에서 올리고드로시테 전구체 세포와 성상교세포를 분화시키는 고함량 선별 분석 기법입니다. 이 방법은 수초 형성 및 재생 연구에 활용됩니다.

태아 및 성인 신경 줄기 세포의 고함량 선별 분화 및 성숙 분석- 유래 올리고드로시테 전구체 세포 배양

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