Name: 포유류 정자 세포의 원형질막을 가로지르는 전기 전류 기록 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: 배우세요 포유류 정자 세포의 패치클램프 기법을 이용한 전기생리학 기록 방법을. CatSper 칼슘 채널 활성을 정밀 측정하여 남성 불임 연구에 활용할 수 있습니다.

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<table><tbody><tr><td>DIC 광학 장비가 장착된 IX71</td><td>올림푸스 주식회사</td><td>IX71</td><td>Nikon TiU 현미경도 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>UplanSApo 60x</td><td>올림푸스 주식회사</td><td></td><td>물 침수 목표</td></tr><tr><td>진동 감쇠 공기 테이블</td><td>뉴포트 주식회사</td><td></td><td>TMC 에어테이블 또는 유사한 도구를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>액소패치와 트레이드; 200B 앰프</td><td>액삭과 트레이드; 그리고 nbsp; /분자 장치</td><td></td><td>Sutter IPA&reg;/더블 IPA&reg; 통합 패치 클램프 시스템도 훌륭한 증폭기</전자기입니다></td></tr><tr><td>액손 디지데이터 아날로그-디지털 변환기</td><td>액삭과 트레이드; 그리고 nbsp; /분자 장치</td><td>1440년 또는 1550년</td><td>도 사용할 수 있어요</td></tr><tr><td>증기압 삼투압계</td><td>웨스코어</td><td>모델 5600</td><td></td></tr><tr><td>MPC 385 마이크로매니퓰레이터</td><td>서터 인스트루먼트, 노바토 캘리포니아</td><td>MPC 385</td><td>Eppendorf 마이크로매니퓰레이터 TransferMan 시리즈도 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>마이크로피펫 풀러</td><td>서터 인스트루먼트, 노바토 캘리포니아</td><td>P1000</td><td>P97을 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>마이크로포지</td><td>나리시게</td><td>MF-830</td><td> 니콘 MPlan 100/0.80 ELWD 210/0 대물렌즈</em을 장착해야 합니다></td></tr><tr><td>패러데이 케이지</td><td>수제</td><td></td><td><>주변 전기 간섭으로부터 세팅을 차단하기 위해</td></tr><tr><td>그리고 nbsp; 5mm 유리 커버 슬립</td><td>WPI</td><td>&nbsp;#502040</td><td></td></tr><tr><td>관류실</td><td>워너 인스트루먼트 주식회사</td><td>그리고 nbsp; RC-24E</td><td></td></tr><tr><td>붕규산 유리 모세관</td><td>서터 인스트루먼트, 노바토 캘리포니아</td><td>BF 150-85-7.5</td><td><> 외경 1.5mm, 내경 0.86mm, 내부 필라멘트</td></tr><tr><td>테플론 매니폴드 MP-8</td><td>워너 인스트루먼트 주식회사</td><td>64-0211</td><td>Teflon 8단계 퍼류플루 매니폴드</td></tr><tr><td>넌크 4웰 플레이트</td><td>누크</td><td>#179820</td><td></td></tr><tr><td>1 x HTF 버퍼</td><td>엠브리오맥스</td><td>MR-070-D</td><td>정전 솔루션</td></tr><tr><td>SA-Oly/2단계 어댑터</td><td>워너 인스트루먼트 주식회사</td><td>시리즈 20 플랫폼용</td><td><올림푸스 현미경용> </td></tr><tr><td>자기 가열 플랫폼</td><td>워너 인스트루먼트 주식회사</td><td>PM-1 또는 유사 시리즈</td><td><> RC-24E 챔버를 보관할 </td></tr><tr><td>MAG-1 자기 클램프</td><td>워너 인스트루먼트 주식회사</td><td>#64-0358</td><td></td></tr><tr><td>2mm Ag/AgCl 펠릿이 장착된 마이크로전극 홀더</td><td>WPI</td><td>MEH3F4515</td><td></td></tr><tr><td>루어 연관이 있는 스톱콕; 4방향; 수컷 잠금장치</td><td>콜-파머 주식회사</td><td>EW-30600&ndash; 09</td><td></td></tr><tr><td>암컷 루어 호스 바브 어댑터, 1/16"</td><td>콜-파머 주식회사</td><td>EW-45508&ndash; 00</td><td></td></tr><tr><td>폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 관류 튜브</td><td>콜-파머 주식회사</td><td>EW-06417&ndash; 21</td><td><>(마이크로보어 PTFE 튜빙, 0.022" 신원 및 시간; 0.042" OD)</td></tr><tr><td>실리콘 커넥터 튜빙 (백금 경화 실리콘 튜빙, 1/32" 신원 및 시간; 3/32" OD)</td><td>콜-파머 주식회사</td><td>EW-95802 & ndash; 01</td><td></td></tr><tr><td>매니폴드 커넥터 튜빙 (PTFE 튜빙, 1/32" 신원 및 시간; 1/16" OD)</td><td>콜-파머 주식회사</td><td>EW-06407&ndash; 41</td><td></td></tr><tr><td>수컷 루어 시리즈 바브 어댑터, 1/16"</td><td>콜-파머 주식회사</td><td>45518&ndash; 00</td><td></td></tr><tr><td>수컷 루어 일체형 잠금 어댑터 1/8"</td><td>콜-파머 주식회사</td><td>45-503-04</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 커넥터 튜빙</td><td>다우 실리콘 코퍼레이션; 그리고 nbsp; 미</td><td>#508-008</td><td></td></tr><tr><td>주사기</td><td>피셔 사이언티픽 또는 VWR</td><td>에어타이트, 노름-젝트 루어</td><td><엠>1 mL, 3mL, 20 mL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>나클</td><td>시그마-올드리치</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>시그마-올드리치</td><td>60216</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 x 7.H2O</td><td>시그마-올드리치</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 x 2.H2O</td><td>시그마-올드리치</td><td>21097</td><td></td></tr><tr><td>젠장</td><td>시그마-올드리치</td><td>H7523-250G</td><td></td></tr><tr><td>포도당</td><td>시그마-올드리치</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>젖산나트륨 (60% 무수당 수분)</td><td>시그마-올드리치</td><td>L7900</td><td></td></tr><tr><td>피루베이트나트륨</td><td>시그마-올드리치</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>시그마-올드리치</td><td>BCBG2421V</td><td></td></tr><tr><td>CsMeSO3</td><td>시그마-올드리치</td><td>C1426</td><td><엠>세슘 메탄설포네이트</엠></td></tr><tr><td>KCl</td><td>피셔 사이언티브</td><td>P217</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>시그마-올드리치</td><td>BCBF5871V</td><td></td></tr><tr><td>트리스-HCl</td><td>퀄리티 바이오컬리컬</td><td>315-006-721</td><td>1M 용액의 유사</td></tr><tr><td>나오</td><td>시그마-올드리치</td><td>221465</td><td></td></tr><tr><td>CSOH</td><td>시그마-올드리치</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>배아세포 인간 난관액 배지:</td><td>밀리포어</td><td>MR-070-D</td><td>정자 세포용 용량 배지</td></tr><tr><td>(엠브리오맥스-HTF)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><스트롱>애니멀스</스트롱></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>수컷 위스타 쥐</td><td>위스타</td><td>할란 연구소 (리버모어, 캘리포니아)</td><td><> 성체 쥐</td></tr><tr><td>수컷 C57BL/6 마우스</td><td>C57BL/6 마우스</td><td>할란 연구소 (리버모어, 캘리포니아)</td><td><3-6개월 > </엠></td></tr></tbody></table>

포유류 정자 세포의 원형질막을 가로지르는 전기 전류 기록

Recording Electrical Currents across the Plasma Membrane of Mammalian Sperm Cells

Recording of the electrical activity from one of the smallest cells of a mammalian organism- a sperm cell- has been a challenging task for ...

recording-electrical-currents-across-plasma-membrane-mammalian-sperm

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이미징 CA의 기술 2 + 인간 정자의 시그널링

세포 내 칼슘 측정<sup&gt; 2 +</sup개의 기술하여 인간 정자에서&gt; 변경 : 기존 Fluorometry은 흐름 Fluorometry, 유동 세포 계측법 및 단일 세포 이미징을 중지

우리는 zebrafish의 배아에서 MAUTHNER 뉴런과 다른 reticulospinal 세포 패치 클램프 녹음을 통해 전기적 활동을 기록하고 모니터링 할 수있는 그대로 뇌 - 척수 준비를 개발했습니다. 따라서, 우리는 배아의 주요 신경 세포에서 흥분성과 억제 성 시냅스 전류, 전압 문 채널 활동 및 활동 전위를 기록 할 수 있습니다.

배아 Zebrafish의 MAUTHNER 세포에서 패치 클램프 녹음

우리는 쥐 cauda epididymides에서 일차 해부 상피 세포의 전기적 특성을 측정하기 위해 세포 격리와 whole-cell patch-clamp recording을 결합한 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 epididymis의 생리적 인 역할을 더 해명하기 위해 원발성 부고환 상피 세포의 기능적 특성을 조사 할 수있게합니다.

부고환에서 분리 된 1 차 상피 세포의 전체 세포 패치 - 클램프 기록

여기, 우리는 spermatozoan 막 무결성, 정자의 수정 능력와 관련 된 세포 기능을 평가 하는 방법론을 제시. 우리 정자 세포 막의 fluorimetric 평가 대 한 세 가지 기술에 설명: 특정 형광 프로브, 형광 현미경 검사 법, 그리고 고급 정자 전용 cytometry 동시 얼룩. 방법론을 결합의 예제도 제공 됩니다.

정자 세포 막의 평가 대 한 Fluorimetric 기법

여기, 캘리포니아2 +에 효과의 평가 대 한 두 개의 중간 처리량 분석-인간의 정자에서 신호 및 acrosome 반응 같습니다. 이 분석 실험은 신속 하 고 쉽게 화면에 캘리포니아2 +효과 대 한 화합물의 큰 금액을 사용할 수 있습니다-인간의 정자에서 신호 및 acrosome 반응.

매체-처리량에 캘리포니아2 +효과의 평가 대 한 분석 실험을 심사-신호 및 인간의 정자에서 Acrosome 반응

우리는 마우스 정자 capacitation 도중 당해 및 산화 인산화에 있는 실시간 변경을 감시하기 위하여 세포외 플럭스 분석기의 응용을 기술합니다.

세포외 플럭스 분석기를 사용하여 마우스 정자 주입 중 글리코용해 및 산화 인산화의 변화를 측정합니다.

여기에 설명된 AcroSensE 마우스 모델 및 살아있는 세포 이미징 방법은 정자 아크로솜의 세포 내 구획에서 칼슘 역학을 연구하고 막 융합 및 아크로솜 엑소사이토시스로 이어지는 중간 단계를 조절하는 방법을 연구하는 새로운 접근 방식을 제공합니다.

실시간 이미징 of Acrosomal Calcium Dynamics and Exocytosis in Live Mouse Sperm

외부 전기장은 세포의 막에 전압을 유도, 유도 멤브레인 전압 (ΔΦ) 칭했다. potentiometric 염색 DI - 8 - ANEPPS을 사용하여, 그것은 noninvasively ΔΦ를 측정할 수 있습니다. 이 비디오는 측정을위한 프로토콜을 보여줍니다 ΔΦ DI - 8 - ANEPPS를 사용합니다.

디 - 8 - ANEPPS으로 유도된 막 전압 측정

이 프로토콜은 유동세포계측법에 의해 세포의 플라즈마 막으로 세포질에서 GLUT4의 translocation을 수치 빠른 방법을 설명합니다.

유동세포계측법에 의해 플라즈마 막에 GLUT4 Translocation의 양적 측정

배우세요 포유류 정자 세포의 패치클램프 기법을 이용한 전기생리학 기록 방법을. CatSper 칼슘 채널 활성을 정밀 측정하여 남성 불임 연구에 활용할 수 있습니다.

포유류 정자 세포의 원형질막을 가로지르는 전기 전류 기록

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