Name: 부고환 백색 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: 배우세요 부고환 백색 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식 방법을 통해 당뇨병 연구에서 췌도 이식의 메커니즘을 평가하고 다양한 질병 모델에 적용할 수 있는 간단한 기술을 익히세요.

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이 연구는 일본 문부 과학성의 과학 연구 보조금 (C) (19K09839, NS)의 지원을 받았습니다.

다음 절차는 세 단계로 수행됩니다. 첫 번째 단계는 수용자 마우스에서 당뇨병의 유도와 기증자 섬의 분리를 포함합니다. 두 번째 단계는 이식 전에 췌도를 준비하는 것입니다. 제 3 단계에서는 부고환 지방 조직에 췌도 이식을 실시하고 지방 조직을 이용하여 췌도를 덮는다. 그 후, 치료 효과를 평가하였다. 본 연구에서 실시한 마우스의 취급 및 실험 절차는 '실험동물 관리의 원리'(실험동물의 관리 및 이용 지침, 국립보건원 간행물 제8판, 2011)에 준거하며, 실험 프로토콜은 후쿠오카대학 동물관리이용위원회의 승인을 받았습니다(승인 번호: 186018).
1. 수술 준비
<ol><li>당뇨병 유도 : 0.1M 구연산염 완충액 (180mg / kg 체중)에서 제조 한 18mg / mL 스트렙토 조토신 용액 18mg / mL 정맥 주사를 통해 체중 20-25g, 8-12 주령 수컷 마우스에서 당뇨병을 유도합니다. 혈당 수치가 400mg/dL를 초과하는 마우스는 당뇨병으로 간주됩니다. 당뇨병 유발 후 1주일 이내에 당뇨병 마우스를 사용하여 섬을 덮기 위해 부고환 백색 지방 조직의 과도한 위축을 일으킨다.</li>
	<li>췌도 분리: 췌도 분리를 위한 Gotoh의 방법27 에 따라 이식 하루 전에 쥐 췌도 분리를 수행합니다.</li>
	<li>간단히 말해서, 콜라게나제 용액을 사용하여 췌장 조직을 소화하십시오. 적절한 세포 분리 용액을 사용하여 밀도 구배 원심분리에 의해 췌도를 분리합니다. 그 다음 22°C 및 5%CO2의 배양기에서 밤새 췌도 배양(<37°C에서 배양하면 28,29,30,31 섬이 사멸하는 것을 방지하는 것으로 보고되었다). 알림: 정제된 췌도 배양액을 안전 캐비닛에서 취급하십시오. 췌도 분리 및 배양에 사용되는 모든 용액을 0.22μm 필터를 사용하여 필터 멸균합니다.</li>
</ol>2. 이식을위한 췌도의 준비
<ol><li>그림 1A에 표시된대로 적절한 도구와 재료를 수집하십시오.</li>
	<li>아밀라아제 및 리파아제와 같은 소화 효소는 분리 및 이식된 섬에 손상을 줄 수 있고 배양 접시 내의 오염된 섬유 조직에 갇혀 섬의 손실이 발생할 수 있으므로 이식 전에 집게를 사용하여 acinar 및 섬유질 조직을 포함하여 췌장에서 추가 섬 구성 요소를 직접 선택합니다(그림 1B). 해부 현미경으로. 따기 후 세포 여과기를 사용하여 단일 acinar 세포를 걸러냅니다.</li>
	<li>여과된 섬을 소 혈청 또는 알부민이 보충된 적절한 배양 배지 또는 완충 용액(예: 저혈당 DMEM, RPMI1640, CMRL1066 또는 HBSS)이 포함된 새 배양 접시로 옮겨 췌도가 플라스틱에 부착되는 것을 방지하고 접시를 소용돌이치게 하여 접시 중앙에 섬을 위치시킵니다(그림 1C). P200 마이크로피펫과 현미경을 사용하여 개별 섬을 적절한 수집 튜브에 넣습니다(그림 1D).</li>
	<li>50mL 플라스틱 튜브(그림 1E 왼쪽 및 중앙) 위에 새 40μm 세포 여과기를 놓고 새 배지로 필터를 세척합니다(그림 1E 오른쪽).</li>
	<li>1000μL 피펫을 사용하여 섬을 여과기에 추가하여 섬과 단일 acinar 세포를 분리합니다(그림 1 F1 및 그림 1F2). 알림: 세포 여과기의 정제된 섬은 약 100% 순수합니다.</li>
	<li>집게를 사용하여 배양 배지가 들어 있는 새로운 60mm 또는 100mm 크기의 비처리 배양 접시 또는 소 혈청 또는 알부민이 보충된 적절한 완충 용액에 여과기를 뒤집습니다(그림 1 F3 및 그림 1F4). 신선한 배지/완충액을 사용하여 섬을 새로운 배양 접시에 넣습니다. 그런 다음 배양 접시에 총 부피가 약 20mL에 도달하도록 충분한 배지/완충액을 추가합니다.</li>
	<li>현미경으로 췌도를 세고 기증자 동물의 수에 따라 개별 1.5mL 플라스틱 원심분리기 튜브에 췌도 수를 균등하게 나눕니다(그림 1G). 예를 들어, 두 마우스의 100-200 μm 췌도 당량 (IEQ) 200 개를 두 개의 튜브 각각에 추가합니다.</li>
	<li>실온에서 1분 이내에 2,100 x g에서 섬을 원심분리하고 상층액을 버립니다. 약 20-30 μL의 잔류 용액이 일반적으로 튜브에 남아 있습니다 (그림 1H).</li>
</ol>3. 부고환 지방 조직에 췌도 이식 및 부고환 백색 지방 조직으로 덮음
<ol><li>수술 전에 작은 동물용 마취기, 실체 현미경, 광원, 200μL 마이크로피펫 팁이 있는 50-200μL 마이크로피펫, 면봉, 4-0 봉합 세트 및 소독된 수술 기구를 수집합니다(그림 2A). 쿠퍼 가위, 안과 용 가위, Pean 집게, 핀셋 및 바늘 홀더를 오토 클레이브하십시오. 오토클레이빙 후 장비를 1% 포비돈-요오드 용액에 담그십시오(그림 2A). 면봉을 사용하여 부고환 백색 지방 조직을 동원하고 출혈의 경우 지혈을 수행하십시오. 췌도 이식을 위해 50-200 μL 팁이있는 마이크로 피펫을 사용하십시오.</li>
	<li>흡입 마취제 (산소 중 2 % 이소 플루 란)를 사용하여 당뇨병 수용자 마우스에 마취를 전달하십시오. 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 안과 윤활제를 바르십시오. 그런 다음 마우스를 앙와위 자세(그림 2B 왼쪽)에 놓고 복부에서 털을 제거하여 이발기 및/또는 제모 크림을 사용하여 감염을 예방합니다. 포비돈-요오드 용액과 70 % 에탄올을 세 번 교대로 사용하여 복부와 사타구니 부위를 소독합니다 (그림 2B 오른쪽). 수술 전에 발가락 핀치 반사가 없어 마취 깊이를 확인하십시오. 가열 패드를 사용하여 수술 중 열 지원을 제공하고 수술용 드레이프를 사용하여 멸균 수술 부위를 고정합니다.</li>
	<li>낮은 중앙 영역에서 피부를 절개합니다 (그림 2C 왼쪽). 길이 약 2cm의 피부 절개를 권장합니다. Pean 집게로 왼쪽 복벽을 고정하고(무외상성 집게 또는 견인기도 사용할 수 있음) 조직을 마우스의 왼쪽으로 당겨 수술 부위를 고정합니다(그림 2C 오른쪽). 개복술 후 마취 유지를 위해 이소 플루 란의 비율을 1.0-1.5 %로 줄입니다.</li>
	<li>면봉을 사용하여 소장과 대장을 마우스의 오른쪽(즉, 작업자의 왼쪽)으로 움직입니다. 복강의 왼쪽 부고환 백색 지방 조직은 왼쪽 사타구니 부위에 위치합니다. 부고환 백색 지방 조직과 왼쪽 고환을 복부 바깥쪽으로 동원하고(그림 2D 왼쪽) 조직을 펴십시오(오른쪽 2D).</li>
	<li>200μL 피펫 팁이 장착된 P200 마이크로피펫을 사용하여 부드러운 피펫팅(그림 2E 왼쪽)으로 하나의 1.5mL 튜브에서 전체 췌도 부피를 수집하고, 수집 시 튜브에 췌도가 남지 않도록 주의합니다. 수집된 섬이 중력에 의해 피펫 끝에 가라앉도록 합니다(그림 2E 오른쪽).</li>
	<li>마이크로피펫 팁을 팽창된 지방 조직에 가볍게 놓습니다. 팁의 배지/완충액이 과도하게 플러싱되지 않도록 주의하면서 췌도를 조직에 조심스럽게 씨를 뿌립니다(그림 2F 왼쪽). 파종 후 해부 현미경으로 췌도의 올바른 위치를 확인하십시오 (그림 2F 오른쪽).</li>
	<li>부고환 백색 지방 조직으로 섬을 덮으십시오 (그림 2G). 봉합사 또는 생체 결합제의 사용은 필요하지 않습니다.</li>
	<li>왼쪽 고환을 부고환 백색 지방 조직 아래에 놓고 조직을 복강 내로 되돌립니다 (그림 2H). 4-0 봉합사를 사용하여 피부를 두 층(복막, 근육 및 피부)으로 닫습니다(나일론 또는 흡수성 봉합사와 같은 모든 봉합사를 사용할 수 있음)(그림 2I). 아세틸 살리실산 주입 (300 mg / kg; SQ) 수술 후 진통제를 위해 상처 근처. 그런 다음 마우스를 열 램프 아래에 놓고 완전히 회복 될 때까지 모니터링하십시오.</li>
</ol>4. 췌도 이식 후 모니터링 (요약)
<ol><li>수술 후 (POD) 28에서 혈당, 포도당 내성 검사 및 조직 학적 평가를 모니터링하여 췌도 이식의 치료 효과를 평가합니다.<ol><li>작은 포도당 측정기를 사용하여 내당능 시험에서 혈당의 측정을 포함하여 혈당을 모니터링한다.</li>
		<li>꼬리 정맥에서 혈액 샘플 (약간의 마이크로 리터)을 수집하십시오. 조직 학적 평가와 관련하여, 뮤린 인슐린 (이식 된 섬 검출 용) 및 폰 빌레 브란트 인자 (혈관 검출 용, 췌도 생착의 증거)는 면역 조직 화학에 의해 회수 된 부고환 지방 조직의 이식 된 섬에서 검출되었다.</li>
	</ol></li>
</ol>

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</ol>

우리는 이해 상충이 없습니다.

지방으로 덮인 췌도 이식 방법은 복강 내 췌도 이식과 지방 조직 내 췌도 이식의 두 가지 이식 기술의 기술을 통합합니다. 부고환 백색 지방 조직의 표면막은 복막에 의해 덮여 있고 부고환에 부착되어있는 백색 지방 조직으로 간주되기 때문에 지방으로 덮인 췌도 이식 방법은 해부학 적으로 복강 내 섬 이식의 일종으로 분류 할 수 있습니다. 그러나 췌도가 수용자에게 전달되는 기술은 지방 조직 내 췌도 이식에 사용되는 기술과 더 유사합니다. 우리의 데이터는 지방으로 덮인 췌도 이식 방법의 치료 효과가 복강 내 췌도 이식의 치료 효과보다 우수하다는 것을 보여줍니다. 우리의 이전 연구는 또한이 방법의 이식 효능이 최고의 이식 효능을 가진 췌도 이식 방법 인 신장 피막 하 섬 이식의 이식 효능과 거의 동일하다는 것을 보여주었습니다23. 이 방법의 유용성은 백색 지방 조직 및 지방 사이토 카인 내에 존재하고 섬 생착에 기여하는 것으로 생각되는 접착 분자 때문일 수 있다고 추측됩니다<sup class="x...

췌도 이식은 중증 당뇨병 환자를위한 세포 대체 요법입니다. 최근 보고서에 따르면 이식 후 3년 후 인슐린 자립율은 최대 44%1까지 향상되며, 총 췌도 등가물 600,000건 이상을 투여받은 수혜자의 약 80%가 인슐린 자립성을 달성합니다2. 또한, 가장 최근의 협력 췌도 이식 등록 보고서에서 췌도 이식만 받은 환자의 70% 이상에서 공복 혈당 수치가 5년 동안 60-140mg/dL로 유지되는 것으로 나타났습니다. 이 연구는 또한 췌도 이식 단독 또는 신장 이식 후 췌도 이식을받은 환자의 약 90 %가 5 년 이상 심각한 저혈당 사건을 일으키지 않았다고 결정했습니다3.
이 치료의 임상 결과가 개선되고 있지만 최적의 이식 부위를 구축해야 할 필요성을 포함하여 몇 가지 제한 사항을 해결해야 합니다. 간은 많은 양의 췌도를 수용할 수 있는 가장 큰 기관이기 때문에 임상 췌도 이식을 위한 전형적인 이식 부위입니다. 그러나, 일부 환자에서는 간을 이용할 수 없고(예를 들어, 문맥 고혈압, 간염 및/또는 간경변4로 인해) 따라서 신장 피막하 공간5,6, 안주머니 7,8,9,10, 장간막(11), 위장관(12), 골격근(13), 피하 조직(13), 골수(14) 및 비장(15)을 포함하는 다른 부위 ,16,17은 대체 이식 부위로 간주되었습니다.
복강 내 췌도 이식은 국소 마취하에 쉽게 수행 할 수있어 복강 내 강이 임상 췌도 이식을위한 매력적인 부위가되지만, 이식시 췌도가 복강 전체에 분산되어 췌도 생착 검출 및 성공적인 생착 확인이 어렵습니다. 따라서, 복강 내 공동은 이상적인 임상 이식 부위로 널리 인식되지 않는다. 대신, 이식된 캡슐화된 섬(18 ) 및 생체공학적 섬(19)의 효과를 조사하기 위한 전임상 연구를 위한 대조 모델로서 자주 활용된다. 그러나 생체 공학과 대조 섬 간의 정확한 비교는 정확한 생착 평가를 수행하는 데 어려움이 있기 때문에 달성하기 어렵습니다.
대조적으로, omental pouch8, 장간막 및 기타 간외 위치에서 복강 내 백색 지방 조직의 사용은 잘 보고되었으며10,20,21,22,23 백색 지방 조직을 사용하여 이식된 생체 공학 섬의 기능을 조사하는 많은 연구에서 유망한 치료 결과를 보고할 수 있었습니다20,24,25, 26. 부고환 지방 조직의 사용이 이식 된 췌도의 검출을 용이하게함에 따라 복강 내 섬 이식의 한계를 극복하기 위해 부고환 지방 조직을 활용 한 "지방 피복 섬 이식 방법"이 개발되었습니다. 본 논문에서는 부고환 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식에 대해 설명한다.

<table><tbody><tr><td>4-0 나일론</td><td>Alfresa</td><td>ER2004NA45-KF2</td><td>폐쇄 복부</td></tr><tr><td>Alexa 488-conjugated 당나귀 항기니피그</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>706-546-148</td><td>인슐린 항체에 대한 2차 항체</td></tr><tr><td>Alexa 647-conjugated donkey anti-rabbit</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>711-606-152</td><td>von Willebrand 인자 항체</td></tr><tr><td>DMEM, 저포도당, 피루브산</td><td>에 대한 2차 항체ThermoFisher Scientific</td><td>11885084</td><td>섬 배양, 이식 섬</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Fujifilm Wako Chemicals</td><td>051-06515</td><td>eosin</td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30120086</td> 수집 섬에 의한 염색 조직 사용<td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Falcon 15 mL 원뿔형 원심분리기 튜브</td><td>Corning</td><td>352095</td><td>수집 섬</td></tr><tr><td>Falcon 40 &micro; m Cell Strainer</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td>다른 췌장 조직에서 섬을 분리하는 데 사용</td></tr><tr><td>Falcon 50 mL 원뿔형 원심분리기 튜브</td><td>Corning</td><td>352070</td><td>과도한 매체/완충액</td></tr><tr><td>기니피그 항인슐린</td> 폐기 <td>Agilent Technologies Japan, Ltd. (Dako)</td><td>IR002</td><td>쥐 인슐린에 대한 1차 항체</td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Muto Pure Chemicals Co., Ltd.</td><td>30002</td><td>헤마톡실린</td></tr><tr><td>이소딘 용액 10%</td><td>Shionogi&Co., Ltd.에</td> 의한 조직 염색에 사용<td>카탈로그 번호 없음</td><td>소독에 사용</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Fujifilm Wako Chemicals</td><td>095-06573</td><td>마취에 사용</td></tr><tr><td>Labcon 1000 &micro; L ZapSilk Low Retention 피펫 팁</td><td>Labcon</td><td>1177-965-008</td><td>다른 췌장 조직에서 섬을 분리하는 데 사용</td></tr><tr><td>Labcon 200 &micro; L ZapSilk Low Retention Pipette Tips</td><td>Labcon</td><td>1179-965-008</td><td>부고환 백색 지방 조직에 섬을 파종하는 데 사용</td></tr><tr><td>Mintsensor</td><td>Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd.,</td> <td>8AEB02E</td><td>혈당 모니터링에 사용</td></tr><tr><td>Pipetteman P-1000</td><td>Gilson F123602</td><td></td><td>다른 췌장 조직에서 섬을 분리하는 데 사용</td></tr><tr><td>Pipetteman P-200</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td>부고환 백색 지방 조직에 섬을 파종하는 데 사용</td></tr><tr><td>Rabbit anti-vWF</td><td>Abcam</td><td>ab6994</td><td>murine von Willebrand factor에 대한 1 차 항체</td></tr></tbody></table>

부고환 백색 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

췌도 이식은 중증 당뇨병에 대한 세포 대체 요법입니다. 복강 내강은 일반적으로이 절차의 이식 부위입니다. 그러나 복강 내 췌도 이식은 이식 효능이 좋지 않고 이식편 검출 능력이 어렵고 이식 후 분석을위한 이식 절제술 능력이 부족하다는 점에서 몇 가지 한계가 있습니다. 이 논문에서는 부고환 백색 지방 조직을 활용한 복강 내 췌도 이식 방법인 "지방으로 덮인 췌도 이식"을 사용하여 생체 공학 췌도의 치료 효과를 평가합니다. 이 방법의 단순성은 부고환 백색 지방 조직에 섬을 뿌리고 조직을 사용하여 섬을 덮는 데 있습니다. 이 방법은 복강 내 췌도 이식 기술로 분류 할 수 있지만 지방 내 조직 췌도 이식과 특성을 공유합니다. 그러나 지방으로 덮인 췌도 이식 방법은 혈당 및 혈장 인슐린 수치의 개선과 이식편 제거 가능성을 포함하여 지방 내 조직 췌도 이식보다 더 강력한 치료 효과를 보여줍니다. 백색 지방 조직으로의 췌도 생착 메커니즘과 생체 공학 섬의 치료 효과를 평가하기 위해이 방법을 채택하는 것이 좋습니다.

지방으로 덮인 췌도 이식의 이식 효능을 복강 내 췌도 이식 후의 이식 효능과 비교하기 위해, 대조군 수용자 당뇨병 동물의 왼쪽 paracolic 공간에서 동일한 수의 췌도를 복막에 이식하였다. 지방으로 덮인 췌도 이식 마우스의 혈당 수치는 복강 내 췌도 이식 마우스에 비해 점진적으로 유의하게 감소하는 것으로 관찰되었다 (p = 0.0023; 그림 3A). 이식 1개월 후, 지방으로 덮인 췌도 이식을 받은 마우스의 혈당은 복강내 포도당 내성 시험에 의해 평가된 바와 같이 복강내 췌도 이식 마우스에서 관찰된 것보다 낮은 수준으로 유지되었다(p=0.0046; 그림 3B). 또한, 이전에 우리가 이전에 보고한 바와 같이, 혈장 인슐린 수치도 지방으로 덮인 섬 이식 후에 개선되었다고 보고했습니다. 혈당 수치의 재 상승도 확인되었습니다. 이러한 데이터는 200 IEQ를 사용한 복강 내 지방으로 덮인 췌도 이식이 수용자 마우스의 당뇨병...

이 지방으로 덮인 췌도 이식 방법은 복강 내 이식 된 섬의 검출에 적합합니다. 특히, 생체 결합제의 사용 또는 봉합이 필요하지 않습니다.

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...

이 프로토콜은 백색 지방 조직으로의 섬 생착 메커니즘을 평가하는 것을 가능하게합니다. 이 지방으로 덮인 췌도 이식 방법의 주요 장점은 기술적으로 복제하기 쉽다는 것입니다. 상기 방법은 다른 질병 모델에 적용될 수 있다.예를 들어 암의 마우스 모델을 만드는 데 사용할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 후쿠오카 대학의 부교수 인 나오아키 사카타 (Naoaki Sakata)가 될 것입니다. 해부 현미경에서 P 200 마이크로 피펫을 사용하여 acinar 및 섬유질 조직을 포함한 췌장 소화에서 여분의 섬 성분을 제거합니다.그런 다음 세포 여과기를 사용하여 단일 acinar 세포를 걸러냅니다. 여과된 췌도를 소 혈청 또는 알부민이 보충된 적절한 배양 배지 또는 완충 용액이 포함된 새로운 배양 접시에 옮기고 접시를 소용돌이치게 하여 섬을 중앙에 위치시킵니다. P 200 마이크로 피펫을 사용하여 개별 섬을 적절한 수집 튜브에 넣습니다.50 밀리리터 플라스틱 튜브 위에 새로운 40 마이크로 미터 셀 스트레이너를 놓습니다. 1000 마이크로 리터 피펫을 사용하여 섬을 여과기에 추가하여 섬과 단일 acinar 세포를 분리합니다. 집게를 사용하여 소 혈청 또는 알부민이 보충 된 배양 배지 또는 적절한 완충 용액이 포함 된 새로운 60 또는 100 밀리리터 크기의 비 처리 배양 접시에 여과기를 뒤집습니다.신선한 배지 또는 완충액을 사용하여 섬을 새로운 배양 접시로 플러시한 다음 배양 접시에 총 부피가 약 20밀리리터에 도달하도록 충분한 배지 또는 완충액을 추가합니다. 현미경으로 섬을 세고 기증자 동물의 수에 따라 개별 1.5 밀리리터 플라스틱 원심 분리기 튜브간에 섬의 수를 균등하게 나눕니다. 췌도를 실온에서 1분 동안 2, 100 G에서 원심분리하고 상층액을 버린다.약 20-30 마이크로 리터의 잔류 용액이 일반적으로 튜브에 남아 있습니다. 감염을 방지하기 위해 복부에서 머리카락을 제거한 후 마우스를 앙와위 자세로 두십시오. 복부와 사타구니 부위를 소독한 후 중간 부위가 낮은 부위의 피부를 절개하여 약 2cm 길이의 피부 절개를 만듭니다.집게 또는 견인기로 왼쪽 복벽을 고정하고 조직을 마우스의 왼쪽으로 당겨 수술 부위를 고정합니다. 면봉을 사용하여 소장과 대장을 마우스 오른쪽으로 움직입니다. 복강의 왼쪽 표피 백색 지방 조직은 왼쪽 사타구니 영역에 있습니다.표피 백색 지방 조직과 왼쪽 고환을 복부 바깥쪽으로 동원하고 조직을 펴십시오. P 200 마이크로 피펫을 사용하여 하나의 1.5 밀리리터 튜브에서 췌도의 전체 부피를 수집하고 수집 시 튜브에 췌도가 남아 있지 않도록 주의하십시오. 수집 된 섬이 중력에 의해 피펫 끝에 정착하도록하십시오.마이크로 피펫 팁을 팽창된 지방 조직에 가볍게 놓고 팁의 배지 또는 완충액이 과도하게 플러싱되지 않도록 주의하십시오. 조심스럽게 섬을 조직에 씨를 뿌립니다. 파종 후 해부 현미경으로 섬의 올바른 위치를 확인하십시오.표피 백색 지방 조직으로 섬을 덮은 다음 왼쪽 고환을 상피 백색 지방 조직 아래에 놓고 조직을 복강 내로 되돌립니다. 4-o 봉합사를 사용하여 피부를 두 층으로 닫습니다. 완료되면 마우스를 열 램프 아래에 놓고 완전히 회복 될 때까지 모니터링하십시오.지방피복췌도 이식의 이식 효능을 복강내 췌도 이식 후의 이식효능과 비교하기 위해, 대조군 수용자 당뇨동물의 좌측 부산균 공간에 있는 복막에 동일한 수의 췌도를 이식하였다. 지방이 덮인 췌도 이식 마우스의 혈당 수치는 복강 내 췌도 이식 마우스에 비해 점진적으로 현저히 감소하는 것으로 관찰되었다. 복강 내 포도당 내성 검사는 이식 1 개월 후에 수행되었다.지방으로 덮인 췌도 이식을 받은 마우스의 혈당은 복강내 췌도 이식 마우스에서 관찰된 것보다 낮은 수준으로 유지되었다. 조직학적 검사는 표피 백색 지방 조직으로의 췌도 생착을 평가하기 위해 사용되었다. 지방으로 덮인 췌도 이식 수용자 동물에서, 헤마톡실린 에오센 염색은 표피 백색 지방 조직 내에 췌도의 존재를 밝혀냈다.또한, 인슐린 양성 섬들의 형광 접합 항체 염색은 모든 수용자 마우스의 표피 백색 지방 조직 내의 폰 빌레브란트 인자 양성 미세 혈관의 검출을 용이하게 하였다. 이 절차를 성공적으로 수행하려면 췌도가 피펫 끝에 완전히 정착하고 엎지르지 않고 지방 조직에 씨를 뿌려야 합니다.

fat-covered-islet-transplantation-using-epididymal-white-adipose

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리 프로토콜이 정상적으로 쉽게 생쥐의 신장에 따라 캡슐 아일 레츠이나 세포를 제공하기 위해 개발되었습니다. 세포 신장 캡슐에서 세포를 이식에 사용되는 최종 튜브에 쥐똥에 집중되어있다. 이 기법의 용이성은 세포와 마우스에 스트레스를 줄여줍니다.

당뇨병 마우스의 신장 캡슐으로 췌장 아일 레츠의 이식

절연 아일 레츠의 이식은 제 1 형 당뇨병에 대한 잠재적인 치료로 제안되었습니다. 여기 마우스 pancreata에서 아일 레츠를 분리하고 신장의 subcapsular 공간을 이식하는 방법을 설명합니다.

Murine 아일릿 절연 및 Subcapsular 신장 이식을위한 방법

이 프로토콜은 murine islet isolation과 decellularized scaffold상의 seeding을 증명합니다. Scaffold-supported 랑게질을 streptozotocin (STZ) 유도 당뇨병 생쥐의 부고환 지방 패드에 이식 하였다. 아일 레트는 이식 부위에서 생존하고 고혈당 상태를 역전시켰다.

당뇨병 쥐의 부고환 지방 세포에 이식 된 지지체 지지대 지지대

마우스에 독도의 omental 이식 하는 방법을 소개 합니다. 격리 된 독도 히드로와 혼합 하 고 혼합 당뇨 마우스의 omental 주머니에 배치 됩니다. 그리고, 혈액 포도 당 감시 면역 조직화 학적인 분석을 수행 합니다.

마우스에 Omentum 작은 섬 이식 하는 방법

췌 장 섬 이식 타입-1 당뇨병에 normoglycemia를 달성 하는 방법입니다. 이 문서는 당뇨병 쥐의 정상적인 포도 당 수준을 유지 하는 intraportal 경로 통해 이식 기술에 초점을 맞추고.

Intraportal 이식 마우스 모델에서 췌 장 독도의

여기, 우리는 히드로 기반 세포 치료, 섬 이식의 예에 의해 그림의 vivo에서 유효성 검사에 대 한 프로토콜을 제시. h Omental 매트릭스 섬 작성 (귀환) 이식 혈관, 적절 한 변화 환경에서 engraftment를 극대화 하기 위해 가까이 omental 레이어 사이 셀 하이드로 겔 혼합물의 주입 수 있습니다.

내부 Omental 작은 섬이 식을 사용 하 여 h Omental 매트릭스 섬 작성 (유도)

이 프로토콜에서, 뮤린 아일렛 분리 및 인추니얼 피하 백색 지방 조직내로이식하는 방법이 기재되어 있다. 분리된 합성 뮤린 섬은 지하 막 하이드로겔을 사용하여 뮤린 수용자로 이식된다. 수령인의 혈당 수준을 모니터링하고, 아일렛 이식의 학력 분석이 수행됩니다.

뮤린 아일렛의 인과 피하 백색 지방 조직 (ISWAT) 이식 모형

여기서 우리는 마우스에서 임상적으로 관련이 있지만 기술적으로 도전적인 수술 절차 인 포털 내 섬 이식을 성공적으로 수행하는 세련된 수술 절차를 제시합니다.

마우스에서 간내 섬 이식 중 주입 후 포털 정맥 출혈 최소화

우리는 인간 줄기세포에서 유래한 췌장 줄기세포 섬을 면역결핍 쥐에 근육 내 이식하여 생체 내 이식과 후속 분석을 위한 최소 침습 프로토콜을 제공합니다.

쥐에서 인간 다능성 줄기세포 유래 췌장 내분비세포의 근육 내 이식

조직 공학 심장 판막에 neotissue 형성 및 협착증 개발을 기초 세포 및 분자 메커니즘을 이해하기 위해, 이소성 심장 판막 이식 뮤린 모델이 개발되었다. 폐동맥 판막은 이소성 심장 이식 기술을 사용하여 수신자에게 이식 하였다.

이소성 심장 이식 마우스 모델을 사용하여 폐동맥 판막 이식

배우세요 부고환 백색 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식 방법을 통해 당뇨병 연구에서 췌도 이식의 메커니즘을 평가하고 다양한 질병 모델에 적용할 수 있는 간단한 기술을 익히세요.

부고환 백색 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식

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