Name: 심한 난소 기능 장애 환자에서 불 임 보존 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 3 s
Description: 배우세요 난소 기능 장애 환자를 위한 약물 없는 체외 활성화(IVA) 방법으로 난포를 활성화하여 수정 가능한 난자 수를 늘리고 생식력 보존을 개선하는 혁신적인 생식 의학 기술입니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이하나 다츠지, 쿠리모토 사치요, 다카하시 가즈코, 요시자와 유키, 아라시 마호, 후지타 켄타로, 에리나 쿠도, 쿠리모토 유카, 와카츠키 마유코 교수에게 약물 없는 IVA 시술과 아론 J.W. 교수(스탠포드 대학 편집대학, 캘리포니아 대학교 편집학 교수) 우리는 또한 영어 내레이션을 삽입 레베카 트루먼과 그레고리 트루먼 감사합니다. 이 연구는 일본 과학 진흥 협회 (JSPS), 과학 연구 B (19H03801), 도전 탐사 연구 (18K19624)에 의해 지원되었습니다.

약물 없는 IVA 치료에 등록한 난소 예비군이 감소하는 각 POR 환자로부터 서면 통보 동의를 얻었습니다. 이 연구는 국제 보건 복지 대학의 윤리위원회에 의해 승인되었다 (제 17-S-21). 임상시험은 UMIN000034464에 따라 등록되었으며 세계의학협회 윤리강령(헬싱키 선언)에 따라 시행되었습니다.
1. 난소 피질 추출
<ol><li>전설명19,20과 같이 복강경 수술을 통해 전신 마취하에 하나 또는 두 난소에서 난소 피질(10 x 10mm, 2-3mm 두께)의 일부를제거한다.</li>
	<li>수집된 난소 피질을 37°C에서 10mL의 수정된 HTF(mHTF)를 함유한 멸균 용기에 놓습니다.</li>
</ol>2. 난소 피질 조각화
참고: 난소 피질의 해부 전에 mHTF를 37°C로 예열하십시오. 절차 전반에 걸쳐 멸균 상태를 유지합니다. 이 절차에 대한 모든 도구는 재료 표에나열됩니다.
<ol><li>수집된 난소 피질을 mHTF 5-10mL를 포함하는 플라스틱 접시에 37°C에서 배치하고 37°C(도2A)에서조직을 유지하기 위해 열판에 놓습니다.</li>
	<li>환자 배경 데이터를 연결하는 다음 절차를 시작하기 전에 환자의 이름이 있는 디지털 카메라를 사용하여 각 피질의 사진을 찍습니다.</li>
	<li>mHTF(도2B)로적신 멸균 거즈에 개별 피질을 놓습니다. 참고: 거즈에 일회용 파이펫을 추가로 적용하여 이 절차 중에 피질의 표면이 건조되는 것을 방지합니다.</li>
	<li>조직의 두께가 1-2mm(도 2C 및 D)에도달되도록 마이크로 가위를 사용하여 분홍색으로 보이는 잔류 수질 조직을 제거하십시오. 참고: 초기 단계에서 여포의 손실을 피하기 위해, 초기 단계 여포가 난소피질(21)의표면에서 1-2mm 이내의 위치에 있기 때문에 두께가 1mm 미만인 피질 스트립을 준비하지 마십시오.</li>
	<li>1mm x 1mm x 5mm의 조직 조각을 각 난소 피질 스트립으로부터 미세메스를 사용하여 해부하고, 이전 설명된18(도 2E)와같은 잔류 여포의 존재를 결정하기 위해 조직학적 분석을 거칩니다. 참고: 조직학을 위한 해부된 조직은 mHTF에 침지되고 고정될 때까지 4°C에서 유지합니다(그림2F,4단계 참조).</li>
	<li>미세 한 메스(그림 2G)를사용하여 피질을 1mm x 1 mm x 10mm 스트립으로 자른다. 참고 : 메스를 당기는 것보다 메스를 누르는 것이 더 쉽습니다.</li>
	<li>이 티슈 스트립을 1mm x 1mm x 1mm 작은큐브(그림 2H)로자른다. 참고: 매체에서 삼투압의 변화를 피하려면 조직 자가 이식 전에 절제에 mHTF를 추가하십시오.</li>
</ol>3. 난소 피질 조각의 자동 접목
<ol><li>IVA 캐뉼라 패키지를 열고 멸균 커튼에 놓습니다.</li>
	<li>MHTF를 여러 번 흡입하고 방출하여 MHTF로 IVA 캐뉼라 내부를 헹구세요.</li>
	<li>흡인 100-200 μL의 mHTF는 로딩 중에 피질 큐브가 건조되는 것을 피하기 위해 IVA 캐뉼라의 끝을 채웁니다(그림3A).</li>
	<li>미세 트위저(그림3B-E)를사용하여 IVA 캐뉼라 의끝에 피질 큐브를 적재합니다. 참고: 로딩용 피질 큐브 의 수는 접목 부위에 따라 다릅니다. 일반적으로, 20-30 큐브는 난소 남아 있는 직교로로 이식될 수 있고, 반면 10-15 큐브는 나팔관의 세로사 아래에 있는 파우치로 이식될 수 있다.</li>
	<li>피질 큐브를 로드한 후 IVA 캐뉼라를 외과 의사에게 옮길 때까지 손가락으로 피질 큐브가 들어 있는 캐뉼라 끝을 잡습니다. 이렇게 하면 큐브 온도가 감소하는 것을 방지할 수 있습니다. 참고 : 복강경 수술에서 자가 이식 절차의 세부 사항은 이전에보고되었습니다19. 난소 피질 큐브를 접목하기 위해, 캐뉼라 모양의 장치 (IVA 캐뉼라)는 우리의 협력자인 기타자토 코퍼레이션에 의해 개발되었습니다.</li>
</ol>4. 난소 피질의 조직학적 분석
참고: 잔여 여포 수를 계산하려면 앞에서 설명한15와같이 조직학적 분석을 수행한다.
<ol><li>샘플 고정 전에 염색을 표시하는 조직으로 피질 스트립 표면을 표시합니다. 이것은 장학적 학을 위한 스트립에 있는 피질의 측을 표시합니다.</li>
	<li>부인의 용액을 사용하여 4 °C에서 하룻밤 동안 티슈 스트립을 수정합니다. 참고: 폐색 여포를 감지하려면 난낭 세포질의 수축을 피하기 위해 파라포름알데히드를 사용하지 않는 것이 좋습니다.</li>
	<li>탈수하고 파라핀에 티슈 스트립을 포함.</li>
	<li>조직 샘플을 포함하는 파라핀 블록을 직렬로 절제한다.</li>
	<li>헤마톡시린과 에신을 사용하여 각 섹션을 얼룩지게 하여 여포를 시각화합니다.</li>
	<li>앞서 설명한17번과같이 여포를 계산한다.</li>
</ol>

<ol><li>Liang, T., Motan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+Oocyte+Cryopreservation+for+Fertility+Preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Mature Oocyte Cryopreservation for Fertility Preservation.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 951, 155-161 (2016).</li>
<li>Yoon, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+births+after+vitrification+of+oocytes+in+a+stimulated+in+vitro+fertilization-embryo+transfer+program%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Live births after vitrification of oocytes in a stimulated in vitro fertilization-embryo transfer program.</a> Fertility and Sterility. 79 (6), 1323-1326 (2003).</li>
<li>Donnez, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Livebirth+after+orthotopic+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue.</a> Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).</li>
<li>Meirow, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancy+after+transplantation+of+cryopreserved+ovarian+tissue+in+a+patient+with+ovarian+failure+after+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue in a patient with ovarian failure after chemotherapy.</a> New England Journal of Medicine. 353 (3), 318-321 (2005).</li>
<li>De Vos, M., Devroey, P., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+ovarian+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Primary ovarian insufficiency.</a> Lancet. 376 (9744), 911-921 (2010).</li>
<li>Scott, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicle-stimulating+hormone+levels+on+cycle+day+3+are+predictive+of+in+vitro+fertilization+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Follicle-stimulating hormone levels on cycle day 3 are predictive of in vitro fertilization outcome.</a> Fertility and Sterility. 51 (4), 651-654 (1989).</li>
<li>Ferraretti, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ESHRE+consensus+on+the+definition+of+%27poor+response%27+to+ovarian+stimulation+for+in+vitro+fertilization%3A+the+Bologna+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">ESHRE consensus on the definition of 'poor response' to ovarian stimulation for in vitro fertilization: the Bologna criteria.</a> Human Reproduction. 26 (7), 1616-1624 (2011).</li>
<li>Huhtaniemi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+Molecular+Pathophysiology%2C+Genetics%2C+and+Treatment+of+Primary+Ovarian+Insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Advances in the Molecular Pathophysiology, Genetics, and Treatment of Primary Ovarian Insufficiency.</a> Trends in Endocrinology and Metabolism. 29 (6), 400-419 (2018).</li>
<li>Męczekalski, B., Maciejewska-Jeske, M., Podfigurna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproduction+in+premature+ovarian+insufficiency+patients+-+from+latest+studies+to+therapeutic+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Prz+Menopauzalny%22%5BJournal%5D)">Reproduction in premature ovarian insufficiency patients - from latest studies to therapeutic approach.</a> Prz Menopauzalny. 17 (3), 117-119 (2018).</li>
<li>Baker, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+plans+and+family-building+options+for+women+with+primary+ovarian+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Reproductive+Medicine%22%5BJournal%5D)">Life plans and family-building options for women with primary ovarian insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 29 (4), 362-372 (2011).</li>
<li>Englert, Y., Govaerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+donation%3A+particular+technical+and+ethical+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Oocyte donation: particular technical and ethical aspects.</a> Human Reproduction. 13, Suppl 2 90-97 (1998).</li>
<li>Englert, Y., Rodesch, C., Laruelle, C., Govoerts, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+donation%3A+ethical+aspects+related+to+the+donor%5BTitle%5D)+AND+%22Contraception%2C+Fertilite%2C+Sexualite%22%5BJournal%5D)">Oocyte donation: ethical aspects related to the donor.</a> Contraception, Fertilite, Sexualite. 25 (3), 251-257 (1997).</li>
<li>Storgaard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obstetric+and+neonatal+complications+in+pregnancies+conceived+after+oocyte+donation%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BJOG%3A+An+International+Journal+of+Obstetrics+and+Gynaecology%22%5BJournal%5D)">Obstetric and neonatal complications in pregnancies conceived after oocyte donation: a systematic review and meta-analysis.</a> BJOG: An International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 124 (4), 561-572 (2017).</li>
<li>Storgaard, M., Malchau, S., Loft, A., Larsen, E., Pinborg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+donation+is+associated+with+an+increased+risk+of+complications+in+the+pregnant+woman+and+the+fetus%5BTitle%5D)+AND+%22Ugeskrift+for+Laeger%22%5BJournal%5D)">Oocyte donation is associated with an increased risk of complications in the pregnant woman and the fetus.</a> Ugeskrift for Laeger. 179 (11), (2017).</li>
<li>Kawamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippo+signaling+disruption+and+Akt+stimulation+of+ovarian+follicles+for+infertility+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Hippo signaling disruption and Akt stimulation of ovarian follicles for infertility treatment.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 110 (43), 17474-17479 (2013).</li>
<li>Hsueh, A. J., Kawamura, K., Cheng, Y., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraovarian+control+of+early+folliculogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Intraovarian control of early folliculogenesis.</a> Endocrine Reviews. 36 (1), 1-24 (2015).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+dormant+ovarian+follicles+to+generate+mature+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Activation of dormant ovarian follicles to generate mature eggs.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (22), 10280-10284 (2010).</li>
<li>Suzuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+fertility+preservation+following+ovarian+tissue+vitrification+in+patients+with+primary+ovarian+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Successful fertility preservation following ovarian tissue vitrification in patients with primary ovarian insufficiency.</a> Human Reproduction. 30 (3), 608-615 (2015).</li>
<li>Tanaka, Y., Hsueh, A. J., Kawamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+approaches+of+drug-free+in+activation+and+laparoscopic+ovarian+incision+to+treat+patients+with+ovarian+infertility%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Surgical approaches of drug-free in activation and laparoscopic ovarian incision to treat patients with ovarian infertility.</a> Fertility and Sterility. , (2020).</li>
<li>Kawamura, K., Ishizuka, B., Hsueh, A. J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-free+in-vitro+activation+of+follicles+for+infertility+treatment+in+poor+ovarian+response+patients+with+decreased+ovarian+reserve%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Biomedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Drug-free in-vitro activation of follicles for infertility treatment in poor ovarian response patients with decreased ovarian reserve.</a> Reproductive Biomedicine Online. 40 (2), 245-253 (2020).</li>
<li>Haino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+Follicular+Localization+in+Human+Ovarian+Cortex+for+Vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Adolescent+and+Young+Adult+Oncology%22%5BJournal%5D)">Determination of Follicular Localization in Human Ovarian Cortex for Vitrification.</a> Journal of Adolescent and Young Adult Oncology. 7 (1), 46-53 (2018).</li>
<li>Baird, D. T., Webb, R., Campbell, B. K., Harkness, L. M., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+ovarian+function+in+sheep+after+ovariectomy+and+transplantation+of+autografts+stored+at+-196+C%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Long-term ovarian function in sheep after ovariectomy and transplantation of autografts stored at -196 C.</a> Endocrinology. 140 (1), 462-471 (1999).</li>
<li>Qin, Y., Jiao, X., Simpson, J. L., Chen, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+primary+ovarian+insufficiency%3A+new+developments+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">Genetics of primary ovarian insufficiency: new developments and opportunities.</a> Human Reproduction Update. 21 (6), 787-808 (2015).</li>
<li>Domniz, N., Meirow, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Premature+ovarian+insufficiency+and+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Practice+%26+Research%3A+Clinical+Obstetrics+%26+Gynaecology%22%5BJournal%5D)">Premature ovarian insufficiency and autoimmune diseases.</a> Best Practice & Research: Clinical Obstetrics & Gynaecology. 60, 42-55 (2019).</li>
<li>Laven, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Ovarian+Insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Reproductive+Medicine%22%5BJournal%5D)">Primary Ovarian Insufficiency.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 34 (4), 230-234 (2016).</li>
<li>Grynberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertility+preservation+in+Turner+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Fertility preservation in Turner syndrome.</a> Fertility and Sterility. 105 (1), 13-19 (2016).</li>
<li>Tomao, F., Spinelli, G. P., Panici, P. B., Frati, L., Tomao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+function%2C+reproduction+and+strategies+for+fertility+preservation+after+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Oncology%2FHematology%22%5BJournal%5D)">Ovarian function, reproduction and strategies for fertility preservation after breast cancer.</a> Critical Reviews in Oncology/Hematology. 76 (1), 1-12 (2010).</li>
<li>Kim, S., Lee, Y., Lee, S., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+tissue+cryopreservation+and+transplantation+in+patients+with+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+%26+Gynecology+Science%22%5BJournal%5D)">Ovarian tissue cryopreservation and transplantation in patients with cancer.</a> Obstetrics & Gynecology Science. 61 (4), 431-442 (2018).</li>
<li>Donnez, J., Dolmans, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+tissue+freezing%3A+current+status%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Ovarian tissue freezing: current status.</a> Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 27 (3), 222-230 (2015).</li>
<li>Wu, R. C., Kuo, P. L., Lin, S. J., Liu, C. H., Tzeng, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X+chromosome+mosaicism+in+patients+with+recurrent+abortion+or+premature+ovarian+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Formosan+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">X chromosome mosaicism in patients with recurrent abortion or premature ovarian failure.</a> Journal of the Formosan Medical Association. 92 (11), 953-956 (1993).</li>
<li>De Munck, N., Vajta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficiency+of+oocyte+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Safety and efficiency of oocyte vitrification.</a> Cryobiology. 78, 119-127 (2017).</li>
<li>Argyle, C. E., Harper, J. C., Davies, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+cryopreservation%3A+where+are+we+now%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">Oocyte cryopreservation: where are we now.</a> Human Reproduction Update. 22 (4), 440-449 (2016).</li>
</ol>

저자는 이해 상충이 없음을 확인합니다.

이 원고에서, 우리는 약물없는 IVA에 대한 상세한 실험실 프로토콜을 보여 주었다. 약물 없는 IVA는 난소 의 성장을 촉진하기 위해 난소 예비를 감소시키는 POR 환자를위한 불임 치료의 새로운 접근법으로, 난소 자극 후 더 성숙한 난모를 산출하고 성공적인 임신20에서증가합니다. 감소하는 난소 예비를 가진 15명의 POR 환자에서, 이 접근법은 1개의 자발적인 임신을 달성했습니다, 체외 수정-태아 전송은 1개의 지속적인 임신19와더불어 4개의 살아있는 출생을 허용했습니다.
난소 피질을 접목하기 위해, 수질 조직은 두께의 1-2 mm와 마이크로 가위를 사용하여 제거되었다. 이전에는 원시, 1차 및 이차 여포의 대부분이 정상 난소예비(21)를가진 환자에서 난소 피질의 표면으로부터 1mm 두께 내에 위치했다는 것을 입증했습니다. POI 환자에서, 우리는 이차...

난소 기능은 노화 와 karyotype 이상, 자가 면역 질환, 화학 요법 및 방사선 요법 및 난소 수술을 포함한 일부 병리학 조건 동안 점진적으로 감소합니다. 불임 보존은 심각한 난소 기능 장애를 가진 미혼 여성이 미래의 임신에 대한 잠재력을 보존하는 가장 좋은 옵션 중 하나입니다. 불임 보존을 위해, 현재 두 가지 방법은 주로 온코 불임 분야에서 사용할 수 있습니다. 오낭 극저온 보존은 불임 보존을 위한 잘 확립된 절차이며 많은 성공적인 사례가1,2로보고되었다. 한편, 난소조직 냉동보존도 암 환자의 불임 보존을 위해 설립되었지만 여전히 실험전략3,4이다. 두 방법 모두에서 임신이 발생하기 위해서는 여러 가지 성숙한 난모세포가 필요합니다. 일반적으로, 40세 이전에 무생물이 되는 조기 난소 부족(POI)을 가진 환자, 그리고 난소 예비가 낮은 중년 여성은 성숙한 난소 자극에 대한 난소 반응(POR)을5,6,7로나타낸 것으로 나타났다. 더욱이, 적은 수의 개미 여포를 가진 젊은 환자는 또한 난소 자극7에POR를 보였다. 이 환자는 적당한 난소 hypers자극 후에조차 회수 가능한 난모세포의 아주 한정된 수를 가지고, 따라서 임신을 위한 난모세포의 충분한 수를 지키기 위하여 다중 비싼 절차가 요구됩니다.
남편의 정자와 배아 전이(ET)를 가진 체외 수정(IVF)에 이어 온구체 기증은 자신의 난소를 얻는 데 어려움을 겪는 POI 및 POR 환자에게 유일한 옵션이다8,9,10. 그러나, 난소세포 기증은 윤리적인 문제뿐만 아니라 자기면역 및 임신 합병증11,12,13,14에의해 복잡하다. 이러한 문제를 해결하기 위해 환자 고유의 난모를 사용하여 불임 치료의 설립이 필요합니다. POI 환자를 위해, 우리는 성공적인 여포 성장 및 성숙한 난모세포의 생성을 허용하기 위하여 체외 활성화 (IVA) 접근을 개발했습니다, 많은 임신 및 납품을 지도하는15. IVA에서, 우리는 복강경 수술에서 난소 피질을 단편화하고 Akt 자극 약물에 의해 여포를 활성화하고 두 번째 복강경 수술15에서나팔관의 세로사 아래에 만든 인공 파우치로 다시 이식이 수행하기 위해 이틀 동안 배양. 이 절차는 난소 피질 단편화 후 원시, 기본 및 이차 여포의 성장을 촉진 하 여 하마 신호 중단을 촉진16,Akt 신호 자극기와 2 일 문화다음 17.
가혹한 POI 케이스와는 대조적으로, 감소된 난소 예비를 가진 POR 환자는 다중 이차 여포가 있습니다. 하마 신호 중단만으로는 이차 여포 성장 촉진에 효과적이기 때문에16,우리는 최근에 Akt 자극 약물의 처리 없이 피질 단편화 및 직교 이식을 포함하는 약 없는 IVA 절차를 사용하여 POR 환자를 위한 성공적인 임신 및 납품을 보여주었습니다. 약물 없는 IVA는 난소 여포의 초기 단계를 자극하여 단 하나의 수술 후 전형 여포 단계로 발전시키고 IVF-배아 전달을 위한 회수된 난귀세포의 수를증가15,18. 약물 없는 IVA 접근법은 원래 IVA와 비교하여 1) 문화 중 잠재적 인 여포 손실을 피하고, 2) 두 번째 수술의 침습성과 비용을 최소화하고, 3) 단기 수술 후 침대 휴식과 4) 직교 성 이식으로 인한 자발적 임신의 잠재력을 포함합니다. 우리는 최근에 약물없는 IVA19의 외과 적 절차와 수술 후 난소 자극의 상세한 프로토콜을 보여주는 비디오 기사를 발표했다20. 여기서, 우리는 약물없는 IVA에 필요한 실험실 방법의 세부 사항을 제시한다.

<table><tbody><tr><td>4.5 onz 표본 용기</td><td>FALCON</td><td>354013</td><td>다른 제품도 적합 할 수 있습니다</td></tr><tr><td>60mm 접시</td><td>FALCON</td><td>351007</td><td>다른 제품도 적합 할 수 있습니다</td></tr><tr><td>50 x 50 cm 멸균 드레이프</td><td>HOGY Medical</td><td>SR-823</td><td>모든 유형의 멸균 produsts도 적합 할 수 있습니다</td></tr><tr><td>일회용 피펫</td><td>FALCON</td><td>357575</td><td>다른 제품도 적합</td></tr> <tr><td>할 수 있습니다.가는 가위, 곡선</td><td>WPI</td> <td># 14224-G</td><td>다른 제품도 적합 할 수 있지만, 우리는이 제품을 사용하는 것이 좋습니다</td></tr><tr><td>핫 플레이트</td><td>TOKAI HIT</td><td>TPiE-SP</td><td>이식 전에 난소 조직을 포함하는 접시의 온도를 유지하기 위해 수술실에서 사용</td></tr><tr><td>인간 혈청 알부민 용액</td><td>Irvine Scientific</td><td>9988</td><td>난소 조직</td></tr><tr><td>IVA 캐뉼</td> <td>처리를위한 매체KITAZATO</td><td>446030 IVA-6030E</td><td>조직 자동 이식을 위한 특정 캐뉼라</td></tr><tr><td>KAI 의료 일회용 메스</td><td>WPI</td><td>#5 10-A</td><td>다른 제품도 적합할 수 있지만 이 제품을 사용하는 것이</td></tr> 좋습니다<tr><td>. 마이크로 가위, 곡선형</td><td>WPI</td><td>#503364</td><td>다른 제품도 적합할 수 있지만 이 제품을 사용하는 것이</td></tr> 좋습니다<tr><td>. 변형 HTF 중형 HEPES</td><td>Irvine Scientific</td><td>90126</td><td>난소 조직 취급용 매체</td></tr><tr><td>멸균 거즈</td><td>Osaki Medical</td><td>15004</td><td>모든 유형의 멸균 프로더스트도 적합할 수 있습니다</td></tr><tr><td>스위스 핀셋, 곡선 팁</td><td>KAI</td><td>#504505</td><td>다른 제품도 적합할 수 있지만 이 제품을 사용하는 것이 좋습니다</td></tr></tbody></table>.

심한 난소 기능 장애 환자에서 불 임 보존

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

난소 기능은 노화 중 및 karyotype 이상, 자가 면역 질환, 화학 및 방사선 요법뿐만 아니라 난소 수술을 포함한 일부 병리학 적 조건에서 점진적으로 감소합니다. 심한 난소 기능 장애를 가진 미혼 여성의 경우, 불임 보존은 미래의 임신에 중요합니다. 난소 극저온 보존은 불임 보존을 위한 확립된 방법이지만, 이 환자들은 난소 과잉 자극 후에도 제한된 수의 난소세포만 보존할 수 있어 향후 임신을 보장하기에 충분한 난피세포를 보장하기 위해 반복된 자극으로 이어질 수 있습니다. 이 문제를 해결하기 위해, 우리는 최근에 우리가 preantral 여포 단계로 발전하기 위하여 난소 여포의 초기 단계를 자극하는 가능하게 하는 시험관 내 활성화 (IVA) 절차를 개발했습니다. 이 preantral 여포는 고나돌비틴 자극의 독특한 프로토콜에 반응할 수 있고, 그 결과 극저온 보존을 위한 난소 자극 당 회수된 난소 자극의 증가수의 결과로. 약물없는 IVA는 외과 적 접근법과 난소 자극으로 구성되었습니다. 우리는 복강경 수술하에 환자에게서 하나 또는 둘 다 난소에서 피질의 부분을 제거했습니다. 난소 피질 조직은 하마 신호 통로를 중단하고 초기 단계 여포의 발달을 자극하기 위하여 작은 큐브로 절단되었습니다. 이 큐브는 남은 난소뿐만 아니라 나팔관의 세로사 아래에 정형소로 이식되었습니다. 우리는 이미 약물없는 IVA의 수술 절차와 후속 난소 자극의 프로토콜을 발표했지만, 여기에서 우리는 약물없는 IVA에 필요한 실험실 방법의 세부 사항을 제시합니다.

IVA접근법(15)의첫 번째 간행물에서, 우리는 복강경수술(그림 1A)의밑에 이식 부위로 하나씩 난소 피질 큐브를 이식했습니다. 100-150 난소 큐브가 사용되었기 때문에 복강경 수술에서 조직 이식에 3-4 시간이 걸렸습니다. 또한, 일부 난소 큐브는 접목 하기 전에 손실 되었다. IVA 캐뉼라는 20-30큐브를 한 번에 접목 부위로 옮길 수 있기때문에(그림 1B)을1-2시간으로 단축할 수 있습니다. 또한, IVA 캐뉼라는 수술 중 난소 피질 큐브의 손실을 제거 할 수 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62098/62098fig01.jpg"> 그림 1: IVA...

우리는 심각한 난소 기능 장애를 가진 환자를 위한 난소 여포의 약물 없는 체외 활성화 (IVA)를 위한 실험실 절차의 세부 사항을 제시합니다. 이 방법은 난소 과잉 자극 당 회수 가능한 난모세포의 수를 증가시키고 그 환자를 위한 불임 보존을 유익할 수 있었습니다.

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

이 영화의 목표는 난소 기능 장애를 가진 환자에 대한 우리의 새로운 접근의 절차를 보여주는 것입니다. 난소 기능은 노화 와 karyotype 이상, 자동 면역 질환, 화학 요법 및 방사선 요법 및 난소 수술을 포함한 일부 병리학 조건 동안 점진적으로 감소합니다. 낮은 난소 예비를 가진 중년 여자의 대부분은 성숙한 난모세포를 산출하기 위한 난소 자극에 가난한 난소 반응을 보여주었습니다.게다가, 개소 여포의 낮은 수를 가진 젊은 환자는 또한 난소 자극에 나쁜 난소 반응을 보여주었습니다. 불임 보존은 미래의 임신을 위한 잠재적인 OCS를 저장하는 것이 중요합니다. 불임 보존을 위해 난낭극 보존이 확립되었습니다.그러나, 이 가난한 난소 반응 환자는 적당한 난소 자극 후에조차 난소세포의 아주 한정된 수를 회수할 수 있었습니다, 한 아기를 보장하기 위하여 난소 세포의 충분한 수를 보장하기 위하여 반복된 비싼 절차의 요구 사항으로 이끌어 냅니다. 이러한 문제를 해결하기 위해, 우리는 최근에 우리가 전 개포 단계로 개발하기 위하여 난소 여포의 초기 단계를 자극하는 가능하게 하는 시험관 내 활성화, IVA 절차를 개발했습니다. 원래 IVA 절차는 난소 피질 단편화에 의해 원시, 기본 및 이차 여포 성장을 촉진 할 수 있습니다, 하마 신호 중단으로 이어지는.그 다음에는 Akt 신호 자극기로 이틀간 배양됩니다. 이 절차는 잔여 여포가 거의 없는 POI 환자에게 적합합니다. 그러나, 이 절차는 다중 이차 여포가 있는 환자를 위한 과도한 처리입니다.잔여 이차 여포가 있는 환자를 위해, 우리는 약 자유로운 IVA에게 불린 방법을 설치하고 이미 하마 신호 통로를 중단해서 이차 여포 성장을 승진시키는 가능성을 이미 시험했습니다. 우리는 또한 마약없는 IVA에 의한 몇 가지 성공적인 배달 사례를 가지고 있었습니다. 우리는 이미 약물 무료 IVA의 외과 적 절차와 난소 자극을 따르는 프로토콜을 발표했습니다.이 비디오에서는 약물 없는 IVA에 필요한 실험실 방법의 세부 사항을 제시합니다. 우리는 볼로냐 기준에 따라 약물없는 IVA 환자를 모집했습니다. 환자는 다중 이차 여포가 있을 수 있었습니다.처음에, 피질의 부분은 복강경 검사에 의해 하나 또는 둘 다 난소에서 제거되었습니다. POR 환자는 중간 크기의 난소를 가진 사람들입니다. 대부분의 환자에서, 우리는 한쪽 또는 양쪽에 난소에서 피질 조직의 일부만 추출.추출된 중요한 조직은 즉시 HEPES 완충액을 가진 배양 매체를 포함하는 배양 접시로 옮겨졌고, 하마 신호 중단을 위해 이 작은 조직을 작은 큐브로 해부하였다. 절차에 대한 자세한 내용은 이 비디오에 표시됩니다. 최적의 장기 크기를 유지하기 위해서는 하마 신호 경로가 필수적입니다.이 경로는 여러 부정적인 성장 규제 기관으로 구성되어 있습니다. 하마 신호가 중단되면, 키나아제 캐스케이드에서 작용하는 부정적인 성장 조절기 중 하나인 YAP의 인산화 수준이 감소하고 YAP의 핵 수준이 증가합니다. YAP는 하류 CCN 성장 요인을 높이기 위해 TEAD 전사 요인과 함께 작동합니다.한편, 구형 작용의 액틴 중합화, G-actin, 필라멘트 형태, F-actin, 세포 형상 유지 보수 및 운동에 중요하다. 이전에 보고된 F-액틴 형성 유도는 하마 신호를 방해하고 인간 HeLa 세포에서 자라난 을 유도합니다. 우리는 이전에 난소 단편화가 F-actin 형성을 증가보고, 그것은 YAP의 인산화의 수준의 감소로 이어집니다.그것은 CCN 성장 인자의 증가 된 발현으로 이어집니다. 절단 후, 이 큐브는 나머지 난소로 접목됩니다. 이 절차는 잔류 이차 여포 성장을 촉진하고 성숙한 난우세포의 증가로 이어질 수 있습니다.약물 없는 IVA는 4단계로 구성됩니다. 우리는 이미 약물없는 IVA에 대한 수술 절차를 발표했습니다. 난소 피질 추출 및 자동 이식에 대한 문헌을 참조하십시오.여기서 우리는 약물없는 IVA에 필요한 실험실 방법의 세부 절차를 보여줍니다. 1단계에서, 우리는 난소 피질 단편화가 어떻게 수행되는지 보여줍니다. 2 단계에서, 우리는 이식을위한 장치에 난소 피질 큐브를로드하는 방법을 보여줍니다, 여기, 난소 피질 단편화를 보여 드리겠습니다.이 연구는 우리 연구소의 윤리위원회에 의해 승인되었으며, 모든 절차는 세계 의학 협회의 윤리 강령에 따라 수행되었습니다. 난소 피질 조각화. 이 단계에 필요한 다음 도구 : 접시, 멸균 거즈, 미세 가위, 미세 한 집게 및 메스.우리는 일반적으로 이러한 종류의 접시와 멸균 거즈를 사용하지만 플라스틱 페트리 접시, 유리 접시, 등 세테라와 같은 다른 제품은이 절차에 적합 할 수 있으며 모든 종류의 멸균 거즈도 적합합니다. 그러나 우리는 강력하게 집게와 메스의이 모양의 사용을 권장합니다. 또한, 온전플레이트를 사용하여 조직을 함유한 요리의 온도를 유지하기 위해 멸균 드레이프 아래에 배치한다.피질 조직은 즉시 mHTF를 포함하는 접시로 전달됩니다. 환자의 데이터와 상관 관계를 위해 환자의 이름으로 사진을 찍습니다. 조직의 크기, 두께 및 상태를 기록합니다.잔류 수질 조직을 제거합니다. 조직 단편화 전에, 수질 조직을 제거합니다. 멸균 거즈에 피질을 넣습니다.동영상에 표시된 것처럼 거즈는 미디엄으로 촉촉합니다. 이 절차 동안 피질 표면이 건조되기 전에 일회용 파이펫으로 매체를 적용하십시오. 두께가 1~2밀리미터에 도달할 때까지 마이크로 가위로 잔류 조직을 제거합니다.POR 환자에서, 이차 여포는 피질 표면에서 1 밀리미터 보다 더 깊은 위치, 그래서 두께에 있는 1 밀리미터 미만 조직을 하지 마십시오. 각 조직의 피질의 한쪽을 조직학적 분석을 위해 하나씩 5밀리미터를 측정하는 스트립으로 잘라 서 여포의 존재를 결정합니다. 이 스트립을 배양 배지가 있는 1.5 밀리리터 튜브에 넣고 고정될 때까지 섭씨 4도까지 유지하십시오.난소 피질 큐브의 준비. 수질 조직의 제거 후, 난소 피질은 하마 신호 중단을 위해 단편화된다. 처음에는 메스를 사용하여 피질을 하나씩 10 밀리미터 스트립으로 자른다.그런 다음 이 스트립을 1밀리미터 큐브된 작은 큐브로 자른다. 배지에서 조직은 미끄러워지고 절단하기가 어렵습니다. 쉽게 자르기 위해 스트립을 당기는 대신 메스를 누르는 것으로 잘라냅니다.절단 후 큐브 수를 계산하고 자동 접목을 준비합니다. 매체에서 삼투압의 변화를 피하기 위해 조직 자동 이식 전에 배지를 적당히 추가하십시오. 난소 자동 이식의 경우 캐뉼라 모양의 장치를 사용하면 로딩이 쉬워집니다.이 단계에는 두 단계가 포함되어 있습니다. 이전에는 난소 파편이 복강경 검사하에 집게를 사용하여 하나씩 이식되었습니다. 그러나 수술이 완료되려면 약 3~4시간이 걸렸습니다.이 절차에서는 내부 주사기와 외부 실린더로 만든 캐너큘러 모양의 장치를 사용합니다. 심플한 모양과 경량입니다. 또한 이 장치의 끝은 둥근 모양입니다.이식 부위의 손상을 피하는 날카로운 점은 없습니다. 이러한 유형의 장치를 사용하면 한 번에 최대 20~30개의 큐브를 이식할 수 있습니다. 이것은 수술 시간에 있는 능률적인 이식 그리고 감소로 이끌어 냅니다.난소 피질 조각을 로드합니다. IVA 캐뉼라의 준비. IVA 캐뉼라를 준비하고 이 장치를 mHTF로 세척합니다.흡인을 반복하고 매체를 여러 번 배출합니다. 매체의 약 100 마이크로리터를 흡입하여 통조레끝을 채웁니다. 이것은 조직 파편 적재 도중 밖으로 그리기에서 큐브를 피하기 위한 것입니다.피질 큐브를 로드합니다. 미세 한 집게로 큐브를 선택하고 캐러클의 끝에 넣습니다. 자동 접목 된 큐브의 수는 이식 부위의 크기에 따라 다릅니다.대상 번호에 도달할 때까지 큐브를 하나씩 로드합니다. 큐브를 로드한 후 캐뉼라를 외과 의사에게 조심스럽게 전달합니다. 접목 부위가 준비되지 않은 경우 난소 큐브가 포함된 캐니큘러 부분은 큐브 온도의 감소를 피하기 위해 손가락으로 보관해야 합니다.우리는 이미 약물없는 IVA의 임상 결과를보고했습니다. 임상 결과에 대해 공지된 논문을 참조하십시오. 이 실험실 프로토콜은 한 환자에게 30~50분이 필요했습니다.평균 시간은 난소 피질 단편화의 경우 10~20분, IVA 캐뉼라에 이러한 조각을 적재하는 데 20~30분입니다. 이것은 조직 크기에 따라 달라 지지만 거의 모든 환자는이 평균 시간에 완료 될 수 있습니다. 결론. 약물 없는 IVA는 난소 보호구역이 감소하는 POR 환자를 위한 불임 치료의 새로운 접근법입니다.이 실험실 프로토콜은 수술에 필요한 시간과 이식 중에 파편의 손실로 이어집니다. 약물없는 IVA의 실험실 기술은 이식없이 성숙한 난모세포를 얻기 위해 난소 조직 문화의 미래 응용 프로그램의 기초가 될 수 있습니다.

fertility-preservation-in-patients-with-severe-ovarian-dysfunction

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

중증 난소 기능 장애 환자의 가임력 보존

Oocyte 냉동 보존은 후구형 여성의 불임 보존을위한 금 본위제로 여러 국제 과학 사회에 의해 인식된다. 적절한 임상 및 실험실 전략은 불임 보존 치료의 효능, 효율성 및 안전을 최대한 보장합니다.

오키테 바이트로피화를 통한 불임 보존: 임상 및 실험실 관점

전담 팀은 Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser 환자에게 복강경 질 성형술시 제어 된 난소 자극 및 난 모세포 동결 보존을 수행 할 수있는 옵션을 제공 할 수 있습니다.

Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser 증후군 치료를위한 질 성형술 중 복강경 난 모세포 검색 및 냉동 보존

본 프로토콜은 난소 조직 동결보존을 통한 가임력 보존이 필요한 25세 미만 환자의 난소 예비력을 평가하는 방법을 설명합니다. 이 방법에는 (1) 대뇌 피질 샘플의 난소 예비력에 대한 조직학적 평가, (2) 참조 데이터 세트와의 비교, (3) Z-점수 계산이 포함됩니다.

가임력 보존을 겪고 있는 젊은 환자의 난소 예비력을 평가하기 위한 Z-점수

널리 사용되는 느린 동결 프로토콜에 대한 대안적인 냉동 보존 방법으로서 난소 조직의 유리화를 위한 프로토콜이 제시됩니다.

난소 피질 조직의 유리화(vitrification of the glassy state of aggation)

이 프로토콜은 IVF 절차에서 난포액, 체세포 및 미성숙 난모세포를 분리하고 처리하여 고품질 분자 및 세포 분석을 가능하게 하는 표준화된 방법을 간략하게 설명합니다. 이러한 접근 방식은 일반적으로 임상 치료에서 폐기되는 재료를 사용하여 생식력, 생식 노화 및 난소 기능 장애에 대한 중개 연구를 지원합니다.

체외 수정을 받는 개인의 인간 난포액, 난포 체세포 및 미성숙 난모세포 수집

심각한 척수 손상의 타박상 모델이 설명되어 있습니다. 자세한 수술 전, 수술 및 수술 후 단계는 일관된 모델을 얻기 위해 설명되어 있습니다.

쥐에 심각한 척수 손상의 타박상 모델

간헐적 파행이 있는 개인은 건강한 대조군에 비해 균형이 잘 잡히지 않습니다. 컴퓨터화된 동적 자세 검사는 균형 장애에 대한 개인의 자세 반응을 측정하는 객관적인 방법입니다. 이것은 감각 자극이 변경되고 예기치 않은 교란이 발생하는 상황에 반응하는 개인의 능력을 객관적으로 반영합니다.

간헐적 파행 환자의 자세 조절 평가를 위한 Computerized Dynamic Posturography (간헐적 파행 환자의 자세 조절 평가를 위한 Computerized Dynamic Posturography)

혈관 장애 및 생리 학적 기전에 기여하는 정도는 상완 동맥 흐름 중재 팽창 대동맥 맥파 속도, 혈관 내피 세포의 단백질 발현을 측정함으로써, 만성 신장 질환을 가진 환자에서 평가 될 수있다.

만성 신장 질환 환자에서 혈관 기능의 평가

여기, 우리는 intracapsular 로타리 컷 절차 (IRCP), 다 산 보존을 촉진 하는 수정 된 복 강경 intracapsular myomectomy 수행 하기 위한 프로토콜을 제시.

Intracapsular 로타리 컷 절차 (IRCP)의 도입: A 다 산 보존을 촉진 하는 Hysteromyomectomy 프로시저 수정

[18F]-fluorodeoxyglucose (FDG) 양전자 방출 단층 촬영 계산한 단층 촬영은 뇌 기능에 관련 된 포도 당 대사를 공부 하는 데 유용. 여기, 선물이 프로토콜 [18F] FDG 추적 프로그램에 대 한 설치 및 심한 외상 성 뇌 손상 환자에서 임상 발현과 관련 된 대상된 뇌 영역에 대 한 관심 지역 분석의 semiquantitative 평가.

심한 뇌 손상 환자에서 [18F] FDG 추적 프로그램을 사용 하 여 반 정량적 평가

배우세요 난소 기능 장애 환자를 위한 약물 없는 체외 활성화(IVA) 방법으로 난포를 활성화하여 수정 가능한 난자 수를 늘리고 생식력 보존을 개선하는 혁신적인 생식 의학 기술입니다.

심한 난소 기능 장애 환자에서 불 임 보존

더 많은 동영상 탐색