심한 난소 기능 장애 환자에서 불 임 보존

이 영화의 목표는 난소 기능 장애를 가진 환자에 대한 우리의 새로운 접근의 절차를 보여주는 것입니다. 난소 기능은 노화 와 karyotype 이상, 자동 면역 질환, 화학 요법 및 방사선 요법 및 난소 수술을 포함한 일부 병리학 조건 동안 점진적으로 감소합니다. 낮은 난소 예비를 가진 중년 여자의 대부분은 성숙한 난모세포를 산출하기 위한 난소 자극에 가난한 난소 반응을 보여주었습니다.

게다가, 개소 여포의 낮은 수를 가진 젊은 환자는 또한 난소 자극에 나쁜 난소 반응을 보여주었습니다. 불임 보존은 미래의 임신을 위한 잠재적인 OCS를 저장하는 것이 중요합니다. 불임 보존을 위해 난낭극 보존이 확립되었습니다.

그러나, 이 가난한 난소 반응 환자는 적당한 난소 자극 후에조차 난소세포의 아주 한정된 수를 회수할 수 있었습니다, 한 아기를 보장하기 위하여 난소 세포의 충분한 수를 보장하기 위하여 반복된 비싼 절차의 요구 사항으로 이끌어 냅니다. 이러한 문제를 해결하기 위해, 우리는 최근에 우리가 전 개포 단계로 개발하기 위하여 난소 여포의 초기 단계를 자극하는 가능하게 하는 시험관 내 활성화, IVA 절차를 개발했습니다. 원래 IVA 절차는 난소 피질 단편화에 의해 원시, 기본 및 이차 여포 성장을 촉진 할 수 있습니다, 하마 신호 중단으로 이어지는.

그 다음에는 Akt 신호 자극기로 이틀간 배양됩니다. 이 절차는 잔여 여포가 거의 없는 POI 환자에게 적합합니다. 그러나, 이 절차는 다중 이차 여포가 있는 환자를 위한 과도한 처리입니다.

잔여 이차 여포가 있는 환자를 위해, 우리는 약 자유로운 IVA에게 불린 방법을 설치하고 이미 하마 신호 통로를 중단해서 이차 여포 성장을 승진시키는 가능성을 이미 시험했습니다. 우리는 또한 마약없는 IVA에 의한 몇 가지 성공적인 배달 사례를 가지고 있었습니다. 우리는 이미 약물 무료 IVA의 외과 적 절차와 난소 자극을 따르는 프로토콜을 발표했습니다.

이 비디오에서는 약물 없는 IVA에 필요한 실험실 방법의 세부 사항을 제시합니다. 우리는 볼로냐 기준에 따라 약물없는 IVA 환자를 모집했습니다. 환자는 다중 이차 여포가 있을 수 있었습니다.

처음에, 피질의 부분은 복강경 검사에 의해 하나 또는 둘 다 난소에서 제거되었습니다. POR 환자는 중간 크기의 난소를 가진 사람들입니다. 대부분의 환자에서, 우리는 한쪽 또는 양쪽에 난소에서 피질 조직의 일부만 추출.

추출된 중요한 조직은 즉시 HEPES 완충액을 가진 배양 매체를 포함하는 배양 접시로 옮겨졌고, 하마 신호 중단을 위해 이 작은 조직을 작은 큐브로 해부하였다. 절차에 대한 자세한 내용은 이 비디오에 표시됩니다. 최적의 장기 크기를 유지하기 위해서는 하마 신호 경로가 필수적입니다.

이 경로는 여러 부정적인 성장 규제 기관으로 구성되어 있습니다. 하마 신호가 중단되면, 키나아제 캐스케이드에서 작용하는 부정적인 성장 조절기 중 하나인 YAP의 인산화 수준이 감소하고 YAP의 핵 수준이 증가합니다. YAP는 하류 CCN 성장 요인을 높이기 위해 TEAD 전사 요인과 함께 작동합니다.

한편, 구형 작용의 액틴 중합화, G-actin, 필라멘트 형태, F-actin, 세포 형상 유지 보수 및 운동에 중요하다. 이전에 보고된 F-액틴 형성 유도는 하마 신호를 방해하고 인간 HeLa 세포에서 자라난 을 유도합니다. 우리는 이전에 난소 단편화가 F-actin 형성을 증가보고, 그것은 YAP의 인산화의 수준의 감소로 이어집니다.

그것은 CCN 성장 인자의 증가 된 발현으로 이어집니다. 절단 후, 이 큐브는 나머지 난소로 접목됩니다. 이 절차는 잔류 이차 여포 성장을 촉진하고 성숙한 난우세포의 증가로 이어질 수 있습니다.

약물 없는 IVA는 4단계로 구성됩니다. 우리는 이미 약물없는 IVA에 대한 수술 절차를 발표했습니다. 난소 피질 추출 및 자동 이식에 대한 문헌을 참조하십시오.

여기서 우리는 약물없는 IVA에 필요한 실험실 방법의 세부 절차를 보여줍니다. 1단계에서, 우리는 난소 피질 단편화가 어떻게 수행되는지 보여줍니다. 2 단계에서, 우리는 이식을위한 장치에 난소 피질 큐브를로드하는 방법을 보여줍니다, 여기, 난소 피질 단편화를 보여 드리겠습니다.

이 연구는 우리 연구소의 윤리위원회에 의해 승인되었으며, 모든 절차는 세계 의학 협회의 윤리 강령에 따라 수행되었습니다. 난소 피질 조각화. 이 단계에 필요한 다음 도구 : 접시, 멸균 거즈, 미세 가위, 미세 한 집게 및 메스.

우리는 일반적으로 이러한 종류의 접시와 멸균 거즈를 사용하지만 플라스틱 페트리 접시, 유리 접시, 등 세테라와 같은 다른 제품은이 절차에 적합 할 수 있으며 모든 종류의 멸균 거즈도 적합합니다. 그러나 우리는 강력하게 집게와 메스의이 모양의 사용을 권장합니다. 또한, 온전플레이트를 사용하여 조직을 함유한 요리의 온도를 유지하기 위해 멸균 드레이프 아래에 배치한다.

피질 조직은 즉시 mHTF를 포함하는 접시로 전달됩니다. 환자의 데이터와 상관 관계를 위해 환자의 이름으로 사진을 찍습니다. 조직의 크기, 두께 및 상태를 기록합니다.

잔류 수질 조직을 제거합니다. 조직 단편화 전에, 수질 조직을 제거합니다. 멸균 거즈에 피질을 넣습니다.

동영상에 표시된 것처럼 거즈는 미디엄으로 촉촉합니다. 이 절차 동안 피질 표면이 건조되기 전에 일회용 파이펫으로 매체를 적용하십시오. 두께가 1~2밀리미터에 도달할 때까지 마이크로 가위로 잔류 조직을 제거합니다.

POR 환자에서, 이차 여포는 피질 표면에서 1 밀리미터 보다 더 깊은 위치, 그래서 두께에 있는 1 밀리미터 미만 조직을 하지 마십시오. 각 조직의 피질의 한쪽을 조직학적 분석을 위해 하나씩 5밀리미터를 측정하는 스트립으로 잘라 서 여포의 존재를 결정합니다. 이 스트립을 배양 배지가 있는 1.5 밀리리터 튜브에 넣고 고정될 때까지 섭씨 4도까지 유지하십시오.

난소 피질 큐브의 준비. 수질 조직의 제거 후, 난소 피질은 하마 신호 중단을 위해 단편화된다. 처음에는 메스를 사용하여 피질을 하나씩 10 밀리미터 스트립으로 자른다.

그런 다음 이 스트립을 1밀리미터 큐브된 작은 큐브로 자른다. 배지에서 조직은 미끄러워지고 절단하기가 어렵습니다. 쉽게 자르기 위해 스트립을 당기는 대신 메스를 누르는 것으로 잘라냅니다.

절단 후 큐브 수를 계산하고 자동 접목을 준비합니다. 매체에서 삼투압의 변화를 피하기 위해 조직 자동 이식 전에 배지를 적당히 추가하십시오. 난소 자동 이식의 경우 캐뉼라 모양의 장치를 사용하면 로딩이 쉬워집니다.

이 단계에는 두 단계가 포함되어 있습니다. 이전에는 난소 파편이 복강경 검사하에 집게를 사용하여 하나씩 이식되었습니다. 그러나 수술이 완료되려면 약 3~4시간이 걸렸습니다.

이 절차에서는 내부 주사기와 외부 실린더로 만든 캐너큘러 모양의 장치를 사용합니다. 심플한 모양과 경량입니다. 또한 이 장치의 끝은 둥근 모양입니다.

이식 부위의 손상을 피하는 날카로운 점은 없습니다. 이러한 유형의 장치를 사용하면 한 번에 최대 20~30개의 큐브를 이식할 수 있습니다. 이것은 수술 시간에 있는 능률적인 이식 그리고 감소로 이끌어 냅니다.

난소 피질 조각을 로드합니다. IVA 캐뉼라의 준비. IVA 캐뉼라를 준비하고 이 장치를 mHTF로 세척합니다.

흡인을 반복하고 매체를 여러 번 배출합니다. 매체의 약 100 마이크로리터를 흡입하여 통조레끝을 채웁니다. 이것은 조직 파편 적재 도중 밖으로 그리기에서 큐브를 피하기 위한 것입니다.

피질 큐브를 로드합니다. 미세 한 집게로 큐브를 선택하고 캐러클의 끝에 넣습니다. 자동 접목 된 큐브의 수는 이식 부위의 크기에 따라 다릅니다.

대상 번호에 도달할 때까지 큐브를 하나씩 로드합니다. 큐브를 로드한 후 캐뉼라를 외과 의사에게 조심스럽게 전달합니다. 접목 부위가 준비되지 않은 경우 난소 큐브가 포함된 캐니큘러 부분은 큐브 온도의 감소를 피하기 위해 손가락으로 보관해야 합니다.

우리는 이미 약물없는 IVA의 임상 결과를보고했습니다. 임상 결과에 대해 공지된 논문을 참조하십시오. 이 실험실 프로토콜은 한 환자에게 30~50분이 필요했습니다.

평균 시간은 난소 피질 단편화의 경우 10~20분, IVA 캐뉼라에 이러한 조각을 적재하는 데 20~30분입니다. 이것은 조직 크기에 따라 달라 지지만 거의 모든 환자는이 평균 시간에 완료 될 수 있습니다. 결론. 약물 없는 IVA는 난소 보호구역이 감소하는 POR 환자를 위한 불임 치료의 새로운 접근법입니다.

이 실험실 프로토콜은 수술에 필요한 시간과 이식 중에 파편의 손실로 이어집니다. 약물없는 IVA의 실험실 기술은 이식없이 성숙한 난모세포를 얻기 위해 난소 조직 문화의 미래 응용 프로그램의 기초가 될 수 있습니다.