Name: 제브라피쉬의 초기 수명 단계에서 형광 미세 플라스틱의 축적 및 분포 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: 학습하세요 형광 미세 플라스틱을 이용한 제브라피쉬 배아와 유충에서의 미세 플라스틱 축적 및 분포 분석 방법을. 이 프로토콜은 수생 생물의 생물 축적 패턴과 독성 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 중국 국립 자연과학 재단(21777145, 22076170)과 창장학자 및 대학 혁신 연구팀(IRT_17R97)의 지원을 받았습니다.

성인 얼룩말 물고기는 중국 제브라피시 자원 센터 (우한, 중국)에서 유래. 이 실험은 국가 가이드 "동물 복지의 윤리적 검토를위한 실험실 동물 지침 (GB / T35892-2018)에 따라 수행되었습니다.
1. 배아 수집
<ol><li>14:10h 광전지에서 일정한 온도(28 ± 0.5°C)에서 숯여과 수돗물 시스템(pH 7.0 ± 0.2)을 재순환하는 20L 유리 탱크에서 물고기를 유지합니다.</li>
	<li>아르테미아 나우플리이와함께 매일 두 번 생선을 먹이는다. 음식은 하루에 최대 3 % 생선 무게로 주어지며14시에 5 분 이내에 먹어야합니다.</li>
	<li>잘 발달 된 성인 얼룩말 물고기 (3-4cm의 몸 길이)를 사육 전날 밤 1 명의 남성에서 2 명의 암컷의 비율로 산란 탱크로 옮긴다. 참고: 다음 날 아침, 물고기는 빛 주기가 시작된 후 생성되기 시작합니다.</li>
	<li>파스퇴르 파이펫을 사용하여 계란을 수집합니다. 행크의 용액을 여러 번 헹구고 현미경을 사용하여 수정을 확인하십시오. 수정란은 약 2시간 후 수정(hpf) 후 골짜기 기간을 거치며15를명확하게 식별할 수 있다.</li>
	<li>28°C에서 소독을 위한 1% 메틸렌 블루로 10% 행크용용100mL의 200mL를 함유한 500mL 비커에서 수정된 배아를 배양한다. 1 배아/2 mL 용액의 적재 속도를 초과하지 마십시오. 참고 : 10 % 행크의 솔루션은 137 mM NaCl, 5.4 mM KCl, 0.25 mM Na2HPO4,0.44 mM KH2PO4,1.3 mM CCl2,1.0 mM MgSO4 및 4.2 mM NaHCO3로구성됩니다.</li>
</ol>2. 미세 플라스틱 현탁액 준비
<ol><li>공칭 직경 500nm(발아/방출: 460/500 nm)의 공칭 직경을 10분 동안 녹색 형광표지 폴리스티렌 구슬(10 mg/mL)의 스톡 용액을 초음파 처리합니다.</li>
	<li>원하는 노출 솔루션(0.1, 1, 10 mg/L)을 생성하기 위해 10% 행크의 솔루션으로 스톡 솔루션을 희석합니다.</li>
	<li>노출 전에 항상 미세 플라스틱의 노출 솔루션을 준비하십시오. 참고: 소플라스틱의 독성 효과를 평가할 때주의해야 하며, 상업용 입자 제형에서 아지드 나트륨과 같은 방부제가 존재하기 때문에 상이한 유기체(16)에독성이 있을 수 있다. 따라서 이러한 첨가제는 독성 실험을 수행하기 전에 컨트롤에서 제거하거나 고려해야 합니다.</li>
</ol>3. 미세 플라스틱 노출
<ol><li>무작위로 6 새로 수정 된 배아 (4 hpf)를 선택한 다음 다른 농도를 가진 5 mL의 미세 플라스틱 용액을 포함하는 6 웰 플레이트의 각 우물로 옮김합니다. 행크의 솔루션 10%를 포함하는 제어 그룹을 포함합니다.<ol>
<li>각 치료에 대해 트리플리케이트 우물(총 18개의 배아)을 사용하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>같은 빛 아래 배아를 배양 : 성인으로 어두운 주기와 온도 (1.2 참조) 매 12 시간 관찰. 죽은 자 즉시 제거합니다.</li>
	<li>24시간마다 미세 플라스틱 솔루션을 90% 갱신합니다. 노출 기간 동안, 물고기는 먹이지 않습니다. 참고 : 일반적으로, 배아의 부화는 48 hpf에서 시작하여 약 72 hpf에서 완료됩니다.</li>
</ol>4. 미세 플라스틱 분포 평가
<ol><li>24, 48, 72, 96 및 120 h 의 후 수정에서 배아 /애벌레 (각각3 개의 복제에서 하나)를 무작위로 선택하고 10 % Hank의 용액으로 헹구습니다.</li>
	<li>애벌레를 페트리 접시에 옮기고 마취를 위해 0.016 % 트리카인에 노출하십시오.<ol>
<li>트리카인의 재고 용액 준비: 트리카인 분말 4 mg은 이중 증류수 100mL에 용해되고, Tris-HCl(pH 9.0)으로 pH를 7.0으로 조정한다. 재고 용액을 냉동실에 보관하십시오.</li>
		<li>작업 솔루션을 준비합니다. 주식 용액을 원하는 농도(0.016%)로 희석 실온14에서행크의 10 % 용액.</li>
	</ol>
</li>
	<li>배아/애벌레를 준비하고 관찰을 준비한다.</li>
	<li>이미징 소프트웨어로 형광 현미경 및 이미지로 물고기를 관찰하십시오.</li>
	<li>ImageJ로 물고기의 형광 강도를 정량화합니다.</li>
</ol>

<ol><li>SAPEA (Science Advice for Policy by European Academies). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22A+Scientific+Perspective+on+Microplastics+in+Nature+and+Society%22">A Scientific Perspective on Microplastics in Nature and Society</a>. , SAPEA. Berlin. (2019).</li>
<li>Plastics Europe. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Plastics-the+facts+2019%22">Plastics-the facts 2019</a>. , Plastics Europe. Brussels. (2019).</li>
<li>Andrady, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+the+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Pollution+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Microplastics in the marine environment.</a> Marine Pollution Bulletin. 62, 1596-1605 (2011).</li>
<li>Arthur, C., Baker, J., Bamford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proceedings+of+the+International+Research+Workshop+on+the+Occurrence%2C+Effects+and+Fate+of+Microplastic+Marine+Debris%5BTitle%5D)+AND+%22National+Oceanic+and+Atmospheric+Administration+Technical+Memorandum%22%5BJournal%5D)">Proceedings of the International Research Workshop on the Occurrence, Effects and Fate of Microplastic Marine Debris.</a> National Oceanic and Atmospheric Administration Technical Memorandum. , (2009).</li>
<li>Ivleva, N. P., Wiesheu, A. C., Niessner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastic+in+aquatic+ecosystems%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Microplastic in aquatic ecosystems.</a> Angewandte Chemie International Edition. 56, 1720-1739 (2017).</li>
<li>Lu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pollutant+toxicology+with+respect+to+microalgae+and+cyanobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Environmental+Sciences%22%5BJournal%5D)">Pollutant toxicology with respect to microalgae and cyanobacteria.</a> Journal of Environmental Sciences. 99, 175-186 (2021).</li>
<li>Huang, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+microplastics+impairs+digestive+performance%2C+stimulates+immune+response+and+induces+microbiota+dysbiosis+in+the+gut+of+juvenile+guppy+%28Poecilia+reticulata%29%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Exposure to microplastics impairs digestive performance, stimulates immune response and induces microbiota dysbiosis in the gut of juvenile guppy (Poecilia reticulata).</a> Science of the Total Environment. 733, 138929(2020).</li>
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<li>Jakubowska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+chronic+exposure+to+microplastics+of+different+polymer+types+on+early+life+stages+of+sea+trout+Salmo+trutta%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Effects of chronic exposure to microplastics of different polymer types on early life stages of sea trout Salmo trutta.</a> Science of the Total Environment. 740, 139922(2020).</li>
<li>Qiang, L., Cheng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+polystyrene+microplastics+impairs+gonads+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Exposure to polystyrene microplastics impairs gonads of zebrafish (Danio rerio).</a> Chemosphere. 263, 128161(2021).</li>
<li>Hamed, M., Soliman, H. A. M., Osman, A. G. M., Sayed, A. E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidants+and+molecular+damage+in+Nile+Tilapia+%28Oreochromis+niloticus%29+after+exposure+to+microplastics%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+and+Pollution+Research%22%5BJournal%5D)">Antioxidants and molecular damage in Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) after exposure to microplastics.</a> Environmental Science and Pollution Research. 27, 14581-14588 (2020).</li>
<li>Burns, E. E., Boxall, A. B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+the+aquatic+environment%3A+Evidence+for+or+against+adverse+impacts+and+major+knowledge+gaps%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Microplastics in the aquatic environment: Evidence for or against adverse impacts and major knowledge gaps.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37, 2776-2796 (2018).</li>
<li>Ma, H., Pu, S., Liu, S., Bai, Y., Mandal, S., Xing, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+aquatic+environments%3A+Toxicity+to+trigger+ecological+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Microplastics in aquatic environments: Toxicity to trigger ecological consequences.</a> Environmental Pollution. 261, 114089(2020).</li>
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<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 203, 253-310 (1995).</li>
<li>Pikuda, O., Xu, E. G., Berk, D., Tufenkji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+assessments+of+micro-+and+nanoplastics+can+be+confounded+by+preservatives+in+commercial+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology+Letters%22%5BJournal%5D)">Toxicity assessments of micro- and nanoplastics can be confounded by preservatives in commercial formulations.</a> Environmental Science & Technology Letters. 6, 21-25 (2019).</li>
<li>Lidster, K., Readman, G. D., Prescott, M. J., Owen, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+survey+on+the+use+and+welfare+of+zebrafish+Danio+rerio+in+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fish+Biology%22%5BJournal%5D)">International survey on the use and welfare of zebrafish Danio rerio in research.</a> Journal of Fish Biology. 90, 1891-1905 (2017).</li>
<li>Pitt, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake%2C+tissue+distribution%2C+and+toxicity+of+polystyrene+nanoparticles+in+developing+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aquatic+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Uptake, tissue distribution, and toxicity of polystyrene nanoparticles in developing zebrafish (Danio rerio).</a> Aquatic Toxicology. 194, 185-194 (2018).</li>
<li>Lin, S. J., Zhao, Y., Nel, A. E., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+An+in+vivo+model+for+nano+EHS+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: An in vivo model for nano EHS studies.</a> Small. 9, 1608-1618 (2013).</li>
</ol>

저자는 경쟁또는 재정적 이익을 선언하지 않습니다.

EU 지침 2010/63/EU와 같은 과학적 목적으로 사용되는 동물의 보호지침에 따르면, 독립적인 먹이주기(5일 후수정)단계까지 제브라피시의 초기 생활 단계 실험에 대해 동물 윤리 허가는 필수가 아니다. 그러나, 모범 복지 관행은 제브라피시의 사용을 최적화하는 데 중요하며, 예를 들어 마취와 안락사의 인도적 방법이 우려되어야 합니다. 에틸 3-aminobenzoate 메탄황산염 (MS-222, 또는 트리카인), 대부분의 실험실에서 일상적으로 사용되는 에이전트, 마취와 안락사를 위해 여기에 사용된다.
현미경의 밑에 관찰하기 전에, 외부 표면에 흡착된 미세 플라스틱이 결과를 방해할 수 있기 때문에 배아및 애벌레는 헹구어야 합니다. 또한, 배아/애벌레의 자동 불발, 특히 때때로 보고된 노른자 낭 주위의 자가 불화는 문제가 될 수 있습니다. 플라빈, 니코티나미드 아데닌 디뉴클레오티드(NAD), 방향족 아미노산, 리포푸스신, 고급 당화 최종 제품...

1900년대에 처음 합성된 이래, 플라스틱은 다양한 분야에서 널리 사용되어 글로벌 생산1의급속한 성장을 초래합니다. 2018년에는전세계적으로 약 3억 6천만 톤의 플라스틱이 생산되었습니다. 자연 환경의 플라스틱은 화학적, 물리적 또는 생물학적 공정으로 인해 미세 입자로 저하됩니다3. 일반적으로 미세 플라스틱 입자< 5mm 크기는 미세 플라스틱4로정의된다. 마이크로 플라스틱은 또한 화장품5의마이크로비드와 같은 특정 응용 분야에 대해 설계되었습니다. 거의 영구적인 오염 물질로, 미세 플라스틱은 환경에 축적되고, 과학자, 정책 입안자 및대중으로부터점점 더 많은 관심을 끌고있다1,6. 이전 연구는 미세 플라스틱이 위장 손상7,신경 독성8,내분비 장애9,산화 스트레스10 및 DNA 손상11과같은 물고기에 악영향을 일으킬 수 있음을 문서화했다. 그러나, 미세 플라스틱의 독성은 완전히 지금까지 밝혀지지 않았다12,13.
Zebrafish 배아는 작은 크기, 외부 수정, 광학 투명성 및 대형 클러치를 포함하여 많은 실험적 이점을 제공하며, 초기 수단계에서 물고기에 대한 오염 물질의 영향을 연구하는 생체 내 이상적인 모델 유기체로 간주됩니다. 또한 생물학적 반응평가를 위해서는 제한된 양의 시험 물질만 필요합니다. 여기서, 제브라피쉬 배아는 5일 동안 미세플라스틱(0.1, 1, 10 mg/L)의 상이한 농도에 노출되고, 제브라피시 배아/유충에서 미세플라스틱의 생체 축적 및 분포를 평가한다. 이 결과는 물고기에 미세 플라스틱의 독성에 대한 우리의 이해를 발전시키고, 여기에 설명 된 방법은 잠재적으로 제브라피시의 초기 생활 단계에서 형광 물질의 다른 유형의 축적 및 분포를 결정하기 위해 일반화 될 수있다.

<table><tbody><tr><td>형광 현미경</td><td>Nikon, 일본</td><td>Eclipse Ti-S</td><td></td></tr><tr><td>녹색 형광 표지 폴리스티렌 비드</td><td>Phosphorex, 미국</td><td>2103A</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine</td><td>Sigma-Aldrich, 미국</td><td>A5040</td><td></td></tr></tbody></table>

제브라피쉬의 초기 수명 단계에서 형광 미세 플라스틱의 축적 및 분포

Accumulation and Distribution of Fluorescent Microplastics in the Early Life Stages of Zebrafish

새로운 유형의 환경 오염 물질인 미세 플라스틱은 수생 환경에서 널리 발견되었으며 수생 생물에 큰 위협이 됩니다. 미세 플라스틱의 생체 축적은 독성 효과에 중요한 역할을합니다. 그러나, 미립자로, 그들의 생체 축적은 많은 그밖 오염 물질과 다릅니다. 여기에 설명된 형광 미세 플라스틱을 사용하여 제브라피시 배아 또는 애벌레에서 미세 플라스틱의 축적 및 분포를 시각적으로 결정하는 실행 가능한 방법이다. 배아는 120h에 대해 직경 500 nm의 형광 미세 플라스틱의 다른 농도 (0.1, 1 및 10 mg/L)에 노출됩니다. 그것은 미세 플라스틱 농도 의존방식으로 제브라피시 배아 / 애벌레에서 생물 축적 할 수있는 결과에 표시됩니다. 부화하기 전에 배아 초리온 주변에서 강한 형광이 발견됩니다. 얼룩말 애벌레에있는 동안, 노른자 낭, 심낭, 위장관은 미세 플라스틱의 주요 축적 사이트입니다. 그 결과는 초기 생활 단계에서 제브라피시의 미세 플라스틱의 섭취와 내재화를 보여 주며, 이는 수생 동물에 대한 미세 플라스틱의 영향을 더 잘 이해할 수 있는 기반을 제공합니다.

형광 미세 플라스틱의 분포 및 축적은 도 1 및 표 1에표시됩니다. 노출되지 않은 그룹(control)에서 눈에 보이는 형광이 관찰되지 않습니다. 그러나, 형광의 축적은 미세 플라스틱 (24 hpf)의 다른 농도에 노출 된 후 초리온을 둘러싼 발견된다. 녹색 형광은 또한 애벌레에서 검출되고, 형광 수준은 농도 및 시간 의존적인 방식으로 증가하는 것처럼 보입니다. 노른자 낭, 심낭 및 위장관은 미세 플라스틱의 주요 축적 된 사이트입니다(그림 2).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62117/62117fig01.jpg"> 그림 1: 제브라피시의 ...

제브라피쉬 배아/애벌레는 외부적으로 발달하며 광학적으로 투명합니다. 초기 생활 단계에서 물고기에 있는 미세 플라스틱의 bio축적은 형광으로 표지된 microbeads로 쉽게 평가됩니다.

As a new type of environmental pollutant, microplastic has been widely found in the aquatic environment and poses a high threat to aquatic organisms. The ...

얼룩말 물고기의 초기 생활 단계에서 형광 미세 플라스틱의 축적 및 분포. 소개. 미세 플라스틱의 생체 축적은 독성 효과에 중요한 역할을합니다. 그러나, 미립자로, 그들의 생체 축적은 많은 그밖 오염 물질과 다릅니다.여기에 설명된 형광 미세 플라스틱을 사용하여 제브라피시 배아 또는 애벌레에서 미세 플라스틱의 축적 및 분포를 시각적으로 결정하는 실행 가능한 방법이다. 실험은 동물 복지의 윤리적 검토를위한 국립 가이드 실험실 동물 지침에 따라 수행되었다. 하나, 배아 수집.성인 얼룩말 물고기는 중국 제브라피시 자원 센터에서 유래. 물고기는 14 및 10 시간의 광기간에, 28 섭씨, 일정한 온도에서 숯 여과 수돗물 시스템을 재순환20 리터 유리 탱크에서 유지됩니다. 생선은 아르테미아 나우플리이와 함께 하루에 두 번 먹입니다.음식은 하루에 최대 3 %의 생선 무게로 주어지며 매번 5 분 이내에 섭취해야하는 것이 좋습니다. 잘 발달 된 성인 얼룩말 물고기는 번식 전날 밤에 한 남성에서 두 명의 암컷의 비율로 산란 탱크로 옮겨갑니다. 다음 날 아침, 물고기는 빛 주기의 개시 후에 생성하기 시작합니다.계란은 파스퇴르 파이펫을 사용하여 수집되고, 10%Hank의 용액으로 여러 번 헹구고, 현미경을 사용하여 수정을 확인합니다. 수정란은 약 2시간 후 수정 후 골짜기 기간을 거치며 명확하게 확인할 수 있다. 수정된 배아는 섭씨 28도에서 소독을 위한 1%메틸렌 블루로 10%의 행크용 용액200 밀리리터를 함유한 500밀리리터 비커로 배양됩니다.적재율은 각 2밀리리터 용액에서 하나의 배아를 초과하지 않습니다. 2, 미세 플라스틱 현탁액의 준비. 명목 직경 500나노미터의 녹색 형광표 폴리스티렌 구슬의 스톡 솔루션은 10분 동안 초음파 처리됩니다.스톡 솔루션을 10% Hank의 솔루션으로 희석하여 리터당 0.1, 1 및 10밀리그램과 원하는 노출 솔루션을 생성합니다. 미세 플라스틱의 노출 솔루션은 노출 전에 항상 신선하게 준비됩니다. 세 가지, 미세 플라스틱 노출.새로 수정된 6개의 태아는 무작위로 선택된 다음, 다른 농도를 가진 5밀리리터의 미세 플라스틱 솔루션을 포함하는 6개의 우물 판의 각 우물로 옮겨집니다. 행크의 솔루션 10%를 포함하는 제어 그룹이 포함됩니다. 총 18개의 배아를 가진 삼중 우물은 각 치료에 사용됩니다.배아는 성인과 같은 밝은 어두운 주기 및 온도의 밑에 배양되고, 매 12 시간마다 관찰됩니다. 죽은 사람은 즉시 제거됩니다. 마이크로 플라스틱 솔루션은 24시간마다 90%씩 갱신됩니다.노출 기간 동안, 물고기는 먹이지 않습니다. 일반적으로, 배아의 부화는 48 시간 후 수정에서 시작하고 약 72 시간 후 수정에서 완료합니다. 네, 미세 플라스틱 분포의 평가.24-48-72-96 및 120 시간 후 수정에서, 배아와 애벌레, 세 복제의 각각에서 하나, 무작위로 선택하 고 10%Hank의 용액으로 헹구는. 배아와 애벌레는 관찰을 위해 배치되고 준비됩니다. 사전에 애벌레는 페트리 접시로 옮겨지고 마취를 위해 0.016 %의 트리카인에 노출됩니다.물고기는 형광 현미경으로 관찰되고, 화상 진찰 소프트웨어로 심상화됩니다. 물고기의 형광 강도는 ImageJ NIH로 더욱 정량화됩니다. 대표적인 결과.미세먼지가 제브라피시 배아와 유충에서 농도 의존적 방식으로 바이오축적될 수 있다는 결과가 나타났다. 부화하기 전에, 강한 형광은 배아 초리온 주위에 발견됩니다; 얼룩말 물고기 애벌레에있는 동안, 노른자 낭, 심낭, 위장관은 미세 플라스틱의 주요 축적 사이트입니다. 토론. 이 결과는 물고기에 미세 플라스틱의 독성에 대한 우리의 이해를 발전시키고, 여기에 설명 된 방법은 잠재적으로 제브라피시의 초기 생활 단계에서 형광 물질의 다른 유형의 축적 및 분포를 결정하기 위해 일반화 될 수있다.초리온은 큰 크기의 입자에 대한 효과적인 장벽역할을 하기 때문에, 노출되기 전에 의 반향 과정이 필요할 수 있다. 그러나, chorion을 온전히 가진 태아는 실제 세계에 있는 노출의 상태를 고려할 때 오염물질의 생태독성을 평가하기 위하여 더 좋습니다. 용액에서 미세 플라스틱의 동작은 생체 이용률에도 중요합니다.미세 플라스틱의 물리 화학적 특성은 노출 기간 동안 추적되어야합니다.

accumulation-distribution-fluorescent-microplastics-early-life-stages

Research

연구

JoVE Journal

Environment

환경

본 연구에서는 표준 배아 미세주입 및 실체현미경 장비를 활용한 제브라피쉬 치어의 새로운 미세강제투여(microgavage) 방법을 제시합니다. 우리는 미세강제투여가 다양한 물질을 제브라피쉬 치어의 장관 내로 정밀하게 정량 투여하는 데 유용한 안전하고 효율적인 기술임을 입증합니다.

Zebrafish 애벌레의 Microgavage

출처: Zhang, X., et al. 생체 재료 관련 황색포도상구 균 감염의 생체 내 시각화 및 생체 내 분석을 위한 제브라피쉬 배아 모델. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 황색포도상구균을 주입한 제브라피쉬 배아의 형광 이미징을 보여주며, 감염 진행 및 박테리아 분포를 정량화하여 생체 내 숙주-병원체 상호 작용에 대한 생체 재료 마이크로스피어의 영향을 평가할 수 있습니다.

 제브라피쉬 배아에서 생체 재료 관련 세균 감염의 형광 이미징

제브라 피쉬 배아 조직 특정 형광의 반 자동화 이미징을위한 프로토콜은 여기에 설명한다.

Zebrafish의 태아의 조직 특이 형광의 반 자동화 이미징

제브라 피쉬는 만성 신장 질환 (CKD)을 모델로 인기있는 도구입니다. 그러나, 작은 크기 것이 불가능 전통적인 방법을 이용하여 신장 기능을 평가한다. 우리는 CKD에 제브라 피쉬의 신장 기능의 정량 분석을 할 수있는 형광 염료 신장 클리어런스 분석 한 설명합니다.

형광 정리 분석을 사용하여 Zebrafish의 신장 기능의 평가

제브라피쉬는 유전 및 발달 연구를 위한 훌륭한 모델 시스템입니다. 비드 이식은 국소 세포 환경에 변화를 일으켜 발달 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있는 귀중한 조직 조작 기술입니다. 이 프로토콜은 제브라피시 배아에서 마이크로비드 이식을 수행하는 방법을 설명합니다.

Zebrafish의 배아에 주입 마이크로 비드

제브라피쉬는 식이 지질 처리 및 대사 질환의 중요한 모델로 부상하고 있습니다. 지질이 풍부한 유충 사료의 프로토콜, 식이 형광 지질 유사체의 실시간 이미징 및 음식 섭취의 정량화가 설명되어 있습니다. 이러한 기술은 다양한 스크리닝, 이미징 및 가설 기반 조사 기술에 적용할 수 있습니다.

애벌레 Zebrafish의에 대한 패러다임을 먹이 고 지방 : 수유, 라이브 영상, 식품 섭취의 정량화

이 프로토콜의 목표 높은 처리량 패션에 애벌레 zebrafish의 용기를 통해 붙일 레이블 음식의 통과 시간을 측정 하는 것입니다.

애벌레 Zebrafish를 사용 하 여 창 자 환승 시간의 높은 처리량 측정

여기에 에스트로겐 효과의 검출을위한 제브라피시 배아 Tg (vtg1 : mCherry)의 사용을위한 자세한 프로토콜입니다. 이 프로토콜은 물고기의 전파와 배아의 치료를 커버하고 내분비 방해 화합물 (EDC)에 의해 유도 된 형광 신호의 검출, 문서화 및 평가를 강조한다.

Tg를 사용 하 여 (Vtg1:mcherry) 제브라피시 배아 내 분 비 방해 화합물의 에스트로겐 효과 테스트

이 논문에서는 제브라피쉬 유충 모델을 이용한 환경 오염물질의 신경행동 독성 평가를 위한 상세한 실험 프로토콜이 제시되며, 여기에는 노출 과정과 신경행동 지표에 대한 테스트가 포함된다.

제브라피시 유충에 대한 환경 오염물질의 신경행동 효과 연구

우리는 빠른 스캐닝 컨포칼 현미경을 활용하여 개발 중인 제브라피시 시신경 구조에서 미세아교세포의 실시간 이미징을 수행하는 방법을 시연하여 생체 내에서 이러한 세포의 역학을 분석할 수 있습니다.

Zebrafish 배아에서 Microglia Dynamics의 실시간 이미징 및 특성 분석

이 프로토콜은 수정 후 3-7일 후에 제브라피시 유충에 대한 약물 스크리닝 절차와 형태학적 평가를 설명합니다.

초기 단계 제브라피시 유충의 소분자 스크리닝 및 독성 테스트

학습하세요 형광 미세 플라스틱을 이용한 제브라피쉬 배아와 유충에서의 미세 플라스틱 축적 및 분포 분석 방법을. 이 프로토콜은 수생 생물의 생물 축적 패턴과 독성 영향을 연구하는 데 활용됩니다.

제브라피쉬의 초기 수명 단계에서 형광 미세 플라스틱의 축적 및 분포

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