Name: 스레드 색전증 방법을 통해 우수한 처상 부비동 폐색의 쥐 모델 설립 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 배우세요 스레드 색전증 기법을 이용한 우수한 처상 부비동 폐색 쥐 모델 수립 방법입니다. 레이저 스펙클 혈류 영상과 MRI를 활용하여 뇌정맥동 혈전증 연구에 안정적이고 재현 가능한 실험 모델을 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 연구는 높은 수준의 특성에 대한 과학 연구 재단에 의해 지원되었다, 전통 중국 의학푸젠 대학 (X2019002 재능).

동물 과목과 관련된 절차는 원저우 의과 대학의 의료 규범 및 윤리위원회에 의해 승인되었으며 실험실 동물의 사용 및 치료에 대한 중국 법률에 따라.
1. 스레드 플러그, SD 쥐 및 실험 장비의 준비
<ol><li>직경 0.28mm의 나일론 실을 스레드 플러그의 본체로 사용합니다. 참고: 나일론 실의 부드러움과 경도는 적당해야 합니다.</li>
	<li>나일론 실의 한쪽 끝을 실리콘 소재로 덮습니다. 실 플러그의 실리콘 부분의 길이는 약 1.2cm이며 직경은 약 1.2 mm입니다. 헤드 엔드는 테이퍼되고 실리콘 부분은 원통형입니다. 5-7cm를 더 예약하십시오. 나일론 실은 클램프가 용이하며 작업 후 특정 요구에 따라 절단 할 수 있습니다.</li>
	<li>75%에탄올을 사용하여 작업 전에 3분 동안 스레드 플러그를 담그고 연결하기 전에 일반 식염수로 잔류 에탄올을 헹구십시오.</li>
	<li>280에서 320 g 사이 무게 12 남성 SD 쥐를 선택 하 고 무작위로 샴 그룹 및 실험 그룹으로 분할 (n = 6 그룹 당). 환경 적응의 주 후, 12 시간 동안 쥐를 빨리 하고 작업 전에 4 시간 동안 그들을 박탈.</li>
	<li>실험에 필요한 다음과 같은 실험 장비를 준비 : 작은 동물 마취 기계, 뇌 입체 계측기, 해부 현미경, 고속 두개골 드릴, 가위, 핀셋, 혈관 집게, 바늘 홀더, 바늘 스레드, 2 mL 주사기, 레이저 반점 혈액 흐름 이미징 시스템, 및 작은 동물 MRI.</li>
</ol>2. 스레드 색전화를 통한 SD-쥐 SSS-색전화 모델 의 건설
<ol><li>SD 쥐를 마취 유도 상자에 넣고 작은 동물 마취 기계를 사용하여 4 % 이소플루란을 전달하여 마취를 유도합니다. 그 후, SD 쥐의 뒷다리와 발가락이 적당한 꼬집어 반응하지 않는다는 것을 확인하기 위해 집게를 사용합니다.</li>
	<li>신속하게 뇌 입체 장치에 경향이 위치에 SD ratwith 면도 상단 머리를 수정합니다. 마취를 1.5-2.0% 이소플루란(0.5L/min의 속도로)으로 유지하고 호흡률을 40-60/분으로 안정화시킵니다. 37±0.2°C에서 가열 패드를 통해 쥐의 체온을 안정화합니다.<ol>
<li>쥐가 입체 프레임에 놓인 후 멸균 안과 안증을 바르면 각막이 마취 중에 건조되지 않도록 보호하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>쥐의 머리 꼭대기의 표면을 살균하여 5% 포비도요오드를 75%에탄올로 세 번 번 다. 머리 중간에 피부 절개(길이 2.0cm)를 만든 다음 상단 근막과 골막을 조심스럽게 벗겨 두개골을 완전히 노출시합니다.<ol>
<li>전방 폰타넬, 후방 폰타넬, 관상 봉합사, 처탈 봉합사 및 헤링본 봉합사의 위치를 확인합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>관상 봉합사와 헤링본 봉합사 사이의 영역을 혈류 관측 영역으로 사용합니다. 두개골이 레이저 반점 혈류 이미징 중에 관찰에 영향을 미치지 않도록 혈관이 명확하게 보일 때까지 관찰 영역에서 두개골을 얇게 합니다. 얇게 썬 두개골의 크기는 약 1.0cm × 1.0cm여야 합니다. 이 단계와 다음은 모두 해부 현미경으로 수행됩니다.<ol>
<li>두개골 연삭 동안, 대뇌 피질에 고온 화상을 방지하기 위해 반복적으로 드릴을 헹구기 위해 정상 온도 식염수식을 사용합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>고속 드릴을 사용하여 브레그마를 중심으로 한 6.0mm x 4.0mm 뼈 창 내에서 두개골을 갈아서 bregma 영역의 SSS를 노출시킵니다.<ol>
<li>일반 식염수로 연마 하는 동안 두개골을 냉각. 두개골이 얇아지면 핀셋을 사용하여 SSS를 찢지 않도록 나머지 뼈 조각을 조심스럽게 제거하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>적합한 스레드 플러그를 선택하고 SSS bregma 점을 플러그 포인트로 사용하고 2 mL 주사기 바늘로 조심스럽게 구멍을 뚫고 스레드 플러그 헤드를 플러그 포인트에 신속하게 삽입하십시오.<ol>
<li>이때 스레드 플러그 헤드의 끝과 SSS 사이의 각도는 약 30-45°여야 합니다. 그런 다음 스레드 플러그의 끝과 SSS 사이의 각도를 0-10도로 조정하고, 머리가 부비동 합류의 후면 가장자리에 도달할 때까지 SSS를 천천히 중앙에 삽입합니다. 그 후, 꼬리의 과잉 부분을 잘라. 참고: SSS가 천명될 때 급속한 출혈이 발생할 수 있습니다. 스레드 플러그의 끝을 한 번에 플러그 포인트에 빠르게 삽입할 수 없는 경우 작은 거즈 또는 면공을 사용하여 플러그 포인트를 부드럽게 누르고 천천히 아래로 미끄러져 플러그 포인트를 조심스럽게 노출한 다음 와이어 볼트의 끝을 SSS에 신속하게 삽입합니다. 나사 플러그를 삽입한 후 플러그 포인트에 출혈이 있는 경우 젤라틴 스폰지와 같은 혈전성 물질을 사용하여 출혈을 막을 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. SD 쥐의 뇌 표면에 혈류의 검출
<ol><li>레이저 광원을 사용하여 혈류 관측 영역을 균일하게 비춥시다. 반사된 라이트는 카메라에 의해 수집되고 분석을 위해 컴퓨터로 전송됩니다. 레이저 반점 혈류 이미징 시스템에 대한 다음 매개 변수 설정을 사용하십시오: 파장: λ = 785 nm; 및 이미지 노출 시간 : T = 10 ms.</li>
	<li>SD-쥐 혈류 관측 영역을 레이저 반점 혈류 영상 시스템의 시야로 중앙화하고 2분 동안 뇌 표면의 혈류를 지속적으로 모니터링합니다. 각 SD 쥐에 대한 색전화 전후의 혈류 데이터를 수집하고 처리하고, 관찰된 영역의 레이저-반점 혈류 맵을 획득한다.</li>
	<li>수술된 부위를 일반 식염수로 반복적으로 헹구어 뼈 파편과 잔류물을 씻어낸다. 피부를 봉합 (0# 스레드) 요오도프로 소독.</li>
	<li>쥐가 수술 후 깨어날 때까지 체온을 유지한 다음 음식과 물이 제공된 단일 케이지에 보관하여 광고 리비텀을제공한다. 가짜 그룹을 연결할 수 없습니다.</li>
	<li>데이터 수집이 완료되면 사후 처리를 수행합니다.<ol>
<li>레이저-반점 혈류 이미징 시스템 소프트웨어에서 제공하는 도구를 통해 관심 영역(ROI)의 완전한 선택. 얻어진 값은 ROI의 평균 혈류 값이며, 국색화 전후의 국소 뇌-혈류 값이다. 색전화 전에 혈류 값을 기준값으로 사용합니다.</li>
		<li>4개의 ROI를 선택하고 기준선 값에서 백분율 변경으로 표현된 각 ROI에 있는 대뇌 혈류에 있는 상대적인 변경을 측정합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 작은 동물 MRI에 스레드 위치감지
<ol><li>MRI 이미징 시스템에 대한 다음 T2 가중 이미징(T2WI) 매개변수를 사용합니다: 에코 시간(TE) = 33ms, 반복시간 (TR) = 3000 ms, 여기개통 수 (NEX) = 4, 슬라이스 = 28, 슬라이스 두께 = 0.8 mm, 매트릭스 크기 = 256 *256 mm2,플립 각도 = 80 ° 시야 (FOV) = 30 *30mm2,스캔 시간 = 6 분 24 s; 자기 공명 혈관 조영술 (MRA) 매개 변수는 다음과 같이 설정되었다 : TE = 4.4 ms, TR = 12 ms, NEX = 4, 슬라이스 = 80, 슬라이스 두께 = 0.4 mm, 매트릭스 크기 = 256 *256 mm2,플립 각도 = 80 °, FOV = 30 *30mm2, 스캔 시간 16 = 23 ms.</li>
	<li>MRI 스캐닝 테이블에 동물을 고정하고, 스캔을 배치하여 뇌 위치를 보정하고, 위치를 확인한 후T2WI 및 MRA 서열 스캐닝을 수행합니다.</li>
	<li>검출 하는 동안 동물 마취 기계를 통해 연속 마취를 사용 합니다. 그런 다음 과도한 펜토바르비탈의 회복내 주입으로 SD 쥐를 안락사시킵니다.</li>
	<li>이미지 수집 및 후처리: 이미지 데이터를 수집한 후, SSS에서 나사 플러그의 상태를 보다 명확하게 관찰하기 위해, 쥐 뇌의T2WI 이미지를 표시하는 의사 색 향상 방법을 사용한다.</li>
</ol>

<ol><li>Bousser, M. G., Ferro, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+venous+thrombosis%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebral venous thrombosis: an update.</a> Lancet Neurology. 6 (2), 162-170 (2007).</li>
<li>Guenther, G., Arauz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+venous+thrombosis%3A+A+diagnostic+and+treatment+update%5BTitle%5D)+AND+%22Neurologia%22%5BJournal%5D)">Cerebral venous thrombosis: A diagnostic and treatment update.</a> Neurologia. 26 (8), 488-498 (2011).</li>
<li>Stam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombosis+of+the+cerebral+veins+and+sinuses%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Thrombosis of the cerebral veins and sinuses.</a> New England Journal of Medicine. 352 (17), 1791-1798 (2005).</li>
<li>Einhäupl, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EFNS+guideline+on+the+treatment+of+cerebral+venous+and+sinus+thrombosis+in+adult+patients%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">EFNS guideline on the treatment of cerebral venous and sinus thrombosis in adult patients.</a> European Journal of Neurology. 17 (10), 1229-1235 (2010).</li>
<li>Coutinho, J. M., Zuurbier, S. M., Stam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Declining+mortality+in+cerebral+venous+thrombosis%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Declining mortality in cerebral venous thrombosis: a systematic review.</a> Stroke. 45 (5), 1338-1341 (2014).</li>
<li>Gotoh, M., Ohmoto, T., Kuyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+study+of+venous+circulatory+disturbance+by+dural+sinus+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurochir+%28Wien%29%22%5BJournal%5D)">Experimental study of venous circulatory disturbance by dural sinus occlusion.</a> Acta Neurochir (Wien). 124 (2-4), 120-126 (1993).</li>
<li>Miyamoto, K., Heimann, A., Kempski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcirculatory+alterations+in+a+mongolian+gerbil+sinus-vein+thrombosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Microcirculatory alterations in a mongolian gerbil sinus-vein thrombosis model.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 8 (4), (2001).</li>
<li>Ungersböck, K., Heimann, A., Kempski, aO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+Blood+Flow+Alterations+in+a+Rat+Model+of+Cerebral+Sinus+Thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral Blood Flow Alterations in a Rat Model of Cerebral Sinus Thrombosis.</a> Stroke. 24 (4), (1993).</li>
<li>Röttger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+reversible+sinus+sagittalis+superior+thrombosis+in+the+rat%3A+magnetic+resonance+imaging+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">A new model of reversible sinus sagittalis superior thrombosis in the rat: magnetic resonance imaging changes.</a> Neurosurgery. 57 (3), 573-580 (2005).</li>
<li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photothrombosis+combined+with+thrombin+injection+establishes+a+rat+model+of+cerebral+venous+sinus+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Photothrombosis combined with thrombin injection establishes a rat model of cerebral venous sinus thrombosis.</a> Neuroscience. 306, 39-49 (2015).</li>
<li>Yang, H., Meng, Z., Zhang, C., Zhang, P., Wang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+new+rat+model+of+central+venous+sinus+thrombosis+and+analyzing+its+pathophysiological+and+apoptotic+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishing a new rat model of central venous sinus thrombosis and analyzing its pathophysiological and apoptotic changes.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 130-135 (2012).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Design%2C+Development+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).</li>
<li>Wang, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+tissue+pH+in+an+experimental+model+of+acute+stroke+-+Determination+of+graded+regional+tissue+pH+changes+with+non-invasive+quantitative+amide+proton+transfer+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Mapping tissue pH in an experimental model of acute stroke - Determination of graded regional tissue pH changes with non-invasive quantitative amide proton transfer MRI.</a> Neuroimage. 191, (2019).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Vigilin+as+a+Potential+Ischemia+Biomarker+by+Brain+Slice-Based+Systematic+Evolution+of+Ligands+by+Exponential+Enrichment%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Identification of Vigilin as a Potential Ischemia Biomarker by Brain Slice-Based Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment.</a> Analytical Chemistry. 91 (10), 6675-6681 (2019).</li>
</ol>

저자는 경쟁적인 재정적 이익이 없다고 선언합니다.

이 연구에서는 SD 쥐의 SSS에 자체 수제 스레드 플러그를 삽입하여 새로운 유형의 CVST 모델을 성공적으로 확립했습니다. 또한, 레이저 반점 혈류 영상과 작은 동물 MRI는 허혈성 타이밍과 위치를 표준화하기 위해 색전 전후에 SD 쥐의 뇌 표면에 혈류의 변화를 모니터링하기 위해 결합되었다.
1989년, Longa 외.는쥐(12)의외부 경동맥에 자체 만든 나일론 봉합사를 역으로 삽입하여 가역적인 MCA 폐색 모델을 만들었다. 이 모델의 안정성을 향상시키기 위해, 이후 몇 가지 개선 된 방법이 도입되었다13. 이 MCA 오클루전 모델은 정확한 허혈성 타이밍과 위치를 가능하게 하고, 재갈을 쉽게 할 수 있으며, 뇌동맥 뇌졸중14,15를조사하는 기초 연구에 널리 사용되고 있다. 본 연구에서는 M...

대뇌 정맥 부비동 혈전증(CVST)은 뇌졸중의 모든 원인의 0.5-1.0%만을 차지하지만 어린이와 젊은 성인1에서상대적으로 높은 발생률을 가지는 대뇌 정맥 시스템의 희귀 질환이다. 부검 중 CVST는 뇌혈관 질환 사망 의 10%의 원인으로밝혀졌다 2. 혈전증은 두개 내 정맥 시스템의 어느 부분에서나 발생할 수 있습니다. 우수한 처상 부비동 (SSS)은 CVST에서 가장 일반적으로 영향을받는 지역 중 하나이며 여러 혈관을 포함 할 수 있습니다. 정맥 부비동의 협착 또는 폐색으로 인해 두개 내 정맥 복귀가 차단되어 종종 두개 내 압력3을증가시킵니다. CVST의 임상 표현은 복잡하고 시간이 지남에 따라 다릅니다. 증상의 특이성이 부족하지만 가장 흔한 증상으로는 두통(77.2%), 발작(42.7%), 신경결핍(39.9%)이 가장 많다. 심한 경우에는 혼수 상태에, 심지어 사망까지4,5가발생할 수 있습니다. 최근 몇 년 동안 의료 및 건강 기준및 공중 보건 의식의 전반적인 개선으로 인해 관련 위험 요소의 비율이 변경되고 외상 및 감염의 비율이 감소했으며 임신, 푸에페리움, 경구 피임약 및 기타 이유로 인한 CVST의 비율이 점차증가하여 5.
현재 CVST의 발병은 아직 잘 이해되지 않습니다. 깊이 있는 CVST를 탐구하기 위하여는, 추가 병학 연구가 필요합니다. 그러나, 이러한 연구 방법의 대부분은 침략 적이 고 임상적으로 구현 하기 어려운. 임상 연구의 많은 한계로 인해 동물 모델은 기본 및 번역 연구 측면에서 대체할 수없는 장점이 있습니다.
CVST의 원인은 초기 발병이 종종 인식되지 않고 혈전 형성의 위치가 매우 가변하기 때문에 복잡합니다. 다행히도 동물 모델은 이러한 요인을 더 잘 제어 할 수 있습니다. 지난 수십 년 동안 다양한 CVST 동물 모델이 설립되었으며 각 모델에는 고유한 단점이 있습니다. 다른 생산 방법에 따르면, 그들은 대략 다음과 같은 범주로 나눌 수 있습니다 : 간단한 SSS-리그레이션 모델6,7; SSS 내부 사출 가속기 모델8; 페리-염화물 유도 SSS 혈전증 모델9; 광화학 유발 SSS 혈전증모델(10); 및 자수색전성-폐색S모델(11) 그러나, 이 모형의 대부분은 동물의 대뇌 피질에 침략적인 손상을 회피할 수 없습니다 정확하게 허혈성 시간 및 위치를 통제할 수 없습니다. 일부 모델에서는, 혈전은 자발적으로 재canalize 것입니다; 다른 모델에서는 SSS가 영구적으로 가려집니다. 또한 복잡한 수술 및/또는 심각한 부상은 이러한 모델의 후속 병리학 적 발견에 영향을 미칠 수 있습니다.
본 연구에서는 스프라그-Dawley(SD) 쥐의 SSS에 스레드 플러그를 삽입하여 손상을 최소화하고 정밀한 제어기능을 가능하게 하며 안정성이 좋은 CVST 모델을 성공적으로 확립했습니다. 또한, 작은 동물 자기 공명 영상 (MRI) 및 레이저 반점 혈류 이미징모델의 효과를 확인하기 위해 결합되었다. 우리는 우리의 모형의 설치 전후에 대뇌 혈류량에 있는 변경을 평가하고, CVST의 발생, 발달 및 관련 병리생리학 기계장치를 탐구하는 추가 연구 결과를 위한 기초를 마련하는 우리의 모형의 안정성을 평가했습니다.

<table><tbody><tr><td>2 mL 주사기</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>301940</td><td></td></tr><tr><td>뇌 입체 계기</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>68025</td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td>무한 SIM 광기술 유</td>한<td>SIM BFI-HR PRO</td><td></td></tr><tr><td>고속 두개골 드릴</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>78046</td><td></td></tr><tr><td>레이저 스페클 혈류 이미징 시스템</td><td>무한 SIM Opto-technology Co.</td><td>SIM BFI-HR PRO</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>F31022-12</td><td></td></tr><tr><td>바늘 실</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>F33303-08</td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>S13029-14</td><td></td></tr><tr><td>실리카 겔</td><td>Heraeus Kulzer</td><td>302785</td><td></td></tr><tr><td>소동물 마취기</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>R540</td><td></td></tr><tr><td>소동물 MRI</td><td>Bruker Medical GmbH</td><td>Biospec 94/30 USR</td><td></td></tr><tr><td>핀셋</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>F11029-11</td><td></td></tr><tr><td>혈관 겸자</td><td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td><td>F22003-09</td><td></td></tr></tbody></table>

스레드 색전증 방법을 통해 우수한 처상 부비동 폐색의 쥐 모델 설립

Establishment of a Rat Model of Superior Sagittal-Sinus Occlusion via a Thread-Embolism Method

대뇌 정맥 부비동 혈전증 (CVST)의 자연적인 개시에 기여하는 기계장치는 주로 알려지지 않으며, 각종 통제할 수 없는 요인은 임상 연구에 있는 중대한 한계귀착되, 질병의 과정에 관련됩니다. 따라서, 통제 할 수없는 혼란 요인의 다양한 표준화 할 수있는 안정적인 CVST 동물 모델의 설립은 임상 연구에서 단점을 회피하는 데 도움이되었습니다. 최근 수십 년 동안 다양한 CVST 동물 모델이 제작되었지만 이러한 모델을 기반으로 한 결과는 일관되지 않고 불완전했습니다. 따라서 CVST의 병리학적 메커니즘을 더 탐구하기 위해서는 CVST의 진단 및 치료에 중요한 실질적인 가치와 과학적 중요성을 갖는 새로운 호환되는 동물 모델을 수립할 필요가 있습니다. 본 연구에서는, 우수한 처상 부비동(SSS) 혈전증의 새로운 스프라그-Dawley(SD) 쥐 모델이 나사 색전화 방법을 통해 확립되었으며, 모델의 안정성과 신뢰성을 검증하였다. 추가적으로, 우리는 CVST의 형성 후에 쥐에 있는 뇌 정맥 혈류에 있는 변경을 평가했습니다. 총체적으로, SD-rat SSS-혈전증 모델은 쉽게 확립되고, 외상을 최소화하며, 좋은 안정성을 산출하며, 허혈성 타이밍과 위치를 정확하게 제어할 수 있는 새로운 CVST 동물 모델을 나타냅니다.

봉합방법을 통해 SD-랫트 SSS-혈전증 모델을 확립하려면 봉합사(도1A)를사전에 제조해야 하며, 실험에 필요한장비(도 1B)를준비해야 한다. 수술의 섬세한 특성으로 인해 모델의 준비는 해부 현미경으로 완료되어야합니다. 주요 단계는 그림 2에표시됩니다. 모델의 혈류 관찰의 특정 세부 사항에 대한 설명을 용이하게 하기 위해 도 3B는 혈류 관측 영역, 뼈 창 및 플러그 점을 표시하고 SSS(도3C)에삽입된 나사 플러그의 상태를 나타낸다. 모델의 제조가 완료된 후, 레이저-반점 혈류 영상은 SD 쥐의 뇌 표면의 혈류를 검출하는 데 사용된다(도4A,B). <strong class="xfi...

여기서, 우리는 나사 색전 방법을 통해 우수한 처상 부비동 (SSS) 혈전증의 새로운 Sprague-Dawley (SD) 쥐 모델을 확립하고, 모델의 안정성과 신뢰성을 검증하였다.

The mechanisms contributing to the natural onset of cerebral venous sinus thrombosis (CVST) are mostly unknown, and a variety of uncontrollable factors ...

이상적인 동물 모델의 부족으로 인해 CVST의 연구는 크게 제한됩니다. 이제 새로운 유형의 SD-Rat CVST 모델은 임상 조건에서 다양하거나 제어할 수 없는 간섭 계수를 표준화한 SSS초기 부위에 자체 제작 된 스레드 색전화를 중시적으로 삽입하여 성공적으로 설립되었습니다. 쥐가 복막 내 주입에 의해 성공적으로 마취된 후, 쥐를 스테레오테틱 프레임에 넣은 후 젤 안과 안과 안구 윤활제를 바르면 각막이 마취 중에 건조되는 것을 방지합니다.쥐의 머리 위에 있는 머리카락을 제거합니다. 이 과정을 보다 효과적으로 수행하기 위해 준비실에서 이전 단계를 수행할 수 있습니다. 쥐가 마취 기계에 의해 성공적으로 마취 된 후 멸균 안과 안구 윤활제를 바르기도합니다.쥐의 머리 위에 5%의 포비도요드 요오드로 표면을 살균합니다. 75%에탄올로 세 번 번 바이쪽. 머리 한가운데에 약 2센티미터 길이의 피부 절개를 합니다.근막은 메스로 잘라냅니다. 그리고, 조심스럽게 두개골을 완전히 노출하기 위해 상단 근막과 골막을 벗겨. 전방 폰타넬, A 및 후방 폰타넬의 위치를 확인, B.혈류 관측 영역으로 관상 봉합사와 팔꿈치 봉합사 사이의 영역을 사용합니다.두개골이 레이저 반점 혈류 영상 중 관측에 영향을 미치지 않도록 혈관이 명확하게 보일 때까지 관찰 영역에서 두개골을 얇게 합니다. 두개골 연삭 동안 대뇌 피질에 고온 파열을 방지하기 위해, 반복적으로 두라를 헹구기 위해 정상 온도 주사기를 사용합니다. 이 단계와 다음은 모두 해부 현미경으로 수행됩니다.이 그림에서, 빨간 줄 지어 직사각형 영역은 혈류 관찰 영역이다. 얇게 썬 두개골의 크기는 약 1센티미터곱미터곱미터곱이어야 합니다. 그리고 파란색 줄 지어 직사각형 영역은 뼈 창입니다.약 6밀리미터가 4밀리미터를 곱했다. 빨간색 원형 영역은 정수리 조인트이고 화살표는 SSS를 가리킵니다. 두개골을 볼 수 있을 때 핀셋을 사용하여 뼈 창의 나머지 뼈 조각을 조심스럽게 사용하십시오.적합한 스레드 프로브를 선택하고, 앞점을 사용하거나, 플러그 포인트로 사용하십시오. 조심스럽게 2mm 주사기 바늘로 구멍을 뚫고 신속하게 준비 지점에 스레드 프로브를 삽입합니다. 이때 스레드 프로브 끝과 SSS 사이의 각도는 약 30~45도여야 합니다.그런 다음 스레드 프로브의 끝과 SS 사이의 각도를 0에서 10도로 조정합니다. 그리고 머리가 부비동 합류의 후방 끝에 도달 할 때까지 천천히 구조에 SSS를 삽입합니다. 빠른 호흡은 SSS가 천공될 때 생길 수 있습니다.스레드 프로브의 끝을 한 번에 준비 지점에 신속하게 삽입할 수 없는 경우 작은 거즈 또는 면공을 사용하여 프로브 포인트를 부드럽게 누르면서 천천히 아래로 미끄러져 준비 점을 조심스럽게 노출시합니다. 즉, 신속하게 SSS에 가져온 와이어의 끝에 삽입합니다. 파란색 화살표는 플러그 점에서 SSS에 삽입된 프로브의 상태를 표시합니다.흰색 화살표는 프로브의 본문을 나타내고 빨간색 화살표는 머리임을 보여줍니다. 그 후 꼬리의 과잉 부분을 잘라냅니다. 쥐의 피부를 봉합합니다.피부를 세 번 소독하고 스테레오탁스 프레임에서 쥐를 제거합니다. 레이저 광원을 사용하여 혈류 관측 영역을 균일하게 조명합니다. 이미지는 스레드 프로브의 동적 프로세스를 SSS로 기록합니다.이 그림에서 A와 B는 실 색전 삽입 전후의 혈류의 비교를 나타낸다. C는 SSS와 뇌 정맥의 혈류가 중간 뇌 동맥과 모세 혈관 모두에 비해 현저히 감소되었다는 것을 보여줍니다. MRI 스캐닝 테이블에 동물을 고정합니다.위치를 확인한 후 스캐닝을 배치하여 뇌 위치를 보정하고 T2WI 및 MRI 서열 스캐닝을 수행합니다. SSS에서 나사 프로브의 상태를 보다 명확하게 관찰하기 위해 C2 헤드 장착 방법은 쥐 뇌의 T2WI 이미지를 표시하는 데 사용되었다. 이 그림에서 A, B 및 C는 수평 위치, 처상 위치 및 두개골 위치에서 SSS의 스레드 프로브를 표시합니다.이미지는 스레드 프로브가 SSS의 색전화를 확인하는 위치에 있음을 보여줍니다. 쥐 SSS 혈전증 모델은 외상을 최소화쉽게 확립하고, 좋은 안정성을 제공하고 화학 적 타이밍과 위치를 정확하게 제어 할 수 있기 때문에, CVST 모델의 이상적인 새로운 유형이다.

establishment-rat-model-superior-sagittal-sinus-occlusion-via-thread

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 지주막하 출혈 쥐 모델을 설정하는 절차를 보여줍니다. 마취된 쥐에게는 두개내압과 뇌혈류를 측정하기 위해 프로브를 이식합니다. 표적 부위가 확인되고 바늘이 chiasmatic 전 위치에 삽입됩니다. 그런 다음 자가 혈액을 지주막하 공간으로 주입하여 두개내 압력을 높이고 뇌 혈류를 감소시켜 모델을 확립합니다.

자가 혈액 주입에 의해 유도된 지주막하 출혈 쥐 모델 구축

이 비디오는 스레드 볼트를 사용하여 중대뇌동맥(MCA)을 폐색하여 쥐 모델에서 허혈성 뇌졸중을 유도하는 과정을 보여줍니다. 이 시술에는 경동맥을 결찰하고, 외부 경동맥에 실 볼트를 삽입하고, MCA에서 뇌로 가는 혈류를 차단하여 신경 세포를 사멸시키고 허혈성 뇌졸중을 모방하는 것이 포함됩니다.

Thread Bolt를 이용한 Middle Cerebral Artery Occlusion을 통한 허혈성 뇌졸중 유도

출처: Tang, X. et. al., 자가 혈액의 이중 주입에 의한 대량 폰틴 출혈. J. Vis. Exp. (2021)이 프로토콜은 쥐 뇌의 폰틴 부위에 자가 혈액을 제어하여 주입하여 대규모 폰틴 출혈을 모델링하는 방법을 설명합니다. 목적은 국소 압력을 증가시켜 국소적인 뇌출혈을 시뮬레이션하는 것입니다.

자가 혈액 주입에 의한 쥐 모델에서 대량 폰틴 출혈 유도

대뇌 국소 빈혈의 여러 동물 모델은 스트로크의 인간의 조건을 시뮬레이션하기 위해 개발되었습니다. 이 프로토콜은 쥐의 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 (동부 표준시-1) 유발 중간 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델에 대해 설명합니다. 또한 중요한 고려 사항, 장점,이 모델의 단점은 설명되어 있습니다.

쥐의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 모델

이 문서는 중간 대뇌 동맥의 근위 부분을보기 위해 시간적 craniectomy를 사용하여 두개의 창문을 통해 쥐 대뇌 동맥을 시각화하는 방법을 설명합니다...

엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 동안 중동 뇌동맥을 시각화하기 위해 두개골 창 활용

만성 안구 고혈압 쥐와 쥐, 일치 녹 내장 망막 신경 절 세포의 기능 및 구조 저하로 이어지는 circumlimbal 봉합을 적용 하 여 유도 된다.

쥐와 쥐에 Circumlimbal 봉합에 의해 유도 된 녹 내장의 모델

지주막하 출혈은 계속해서 사람의 사망률과 이환율에 대한 높은 부담을 안고 있습니다. 상태와 병태생리학에 대한 추가 연구를 용이하게 하기 위해 pre-chiasmatic, 단일 주입 모델이 제시됩니다.

쥐 모델에서 실험적 지주막하 출혈을 유도하기 위한 자가 혈액의 Pre-chiasmatic, 단일 주사

현재 프로토콜은 손상을 입히지 않고 뇌 혈관의 해부학적 구조를 보존하는 중대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델을 설명합니다.

대뇌 혈관의 해부학적 구조를 손상시키지 않고 중간 대뇌 동맥 폐색/재관류의 쥐 모델

본 연구는 실크 봉합법과 레이저 반점 조영 영상 및 고해상도 초음파를 결합하여 평가를 위해 실크 봉합법과 레이저 반점 조영 영상 및 고해상도 초음파를 결합하여 상시상동 혈전증을 재현 가능하고 최소 침습 모델로 확립하는 프로토콜을 제시합니다.

수정된 염화철 유도 상시상동 혈전증 형성

쥐에서 허혈성 뇌 손상 외과 유도는 뇌졸중 연구 널리 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 중간 대뇌 동맥의 폐색에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈의 유도를 보여줍니다. histological 얼룩 및 자기 공명 영상에 의해 발생하는 경색의 시각화도 표시됩니다.

쥐 중간 대뇌 동맥의 폐색의 Endovascular 봉합사에 의해 초점 대뇌 국소 빈혈 모델

배우세요 스레드 색전증 기법을 이용한 우수한 처상 부비동 폐색 쥐 모델 수립 방법입니다. 레이저 스펙클 혈류 영상과 MRI를 활용하여 뇌정맥동 혈전증 연구에 안정적이고 재현 가능한 실험 모델을 제공합니다.

스레드 색전증 방법을 통해 우수한 처상 부비동 폐색의 쥐 모델 설립

더 많은 동영상 탐색