Name: 곰팡이, 둘레 및 미각 미각의 전체 마운트 염색, 시각화 및 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: 학습하세요 쥐 혀의 전체 마운트 분리 및 염색 기법을 통해 미각 신경 분지와 세포 간 물리적 관계를 정밀 분석하는 방법을. 이 기술은 미각 소기관의 구조와 기능 연구에 활용됩니다.

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우리는 조직 염색에 그녀의 기여와 외경 미각의 이미징에 대한 Kavisca Kuruparanantha에 감사드립니다, 유두에 내부의 염색및 이미징제니퍼 쉬, 동물 관리 및 genotyping케이티 혼, 부드러운 입맛 의 그녀의 조직 염색에 대한 리쿤 마. 이 프로젝트는 R21 DC014857 및 R01 DC007176에서 R.F.K 및 F31 DC017660에서 L.O까지 지원되었습니다.

저자는 공개 할 것이 없습니다.

3개의 구강 맛 영역(곰팡이형태, 둘레 및 입맛)에서 전체 미각을 지속적으로 수집하고 얼룩지게 하는 접근법의 개발은 미각 변환 세포를 분석하고, 새로 통합된 세포를 추적하고, 이 구조물 사이의 관계를 추적하기 위한 상당한 개선을 제공한다. 또한, 표지된집단(50)의내부 또는 외부의 잠재적이 보조 뉴런 마커의 국소화를 용이하게 한다. 이것은 또한 몇몇 맛 신경세포를 표시할 수 있는 강력한 somatosensory내면52,53를수신한다는 것을 주어진 특히 관련됩니다. 유두 하우징 미각은 또한 낮은 배율을 사용하여 이미지화 될 수있다. 이것은 전체 유두뿐만 아니라 미각에 내면의 시각화를 허용하고, 미각과 주변 신경 섬유를 관통 하는 내면의 독립적인 분석을 가능하게.
피부에 있는 Somatosensory 신경 종말은 모낭의 주위에 그들의 조...

미각은 구강에 존재하는 화학 맛 자극의 하위 집합을 결합하는 50-100 전문 상피 세포의 모음입니다. 미각 유도 세포는 일반적으로 유형1,2,3,4,5,6,7,8,9로존재하도록 생각되며, 처음에는 나중에 분자 마커와 상관관계가 있었던 전자 현미경 기준에 기초하여. 타입 II 세포는 인지질제 C-베타 2 (PLCβ2)2 및 과도 수용체 전위 양이온 채널, 서브패밀리 M 부재 51을 발현하고 달콤하고 쓴 맛, 및 감칠맛1,10을트랜스듀싱하는 세포를 포함한다. 타입 III 세포는 탄산 안수분해 4 (Car4)11 및 시냅토소말 관련 단백질(258)을 발현하고 주로신맛(11)에반응하는 세포를 나타냅니다. 짠맛을 유발하는세포는12,13,14로명확하게 묘사되지 않았지만 잠재적으로 타입 I, 유형 II 및 타입 III 세포15,16,17,18,19를포함할 수 있다. 미각 환경은 맛을 유발하는 세포가 지속적으로 성인기에 걸쳐 인계되고 기저 선조3,20,21로대체된다는 점을 감안할 때 복잡하고 역동적입니다. 이러한 맛 을 유발하는 세포는 뇌간으로 맛 정보를 전달하는 유전자 절인 및 석유 신경교에서 의사 단극성 신경 섬유에 연결합니다. 이러한 뉴런은 주로22,23을 운반하는 맛 정보의 종류에 따라 분류되었습니다. 타입 II 세포는 칼슘 항상성 변조기 단백질 1 이온 채널25를통해 신경 섬유와 통신하는 반면, 타입 III 세포는 고전적인 시냅스를 통해통신8,26. 미각 세포의 추가 특성화-세포 형 혈통 을 변환 포함 하 여, 그들의 분화에 영향을 미치는 요인, 그리고 연결 식목의 구조는 모두 적극적인 조사의 영역.
미각 연구는 몇 가지 기술적 인 도전에 의해 방해되었습니다. 혀를 구성하는 이종및 조밀한 조직은 면역조직화학(27,28,29)에대한 항체 투과성을 현저히 감소시다. 이러한 장애물은 측정이 대표 섹션에 따라 근사되거나 섹션 전체에 걸쳐 합산되도록 섹션 에 걸쳐 미각을 분할하는 결과 단면 프로토콜이 필요합니다. 이전에는 대표적인 얇은 섹션이 볼륨 값과 트랜스듀싱 셀 수30을모두 근사화하는 데 사용되었습니다. 두꺼운 직렬 단면은 모든 미각 섹션의 이미징과 각 섹션31에서측정의 합산을 허용합니다. 이러한 두꺼운 섹션을 절단하고 전체 미각 바이어스 바이어스 샘플링 작은 미각을 향해 샘플링32,33,34. 단면 미각에서 신경 내선 추정은 픽셀 번호13,35,모든36,37,38에서정량화하는 경우의 분석을 기반으로합니다. 이러한 측정은 개별 신경 식목의 구조와 수를 완전히 무시합니다. 마지막으로, 상피를 벗겨내더라도 전체 미각이39,40으로얼룩지게 되고, 미각 신경 섬유를 제거하고 세포 간의 정상적인 관계를 방해할 수 있습니다. 따라서 미각 내의 구조적 관계에 대한 조사는 염색 접근법으로 인한 이러한 중단으로 인해 제한되었습니다.
전체 구조 컬렉션은 대표 섹션에 대한 필요성을 제거하고 볼륨, 셀 카운트 및 구조 형태(41)의절대 값 측정을 할 수 있습니다. 또한 이 방법은 정확도를 높이고 바이어스를 제한하며 기술적 변동성을 줄입니다. 이 마지막 요소는 미각이34,42및 지역43,44 내의 상당한 생물학적 가변성을 나타내기 때문에 중요하며 전체 미각 분석은 절대 세포 수를 제어 및 실험 조건 사이에서 비교할 수 있도록 합니다. 더욱이, 그대로 미각을 수집하는 능력은 다른 트랜스듀싱 세포와 그들의 관련 신경 섬유 사이의 물리적 관계의 분석을 허용한다. 미각 유도 세포는 서로 통신할 수 있기 때문에(45) 신경 섬유와 통신 할 수 있습니다(46)이러한 관계는 정상적인 기능에 중요하다. 따라서 기능 상실 조건은 세포의 손실 때문이 아니라 세포 관계의 변화로 인한 것일 수 있습니다. 여기에 제공 된 전체 미각을 수집하여 미각과 내면, 미각 세포 수 및 모양 모두에 대한 볼륨 분석을 정제하고 세포 관계 및 신경 아버 형태학의 분석을 촉진하기위한 절대 측정의 이점을 얻을 수 있습니다. 두 가지 워크플로우는 또한 조직 준비를위한이 새로운 전체 마운트 방법의 다운스트림을 제시한다 : 1) 미각 부피 및 총 내부 를 분석하기위한 2) 미각 뉴런의 희소 세포 유전 라벨링 (맛 변환 세포의 하위 세트) 및 맛 신경 아버 형태의 후속 분석, 맛 세포 유형과 그 모양 사이의 물리적 분석 사이의 이미지 분석 및 변환 사이의 이미지 분석 세포와 그들의 신경 수목. 이러한 워크플로우는 조직 준비와 전체 미뢰 분석 및 내면의 식목의 완전한 형태에 대한 새로운 접근 방식을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>2,2,2-Tribromoethanol</td><td>ACROS 유기물</td><td>AC421430100</td><td></td></tr><tr><td>2-메틸부탄</td><td>ACROS</td><td>126470025</td><td></td></tr><tr><td>AffiniPure Fab Fragment 당나귀 안티-토끼 IgG</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>711-007-003</td><td>15.5&mu; L/mL</td></tr><tr><td>Alexa Fluor&reg; 647 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>712-605-150</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>AutoQuant X3 소프트웨어</td><td>&nbsp; 미디어 사이버네틱스</td><td></td><td></td></tr><tr><td>블런트 엔드 펜치</td><td>파인 사이언스 도구&nbsp;</td><td>FST 91100-12</td><td></td></tr><tr><td>클릭-iT&트레이드; Plus EdU 세포 증식 키트</td><td>분자 프로브</td><td>C10637</td><td>키트 지침을 따르십시오&nbsp;</td></tr><tr><td>커버글래스</td><td>Marienfeld</td><td>107242</td><td></td></tr><tr><td>Cytokeratin-8</td><td>발달 연구 하이브리도마 은행(DSHB), (RRID: AB_531826)&nbsp;</td><td>Troma1 상등액</td><td>(1:50, 4°C에 보관; C)</td></tr><tr><td>해부 가위 (거친)</td><td>Roboz</td><td>RS-5619</td><td></td></tr><tr><td>해부 가위 (세밀한)</td><td>Moria</td><td>MC19B</td><td></td></tr><tr><td>당나귀 안티-래빗 IgG (H+L) 고교차 흡착 2차 항체, Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A21206</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>Donkey anti-Rabbit, Alexa Fluor&reg; 555</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A31572</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>DyLight&trade; 405 AffiniPure Fab Fragment Bovine Anti-Goat IgG</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>805-477-008</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>Fluoromount G</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Glass slides</td><td>Fisher Scientific (Superfrost Plus Miscroscope Slides)</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti-Car4</td><td>R& D 시스템&nbsp;</td><td>AF2414</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>이마리스&nbsp;</td><td>비트플레인&nbsp;</td><td>픽셀 기반 이미지 분석 소프트웨어</td><td></td></tr><tr><td>Neurolucida 360 + Explorer</td><td>MBF Biosciences</td><td>3D 벡터 기반 이미지 분석 소프트웨어</td><td></td></tr><tr><td>Normal Donkey Serum</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Normal Rabbit Serum&nbsp;</td><td>Equitech-Bio, Inc</td><td>SR30</td><td></td></tr><tr><td>Olympus FV1000</td><td></td> <td>(파장 458, 488, 515 및 543 및 633을 방출하는 추가 HeNe 레이저를 가진 다중 아르곤 레이저)</td><td></td></tr> <tr><td>파라 포름 알데히드</td><td>EMD</td><td>PX0055-3</td><td>4 % 0.1M</td></tr><tr><td>PB Rabbit anti-dsRed</td><td>Living Colors DsRed Polyclonal 항체; Clontech Clontech Laboratories, Inc. (632496)</td><td>632496</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>Rabbit anti-PLC&beta; 2&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Cat# sc-206</td><td>(1:500)</td></tr><tr><td>인산나트륨 이염기성 무수</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP332-500</td><td></td></tr><tr><td>인산나트륨 일염기</td>성 <td>Fisher Scientific</td><td>BP330-500</td><td></td></tr><tr><td>tert-Amyl alcohol</td><td>Aldrich Chemical Company</td><td>8.06193</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Molds</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>70180</td><td></td></tr><tr><td>티슈-텍&reg; &nbsp;O.C.T. 컴파운드</td><td>사쿠라</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>BIO-RAD</td><td>#161-0407</td><td></td></tr><tr><td>Zenon&trade; 알렉사 플루어&트레이드; 555 토끼 IgG 라벨링 키트</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Z25305</td><td>키트 지침을 따르십시오&nbsp;</td></tr></tbody></table>

곰팡이, 둘레 및 미각 미각의 전체 마운트 염색, 시각화 및 분석

Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds

미각은 구강 내 화학 자극의 하위 집합을 검출하기 위해 특화된 미각 변환 세포의 모음입니다. 이 유도 세포는 두뇌에 이 정보를 전송하는 신경 섬유와 통신합니다. 맛을 유발하는 세포가 지속적으로 죽고 성년 내내 대체되기 때문에 미각 환경은 복잡하고 역동적이므로 세포 유형, 위치 및 신체 관계에 대한 상세한 분석이 필요합니다. 상세한 분석은 항체 투과성을 현저하게 감소시킨 혀 조직 이질성 및 밀도에 의해 제한되었습니다. 이러한 장애물은 측정이 근사화되고 세포 관계가 손실되도록 섹션 간에 미각을 분할하는 프로토콜을 필요로 합니다. 이러한 과제를 극복하기 위해, 본원에 설명된 방법은 곰팡이 유두, 둘레 유두 및 입맛의 세 가지 맛 부위에서 전체 미각 및 개별 말단 아버를 수집, 이미징 및 분석하는 것을 포함합니다. 전체 미각을 수집하는 것은 편견과 기술적 가변성을 감소시키며 미각 부피, 총 미각 내부, 트랜스듀싱 셀 수 및 개별 터미널 아버의 형태와 같은 기능에 대한 절대 숫자를 보고하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법의 장점을 입증하기 위해, 이 논문은 일반적인 미각 마커와 모든 미각 섬유에 대한 라벨을 사용하여 곰팡이 형태와 둘레 미각 사이의 미각과 내면의 볼륨의 비교를 제공합니다. 미각 뉴런의 희소세포 유전 라벨링(미각 유도 세포의 표지된 하위 세트)의 사용을 위한 워크플로우도 제공됩니다. 이 워크플로는 개별 미각 신경 식목, 세포 유형 번호 및 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 세포 간의 물리적 관계를 분석합니다. 이러한 워크플로우는 전체 미뢰와 내면의 식목의 완전한 형태에 대한 조직 준비 및 분석을 위한 새로운 접근법을 제공합니다.

dsRed 및 각질-8(일반 미각 마커)에 대한 항체를 가진 언어 상피의 염색은 전체 미각과 Phox2b-Cre:tdTomato 마우스50,51 (그림 3A)의모든 미각 내부를 모두 표시하였다. 모공에서 기지까지 이러한 미각을 이미징하면 가장 높은 해상도의 X-y 평면이미지(그림 3A,B)가나타났습니다. 픽셀 기반 이미징 프로그램의 등고선 기능은 각섹션(도 3B)에서미각의 주변을 윤곽을 낸 다음 미각 부피를 나타내는 표면(그림3C)을생성하는 데 사용되었습니다. 마스킹(또는 복제)은 표면 내에서만 미각 라벨과 관련된 형광을 생성하여 이 형광만을 포함하고 미각을 가리는 유두 염색을 제거하...

이 논문은 전체 및 그대로 미각 (내면의 신경 섬유 포함)을 일관되게 산출하고 미각과 주변 유두 내의 구조 사이의 관계를 유지하는 전체 곰팡이, 둘레 및 미각 미각의 조직 준비, 염색 및 분석을위한 방법을 설명합니다.

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells ...

이 전산 해부 및 분석 워크플로우는 개별 미각 신경 식목, 세포 유형 번호 및 세포 간의 물리적 관계의 완전한 형태를 분석하는 새로운 접근 방식을 제공합니다. 전체 언어 상피를 수집하면 전체 미각 내에서 세포의 절대 수와 내면의 양을 측정 할 수 있습니다. 이 방법은 단면도에서 샘플링을 기반으로 셀 구조의 추정치보다 더 정확하여 기술적 가변성을 감소시킵니다.이것은 또한 그들의 내부 밴션과 관련하여 미각 세포의 상세한 분석을 제공하는 첫번째 방법입니다. 이 방법은 미각 내의 잠재적인 회로뿐만 아니라 정상적인 맛 기능을 방해하는 질병 과정 및 화학 요법에 대한 조사를 향상시킬 수 있습니다. 이러한 경우 대부분의 경우 어떤 구조 또는 관계가 중단되는지는 불분명하므로 이러한 모든 요소를 그대로 유지하면 단일 준비 내에서 모든 분석을 수행할 수 있습니다.가장 흔한 실수는 상피의 밑면에 충분히 가깝게 해부하지 않음으로써 상피를 손상시키지 않도록 노력하는 것입니다. 조직 금형의 조직을 동결하기 전에 가능한 한 많은 기본 조직을 제거하는 것이 필수적입니다. 상피가 조직 금형의 바닥에 평평하게 누워 있는지 확인하는 것도 중요합니다.먼저 혀를 0.1 개의 어금니 인산완충제로 해동하고 헹구는 것으로 시작합니다. 그런 다음 해부 현미경 아래 유리 슬라이드에 곰팡이 유두를 함유 한 전방 혀의 1/2를 놓습니다. 무딘 말단 집게와 해부 가위를 사용하여 근육을 제거하고 언어 상피가 곡선으로 조직을 열어 놓고 거친 해부 가위의 블레이드를 상피와 평행하게 유지하여 조직의 평평한 방향을 보장합니다.입맛이 들어 있지 않은 혀의 복부 비각질화 상피를 버리십시오. 그런 다음 각질화된 상피의 밑면에 더 가깝게 해부하기 위해 미세 해부 가위를 사용합니다. 무딘 끝의 집게를 사용하여 상피 조각을 조직 금형에 넣고 평평하게 놓이도록하십시오.그런 다음 조직에 최적의 절삭 온도 화합물 또는 OCT의 한 방울을 추가합니다. 이전에 냉각된 금속 베이스에 티슈 몰드를 해부 범위 아래에 놓고, OCT가 동결될 때까지 집게로 조직을 가볍게 두드려 조직이 가능한 한 평평하게 얼어 붙는다. OCT가 동결되면 신속하게 OCT를 추가하고 얼릴 때까지 냉각 된 2 메틸 부탄의 비커에 금형을 놓습니다.냉동에 OCT 금형을 마운트하고 20 미크론 섹션으로 잘라. 각 섹션을 수집하고 상피의 기지에 근접을 평가하기 위해 빛 현미경으로 볼 수 있습니다. 조직이 상피의 밑면에서 면도 한 후, 상피를 해동하고 셰이커에 0.1 어금니 PB에서 두 번 헹구.단단한 입맛 앞쪽을 부드럽고 단단한 입맛의 접합에 잘라낸 다음, 부드러운 입맛을 기본 조직으로부터 분리하여 남은 뼈 조각이 잘라내고 추가 근육 및 결합 조직을 제거합니다. 무딘 끝의 집게로 미각을 잡고 나머지 땀샘을 제거하고 면도날로 부드럽게 긁어 내어 결합 조직을 잃게됩니다. 전체 미각과 Phox2b-Cre TdTomato 마우스의 모든 미각 은 DsRed 및 각질 8에 대한 항체로 언어 상피를 염색하여 라벨을 부착했습니다.미각 부피를 측정하고 곰팡이 또는 둘레 측정 영역에서 미각 볼륨과 내측 부피 사이의 상관 관계가 없음을 밝혔다. TrkB CreER TdTomato 마우스에 있는 타목시펜의 낮은 복용량의 행정은 유전자 재조합 및 소수의 뉴런의 라벨을 일으키는 원인이 됩니다. 전산 미각은 세포 마커를 변형시키는 미각으로 염색된 탄산 안수드라제 4와 인지질AE C 베타 2가 여기에 나와 있다.이 미각은 섬유를 재구성 한 후 제거 된 미각과 함께 표시되는 두 개의 레이블 터미널 아버가 있습니다. 세포 픽셀 기반 이미징 소프트웨어를 사용하여 신경 섬유와 미각 변환 세포 간의 가장 근접성을 확인함으로써 19가지 맛 중 19가지 맛 중 블루 단말 아버가 연한 청색 탄산 수화물 4개 이상의 세포의 200나노미터 이내의 것으로 나타났다. 녹색 추적과 관련된 말단 식소는 마젠타에 표시되며 빛과 진한 청색 탄화 수화물 4개 이상의 세포 모두에서 200 나노미터 내에 있다.전체 마운트 케라틴 8 및 5-에티닐-2'데옥시리딘 또는 곰팡이 형성 미각의 EdU 염색은 EdU 라벨 세포가 미각 안팎에서 모두 존재한다는 것을 밝혔다. 마젠타와 보라색 핵은 미각의 각질 8 플러스 테두리 외부에서 관찰된다. 노란색, 청록색 및 청색 세포는 미각 안에 있었습니다.이 프로토콜을 시도할 때 조직 해부 및 동결 단계는 중추적인 역할을 합니다. 이러한 조직 해부 방법은 입맛 내와 미각 외의 관계를 분석하기 위해 다양한 세포 및 구조에 대한 염색에 의해 뒤따를 수 있지만 유두 내에서. 이것은 미각 내의 전체 맛 아버의 첫 번째 분석뿐만 아니라 맛을 유발하는 세포와의 관계입니다.이러한 요소 중 몇 가지를 단일 준비로 보존하고 염색하면 분석 가능성이 확장되고 가능한 측정을 구체화합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

gustatory 전달을 기본 분자 메커니즘의 지식은 최근에 크게 인해 동물 모델을 사용하는, 상당한 발전을 즐기고있다. 그러나, 인간의 조직에있는 포유류 영장 연구 중에서 맛이 감도 및 특이성의 넓은 다양성. 우리는 인간의 혀 용의자의 생활 미각 세포를 수집하는 생검 방법을 설명합니다.

인간 혀에서 Fungiform (맛) 용의자를 수집하는 기술

우리는 인간의 fungiform의 맛을 용의자 전지의 장기 문화를 분리하고 관리하기위한 재현성 프로토콜을 개발하기위한. 생검에 의해 얻은 인간 fungiform 용의자의 세포가 성공적으로 생존 능력의 손실없이 더보다 여덟 구절 (12 개월) 동안 문화를 유지했다.

인간 Fungiform의 맛 용의자 전지의 분리 및 문화

출처: Fowler, B. E., et al. 미각 자극에 대한 마우스 슬상 신경절 뉴런 반응의 생체 내 칼슘 이미징. J. Vis. 경험. (2021년) 이 비디오는 마취된 마우스에서 외과적으로 노출된 무상 신경절에 테이스터를 전달하고 낙산화 형광 현미경과 함께 GCaMP 형광을 사용하여 실시간 신경 반응을 시각화하여 말초 미각 신호 처리에 대한 연구를 돕는 프로토콜을 보여줍니다.

Epifluorescent Microscopy를 사용한 슬상 신경절 뉴런 반응의 생체 내 이미징

지방산과식이 요법과 지방 식품 환경 설정과 협회의 구강 chemoreception는 비만의 개발 및 이유식이 변화는 많은 사람들을위한 어려울 수 있습니다와 관련된 메커니즘의 식별을 가능하게 할 수있다.

구강 지방산 임계 값, 지방 지각, 지방 음식을 좋아하고, 인간의 용의자 밀도 측정

여기에서 우리는 디지털 사진에서 fungiform 유두 밀도를 측정하기위한 프로토콜을 제시한다. 이 방법은 밀러 &amp; 리디 (1990)에 의해 fungiform 용의자의 원래 설명 작업에 우선 순위 및 목표 특성 통계를 작성합니다.

Fungiform 용의자 객관적인 분석을위한 덴버 유두 프로토콜

미식가 코딩을 연구하기위한 세 가지 새로운 방법을 제시 합니다. 나방의 Manduca sexta ( Manduca ) 라는 간단한 동물을 사용하여 우리는 해부 프로토콜, 다중 미각 수용체 뉴런의 활동을 기록하기위한 세포 외 tetrodes의 사용법, 정확한 타이밍 버섯의 전달 및 모니터링 시스템을 설명합니다.

새로운 방식으로 맛보기 코딩 공부하기

여기, 우리는 공 촛점 현미경을 사용하여 마우스 보조 입천장 융합의 라이브 영상을위한 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 다양한 형광 기자 마우스 라인과 기계적 통찰력을위한 경로 억제제와 함께 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 다른 발달 시스템의 라이브 이미징에 적용 할 수 있습니다.

Mouse Secondary Palate Fusion의 라이브 이미징

여기에서 우리는 살아있는, 마취 실험실 마우스의 조야성 신경절 신경절을 드러내는 방법과 각성제를 맛보기 위하여 이 뉴런의 앙상블의 반응을 측정하기 위하여 칼슘 화상 진찰을 사용하는 방법을 제시합니다, 다른 각성제를 가진 다중 예심을 허용하. 이것은 어떤 신경 세포가 어떤 tastants에 반응하는지의 깊이 비교를 허용합니다.

마우스 의 생체 칼슘 이미징에서 맛 자극에 신경절 신경 반응

이 기사는 미세 유체를 혀의 인포탈 이미징 창에 통합하여 생체 내 기능적인 맛 세포 이미징을 위한 μTongue(미세 유체액액)을 도입합니다.

μTongue: Vivo의 혀를 위한 미세 유체 기반 기능 이미징 플랫폼

칼슘 이미징 접근법은 용액이 라벨에 적용되는 동안 깨어 있는 파리의 뇌에서 미각 유도 반응을 기록할 수 있습니다. Drosophila melanogaster 의 1차 미각 반응이 예로 사용되지만 이 프로토콜은 다운스트림 뉴런 또는 다른 종을 연구하는 데 적용할 수 있습니다.

생체 내 성체 초파리에서 미각 유도 신경 반응의 칼슘 이미징

학습하세요 쥐 혀의 전체 마운트 분리 및 염색 기법을 통해 미각 신경 분지와 세포 간 물리적 관계를 정밀 분석하는 방법을. 이 기술은 미각 소기관의 구조와 기능 연구에 활용됩니다.

곰팡이, 둘레 및 미각 미각의 전체 마운트 염색, 시각화 및 분석

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