다이아몬드 광원의 대상 시리얼 데이터 수집 수정

다이아몬드 빔라인 I24에서 직렬 싱크로트론 결정예촬영을 위한 고정 대상 샘플 준비, 데이터 수집 및 데이터 처리에 대한 포괄적인 가이드를 제시합니다.

시리얼 싱크로트론 결정학, 또는 SSX는, MX.It의 상대적으로 새롭고 빠르게 개발 영역은 낮은 용량과 실온 실험에 매우 적합하지만, 아마도 가장 중요한 것은, 그것은 역학을 따르는 데 정말 적합합니다. 이를 통해 작용 중인 단백질의 스톱 모션 영화를 만들 수 있습니다. I24에서는 여러 가지 SSX 모드를 사용할 수 있습니다.

이 프로토콜은 제한된 양의 샘플을 사용하여 광범위한 직렬 실험을 허용하는 고정 대상 SSX에 중점을 둡니다. 실리콘 칩은 익숙하지 않은 경우 로딩 및 청소 할 때 손상 될 수 있습니다. 또한 칩 정렬 프로토콜은 많은 결정학자에게 완전히 새롭고 데이터 처리는 표준 회전 데이터와 약간 다릅니다.

칩 홀더를 준비하려면 폴리에스테르 호일 2장을 약 6-6센티미터 사각형으로 자르고 시트를 두 개의 베이스 플레이트 위에 놓습니다. 금속 밀봉 링을 사용하여 시트를 제자리에 고정한 다음 여분의 호일을 조심스럽게 당겨 주름을 제거합니다. 다음으로, 분석할 결정의 크기에 비해 적절한 크기의 조리개를 가진 실리콘 칩을 선택한다.

글로우는 0.39 밀리바에서 25초 동안 칩을 배출하며, 15밀리암페어 전류를 가짐에 따라 칩을 배출합니다. 핀셋을 사용하여 실리콘 칩을 칩 로딩 스테이지에 배치하고 올려지지 막대가 아래로 향합니다. 그런 다음, 파이펫을 사용하여, 칩의 평평한 쪽에 마이크로 결정 슬러리의 200 마이크로 리터를 적용, 칩의 모든 도시 블록을 커버슬러리를 확산.

칩이 손상된 경우 작은 폴리에스테르 호일로 구멍을 덮어 균일한 진공을 적용할 수 있도록 하십시오. 그런 다음 부드러운 진공을 적용하여 칩을 통해 모든 여분의 액체를 흡입합니다. 칩 로딩 단계에서 칩을 제거하고 필터 용지로 칩의 밑면을 조심스럽게 얼룩서 과도한 액체를 제거합니다.

로드된 칩을 가이드 마크 사이에 칩 홀더의 더 큰 절반에 놓고 평평한 면을 아래로 놓습니다. 칩 홀더의 작은 절반을 칩에 놓아 밀봉합니다. 칩 홀더의 두 반쪽은 제자리에 스냅해야합니다.

그런 다음 육소 볼트를 사용하여 칩을 제자리에 단단히 고정시하십시오. 칩을 정렬하려면 마운트에 접근하는 동안 칩 홀더를 30도 각도로 유지합니다. 그런 다음 운동 용 마운트를 사용하여 로드된 칩을 빔 라인의 XYZ 단계에 배치합니다.

자석이 접촉할 때 칩 홀더가 흐름과 평행하게 회전하도록 하고 제자리를 클릭합니다. 칩이 배치되면 빔 라인 온축 보기 시스템과 칩 정렬 그래픽 사용자 인터페이스를 사용하여 칩의 왼쪽 상단 을 찾습니다. X, Y 및 Z의 Fiducial 0을 중심으로 하려면 초점에서 위아래로 이동하여 Y를 정렬하고 X를 정렬한 다음 Fiducial 0을 클릭합니다.다음 Fiducial 0을 정렬한 후 프록시 1과 2를 같은 방식으로 X선 빔과 정렬한 후 공동 조정 시스템 만들기를 클릭합니다.

그런 다음 블록 확인을 클릭"각 도시 블록의 첫 번째 우물로 XYZ 단계를 이동합니다. X선 십자선이 조리개와 정렬되면 칩이 정렬됩니다. DIALS에서 스팟 검색 결과를 나타내는 이 그래픽 표현에서 업데이트된 적음 플롯을 관찰할 수 있습니다.

히트를 클릭하면 해당 회절 이미지가 DIALS 이미지 뷰어에 표시됩니다. 이 표에서는 방문 중에 데이터가 수집될 때 실시간으로 업데이트되는 현재 인덱싱 및 통합 속도를 시각화할 수 있습니다. 단위 셀 매개 변수의 시각화는 다형성을 나타낼 수 있습니다.

유용한 매개 변수의 2차원 플롯을 생성하여 적재 또는 탈수 효과로 인해 발생하는 변형을 나타낼 수도 있습니다. 입체 투영은 로딩 프로토콜에 다시 공급될 수 있는 기본 방향의 존재 또는 부재를 나타낼 수 있습니다. 예를 들어, 이 프로젝션에서는 리조지메 결정으로 칩을 과부하는 효과가 관찰될 수 있다.

칩을 로드할 때 파이펫을 천천히 사용하여 손가락을 사용하여 칩 위에 파이펫을 놓습니다. 이렇게 하면 칩에 닿지 않으며 실리콘의 구멍을 실수로 찌르는 것을 방지할 수 있습니다. 데이터를 처리할 때 자동화된 파이프라인을 사용할 수 있습니다.

이렇게 하면 실험이 어떻게 진행되고 있는지, 그리고 무언가를 변화시켜야 하는 경우 에 대한 좋은 아이디어를 제공합니다. 이 방법은 상당한 양으로 결정화 될 수있는 모든 단백질 시스템에 적용 될 수있다. 그리고 반응은 빛 엑스레이 또는 급속한 혼합에 의해 시작될 수 있습니다.

일련의 구조에 대한 동적 연구는 단백질이 어떻게 작동하는지에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다.