Name: 체외 및 생체 내 연구를 위한 마우스 불변 천연 킬러 T 세포의 정화 및 확장 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-15T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 배우세요 마우스 비장에서 불변 천연 킬러 T(iNKT) 세포를 정화하고 30배 확장하는 방법을. 면역학 연구에 활용할 수 있는 효율적인 세포 분리 및 배양 기술입니다.

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우리는 파올로 델라보나와 줄리아 카소라티에게 과학적 지원과 원고의 비판적 독서에 감사드립니다. 우리는 또한 마우스 CD1d 테트라머에 대한 NIH 테트라머 코어 시설에 감사드립니다. 이 연구는 폰다지오네 카리플로 그랜트 2018-0366 (M.F.) 및 이탈리아 암 연구 협회 (AIRC) 펠로우십 2019-22604 (G.D.에)에 의해 투자되었습니다.

여기에 설명 된 절차는 검토 및 샌 라파엘과학 연구소에서 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC) (No. 1048)에 의해 승인되었다.
참고: 모든 절차는 멸균 조건에서 수행해야 합니다. 사용되는 모든 시약은 재료 표에나열됩니다.
1. 비장 가공
<ol><li>기관 정책에 따라 CO2의 흡입에 의한 iVα14-Jα18 마우스의 안락사. 참고: iVα14-Jα18 마우스는 8주 이상이어야 한다. 세포의 생체 내 전달에서 세포의 거부를 피하기 위해, 여성 마우스로부터 분리 된 세포가 남성 및 여성 수신자 모두에서 입양적으로 전달 될 수 있음을 고려, 남성 마우스에서 분리 된 세포는 남성 받는 사람에서만 전송 될 수 있습니다. 시험관 내 실험의 경우 성 편견을 고려해야 합니다. 더 많은 마우스를 더 많은 세포를 얻기 위하여 풀로 만들 수 있습니다.</li>
	<li>마우스 비장을 해부하고 70 nm 세포 스트레이너를 통해 분쇄하여 2%의 태아 소 혈청(FBS)을 가진 10mL의 인산완충식염수(PBS)에서 단일 세포 현탁액을 얻습니다.</li>
	<li>300 x g의 원심분리기는 5분 동안.</li>
	<li>반전으로 상체를 제거하고 적혈구 용해 버퍼로 처리합니다. 멸균 ACK (암모늄 - 염화물 칼륨) 리싱 버퍼의 1 mL로 세포 펠릿을 다시 중단하고, 실온에서 3 분 동안 배양하고, 2 %의 FBS와 PBS의 5 mL로 차단합니다. 300 x g의 원심분리기는 5분 동안. 참고: ACK는 시판됩니다. 0.15MNH4Cl,10mM KHCO3,0.1 mM Na2EDTA(에틸렌디아민트라아세트산)의 용액으로 구성되어 있으며, 비스티스틸H2O, pH 7.2-7.4에 용해된다. 수제 경우 0.22 μm 필터로 여과에 의해 살균하십시오.</li>
	<li>반전으로 상체를 제거합니다. 2% FBS로 PBS의 3mL에서 세포 펠릿을 다시 중단하고 파이펫팅하여 지방 잔류물을 제거합니다. 필요한 경우 다른 마우스에서 나오는 세포를 풀.</li>
	<li>세포를 계산하고 FACS 분석을 위해 50 μL을 유지합니다.</li>
</ol>2. T 세포 농축
참고: 농축 단계의 경우, 빠르게 작업하고, 세포를 차갑게 유지하고 밤새 4°C에서 미리 냉각된 다음 얼음 위에 보관하는 솔루션을 사용합니다.
<ol><li>300 x g의 원심분리기는 5분 동안.</li>
	<li>2% FBS (107 셀에 대한 500 μL) 및 Fc 차단기 (2.5 μL x 107 셀)로 PBS의 적절한 양으로 모든 세포를 재중단; 실온(RT)에서 15분 동안 배양합니다.</li>
	<li>107 총 세포 당 MACS 분리 버퍼 (MB)의 1-2 mL로 세척하고 10 분 동안 300 x g에서 원심분리기. 참고: MACS 버퍼는 시판됩니다. PBS pH 7.2, 0.5% 소세럼 알부민(BSA), 2mM EDTA로 구성되어 있습니다. 수제 경우 0.22 μm 필터로 여과에 의해 살균하십시오.</li>
	<li>CD19-FITC 및 H2(IA b)-FITC(MB의 100 μL에서 5 μL x 107 셀 사용)로 셀을 반전하고 얼룩지게 하여 상체를 제거합니다. 잘 섞고 4-8°C에서 어둠 속에서 15분 동안 배양하십시오.</li>
	<li>107 세포 당 MB의 1-2 mL을 추가하고 10 분 동안 300 x g의 원심분리기를 추가하여 세포를 씻으시면 셀을 씻으신다.</li>
	<li>상체에서 완전히 피펫을 벗겨 내고 총107개의 세포당 MB의 90 μL에서 셀 펠릿을 재연한다. 총 셀10개당 10μL의 FITC 마이크로비드를 추가합니다. 잘 섞고 4-8°C에서 어둠 속에서 15분 동안 배양하십시오.</li>
	<li>107 세포 당 MB의 1-2 mL을 추가하고 10 분 동안 300 x g에서 원심분리기를 추가하여 세포를 씻으시면 셀을 씻으시다.</li>
	<li>상체에서 완전히 피펫을 벗겨 MB의 500 μL에서 최대 1.25 x 108 셀을 다시 일시 중지합니다.</li>
	<li>고갈을 진행하기 위해 MACS 분리기의 자기장에 LD 컬럼을 배치합니다. 막힘을 피하려면 LD 열에 사전 분리 필터를 적용하고 MB의 2mL로 헹신다.</li>
	<li>컬럼 저장소가 비어 있으면 셀 서스펜션을 필터에 적용합니다. 열을 통과하는 레이블이 없는 셀을 수집합니다.</li>
	<li>컬럼 저장소가 비어있을 때만 MB1mL로 3번 씻으시다. T 세포에서 농축될 총 유출물을 수집하고 세포를 계산합니다. 항상 FACS 분석을 위해 50 μL을 유지하십시오.</li>
</ol>3. iNKT 세포 농축
<ol><li>300 x g의 원심분리기는 5분 동안 반전으로 상판을 제거합니다.</li>
	<li>CD1d-테트라머-PE(마우스 PBS57-CD1d-테트라머)를 가진 세포를 염색하여106세포당 MB의 50μL의 항체 적정에 따라 염색한다. 잘 섞어서 얼음 의 어둠 속에서 30 분 동안 배양하십시오. 참고: 절차는 APC 라벨이 부착된 mCD1d 테트라머 및 안티 APC 구슬로도 수행될 수 있습니다. 다음에 사용되는 불소크롬을 조정하여 그에 따라 염색한다. 본 프로토콜에서 우리는 NIH에서 제공하는 마우스 PBS-57-CD1d-테트라머를 사용했습니다. αgalactosylceramide (αGal-Cer)는 iNKT 세포에 의해 인식되는 전형적인 항원이다; PBS-57은 용해도가 향상된 αGal-Cer의유사체입니다9; NIH 테트라머 시설은 CD1d 테트라머에 PBS-57 리간드 복합체를 제공합니다. 그러나, 다른 CD1d 디머/테트라머/dextramers는 시판되고 αGal-Cer로서 리피딕 항원으로 적재될 수 있다. 우리는 그들의 사용에 대 한 프로토콜을 조정할 수 있는 가능성을 상상.</li>
	<li>107 세포 당 MB의 1-2 mL을 추가하고 10 분 동안 300 x g에서 원심분리기를 추가하여 세포를 씻으시면 셀을 씻으시다.</li>
	<li>피펫은 완전히 상체에서 피펫과 107 총 세포 당 MB의 80 μL에서 셀 펠릿을 다시 중단합니다. 총 세포10개당 20μL의 안티-PE MicroBeads를 추가합니다. 잘 섞고 4-8°C에서 어둠 속에서 15분 동안 배양하십시오.</li>
	<li>107 세포 당 MB의 1-2 mL을 추가하고 10 분 동안 300 x g의 원심분리기를 추가하여 세포를 씻으시면 셀을 씻으신다.</li>
	<li>상체에서 완전히 피펫을 벗겨 MB의 500 μL에서 최대 108셀을 재연합니다. 그렇지 않으면 셀이 108을초과하는 경우, 그에 따라 부피를 조정한다.</li>
	<li>세포 수에 따라, LS(최대108)또는 MS(최대107)컬럼을 MACS 분리기의 자기장에 놓는다. MB(LS용 3mL, MS용 500 μL)로 컬럼을 헹구는다.</li>
	<li>셀 서스펜션을 열에 적용합니다.</li>
	<li>지나갈 레이블이 없는 셀을 수집합니다. 컬럼 저장소가 비어있을 때만 적절한 양의 MB(LS 열의 경우 3 x 3mL, MS 열의 경우 3 x 500 μL)를 추가하여 컬럼을 3회 세척합니다. 총 유출물은 음수 분획입니다.</li>
	<li>자기장에서 컬럼을 제거하고 새 수집 튜브에 배치합니다.</li>
	<li>열에 파이펫 MB (LS 열5 mL 또는 MS 열에 대한 1 mL); 제공된 플런저를 컬럼으로 밀어 넣고 양극분수(iNKT 셀에서 농축)를 플러시합니다.</li>
	<li>iNKT 세포 회수를 더욱 증가시키기 위해, 10분 동안 음극을 300 x g로 원심분리하고 새로운 LS 또는 MS 컬럼을 사용하여 3.6-3.7 단계를 반복한다. 양수 분수를 풀고 셀 수를 결정합니다. FACS 분석을 위해 양수 분수와 음수 50μL을 유지합니다.</li>
	<li>FACS 분석을 통해 정화 단계를 확인합니다. 샘플은 다음과 같습니다: 비장 전 비보, T 세포 농축 분수, iNKT 양성 분획 및 iNKT 음수 분획. 염색 세포: CD19-FITC, IAb-FITC, CD1d-테트라머-PE, TCRβ-APC 및 DAPI. 참고: iVα14-Jα18 마우스에서 예상되는 회복은 2x106 iNKT 셀이다.</li>
</ol>4. iNKT 세포 활성화 및 확장
<ol><li>마우스 T 활성제 안티 CD3/CD28 자기 구슬을 1:1 비율로 정제된 iNKT 세포를 활성화합니다.<ol>
<li>원심분리기 iNKT 셀 양성 분획은 300 x g에서 5분 동안.</li>
		<li>한편 안티 CD3/CD28 마그네틱 구슬의 적절한 부피를 튜브로 옮기고 5초 동안 동일한 양의 PBS, 소용돌이를 추가합니다. 튜브를 자석에 1분간 놓고 상체를 폐기합니다.</li>
		<li>자석에서 튜브를 제거하고 완전한 RPMI (RPMI 1640 매체, 10 % 열 비활성화 FCS, 1 mM 나트륨 피루바테, 1 % 비 필수 아미노산, 10 U /ml 페니실린 및 연쇄 상감,50M β μ-메르카포) 5NK의 적절한 부피에서 세척 된 자기 구슬을 재중단합니다. 원심 분리 된 iNKT 양수 분획을 다시 일시 중지하려면이 현탁액을 사용합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>플레이트 1 mL의 셀 서스펜션(5 x 105 iNKT 세포) 및 안티 CD3/CD28 자기 구슬은 20 U/mL IL-2를 장착한 48웰 플레이트에서 37°C에서 배양한다.</li>
	<li>5일 후 10 ng/mL IL-7을 추가합니다.</li>
	<li>80-90% 합류에 도달하면 세포를 1:2로 분할하고 항상 20U/mL IL-2 및 10 ng/mL IL-7을 추가합니다. 이러한 조건에서, iNKT 세포는 최대 15일 동안 확장될 수 있다.</li>
</ol>

<ol><li>Bendelac, A., Savage, P. B., Teyton, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+NKT+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">The biology of NKT cells.</a> Annual Review of Immunology. 25, 297-336 (2007).</li>
<li>Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+natural+killer+T+cells%3A+an+innate+activation+scheme+linked+to+diverse+effector+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions.</a> Nature Reviews: Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).</li>
<li>Pellicci, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+natural+killer+T+%28NKT%29+cell+developmental+pathway+iInvolving+a+thymus-dependent+NK1.1%28-%29CD4%28%2B%29+CD1d-dependent+precursor+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">A natural killer T (NKT) cell developmental pathway iInvolving a thymus-dependent NK1.1(-)CD4(+) CD1d-dependent precursor stage.</a> Journal of Experimental Medicine. 195 (7), 835-844 (2002).</li>
<li>Benlagha, K., Kyin, T., Beavis, A., Teyton, L., Bendelac, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thymic+precursor+to+the+NK+T+cell+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A thymic precursor to the NK T cell lineage.</a> Science. 296 (5567), 553-555 (2002).</li>
<li>Lee, Y. J., Holzapfel, K. L., Zhu, J., Jameson, S. C., Hogquist, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steady-state+production+of+IL-4+modulates+immunity+in+mouse+strains+and+is+determined+by+lineage+diversity+of+iNKT+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Steady-state production of IL-4 modulates immunity in mouse strains and is determined by lineage diversity of iNKT cells.</a> Nature Immunology. 14 (11), 1146-1154 (2013).</li>
<li>Griewank, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homotypic+interactions+mediated+by+Slamf1+and+Slamf6+receptors+control+NKT+cell+lineage+development%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Homotypic interactions mediated by Slamf1 and Slamf6 receptors control NKT cell lineage development.</a> Immunity. 27 (5), 751-762 (2007).</li>
<li>Cortesi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bimodal+CD40%2FFas-Dependent+Crosstalk+between+iNKT+Cells+and+Tumor-Associated+Macrophages+Impairs+Prostate+Cancer+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Bimodal CD40/Fas-Dependent Crosstalk between iNKT Cells and Tumor-Associated Macrophages Impairs Prostate Cancer Progression.</a> Cell Reports. 22 (11), 3006-3020 (2018).</li>
<li>Heczey, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+NKT+cells+with+chimeric+antigen+receptor+provide+a+novel+platform+for+safe+and+effective+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Invariant NKT cells with chimeric antigen receptor provide a novel platform for safe and effective cancer immunotherapy.</a> Blood. 124 (18), 2824-2833 (2014).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+alpha-galactosyl+ceramide+for+staining+and+stimulating+natural+killer+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">A modified alpha-galactosyl ceramide for staining and stimulating natural killer T cells.</a> Journal of Immunological Methods. 312 (1-2), 34-39 (2006).</li>
<li>Chiba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+reliable+generation+of+invariant+natural+killer+T-cell+lines+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Rapid and reliable generation of invariant natural killer T-cell lines in vitro.</a> Immunology. 128 (3), 324-333 (2009).</li>
<li>Crowe, N. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+antitumor+immunity+mediated+by+NKT+cell+subsets+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Differential antitumor immunity mediated by NKT cell subsets in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 202 (9), 1279-1288 (2005).</li>
<li>de Lalla, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+profibrotic+cytokines+by+invariant+NKT+cells+characterizes+cirrhosis+progression+in+chronic+viral+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Production of profibrotic cytokines by invariant NKT cells characterizes cirrhosis progression in chronic viral hepatitis.</a> Journal of Immunology. 173 (2), 1417-1425 (2004).</li>
<li>Tian, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD62L%2B+NKT+cells+have+prolonged+persistence+and+antitumor+activity+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">CD62L+ NKT cells have prolonged persistence and antitumor activity in vivo.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (6), 2341-2355 (2016).</li>
<li>Gaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+of+Antiviral+B+Cell+Immunity+Relies+on+Innate+Signals+from+Spatially+Positioned+NKT+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Initiation of Antiviral B Cell Immunity Relies on Innate Signals from Spatially Positioned NKT Cells.</a> Cell. 172 (3), 517-533 (2018).</li>
<li>Rotolo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Anti-lymphoma+Activity+of+CAR19-iNKT+Cells+Underpinned+by+Dual+CD19+and+CD1d+Targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Enhanced Anti-lymphoma Activity of CAR19-iNKT Cells Underpinned by Dual CD19 and CD1d Targeting.</a> Cancer Cell. 34 (4), 596-610 (2018).</li>
<li>Schneidawind, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Third-party+CD4%2B+invariant+natural+killer+T+cells+protect+from+murine+GVHD+lethality%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Third-party CD4+ invariant natural killer T cells protect from murine GVHD lethality.</a> Blood. 125 (22), 3491-3500 (2015).</li>
<li>Schneidawind, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+invariant+natural+killer+T+cells+protect+from+murine+GVHD+lethality+through+expansion+of+donor+CD4%2BCD25%2BFoxP3%2B+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD4+ invariant natural killer T cells protect from murine GVHD lethality through expansion of donor CD4+CD25+FoxP3+ regulatory T cells.</a> Blood. 124 (22), 3320-3328 (2014).</li>
<li>Schneidawind, D., Pierini, A., Negrin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+and+natural+killer+T+cells+for+modulation+of+GVHD+following+allogeneic+hematopoietic+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells and natural killer T cells for modulation of GVHD following allogeneic hematopoietic cell transplantation.</a> Blood. 122 (18), 3116-3121 (2013).</li>
<li>Leveson-Gower, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+doses+of+natural+killer+T+cells+provide+protection+from+acute+graft-versus-host+disease+via+an+IL-4-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Low doses of natural killer T cells provide protection from acute graft-versus-host disease via an IL-4-dependent mechanism.</a> Blood. 117 (11), 3220-3229 (2011).</li>
<li>Coman, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD4-+invariant+NKT+lymphocytes+regulate+graft+versus+host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">Human CD4- invariant NKT lymphocytes regulate graft versus host disease.</a> Oncoimmunology. 7 (11), 1470735(2018).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NKT+Cells+Coexpressing+a+GD2-Specific+Chimeric+Antigen+Receptor+and+IL15+Show+Enhanced+In+vivo+Persistence+and+Antitumor+Activity+against+Neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">NKT Cells Coexpressing a GD2-Specific Chimeric Antigen Receptor and IL15 Show Enhanced In vivo Persistence and Antitumor Activity against Neuroblastoma.</a> Clinical Cancer Research. 25 (23), 7126-7138 (2019).</li>
<li>Heczey, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-GD2+CAR-NKT+cells+in+patients+with+relapsed+or+refractory+neuroblastoma%3A+an+interim+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Anti-GD2 CAR-NKT cells in patients with relapsed or refractory neuroblastoma: an interim analysis.</a> Nature Medicine. 26 (11), 1686-1690 (2020).</li>
<li>Exley, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+Transfer+of+Invariant+NKT+Cells+as+Immunotherapy+for+Advanced+Melanoma%3A+A+Phase+I+Clinical+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Adoptive Transfer of Invariant NKT Cells as Immunotherapy for Advanced Melanoma: A Phase I Clinical Trial.</a> Clinical Cancer Research. 23 (14), 3510-3519 (2017).</li>
<li>Wolf, B. J., Choi, J. E., Exley, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Approaches+to+Exploiting+Invariant+NKT+Cells+in+Cancer+Immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Novel Approaches to Exploiting Invariant NKT Cells in Cancer Immunotherapy.</a> Frontiers in Immunology. 9, 384(2018).</li>
</ol>

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여기에서 우리는 수백만 개의 즉시 사용할 수 있는 iNKT 셀을 얻기 위해 재현 가능하고 실행 가능한 프로토콜을 보여줍니다. 생체 내에서 이러한 세포의 빈약성으로 인해 이를 확장하는 방법이 매우 필요했습니다. 우리가 제안하는 프로토콜은 특정 계측이나 많은 수의 마우스를 필요로하지 않습니다. 당사는 절차에 필요한 마우스의 수를 줄이기 위해 iVα14-Jα18 형질전환 마우스를 의도적으로 이용했습니다.
iVα14-Jα18 형질전환 마우스로부터 iNKT 세포 확장을 위한 또 다른 성공적인 프로토콜은문헌(10)에서사용할 수 있다. 이 프로토콜은 iNKT 세포 정화 6일 전에 신선한 골수 유래 수지상 세포의 생성을 포함하고, 그 후에 α 갈라토실세라미드와 조사, 플러스 IL-2 및 IL-7로 로드됩니다. 우리는 시술에 관여하는 마우스의 수의 감소를 프로토콜의 큰 이점으로 간주합니다. 세포 배양의 설정이 일주일 대신 하루 지속되기 때문에 그것은 또...

불변성 천연 킬러 T 세포(iNKT 세포)는 반불변성 αβ T 세포 수용체(TCR)를 발현하는 선천성 T 림프구체로, 비정체 Vα14-Jα18 사슬에 의해 마우스에서 형성된 다양한 Vβ 사슬1의한정된 세트와 결합되어 MHC 급 I-관련 분자CD1 CD에의해 제시된 지질 항원특이이다. iNKT 세포는 여러 성숙 단계3,4를통해 발생하는 흉선에서 이미 활성화 / 타고난 이펙터 표현형을 획득하는 결과 고뇌선별 프로그램을 거치며 CD4+ 및 CD4- 하위 세트를 생성합니다. 이 프로그램을 통해 iNKT 세포는 T-bet, GATA3, PLZF 및 RORγt의 발현에 의해 식별 가능한T-H(iNKT1),TH2(iNKT2) 및 TH17(iNKT17)과 같은 T 조머(TH)이펙터 표현형을 획득한다. iNKT 세포는 다양한 미생물 지질을 인식하지만 암 및 자가 면역2와같은 세포 스트레스 및 조직 손상의 병리학적 상황의 맥락에서 조절되는 내인성 지질에 대해 자가 반응성이다. 활성화시, iNKT 세포는 직접 접촉 및 사이토카인 생성2를통해 다른 선천적이고 적응형 면역 이펙터 세포의 기능을 조절한다.
iNKT 세포의 조사는 CD1d-결핍 또는 Jα18-결핍 마우스를 포함하는 마우스 모델, 및 항원적 로드 CD1d 테트라머의 생산에 의해 촉진되었으며, 인간 반투명 TCR에 특이적인 단일 클론 항체(mAbs)의 생성에 의해 촉진되었다. 그러나, 1차 마우스 iNKT 세포주의 생성은 어렵다는 것을 입증했습니다. iNKT 세포의 항종양 기능을 보다 잘 특성화하고 입양 세포 치료에 활용하기 위해 iVα14-Jα18 트랜스제닉 마우스(iVα14Tg)6의비장 iNKT 세포를 정화하고 확장하는 프로토콜을 설정하여 iNKT 세포가 야생형 마우스보다 30배 더 빈번합니다.
확장된 iNKT 세포는 시험관 내 분석, 그리고 생쥐로 다시 옮겨질 때 생체 내에서 악용될 수 있다. 이 설정에서, 예를 들어, 우리는 그들의 강력한 항 종양 효과 보여 주었다7. 더욱이, 시험관 내 확장된 iNKT 세포는 생체 내에서 그들의 주입 전에 유전자 전달 또는 편집을 통해 기능적 변형을 가능하게하며,분자 통로의 통찰력 있는 기능적 분석을 허용하고, 또한 진보된 세포 치료를 위한 길을 포장할 수 있다.

<table><tbody><tr><td>가정용</td><td></td> <td>암모늄-염화-칼륨(ACK) 용액</td><td>0.15M NH4Cl, 10mM KHCO3, 0.1mM EDTA, pH 7.2-7.4</td></tr><tr><td>안티 FITC 마이크로비즈</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-048-701</td><td></td></tr><tr><td>안티 PE 마이크로비즈</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-048-801</td><td></td></tr><tr><td>Brefeldin A</td><td>Sigma</td><td>B6542</td><td></td></tr><tr><td>CD19 -FITC</td><td>Biolegend</td><td>115506</td><td>클론 6D5</td></tr><tr><td>CD1d-테트라머 -PE</td><td>NIH 테트라머 코어 시설</td><td></td><td>마우스 PBS57-Cd1d-테트라머</td></tr><tr><td>CD4 -PeCy7</td><td>Biolegend</td><td>100528</td><td>클론 RM4-5</td></tr><tr><td>Fc 차단제</td><td>BD Bioscience</td><td>553142</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Euroclone</td><td>ECS0186L</td> FOXP3 전사 인자 염색 완충액 <td>사용 전 .22 열 비활성화 및 여과</td></tr><tr><td></td><td>eBioscience</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>H2 (IAb) -FITC</td><td>Biolegend</td><td>114406</td><td>클론 AF6-120.1</td></tr><tr><td>hrIL-2</td><td>Chiron Corp</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ionomycin</td><td>Sigma</td><td>I0634</td><td></td></tr><tr><td>LD 컬럼</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-901</td><td></td></tr><tr><td>LS 컬럼</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS 완충액(MB)</td><td>사내</td><td></td><td>0.5% 소 혈청 알부민(BSA; Sigma-Aldrich) 및 2Mm EDTA</td></tr><tr><td>MS 컬럼</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>비필수 아미노산</td><td>Gibco</td><td>11140-035</td><td></td></tr><tr><td>페니실린 및 스트렙토마이신(Pen-Strep)</td><td>Lonza</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PermWash</td><td>BD Bioscience</td><td>51-2091KZ</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate 완충 식염수(PBS)</td><td>EuroClone</td><td>ECB4004L</td><td></td></tr><tr><td>PMA</td><td>Sigma</td><td>P1585</td><td></td></tr><tr><td>사전 분리 필터(30 &마이크로; m)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>리콤비나트 마우스 IL-7</td><td>R& D 시스템</td><td>407-ML-025</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 with glutamax</td><td>Gibco</td><td>61870-010</td><td></td></tr><tr><td>sodium pyruvate</td><td>Gibco</td><td>11360-039</td><td></td></tr><tr><td>TCR&beta; -APC</td><td>Biolegend</td><td>109212</td><td>클론 H57-597</td></tr><tr><td>&alpha; CD3CD28 마우스 T 활성제 Dynabeads</td><td>Gibco</td><td>11452D</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-메르캅토에탄올</td><td>Gibco</td><td>31350010</td><td></td></tr></tbody></table>

체외 및 생체 내 연구를 위한 마우스 불변 천연 킬러 t 세포의 정화 및 확장

Purification and Expansion of Mouse Invariant Natural Killer T Cells for in vitro and in vivo Studies

불변성 천연 킬러 T(iNKT) 세포는 비다형성 MHC 급 I 관련 분자 CD1d.전임상 및 임상 연구에서 암, 자가면역 및 감염성 질환에서 iNKT 세포에 대한 역할을 지원하는 자체 또는 미생물 지질 항원에 특이적인 반불변성 T 세포 수용체(TCR)를 발현하는 선천성 T 림프구체이다. iNKT 세포는 종 전체에 걸쳐 매우 보존되고 그들의 조사는 CD1d 결핍 또는 iNKT 결핍 마우스를 포함하여 마우스 모델에 의해 촉진되고, 반 불변 TCR에 특이적인 CD1d 테트라머 또는 mAbs를 가진 마우스와 남자에서 명백하게 검출할 가능성. 그러나 iNKT 세포는 드물며 모든 연구를 위해 관리 가능한 숫자에 도달하기 위해 확장되어야 합니다. 시험관 내의 1차 마우스 iNKT 세포주의 생성이 어렵다는 것이 입증되어 왔으니, iVα14-Jα18 트랜스제닉 마우스(iVα14Tg)로부터 비장 iNKT 세포를 정화하고 확장하기 위한 견고한 프로토콜을 설정하여 iNKT 세포가 30배 더 빈번하다. 우리는 여기에서 1 차적인 비장 iVα14Tg iNKT 세포가 면역자기 분리 과정을 통해 풍부해질 수 있다는 것을, 대략 95-98% 순수한 iNKT 세포를 산출한다는 것을 여기에서 보여줍니다. 정제된 iNKT 세포는 안티 CD3/CD28 구슬플러스 IL-2 및 IL-7에 의해 자극되며, 85-99%의 순도로 배양의 날 +14까지 30배 확장됩니다. 확장된 iNKT 세포는 쉽게 유전적으로 조작될 수 있으며, 생체 외에서 활성화 및 기능 메커니즘을 해부하고, 더 중요한 것은 생체 내에서의 입양 전달시에도 귀중한 도구를 제공합니다.

본 원고에 기재된 프로토콜은 도 1A에요약된 면역자기 분리 과정을 통해 iVa14-Ja18 형질성 마우스의 비장으로부터 iNKT 세포를 풍부하게 할 수 있다. 총 비장 T 세포는 먼저 B 세포와 단세포를 고갈하여 부정적으로 선택되고, PBS-57 지질 항원로드 CD1d 테트라머를 사용하여 iNKT 세포 양성 면역자기 분류를 통해 iNKT 세포만 구체적으로 염색할 수 있게 된다. 이 프로토콜은 단일 iVa14-Ja18 Tg 마우스의 비장으로부터 95-98% 순수 iNKT 세포의 약 2 x 106을 산출합니다. 아니 또는 정말 소수의 iNKT 세포는 음수 분수(도 1B)에서검출 될 수있다.
농축 후, iVa14 iNKT 세포는 항 CD3/CD28 구슬플러스 IL-2 및 IL-7(도2A)으로확장될 수 있으며...

우리는 마우스 비장에서 불변 자연 킬러 T (iNKT) 세포를 풍부하게하고 체외 및 생체 내 연구에 적합한 숫자로 시험관 내에서 확장하기 위해 신속하고 강력한 프로토콜을 설명합니다.

체외 및 생체 내 연구를 위한 마우스 불변 천연 킬러 T 세포의 정화 및 확장

Invariant Natural Killer T (iNKT) cells are innate-like T Lymphocytes expressing a conserved semi-invariant T cell receptor (TCR) specific for self or ...

이 프로토콜은 매우 드문 INK T 세포의 정화를 가능하게하고, 그들의 수에 30 배 확장을 허용한다. 정제는 하루에 수행 될 수 있으며 2 주 동안 생체 내 및 체외 연구를위한 즉시 사용할 수있는 잉크 T 세포의 많은 수를 생성 할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 실험실의 사후 문서인 글로리아 델판티(Gloria Delfanti)입니다.마우스 비장을 해부 한 후, 70 나노 미터 세포 스트레이너를 통해 분쇄하여 2 % FBS로 PBS의 10 밀리리터에서 단일 세포 현탁액을 얻습니다. 원심분리기는 5분간 300배 G로 합니다. 상체를 제거하고 멸균 암모늄 염화 칼륨 리신 버퍼의 1 밀리리터로 세포 펠릿을 다시 분리합니다.실온에서 3분 동안 세포를 배양한 다음 2%의 FBS로 PBS 5밀리리터로 차단합니다. 원심분리기는 5분간 300배 G로 합니다. 상체를 제거 한 후, 2 %의 FBS와 PBS의 세 밀리리터에서 세포 펠릿을 다시 중단하고 파이펫팅하여 지방 잔류물을 제거합니다.농축 단계를 위해 세포를 차갑게 유지하고 섭씨 4도에서 미리 냉각된 다음 얼음 위에 보관하는 솔루션을 사용합니다. 원심분리기는 5분간 300배 G로 합니다. 2%FPS 및 Fc 차단제로 적절한 양의 PBS로 모든 셀을 재중단하고 실온에서 15분 동안 배양합니다.1,000만 개의 세포당 MACS 분리 버퍼1~2밀리리터로 세척하고 10분 동안 300배 G에서 원심분리기로 세척합니다. 상체를 제거한 후 CD19-FITC 및 H2-IAb-FITC로 세포를 염색하고 4-8°C에서 어둠 속에서 15분 동안 배양합니다. 1,000만 개의 세포당 MACS 버퍼1~2밀리리터를 추가하고 10분 동안 300배 G의 원심분리기를 추가하여 셀을 세척합니다.1,000만 개의 세포당 90마이크로리터의 MACS 버퍼에서 수퍼를 제거하고 세포 펠릿을 재연합니다. 1,000만 개의 세포당 10마이크로리터의 안티 FITC 마이크로비드를 추가합니다. 잘 섞고 4~8도의 어둠 속에서 15분간 배양하세요.1,000만 개의 세포당 MACS 버퍼1~2밀리리터를 추가하고 10분 동안 300배 G의 원심분리기를 추가하여 세포를 세척합니다. 상체를 제거하고 MACS 버퍼의 500 마이크로 리터에서 최대 1억 2,500만 개의 세포를 재연하십시오. MACS 분리기의 자기장에 LD 컬럼을 배치합니다.막힘을 피하려면 LD 열에 사전 분리 필터를 적용하고 MACS 버퍼의 두 밀리리터로 헹신다. 셀 서스펜션을 필터에 적용하고 컬럼을 통과하는 레이블이 없는 셀을 수집합니다. MACS 버퍼 1밀리리터로 빈 기둥 저장소를 세 번 씻으시면 됩니다.T 세포농축 유출물을 수집하고 세포를 계산하여 FACS 분석을 위해 50마이크로리터를 유지합니다. 5 분 동안 300 회 G에서 원심 분리 한 후, 상체를 제거하고 CD1d 테트라머 -PE로 세포를 얼룩. 잘 섞어서 얼음 의 어둠 속에서 30 분 동안 배양하십시오.1,000만 개의 세포당 MACS 버퍼의 1~2밀리리터를 추가하여 셀을 세척합니다. 10분 동안 300회 G에서 원심분리 후, 1,000만 개의 세포당 80마이크로리터의 MACS 버퍼에서 수퍼나탄을 제거하고 세포 펠릿을 재보페한다. 1,000만 개의 세포당 20마이크로리터의 안티-PE 마이크로비드를 추가합니다.잘 섞고 4~8도의 어둠 속에서 15분간 배양하세요. 1,000만 개의 세포당 MACS 버퍼1~2밀리리터를 추가하고 10분 동안 300배 G의 원심분리기를 추가하여 셀을 세척합니다. 상체를 제거하고 MACS 버퍼의 500 마이크로 리터에서 최대 1 억 개의 세포를 다시 일시 중단하십시오.셀 수에 따라 LS 또는 MS 컬럼을 MACS 분리기의 자기장에 배치하고 MACS 버퍼로 컬럼을 헹구는다. 셀 서스펜션을 컬럼에 적용하고, 이전에 설명한 대로 열을 세 번 통과하고 세척하는 레이블이 없는 세포를 수집합니다. 이것은 음수 분수입니다.자기장에서 컬럼을 제거하고 새 수집 튜브에 배치합니다. 파이펫 MACS는 컬럼에 버퍼링하고 제공된 플런저를 컬럼으로 밀어 잉크 T 셀에 농축된 양수 분획을 플러시합니다. INK T 셀 복구를 더욱 증가시키기 위해 음극을 10분 동안 300배 G로 원심분리하고 새로운 LS 또는 MS 열을 사용하여 이전 단계를 반복합니다.양수 분획을 당기고 셀 수를 결정합니다. FACS 분석을 위해 50마이크로리터를 양수 및 음극분수 모두 유지하여 순도를 확인합니다. 1대1 비율로 INK T 세포를 활성화하려면 항 CD3 및 CD28 자기 구슬의 적절한 부피를 튜브로 옮기고 PBS의 동일한 부피로 5초 동안 소용돌이를 전달합니다.튜브를 자석에 1분간 놓고 상체를 폐기합니다. 자석에서 튜브를 제거하고 RPMI의 적절한 부피에서 세척 된 자기 구슬을 다시 분리합니다. 원심분리기는 잉크 T 세포를 5분 동안 300배 G로 정결하고 마우스 T-활성제 안티 CD3 또는 CD28 자기 구슬과 혼합합니다.셀 서스펜션의 1밀리리터, 안티 CD23 및 CD28 마그네틱 구슬을 48웰 플레이트에 넣고 밀리리터 IL-2당 20단위를 한 다음 섭씨 37도에서 배양합니다. 5 일 후, 추가 10 밀리 리터 IL-7 당 나노 그램. 80~90%의 합류에 도달하면 세포를 반으로 나누고, 항상 밀리리터 IL-2당 20단위, 밀리리터 IL-7당 10나노그램을 추가합니다.이러한 조건하에서 INK T 세포는 최대 15일 동안 확장할 수 있습니다. 이 프로토콜을 사용하여, 잉크 T 세포는 면역 자기 분리 과정을 통해 형질전환 마우스의 비장에서 풍부하게 된다. 농축 후, 세포는 항 CD3 및 CD28 구슬로 확장될 수 있으며, 그 결과 배양14일까지 평균 30배의 확장이 가능합니다.안티 CD3 및 안티 CD 비드를 통한 강력한 활성화는 세포 표면에 IMK T 세포 TCR 발현의 다운레핑을 유도하고 이중 음수 집단이 나타났다. 확장된 잉크 T 세포의 대다수는 CD4 음성입니다. 계보 특이적 전사 인자 PLZF 및 ROR 감마 T의 특성화는 0일 및 14일에 농축된 잉크 T 세포에 대한 NKT1, NKT2 및 NKT17 표현형을 식별할 수 있게 하였다.농축 된 잉크 T 세포는 PMA 및 이오노마이신 자극 후 인터페론 감마와 IL-4의 분비에 의해 확인된 바와 같이 14 일 간의 확장 후 보존되는 T80과 같은 이펙터 표현형을 보여줍니다. 정화 단계 동안, 미리 냉각 된 솔루션으로 빠르게 작동하고 파이펫하는 동안 볼 수있는 지방 잔류물을 제거해야합니다. 확장된 INK T 세포는 유전자 전달 또는 편집을 통해 기능적 수정 후에도 체외 분석 및 생쥐로의 생체 내 전달을 위해 악용될 수 있다.INK T 세포의 체외 확장은 빈약에 의해 주어진 한계를 극복, 종양 면역 감시의 분야에서 전임상 연구에서 악용 만들기, 전염병, 및 자동 면역.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

여기 우리는 효율적으로 확장하고 정화 인간 NK 세포의 큰 숫자를하고 기능을 평가하는 방법을 설명합니다.

확장, 정화, 그리고 사람 말초혈 NK 세포 기능 평가

이 비디오는 자연 살해 세포 또는 NK 세포를 포함한 림프구를 선택적 증식을 위해 인간의 간 조직에서 분리하는 방법을 보여줍니다. 효소 및 기계적 분해 후 밀도 구배 분리는 NK 세포를 포함한 림프구 분리를 촉진합니다. 수집된 림프구는 NK 세포의 선택적 증식에 추가로 사용될 수 있습니다.

선택적 확장을 위한 간 조직에서의 자연 살해 세포 분리

이 영상은 불변 자연적인 살해 T 세포, 일컬어 iNKT 세포를 고립시키기를 위한 방법을 설명합니다. 절차는 비장에 있는 iNKT 세포의 활성화 그리고 증식을 자극하기 위하여 합성 당지질을 쥐로 주입하는 것으로 시작됩니다. 연속적으로, 단 하나 세포 현탁액은 비장에서 준비되고 형광단으로 레테르를 붙인 iNKT 세포 인식 복합물로 배양되고, 자석 구슬 근거한 별거가 뒤이어, iNKT 세포를 고립시키기 위하여 배양됩니다.

마우스 모델에서 불변 자연 살해 T 세포 분리

순진한 CD4+ T cell은 활성화 시점의 환경에 따라 다양한 subset으로 분극화합니다.  naive CD4+ T cell을 다양한 effector subset으로 분화하는 것은 T cell receptor stimuli 및 specific cytokine signal의 추가를 통해 in vitro에서 달성할 수 있습니다.

마우스 나이브 CD4<sup&gt; +</sup&gt; T 세포의 분리 및<em&gt; 시험관</em&gt; T 세포 하위 집합으로 차별화

여기에서는 쥐의 비장에서 많은 수의 쥐 불변 자연 살해 T 세포를 생성하는 데 사용할 수 있는 적응된 프로토콜을 제시합니다. 의정서는 비장 iNKT 세포가 한정된 수의 동물 및 시약을 사용하여 시험관 내에서를 위해 풍성하게 하고, 고립되고 확장될 수 있는 접근 방식을 개략적으로 설명합니다.

마우스 비장에서 불변 자연 살해 T 세포를 분리하고 확장을위한 최적화 방법

뚜렷한 수지상 세포 부분 집합은 림프 기관에서 드문 집단으로 존재하므로 면역학 실험을 위한 충분한 수와 순도로 분리하기가 어렵습니다. 여기에서는 현재 알려진 마우스 비장 수지상 세포의 모든 주요 부분 집합을 분리하기 위한 고효율, 고수율 방법에 대해 설명합니다.

마우스 수지상 세포 하위 집합의 분리를위한 효율적이고 높은 수율 방법

림프구는 적응 면역 반응의 주요 플레이어입니다. 여기에서는 in vitro 및 in vivo에서 원하는 분자의 림프구 활성화의 생리학적 기능을 결정하기 위한 림프구 정제 프로토콜을 제시합니다. 설명된 실험 절차는 대조군 림프구와 유전자 변형 림프구 간의 기능적 능력을 비교하는 데 적합합니다.

분리 및 쥐 림프구의 활성화

여기, 우리가 순진한 CD4 T 세포 (T 세포) 활성화, 확산, 그리고 GM-CSF 골 (BM)에 의해 유도 된 Th1 차별화의 비보에 결정에 대 한 프로토콜을 제시-파생 된 모 수석 세포 (DCs). 또한,이 프로토콜 BM 및 T-세포 절연, DC 생성, 및 DC 및 T-세포 입양 전송을 설명합니다.

Vivo에서 마우스 모델을 측정 순진한 CD4 T 세포 활성화, 확산 및 골 수 유래 수지상 세포에 의해 유도 된 Th1 차별화

여기에서는 종양 항 원에 대 한 세포 독성 T 림프 구 (CTL) 반응에서 면역 우세의 검사를 가능 하 게 하는 유 세포 분석 기반의 생체 사 멸 분석 법을 설명 한다. 이 우아한 분석을 기계 론 적 연구와 약물 효능 테스트에 사용 하는 방법의 예를 제공 합니다.

종양 특이 CD8+ T 세포 반응에서 면역 우세를 연구 하기 위한 생체 내 세포 독성 분석 법

이것은 임신과 비 임신 마우스 둘 다에서 자궁 림프세포를 격리하는 방법입니다. 이 방법은 FACS phenotyping, 세포 선별, 기능 적 작용, RNA-seq 및 프로테오믹스와 같은 여러 다운스트림 응용 제품에 사용할 수 있습니다. 여기서 프로토콜은 혈류 세포측정에 의한 표현형 그룹 1 자궁선천성 림프구 세포를 전파한다.

유동 세포측정에 의한 분석을 위한 자궁 내 선천 림프구 세포의 격리

배우세요 마우스 비장에서 불변 천연 킬러 T(iNKT) 세포를 정화하고 30배 확장하는 방법을. 면역학 연구에 활용할 수 있는 효율적인 세포 분리 및 배양 기술입니다.

체외 및 생체 내 연구를 위한 마우스 불변 천연 킬러 T 세포의 정화 및 확장

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