Name: 프로그래밍 가능한 자동 나노리터 인젝터 를 사용한 초파리 멜라노가스터 에서의 종양 동종이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 6 s
Description: 배우세요 Drosophila melanogaster에서 자동 나노리터 인젝터를 활용한 종양 동종이식 방법으로, 연구 효율성과 종양 수율을 높여 암 연구의 신뢰성을 향상시킵니다.

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우리는 전 실험실 구성원 인 Sheng-An Yang 박사와 Juan-Martin Portilla 씨가이 프로토콜을 개발하는 데 기여한 것에 대해 감사드립니다. 북경 대학 생명 과학 대학원의 Yan Song 박사의 실험실에서 수동 동종 이식에 대한 프로토콜을 공유 한 것에 감사드립니다. 우리는 또한 Calder Ellsworth와 Everest Shapiro 씨가 원고를 비판적으로 읽어 주신 것에 감사드립니다.
WMD는 국립 보건원 (https://www.nih.gov/)으로부터이 작업에 대한 자금 (GM072562, CA224381, CA227789)과 국립 과학 재단 (htps://nsf.gov/)으로부터 자금 (IOS-155790)을 받았다. 기금 제공자는 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 출판 결정 또는 원고 준비에 아무런 역할을하지 못했습니다.

1. SG 상상고리종양의 제조
<ol><li>교차 성인은 UAS-NICD (남성 : 10-15 파리)와 Act-Gal4, UAS-GFP / CyO; tub-Gal80ts (처녀 암컷 : 10-15 파리)의 유전자형을 가지고 파리를 다니며 18 °C에서 1 일 동안 번식 할 수 있도록합니다. 선택한 성인 파리는 높은 비옥도를 보장하기 위해 5-9 일 이상이어야합니다.</li>
	<li>성인 파리가 18 °C에서 24 시간 동안 바이알에 들어있는 파리 사료에 알을 낳도록 허용한 다음 성인 파리를 제거하십시오. 참고 : 플라이 푸드는 Drosophila Stock Center8의 표준 옥수수 가루 식품 레시피를 사용하여 준비됩니다. 각 바이알에는 약 10mL의 플라이 푸드가 들어 있어야합니다.</li>
	<li>난자가 18°C에서 6일 동안 배양되도록 허용한다. 이 기간 동안 애벌레는 부화 할 것입니다.</li>
	<li>유충을 함유하는 바이알을 29°C 인큐베이터로 옮기고 또 다른 7일 동안 인큐베이션한다. 참고: 이 인큐베이션 단계는 특정 실험 설계에 따라 선택 사항입니다.</li>
</ol>2. 동종이식을 위한 성인 야생형 초파리 의 제조
<ol><li>야생형 또는 적절한 돌연변이 성인 파리를 100%CO2로 마취시키고 성별에 따라 파리를 분류합니다. 수컷과 암컷 파리 모두 종양 숙주로 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>5cm 길이의 플라이 테이프 조각을 현미경 슬라이드에 고정하고 끈적 끈적한면을 양쪽 끝에 하나씩 두 개의 작은 테이프 조각으로 고정하십시오.</li>
	<li>날개를 테이프에 부착하여 파리를 고정시킵니다. 파리를 조종하는 동안 포셉을 사용하십시오.<ol>
<li>동종 이식편 수용체로 사용되는 60-80 마리의 성인 파리에 대해 위의 단계를 반복하십시오. 참고 : 파리를 깔끔한 행으로 구성하는 것이 가장 좋으며, 나중에 더 시간 효율적인 주입 과정을 위해 신체 축이 서로 평행하게 정렬되어 있습니다. 그림 1에서는 이러한 방식으로 테이핑된 호스트 파리의 행을 보여 줍니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 자동 인젝터 장치의 조립
<ol><li>자동 인젝터 장치와 전원 코드를 컨트롤러 상자에 연결합니다.<ol>
<li>주입 부피를 59.8 nL로 설정하십시오. 이것은 동종 이식 중에 적절한 양의 흡입 및 주사력을 유지하는 데 도움이됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>컨트롤러 상자와 자동 인젝터를 광학 현미경의 반대쪽에 놓습니다. 참고: 오른손잡이 작업자의 경우, 컨트롤 박스는 현미경의 왼쪽에 배치해야 하며 오른쪽에는 인젝터가 있어야 합니다. 왼손잡이 연산자의 경우도 마찬가지입니다.</li>
	<li>포셉으로 닫힌 끝을 잘라내어 사용할 3.5 ''유리 모세관을 준비하십시오.<ol>
<li>4 단계 마이크로 피펫 풀러를 사용하여 유리 모세관의 한쪽 끝을 처리하고 계측기의 다음 사양을 사용하여 좁고 닫힌 끝으로 가열하십시오 : 열 = 650, 힘 = 200 및 거리 = 8. 모세 혈관을 풀러 장치에 깔끔하게 배치하고 위의 설정을 입력 한 후 프로그램을 실행하십시오.</li>
		<li>포셉을 사용하여 모세관을 약 60 ° 각도로 클립하여 성인 비행 복부에 쉽게 들어갈 수 있도록 더 선명한 끝을 만듭니다1. 잘 잘린 모세관의 예를 보려면 그림 2 를 참조하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>인젝터의 캡을 가볍게 풉니다. 전체 길이의 70%-80%가 표시될 때까지 Empty 버튼을 눌러 인젝터 바늘을 전진시킵니다. 모세관 진행을 가속화하려면 채우기 버튼을 한 번 누른 채 빈 버튼을 누른 채 누릅니다.</li>
	<li>주사기를 사용하여 유리 모세관을 미네랄 오일로 채 웁니다. 그런 다음 전자가 인젝터의 고무 마개에 단단히 부착 될 때까지 유리 모세관을 인젝터 바늘에 조심스럽게 삽입하십시오. 이제 인젝터 캡을 단단히 조이십시오.<ol>
<li>유리 모세관 커버의 외부 표면에 남아 있는 미네랄 오일을 닦아내어 동종이식 동안 매질을 오염시키지 않도록 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. SG 상상고리 종양의 해부
<ol><li>유충 중 하나를 선택하고 100 μL의 슈나이더 배지로 채워진 해부 플레이트로 옮겨 SG 상상 고리 종양 해부를 준비하십시오. 참고 : 종양을 보유하고있는 표본 만 애벌레로 남아 있습니다. 이는 종양 성장이 애벌레의 발달과 진행을 지연시키기 때문이다9. 표본의 삼분의 일은 종양을 보유하지 않을 것이므로 번데기 / 성인으로 진행될 것입니다.<ol>
<li>해부 및 동종 이식 목적을 위해, 10x-20x 배율 범위의 입체 현미경을 사용하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>애벌레 몸체의 중간 부분을 잡기 위해 한 쌍의 포셉을 사용하여 다른 포셉을 사용하여 애벌레 머리를 꼬집고 길게 스트레칭 힘을 가하십시오.</li>
	<li>유충의 Y 자형 SG를 찾아 나머지 애벌레 조직(10)에서 분리하십시오.</li>
	<li>인접한 조직을 제거하여 SG 상상 고리 종양을 해부하고 분리한다. 이 해부 과정을 묘사하려면 그림 3 을 참조하십시오.</li>
	<li>연구 요구에 따라 추가 10-20개의 SG 상상 고리 종양에 대해 4.1-4.4단계를 반복합니다.</li>
</ol>5. 원발성 SG 상상고리 종양의 동종이식편
<ol><li>모세관을 원발성 SG 상상 고리 종양이 들어있는 슈나이더 배지에 잠급니다. 채우기 버튼을 눌러 유리 모세관을 슈나이더 미디엄으로 채워 상단 0.5cm 세그먼트까지 채웁니다. 이 상단 세그먼트는 미네랄 오일로 채워져 있어야합니다. 참고: 채우기 단추를 누른 상태에서 빈 단추를 한 번 눌러 이 프로세스를 가속화하십시오.</li>
	<li>원발성 종양을 찾고 종양이 모세관으로 흡입 될 때까지 채우기 버튼을 누릅니다.<ol>
<li>종양이 모세관의 끝 또는 모세관의 끝에서 몇 밀리미터 떨어진 곳에 있는지 확인하십시오. 이것은 종양이 표류하고 모세관 내에 포함 된 용액에서 손실되는 것을 방지하는 데 도움이됩니다. 모세관에 앉을 때 적절한 종양 위치의 입증을 위해 도 4A 를 참조한다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>현미경 슬라이드에서 테이프에 고정되어있는 성인 파리를 찾습니다. 포셉을 사용하여 하복부를 부드럽게 잡으십시오. 그런 다음 모세관으로 복부의 아래쪽 측면 큐티클을 관통하십시오. 종양이 새 숙주 복부에 들어갈 때까지 Empty 버튼을 누릅니다. 이 기술의 데모는 그림 4B 를 참조하십시오.</li>
	<li>포셉을 사용하여 호스트의 날개를 부드럽게 꼬집어 테이프에서 제거하십시오. 주인을 신선한 음식으로 새로운 바이알에 넣으십시오. 주사 후 초기 24 시간 동안 바이알을 옆으로 놓는 것이 가장 좋습니다. 각 바이알에는 최대 20 마리의 파리 만 포함되어야합니다. 참고 : 일부 숙주 파리는 주사 후 몸에 날개와 다른 상처가 없으며 바이알을 똑바로 세우면 플라이 푸드에 달라 붙을 수 있습니다.</li>
	<li>단계 5.2 내지 5.4를 반복하여 나머지 원발성 종양을 그들의 새로운 성인 숙주에 이식한다.
</li>
	<li>모세 혈관을 날카로운 용기에 넣고 장치를 상자에 다시 교체하기 전에 자동 인젝터 외부에서 미네랄 오일 잔류 물을 청소하십시오.</li>
	<li>숙주의 바이알을 실온에서 1일 동안 보관한 다음, 바이알을 29°C의 인큐베이션 챔버로 옮긴다. 비행 호스트를 2-3 일마다 새로운 바이알로 옮기십시오.</li>
	<li>매일 비행 호스트를 모니터링하고 생존율을 계산하십시오. 일주일 후, 종양은 형광 어댑터가있는 스테레오 현미경으로 볼 수 있어야하며 크기와 진행을 지속적으로 모니터링 할 수 있습니다.</li>
</ol>6. 이식된 종양의 재동종이식편
<ol><li>동종이식편 후 약 10-14일 후, 형광 현미경을 사용하여 숙주 복부에서 성장한 종양을 스크리닝한다.</li>
	<li>숙주를CO2 로 마취시키고 100 μL 슈나이더 매질로 채워진 해부 플레이트에 놓는다. 성장한 동종이식편된 종양을 두 쌍의 포셉을 사용하여 숙주 밖으로 해부한다.<ol>
<li>한 쌍의 포셉을 사용하여 복부를 누르고 다른 한 쌍은 복부 큐티클을 절개하여 동종 이식 된 종양을 노출시킵니다1.</li>
		<li>지침으로 형광 마커를 사용하여 가능한 한 많이 부착된 숙주 조직으로부터 종양을 조심스럽게 분리한다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>단계 6.2를 반복하여 2 내지 세 개의 추가적인 동종이식편된 종양을 준비한다.</li>
	<li>수확된 종양을 포함하는 해부 플레이트를 광학 현미경의 스테이지 상으로 옮긴다.</li>
	<li>멸균 바늘을 사용하고 종양을 모세관 크기에 적합한 작은 조각으로 해부하십시오.</li>
	<li>새로운 세대의 성인 숙주를 준비하기 위해 단계 4.1-4.5를 반복하고 5.1-5.7 단계를 반복하여 종양의 동종 이식을 완료하십시오. 참고: 성공률은 일반적으로 원발성 종양의 성공률과 비교하여 비원발성 종양의 경우 더 높습니다.</li>
	<li>연구에 사용 된 모든 후속 세대의 파리에 대해 6.1-6.6 단계를 반복하십시오. 참고: 실험적 요구에 적합한 초파리 숙주 라인을 선택하십시오.</li>
</ol>

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<li>Koyama, L. A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bellymount+enables+longitudinal%2C+intravital+imaging+of+abdominal+organs+and+the+gut+microbiota+in+adult+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Biology%22%5BJournal%5D)">Bellymount enables longitudinal, intravital imaging of abdominal organs and the gut microbiota in adult Drosophila.</a> PLOS Biology. 18 (1), 3000567(2020).</li>
</ol>

저자들 사이에서 선언 할 이해 상충은 없습니다.

종양 동종 이식은 연구자가 초파리 종양 성장 및 진행 중에 발생하는 특정 문제를 해결하는 데 도움이 될 수 있습니다. 그러한 도전 중 하나는 원발성 종양 배양12 동안 종양을 가진 유충 또는 성인의 조기 사망을 우회하는 것입니다. 이러한 맥락에서, 지속적인 종양 동종이식은 종양이 무기한으로 성장할 수 있게 하여, 종양 성장, 전이 및 진화에 대한 종단 연구를 용이하게 한다. 종양 동종이식은 또한 숙주-종양 상호작용7,13의 다양한 양태를 평가하는데 유용하다. 숙주 유전자형은 종양 동종이식편 전에 조작되어 종양 성장 및 이동에 대한 숙주 효과의 평가를 허용하고, 종양-유도된 악액질14,15에 대한 숙주 효과를 허용할 수 있다. 상이한 유전자형을 갖는 플라이 호스트는...

이 프로토콜은 자동 나노리터 주사 장치(예를 들어, Nanoject)를 사용하여 초파리 유충 타액선(SG) 상상 고리 종양을 성인 숙주의 복부 내로의 동종이식을 위한 단계별 지침을 제공한다. 이 프로토콜은 또한 새로운 세대의 성인 숙주로의 종양의 후속 재동종이식편에 대한 지침을 제공하며, 이는 종양 진화 및 종양-숙주 상호작용과 같은 종양 특성에 대한 지속적인 종단 연구를 위한 기회를 제공한다. 이 프로토콜은 또한 약물 스크리닝 실험에 적용될 수 있다.
이 방법은 수동 인젝터1을 사용하여 초파리에서 종양 동종 이식을 수행하는 효능을 향상시키기 위해 개발되었으며, 이는 종종 흡입 및 주사력에 일관성이 없어 종양 동종 이식에 대한 차선책의 결과를 초래합니다. 자동 인젝터 장치는 더 나은 제어를 제공하며 동종 이식 후 파리 사망률을 낮출 수 있습니다. 훈련된 작업자는 수동 인젝터를 사용했을 때 약 80%에 비해 자동 인젝터로 90% 이상의 호스트 생존율을 달성할 수 있었습니다1. 전체 종양 획득률은 동종이식편 후 8-12일째에 60%-80%이다. 평균 주입 시간도 수동 인젝터를 사용하여 비행 당 30-40 초에서 자동 인젝터를 사용하여 비행 당 20-25 초로 향상되었습니다.
이 프로토콜은 초파리 종양 동종 이식에서 자동 주입기 장치를 사용하는 처음 몇 가지 프로토콜 중 하나입니다. 최근의 한 연구는 또한 종양성 신경 줄기 세포의 동종이식을 위해 자가주입기를 사용하였다2. 이전에, 자가 인젝터 장치는 초파리 에서 박테리아 독성3, 기생충 감염 및 숙주 방어4를 연구하고 다른 화합물5의 생체 활성을 스크리닝하기 위해 사용되었습니다. 우리의 프로토콜은 종양 주사 사용을 위해 자동 인젝터 장치를 적응시키고 Drosophila 연구원에게 상당한 시간을 절약하면서 더 높은 품질과 일관된 결과를 제공하고자합니다. 이 프로토콜은 종양의 동종 이식에 사용될 수있을뿐만 아니라 유사한 구경6의 야생형 및 돌연변이 조직의 동종 이식에도 적합 할 수 있습니다.
이 프로토콜에 사용 된 초파리 NICD 종양은 SG 상상 고리 전이 구역, 높은 수준의 내인성 야누스 키나제 / 신호 변환기 및 전사 활성제 (JAK-STAT) 및 c-Jun N 말단 키나아제 (JNK) 활성을 나타내는 "종양 핫스팟"에서 Yang et al.7 에 의해 처음 도입되었습니다. 추가적으로, 전이 영역은 높은 수준의 매트릭스 메탈로프로테이나제-1 (MMP1)7을 가지며, 이는 이 영역을 특히 종양 발생에 도움이 되게 한다. NICD 과발현 단독을 통한 노치 경로 활성화는 종양 형성을 일관되게 개시하기에 충분하다. 이들 종양은 종양 세포 분열, 침윤 및 종양-숙주 상호작용을 포함하는 광범위한 주제의 조사를 허용하기 위해 후속적으로 동종이식될 수 있다.

<table><tbody><tr><td>컨포칼 레이저 스캐닝 현미경</td><td>Zeiss</td><td>LSM 980</td><td>일명 "Zeiss LSM 980</td></tr><tr><td>"옥수수 가루 플라이 푸드</td><td>블루밍턴 초파리 재고 센터</td><td>N / A</td><td>"BDSC Standard Cornmeal Food"</td></tr><tr><td>해부 바늘 (30Gx1 / 2)</td> <td>BD PrecisionGlide</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Dissection Plate</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565B</td><td></td></tr><tr><td>플라이 테이프</td><td>Fisherbrand</td><td>159015A</td><td></td></tr><tr>Stero 현미경 <td>전자 현미경 과학</td><td>SFA-UV</td><td>용 형광 어댑터</td><td>"NightSea 형광 어댑터"라고도 함</td></tr> <tr><td>형광 현미경</td><td>Zeiss</td><td>495015-0001-000</td><td>"Zeiss Stereo Discovery.V8"이라고도 함.</td></tr> <tr><td>펜치</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>11251-10</td><td>"Dumont #5 Forceps"라고도 합니다&nbsp;</td></tr><tr><td>유리 모세관 (3.5 ")</td> <td>: Drummond</td><td>3-000-203-G / X</td><td></td></tr><tr><td>접착제</td><td>Elmer</td><td>E305</td>, <td>일컬어 "Elmer Washabale Clear Glue"</td></tr><tr><td>광 현미경</td><td>: Zeiss</td><td>435063-9010-100</td>, <td>일컬어 "Zeiss Stemi 305"</td></tr><tr><td>마이크로 피펫 풀러</td><td>세계 정밀 기기</td><td>PUL-1000</td><td>일컬어 "Four Step Micropipette Puller""</td></tr><tr><td>Nanoject Apparatus</td><td>Drummond</td><td>3-000-204</td><td>일컬어 "Nanoject II Auto-Nanoliter Injector"</td></tr><tr><td>슈나이더의 매체</td><td>ThermoFisher</td><td>21720001</td><td></td></tr><tr><td>주사기 (27G x1 / 2)</td> <td>BD PrecisionGlide</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>바이알</td><td>Fisherbrand</td><td>AS507</td><td></td></tr></tbody></table>

프로그래밍 가능한 자동 나노리터 인젝터 를 사용한 초파리 멜라노가스터 에서의 종양 동종이식

Tumor Allotransplantation in Drosophila melanogaster with a Programmable Auto-Nanoliter Injector

이 프로토콜은 자동 나노리터 주사 장치를 사용하는 초파리 멜라노가스터 에서 종양의 동종이식을 기술한다. 자동 인젝터 장치를 사용하면 숙련 된 작업자가 수동 인젝터를 사용하여 얻은 것보다 더 효율적이고 일관된 이식 결과를 얻을 수 있습니다. 여기에서, 우리는 연대순으로 주제를 다룹니다 : 초파리 선의 교차에서부터 원발성 종양의 유도 및 해부, 원발성 종양을 새로운 성인 숙주로 이식하고 확장 된 연구를 위해 종양의 지속적인 세대 이식에 이르기까지. 실증으로서, 여기서 우리는 세대 이식을 위해 노치 세포내 도메인 (NICD) 과발현 유도 타액선 상상 고리 종양을 사용한다. 이들 종양은 먼저 유충 타액선 상상 고리 내의 전이 구역 미세환경에서 확실하게 유도될 수 있고, 이어서 동종이식편되고 생체내에서 배양되어 지속적인 종양 성장, 진화 및 전이를 연구할 수 있다. 이러한 동종이식 방법은 잠재적인 약물 스크리닝 프로그램뿐만 아니라 종양-숙주 상호작용을 연구하는데 유용할 수 있다.

여기에서는 나노리터 주사 자동 주입 장치를 사용하여 SG 상상 고리 종양의 세대 동종 이식을 수행하고 공초점 레이저 스캐닝 현미경으로 후속 종양 라이브 이미징을 수행하여 종양 성장, 종양 세포 이동 및 종양 - 숙주 상호 작용에 대한 주제에 대해 더 깊이 파고 들었습니다. 파리를 장착 할 때 현미경 슬라이드에 붙이고 폴리 디메틸 실록산 (PDMS) 블록11을 통해 제지하십시오.
도 5A는 동종이식 후 10일째에 성인 숙주 복부에서 성장하는 1세대 (G1) SG 상상의 고리 종양의 라이브 이미징 캡처를 특징으로 한다. 이러한 수준의 영상화는 종양 분열의 과정을 추적하는데 사용될 수 있다. 도 5B 는 동종이식 후 10일째에 숙주 복부의 많은 부분을 차지하는 6세대 (G6) SG 상상 고리 종양을...

이 프로토콜은 신생물의 다양한 측면을 연구하기 위해 초 파리 종양을 성인 숙주의 복부로 초기 및 지속적인 세대 동종 이식에 대한 자세한 지침을 제공합니다. 자동 인젝터 장치를 사용하여 연구원은 기존의 수동 방법에 의해 달성 된 것과 비교하여 향상된 효율과 종양 수율을 달성 할 수 있습니다.

This protocol describes the allotransplantation of tumors in Drosophila melanogaster using an auto-nanoliter injection apparatus. With the use of an ...

이 프로토콜은 초파리 종양 동종 이식에서 자동 주입기 장치의 사용을 설명하는 최초의 프로토콜 중 하나입니다. 최근 몇 년 동안 인기를 얻은 주제. 이 방법의 주요 장점은 종양 동종 이식의 속도, 일관성 및 수율을 향상시킴으로써 초파리에서 암 연구의 효율성을 증가시킨다는 것입니다.초파리의 종양 동종 이식은 마스터하기 어려울 수있는 섬세한 기술입니다. 인내심을 갖고 연습이 완벽하다는 것을 신뢰하십시오. 파리를 건너 섭씨 18도에서 6 일 동안 알을 배양 한 후 부화 한 유충이 들어있는 바이알을 섭씨 29도에 설정된 인큐베이터로 옮깁니다.마취 된 야생형 또는 돌연변이 성인 파리를 성별에 따라 정렬하십시오. 다섯 센티미터 길이의 플라이 테이프 조각을 현미경 슬라이드에 고정하고 끈적 끈적한면을 위로 향하게하십시오. 포셉으로 날개를 테이프에 부착하여 파리를 고정시킵니다.컨트롤러 상자와 자동 인젝터를 광학 현미경의 반대쪽에 놓습니다. 유리 모세관의 한쪽 끝을 네 단계 마이크로 피펫 풀러를 사용하여 처리하고, 이를 좁은 닫힌 단부로 가열한다. 포셉을 사용하여 모세관을 약 60도 각도로 클립하여 3.5 인치 유리 모세관을 준비하십시오.인젝터의 캡을 가볍게 풉니다. 빈 버튼을 누른 채 인젝터 바늘을 전체 길이의 70~80%가 표시될 때까지 전진시킵니다. 주사기를 사용하여 유리 모세관을 미네랄 오일로 채 웁니다.유충 중 하나를 선택하고 100 마이크로 리터의 슈나이더 배지로 채워진 해부 판으로 옮겨 SG 상상 고리 종양 해부를 준비하십시오. 한 쌍의 포셉을 사용하여 애벌레 몸체의 중간 부분을 잡고 다른 한 쌍의 포셉을 사용하여 애벌레 머리를 꼬집고 길게 스트레칭 힘을 가하십시오. 유충의 Y 자형 SG를 찾아 분리 한 다음 인접한 조직을 제거하여 SG 상상 고리 종양을 해부합니다.유리 모세관을 슈나이더 미디엄으로 채우기 버튼을 눌러 상단 0.5 센티미터 세그먼트까지 채 웁니다. 원발성 종양을 찾아 종양이 모세관으로 흡입 될 때까지 채우기 버튼을 누릅니다. 종양이 모세관의 끝 또는 모세관의 끝에서 몇 밀리미터 떨어진 곳에 있는지 확인하십시오.테이프에 고정 된 성인 파리를 찾으십시오. 그런 다음 포셉을 사용하여 하복부를 부드럽게 누르고 모세관으로 복부의 아래쪽 측면 큐티클을 관통하십시오. 종양이 새로운 숙주 복부에 들어갈 때까지 빈 버튼을 누릅니다.포셉을 사용하여 호스트의 날개를 부드럽게 꼬집어 테이프에서 제거하십시오. 그런 다음 신선한 음식으로 새 바이알에 넣으십시오. 동종이식 후 10 내지 14일 경에 형광 현미경을 사용하여 숙주 복부에서 성장한 종양을 스크린하고, 두 쌍의 포셉을 사용하여 숙주 밖으로 성장한 동종이식편된 종양을 해부한다.한 쌍의 포셉을 사용하여 복부를 누르고 다른 한 쌍은 복부 큐티클을 절개하여 동종 이식 된 종양을 노출시킵니다. 부착된 숙주 조직으로부터 종양을 조심스럽게 분리한다. 멸균 바늘을 사용하고 종양을 모세관 크기에 적합한 작은 조각으로 해부하십시오.새로운 세대의 성인 숙주가 종양의 동종 이식을 완료하기 위해이 과정을 반복하십시오. 종양 발달 과정은 동종이식 후 10일째에 성인 숙주 복부에서 성장하는 1세대 SG 상상 고리 종양의 라이브 이미징에 의해 추적되었다. 6세대 SG 상상 고리 종양이 10일째에 숙주 복부의 많은 부분을 차지하고, 동종이식 후 여기에 도시되어 있다.이 단계에서의 이미징은 종양 성장 패턴뿐만 아니라 이동 및 침윤 행동을 밝히는 데 도움이 될 수 있습니다. 종양 이식은 종양 진행, 진화 및 전이에 대한 종단 연구를위한 훌륭한 기술입니다. 종양 숙주 상호작용을 연구하는 데 매우 중요한 결과.이 프로토는 Temodal 약물을 사용하는 암 약물 스크리닝에서 큰 잠재력을 가지고 있습니다. 이 기술을 사용하면 연구원은 조사에서 상당한 시간과 노력을 절약 할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

우리는 조류 배아 모델 동적, 실시간 intravital 이미지를 사용하여 인간의 xenografted 종양의 vasculature에 nanoparticle의 국제화를 수치 소설 접근법을 제시한다.

Intravital 이미징을 사용하여 실시간으로 종양의 Nanoparticle의 이해 평가

RAS V12 및 남겼, 종양 세포는 또한 침략적인 행동을 표시 초파리에있는 종양의 성장 결과와 같은 세포 극성 유전자의 돌연변이와 같은 활성화 된 발암 유전자 간의 협력. 여기에 양성 및 침입 종양의 유도 및 관찰을위한 간단한 프로토콜을 제시한다.

의 두부 컴플렉스 유전 유도하고 양성 및 침윤성 종양의 시각화를위한 프로토콜<em&gt; 초파리</em

이 프로토콜은 초파리의 눈 / 더듬이 가상적인 디스크 (EAD에게)에서 형광 표시, 유 전적으로 정의 클론 종양을 생성하는 방법을 보여줍니다. 그것은 세 번째 령 유충과 방법을 시각화하고 유전자 발현 변화와 종양 침입을 정량화를 처리하는 방법에서 EAD 뇌를 해부하는 방법에 대해 설명합니다.

그만큼<em&gt; 초파리</em&gt; 가상적인 디스크 종양 모델 : 유전 모자이크를 사용하여 유전자 발현 및 종양 침윤의 시각화 및 정량화

암 세포의 이식은 암 기전과 치료 반응의 확인에 중요한 도구입니다. 현재의 기술은 면역 기능이없는 동물에 달려 있습니다. 여기, 우리는 종양 세포 행동과 생체 내 약물 반응의 장기 분석을위한 면역 능력이있는 배아에 zebrafish 종양 세포를 이식하는 방법을 설명합니다.

종양 세포의 행동과 약물 반응에 대한 장기 연구를 위해 면역 능력이있는 숙주 내로 Zebrafish Pediatric Brain 종양을 이식

이 방법의 목적은 형광표지된 혈관이 있는 제브라피시 배아로 포유류 종양 세포를 이종이식에 이식함으로써 종양 혈관신생의 생체 내 모델을 생성하는 것이다. 이종이식 및 관련 혈관을 이미징함으로써, 혈관신생 반응의 정량적 측정을 얻을 수 있다.

제브라피시 종양 이종이식에서 숙주 혈관조형성 반응의 생체 내 이미징 및 정량화

초파리 멜라노가스터 성인 파리는 숙주 항미생물 선천적 면역 반응 및 미생물 감염 전략의 기초가 되는 분자 메커니즘을 조사하기 위한 모델 유기체로서 광범위하게 활용되고 있다. D. melanogaster 유충 단계를 추가 또는 대안 모델 시스템으로서 촉진하기 위해, 애벌레 주입 기술이 기술된다.

초파리 멜라노가스터 유충 주입 프로토콜

우리는 간단하고 빠른 병기 결정 방법으로 최적화된 투명한 제브라피시 배아의 난황에 이종 이식을 위한 프로토콜을 설명합니다. 주입 후 분석에는 생존 및 유세포 분석을 통한 이종 이식 세포의 질병 부담 평가가 포함됩니다.

투명 제브라피시 배아에서 종양 이종 이식 분석을 위한 간단하고 빠르며 효과적인 방법

이 논문은 초파리의 phiC31 인테그라제 매개 형질전환효소를 예로 들어 형질전환파리를 생성하기 위한 중요한 단계인 배아 미세주입에 최적화된 프로토콜을 제시합니다.

초파리의 형질전환을 위한 배아 미세주입

여기에서는 최첨단 로봇 주입 시스템을 사용하여 제브라피쉬 유충에 자동화된 종양 이종이식편을 이식하기 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다. 또한 시스템의 성공적인 성능을 보여주는 주입 비디오와 검증 데이터를 제시합니다.

암 연구 및 의학을 위한 제브라피쉬 유충의 종양 이식 자동화

이 프로토콜은 전사 인자 PU.1, IRF8 및 BATF3의 강제 발현을 통해 마우스 암세포를 종양 미세 환경 내에서 유형 1 수지상 유사 세포로 생 체 내 재프로그래밍하는 것을 설명합니다.

종양 세포를 제1형 기존의 수지상 세포 유사 세포로 다루기 쉬운 생체 내 재프로그래밍

종양 내 면역치료에 대한 관심이 높아짐에 따라, 접근 가능하고 실용적인 종양 모델을 선택하는 것이 필수적입니다. 피하 종양은 쉽게 진단할 수 있지만, 시각화하고 조작하는 것은 어렵습니다. 이 프로토콜에서는 가시성과 접근성을 높이는 피내종양을 생성하는 방법을 설명합니다.

생쥐암 종양 내 면역치료 연구의 강력한 모델로서의 피내종양 이식

배우세요 Drosophila melanogaster에서 자동 나노리터 인젝터를 활용한 종양 동종이식 방법으로, 연구 효율성과 종양 수율을 높여 암 연구의 신뢰성을 향상시킵니다.

프로그래밍 가능한 자동 나노리터 인젝터 를 사용한 초파리 멜라노가스터 에서의 종양 동종이식

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