Name: 인간 골격 근육 미세 조직에서 골격 근육 건강의 기능 메트릭 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: 배우세요 인간 골격 근육 미세 조직에서 수축력과 칼슘 신호를 반복 측정하는 방법을 MyoTACTIC 플랫폼을 활용하여. 이 기술은 근육 기능 연구와 질병 모델링에 적합합니다.

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우리는 모하마드 아프샤르, 하벤 아브라하, 모센 아프샤르-바쿠쉬리, 사데다부디에게 MyoTACTIC 문화 플랫폼의 발명에 기여하고 여기에 설명된 제조 및 분석 방법을 확립해 주셔서 감사합니다. HL은 오르간 온-칩 엔지니어링 및 기업가 정신 장학금 및 토론토 와일드캣 대학 졸업생 장학금의 자연 과학 및 공학 연구 위원회 (NSERC) 교육 프로그램에서 자금을 받았다. PMG는 내인성 수리에 있는 캐나다 연구 의자이고 재생 의학을 위한 온타리오 연구소, 줄기 세포 네트워크 및 디자인에 의하여 의학에서 이 연구 결과에 대한 지원을 수신했습니다, 캐나다 첫번째 연구 우수성 프로그램. 회로도 는 BioRender.com 함께 만들어졌습니다.

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<li>Urciuolo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+a+3D+in+vitro+model+of+human+skeletal+muscle+at+the+single+fiber+scale%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Engineering a 3D in vitro model of human skeletal muscle at the single fiber scale.</a> PLoS One. 15 (5), 0232081(2020).</li>
<li>Cvetkovic, C., Rich, M. H., Raman, R., Kong, H., Bashir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+3D-printed+platform+for+modular+neuromuscular+motor+units%5BTitle%5D)+AND+%22Microsystems+%26+Nanoengineering%22%5BJournal%5D)">A 3D-printed platform for modular neuromuscular motor units.</a> Microsystems & Nanoengineering. 3 (1), 1-9 (2017).</li>
<li>Shima, A., Morimoto, Y., Sweeney, H. L., Takeuchi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+contractile+muscle+tissue+consisting+of+human+skeletal+myocyte+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional contractile muscle tissue consisting of human skeletal myocyte cell line.</a> Experimental Cell Research. 370 (1), 168-173 (2018).</li>
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<li>Gholobova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+tissue-engineered+skeletal+muscle%3A+a+novel+3D+in+vitro+model+for+drug+disposition+and+toxicity+after+intramuscular+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Human tissue-engineered skeletal muscle: a novel 3D in vitro model for drug disposition and toxicity after intramuscular injection.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1-14 (2018).</li>
<li>Osaki, T., Uzel, S. G. M., Kamm, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microphysiological+3D+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29+from+human+iPS-derived+muscle+cells+and+optogenetic+motor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Microphysiological 3D model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS) from human iPS-derived muscle cells and optogenetic motor neurons.</a> Science Advances. 4 (10), 5847(2018).</li>
<li>Rao, L., Qian, Y., Khodabukus, A., Ribar, T., Bursac, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+human+pluripotent+stem+cells+into+a+functional+skeletal+muscle+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Engineering human pluripotent stem cells into a functional skeletal muscle tissue.</a> Nature Communications. 9 (1), (2018).</li>
<li>Maffioletti, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+human+iPSC-derived+artificial+skeletal+muscles+model+muscular+dystrophies+and+enable+multilineage+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional human iPSC-derived artificial skeletal muscles model muscular dystrophies and enable multilineage tissue engineering.</a> Cell Reports. 23 (3), 899-908 (2018).</li>
<li>Chal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+muscle+fibers+and+satellite-like+cells+from+human+pluripotent+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Generation of human muscle fibers and satellite-like cells from human pluripotent stem cells in vitro.</a> Nature Protocols. 11 (10), 1833-1850 (2016).</li>
<li>Khodabukus, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+stimulation+increases+hypertrophy+and+metabolic+flux+in+tissue-engineered+human+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Electrical stimulation increases hypertrophy and metabolic flux in tissue-engineered human skeletal muscle.</a> Biomaterials. 198, 259-269 (2019).</li>
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<li>Bakooshli, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+3D+model+of+human+skeletal+muscle+innervated+with+stem+cell-derived+motor+neurons+enables+epsilon-subunit+targeted+myasthenic+syndrome+studies%5BTitle%5D)+AND+%22BioRxiv%22%5BJournal%5D)">A 3D model of human skeletal muscle innervated with stem cell-derived motor neurons enables epsilon-subunit targeted myasthenic syndrome studies.</a> BioRxiv. , 275545(2018).</li>
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<li>Bell, E., Ivarsson, B., Merrill, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+a+tissue-like+structure+by+contraction+of+collagen+lattices+by+human+fibroblasts+of+different+proliferative+potential+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Production of a tissue-like structure by contraction of collagen lattices by human fibroblasts of different proliferative potential in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 76 (3), 1274-1278 (1979).</li>
<li>Hinds, S., Bian, W., Dennis, R. G., Bursac, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+extracellular+matrix+composition+in+structure+and+function+of+bioengineered+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The role of extracellular matrix composition in structure and function of bioengineered skeletal muscle.</a> Biomaterials. 32 (14), 3575-3583 (2011).</li>
</ol>

저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.

이 원고는 기본 근육 생물학, 질병 모델링 또는 후보 분자 테스트에 적용할 수 있는 3D hMMT 배양 모델을 제조하고 분석하는 방법을 설명합니다. MyoTACTIC 플랫폼은 비용 친화적이고 제조가 용이하며 골격 근육 미세 조직을 생산하기 위해 상대적으로 적은 수의 세포가 필요합니다. 근로전술 배양 플랫폼 내에 형성된 hMMT는 정렬, 다핵, 및 축소된 심포우로 구성되며, 수축을 유발하는 칼슘 과도를 시동하여 전기 자극에 반응한다(그림2, 도 3, 도 4). 이전 연구는 hMMTs생화학 자극에 유사한 반응을 제공하고 더 큰 형식3D 골격 근육 모델12,30에보고된 것과 일치하는 성숙 수준에 도달할 수 있다는 것을 보여주었습니다.
<p class="jove_co...

골격 근은 인체에서 가장 풍부한 조직 중 하나이며 운동, 열 항상성 및 신진 대사1과같은 주요 신체 기능을 지원합니다. 역사적으로, 동물 모델 및 2차원(2D) 세포 배양 시스템은 생물학적 과정및 질병 병인을 연구하고, 골격 근질환 의 치료에 약리학적 화합물을 테스트하는 데 사용되어왔다2,3. 동물 모델은 건강과 질병에 있는 골격 근육에 대한 우리의 지식을 크게 향상시켰지만, 그들의 번역 영향은 높은 비용, 윤리적 고려 사항 및 종 간 차이2,4에의해 방해되었습니다. 골격 근육을 연구하기 위해 인간 세포 기반 시스템으로 전환할 때, 2D 세포 배양 시스템은 단순성 때문에 유리합니다. 그러나 제한사항이 있습니다. 이 형식은 종종 신체5,6내에서 자연적으로 발생하는 세포 세포 및 세포 외 세포 매트릭스 상호 작용을 다시 수적으로 회수하지 못합니다. 지난 몇 년 동안, 3차원(3D) 골격 근 모델은 생리학적 및 병리학적으로 관련된 과정의 모델링을 허용함으로써 전체 동물 모델 및 종래의 2D 배양 시스템에 대한 강력한 대안으로 등장하였다7,8. 실제로, 연구의 과다 바이오 인공 3D 배양 포맷1에서인간의 골격 근육을 모델링하는 전략을보고했다. 이러한 연구의 많은 한 가지 제한은 활성 힘이 배양 플랫폼에서 근육 조직을 제거하고 힘 변환기에 부착한 후 정량화되어 있으며, 이는파괴적이고 따라서 종점 분석9,10,12,13,14,15,16,17,18로 봉사하는 것으로 제한된다. ,19,20,21. 다른 사람들은 활성력을 측정하는 비침습적 방법을 허용하는 배양 시스템을 설계했지만, 모두 고함량 분자 테스트 응용 프로그램7,8,9,10,14,18,22,23,24,25,26,27, 27, 28에적합합니다. ,29.
이 프로토콜은 골격 근육 (Myo) 마이크로 조직 배열 편차 대한 조사를 위해 인간 근육 미세 조직 (hMMTs)을 제조하는 상세한 방법을 설명 (MyoTACTIC) 플랫폼; 3D 골격 근 미세조직(30)의벌크 생산을 지원하는 96개의 웰 플레이트 장치. 근로전술 플레이트 제조 방법은 96개의 잘 된 폴리디메틸실록산(PDMS) 배양판과 모든 상응하는 음피성을 단일 주조 단계에서 가능하게 하며, 이에 따라 각각의 우물은 미세 조직 형성을 위해 상대적으로 적은 수의 세포가 필요하다. 근로전술 내에서 형성된 미세조직은 장치의 우물에서 잘 에서 재현할 수 있는 정렬, striated 및 다핵근구를 포함하고, 성숙시, 시투30에서화학 및 전기 자극에 반응할 수 있다. 본 명세서에서, 폴리우레탄(PU) 복제본으로부터 PDMS 근구배양판 장치를 제조하는 기술은, hMMT를 제조하기 위해 불멸의 인간 근생 전조세포를 구현하는 최적화된 방법, 그리고 엔지니어링된 hMMT 력 생성 및 칼슘 취급 특성의 기능적 평가를 설명하고 논의한다.

<table><tbody><tr><td>0.9% 식염수, Sterile</td><td>House Brand</td><td>1010</td><td>용액의 10mL 분취액은 4°C에서 만들어지고 보관됩니다. C</td></tr><tr><td>25G 바늘</td><td>BD, Medstore, 토론토 대학</td><td>2548-CABD305127</td><td></td></tr><tr><td>6-Aminocaproic Acid, &ge; 99%(적정), 분말</td><td>시그마 - Aldrich</td><td>A2504-100G</td><td>50mg/mL 원액은 6-아미노카프로산 분말 5mg을 100mL의 오토클레이브 증류수에 용해시켜 생성됩니다. 용액은 진공 여과되고 10mL 분취액은 4°C에서 저장됩니다. C</td></tr><tr><td>6.35 mm ID 튜빙</td><td>VWR</td><td>60985-528</td><td></td></tr><tr><td>AB1167 Myoblast Cell Line</td><td>Institut de Myologie (Paris, France)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Arbitrary Waveform Generator</td><td>Rigol</td><td>DG1022Z</td><td></td></tr><tr><td>Basement Membrane Extract (Geltrex)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A14132-02</td><td>50 &micro의 부분 표본으로 저장됨; L 또는 100 & 마이크로; -80&deg에서 L; C</td></tr><tr><td>벤치탑 진공 챔버</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>D2672</td><td></td></tr><tr><td>BNC에서 알리게이터 클립 케이블</td><td></td><td></td><td>로 아마존</td></tr><tr><td>컬처 플라스틱</td><td>사르스테트</td><td></td>에서 주문한 제품 <td>배양 플레이트, 혈청학적 피펫 등이 포함되어 있습니다</td></tr>. <tr><td>디메틸 설폭사이드</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>D8418-250ML</td><td></td></tr><tr><td>DPBS, 분말, 칼슘 없음, 마그네슘 없음</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>21600069 Dulbecco의 수정된 독수리 매체 (DMEM) (1X)</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td>이것은 L-글루타민과 나트륨 피루브산이 포함된 고포도당 DMEM입니다</td></tr>. <tr><td>소의 태아 혈청</td><td>Fisher Scientific</td><td>10437028</td><td></td></tr><tr><td>소의 피브리노겐</td> 추출물입니다. <td>시그마 - 알드리치</td><td>F8630-5G</td><td>7 - 10 mg의 피브리노겐 분말이 만들어지고 저장됩니다; -20°C에서 저장됩니다; C</td></tr><tr><td>Filtropur 주사기 필터, 0.22um 기공 크기</td><td>Sarstedt</td><td>83.1826.001</td><td></td></tr><tr><td>Horse Serum</td><td>Gibco</td><td>16050-122</td><td></td></tr><tr><td>인간 재조합 인슐린</td><td>시그마 - Aldrich</td><td>91077C</td><td>원액은 100X이며 1 mg의 인간 재조합 인슐린을 1 mL의 DMEM과 1 &micro에 용해시켜 만듭니다. NaOH 10N의 L. 용액을 여과하여 4°°C에서 1mL 분취량으로 저장합니다. C</td></tr><tr><td>이미지 수집 소프트웨어</td><td>Olympus</td><td>cellSens Dimension</td><td></td></tr><tr><td>이미지 처리 소프트웨어</td><td>미국 국립보건원(National Institutes of Health</td>) <td>ImageJ</td><td></td></tr><tr><td>Isotemp 오븐</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>201</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>올림푸스</td><td>IX83</td><td></td></tr><tr><td>현미경 - 카메라 마운트</td><td>Labcam</td><td>iPhone용 Labcam</td><td>Amazon에서 주문</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(10,000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 일회용 주사기, 1cc</td><td>BD</td><td>2606-309659</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 일회용 주사기, 50cc</td><td>BD</td><td>2612-309653</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127, 분말, 바이오시약</td><td>시그마 - Aldrich</td><td>P2443-250G</td><td>플루론산의 5% 원액은 플루론산 분말 5g을 100mL의 냉각수, 오토클레이브, 증류수에 용해시켜 만듭니다. 용액은 진공 여과되고 10mL 분취액은 4°C에서 저장됩니다. C</td></tr><tr><td>폴리디메틸실록산(Sylgard 184 실리콘 엘라스토머 키트)</td><td>Dow</td><td>4019862</td><td>키트는 Thermo Fisher Scientific, Sigma - Aldrich 등에서도 구입할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>폴리우레탄 네거티브 몰드</td><td>인 하우스</td><td></td><td></td></tr><tr><td>이형제</td><td>Mann Release Technologies</td><td>200</td><td></td></tr><tr><td>로터리 베인 진공 펌프</td><td>Edwards</td><td>A65401906</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>Almedic, Medstore, University of Toronto</td><td>2586-M36-0100</td><td></td></tr><tr><td>Single Edge Razor Blade</td><td>VWR</td><td>55411-050</td><td></td></tr><tr><td>골격근 세포 기저 Medium</td><td>Promocell</td><td>C-23260</td><td>30 mL 분취물이 생성되어 4°C에 보관됩니다.</td></tr><tr><td>골격근 세포 성장 배지 (즉시 사용 가능)</td><td>Promocell</td><td>C-23060</td><td>42 mL 분취량은 4°C에서 생성 및 보관됩니다.</td></tr><tr><td>스마트폰 (iPhone)</td><td>Apple</td><td>SE</td><td></td></tr><tr><td>Standard Duty Dry Vacuum Pump</td><td>Welch</td><td>2546B-01</td><td></td></tr><tr><td>살균 백</td><td>Alliance</td><td>211-SCM2</td><td></td></tr><tr><td>Thimble</td><td>Igege</td><td></td><td>아마존</td></tr><tr><td>트롬빈에서 주문한 인간 플라즈마</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>T6884-250UN</td><td>100 단위의 트롬빈이 0.1% BSA 용액 1mL에 용해됩니다. 10 & 마이크로; L 분취량은 -20°C에서 준비 및 보관됩니다.</td></tr>아마존 <tr><td>트리판 블루 솔루션, 0.4%</td><td>Thermo Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA, 0.25%</td><td>Thermo FIsher Scientific</td><td>25200072</td> 진공 챔버 2 SP Bel-Art F42027-0000에서 주문한 주석 코팅 구리선 Arco B8871K48 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

인간 골격 근육 미세 조직에서 골격 근육 건강의 기능 메트릭 평가

Assessing Functional Metrics of Skeletal Muscle Health in Human Skeletal Muscle Microtissues

골격 근의 체외 모델에서 3차원 (3D)은 골격 근육 개혁을 연구하고 실험 적 조작에 적합한 확장 가능한 형식으로 기능을 할 수있는 기회를 제공함에 따라 생체 의학 연구에서 귀중한 발전입니다. 3D 근육 배양 시스템은 과학자들이 인간 세포의 맥락에서 골격 근 ex vivo를 연구할 수 있게 해 주도록 하는 것이 바람직합니다. 체외 모델에서 3D는 성인 골격 근의 기본 조직 구조의 측면을 밀접하게 모방합니다. 그러나 보편적 인 응용 프로그램은 조작, 비용 및 사용자 친화적 인 플랫폼의 가용성에 의해 제한되며 상대적으로 많은 양의 인간 골격 근육 조직을 산출합니다. 또한, 골격 근은 많은 질병 상태에서 시간이 지남에 따라 손상되는 중요한 기능적 역할을 하기 때문에, 미세 조직 연구를 위한 실험 플랫폼은 최소침습칼슘 과도 및 수축력 측정이 플랫폼 자체 내에서 직접 수행될 수 있을 때 가장 실용적입니다. 본 프로토콜에서, 'MyoTACTIC'로 알려진 96웰 플랫폼의 제조, 3D 인간 골격 근육 미세 조직(hMMTs)의 대량 생산이 설명된다. 또한, 시간이 지남에 따라 각 미세 조직의 골격 근육력 및 칼슘 처리의 반복적인 측정을 가능하게 하는 전기 자극의 최소 침습적 적용 방법을 보고한다.

여기에 설명된 방법은 PU 금형으로부터 96웰 PDMS 기반 MyoTACTIC 배양 플랫폼을 캐스팅하고, hMMT 복제 조직의 배열을 제조하고, 배양 장치-힘 생성 및 칼슘 취급 내의 hMMT 기능의 두 가지 측면을 분석하는 방법이다. 도 1은 hMMT 시드 전에 근로식 문화 우물의 준비에 대한 회로도 개요를 제공합니다. PDMS는 널리 사용되는 실리콘 계 폴리머로, 복잡한장치(32)를생성하기 위해 쉽게 성형할 수 있다. PDMS 기반 프로토콜은 제조 된 음의 PU 금형(30)에서96 웰 배양 장치의 무제한 수를 캐스팅하도록 설계되었습니다. 최종 경화 PDMS 양수 플레이트는 유연하며 단일 엣지 면도날(그림1)을지원하여 소형 기능 성 장치로 쉽게 절단할 수 있습니다. 이를 통해 사용자는 실험 설계와 관련된 hMMT 복제본 요구 사항을 충족...

이 원고는 수축력 및 칼슘 취급 분석을 포함하여 기능분석에서 3D 인간 골격 근 미세 조직 및 최소 침습 다운스트림의 배열을 생성하는 상세한 프로토콜을 설명합니다.

Three-dimensional (3D) in vitro models of skeletal muscle are a valuable advancement in biomedical research as they afford the opportunity to study ...

우리의 프로토콜은 3D 인간 골격 근육 미세 조직 배양을 제조하고 분석하는 상세한 방법을 설명합니다. 근육 미세 조직은 기본적인 근육 생물학의 연구, 질병 모델링, 또는 후보 분자 테스트에 적용 될 수있다. 이 기술의 주요 장점은 수축력과 칼슘 과도의 시차 평가를 허용한다는 것입니다.이 때문에 근육 조직 기능에 대한 종방향 연구를 수행 할 수 있습니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 대학원생 인 브레넨 머스그레이브와 헤타 라드가 될 것입니다. 세포 파종 2~3시간 전에 6개의 잘 온화한 전술 플레이트 부분을 10센티미터 세포 배양 접시에 넣습니다.5%의 피루론 F-127 용액의 100마이크로리터를 추가하여 각 개별 근문 문화를 잘 준비한다. 뚜껑을 사용하여 우물을 덮고 파라핀 필름을 바르면 접시를 밀봉합니다. 접시 스피너 어댑터가 장착된 원심분리기에서 1, 550회 G로 접시를 원심분리합니다.세포가 파종 할 준비가 될 때까지 배양 접시를 섭씨 4도에 보관하십시오. 그런 다음 지하 멤브레인 추출물의 150 마이크로리터 알리쿼트와 문화 후드의 얼음에 혈소판 알리쿼트 110을 천천히 해동합니다. 세포 배양 후드에서 작업, 추가 700 0.9% 식염수 용액의 마이크로 리터 1.5 분말 피브리노겐의 7 밀리 그램을 포함 하는 1.5 밀리 리터 마이크로 원심 분리 기 튜브.튜브를 섭씨 37도 세포 배양 인큐베이터에 3~5분간 영양없이 놓습니다. 튜브를 부드럽게 제거하고 플릭한 다음 펄스는 용존 솔루션을 마이크로 원심분리기로 스핀한 다음 배양 후드로 되돌게 됩니다. 0.22 마이크로미터 주사기 필터가 장착된 1밀리리터 주사기를 사용하여 피브리노젠 용액을 필터링합니다.그런 다음 용존 피브리노겐 용액을 지하 막 추출물 및 트롬빈 알리쿼트와 함께 얼음으로 옮기습니다. 조직 을 시드 한 후 문화 우물에 소개 될 37 섭씨에서 조직 성장 미디어를 준비하고 미리 따뜻하게하십시오. 인큐베이터에서 세포 배양 판을 제거하고 배양 매체를 흡인한다.그런 다음 각 배양 판에 DPBS의 5 밀리리터를 추가하여 세포를 한 번 씻으시다. DPBS를 흡인하고 각 배양 접시에 0.25%의 트립신 EDTA1밀리리터를 추가하여 세포를 분리합니다. 3 분 동안 세포 배양 인큐베이터에 접시를 놓고 배양 접시에 세척 매체의 3 밀리리터를 추가하여 트립신을 잡고 적절한 크기의 원추형 튜브로 세포를 옮김시합니다.10 분 동안 400 회 G에서 원심 분리하여 세

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

절연 골격근의 묘 - 기계 분석

이 프로토콜은 시험 관내에서 근육 세포의 수축력을 측정하기위한 유연한 배양 표면과 같은 실리콘 마이크로 캔틸레버의 사용을 설명한다. 셀룰러 수축 측정 기록하고, 시험 관내에서 수축력을 측정하는 비 침습적이고 확장 가능한 시스템을 제공하고, 힘의 판독 값으로 변환 할 수 외팔보 굽힘을 야기.

마이크로 실리콘 캔틸레버의 이용은 세포 수축 기능을 평가하기 위해 체외

이 프로토콜은 성인과 노인의 골격 근육에서 분리 및 근원 세포의 전구 세포의 문화의 강력한 재현하고 간단한 방법을 설명합니다. 여기에 사용되는 근육은 발과 다리 근육을 포함한다. 이 방법은 기능 연구를위한 주요 근육 아세포의 풍부한 인구의 분리를 할 수 있습니다.

성인 및 노인 인간의 골격 근육에서 근육 조직 전구체 세포 / 차 근육 아세포의 준비 및 문화

쥐 골격 근육 수축 기능의 측정 치료 개입의 효능 뿐만 아니라 질병의 진행을 추적 하는 데 사용할 수 있는 유용한 도구입니다. 여기 같은 마우스에서 시간이 지남에 따라 반복 될 수 dorsiflexor 근육의 비-침략 적, vivo에서 평가 설명 합니다.

비-침략 적 쥐에서 Dorsiflexor 근육 기능 평가

이 기술 보고서는 섬유 손상을 제한하는 근육 티비알리스 전방의 생검을 위한 수정된 Bergström 기술의 변형을 설명합니다.

기계적 평가를 위한 인간 근육 티비아리스 전방의 우수한 구획에서 골격 근육 생검 의 컬렉션

무릎 근간근의 정량화는 노화, 질병, 부상 및 재활에 대한 기능적 적응을 이해하는 것이 필수적입니다. 생체 무릎 확장 이소메트릭 피크 파타닉 토크에서 반복적으로 측정하는 새로운 방법을 제시합니다.

마우스에서 무릎 엑스텐서 근육 기능의 생체 측정

이 프로토콜에서 근육 줄기 세포에 대한 체외 배양 및 기능 분석 방법이 설명되어 있어 내인성 틈새 시장을 통해 대부분의 상호 작용을 보존합니다.

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이 프로토콜은 3D 엔지니어링된 심장 및 골격근 조직을 생성하는 방법을 제공하고 전임상 약물 스크리닝 양식에서의 사용을 설명합니다. 설명된 방법은 자기 감지 시스템을 사용하여 24개의 조직을 동시에 동시에 평가할 수 있습니다.

확장 가능한 3D 엔지니어링 근육 조직의 전임상 약물 테스트

우리는 성인 마우스의 6개 근육에서 다양한 길이와 유형의 효소로 해리된 섬유를 얻기 위한 프로토콜을 설명합니다: 그 중 3개는 이미 설명되었고(flexor digitorum brevis, extensor digitorum longus, soleus) 그 중 3개는 처음으로 성공적으로 해리되었습니다(extensor hallucis longus, peroneus longus, peroneus digiti quarti).

생쥐의 6개 뒷다리 근육의 효소 해리로 얻은 온전한 짧은, 중간 및 긴 골격근 섬유: Beyond Flexor Digitorum Brevis

여기에서는 인간 또는 생쥐 근육의 신선한 투과화된 골격근 섬유에서 미토콘드리아 산화 인산화를 측정하는 포괄적인 방법을 설명합니다. 이 방법을 사용하면 미토콘드리아 호흡을 실시간으로 정량화하고 연료 선호도 및 대사 유연성을 평가하는 동시에 기존 미토콘드리아 네트워크와 멤브레인 무결성을 유지할 수 있습니다.

고분해능 호흡 측정법을 통한 인간 및 생쥐 골격근 섬유의 미토콘드리아 호흡 측정

이 프로토콜은 마이크로 컴퓨터 단층촬영을 사용하여 작은 동물의 골격근 및 내장 조직, 지방 조직 및 골격 조직을 포함한 제지방량을 비용 효율적으로 정량화할 수 있습니다. 이는 제지방 조직과 지방 조직을 구분하며, 이는 생물 의학 연구, 특히 작은 동물을 대상으로 한 중개 연구에 상당한 이점을 제공합니다.

Micro-Computed Tomography를 사용한 소형 동물의 비침습적 골격근 정량화

배우세요 인간 골격 근육 미세 조직에서 수축력과 칼슘 신호를 반복 측정하는 방법을 MyoTACTIC 플랫폼을 활용하여. 이 기술은 근육 기능 연구와 질병 모델링에 적합합니다.

인간 골격 근육 미세 조직에서 골격 근육 건강의 기능 메트릭 평가

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