꿀벌 여왕을 짝짓기하는 농약적 위험 평가

이 프로토콜은 농약이 꿀벌(아피스 멜라이프라)재생에 미치는 이해를 향상시키기 위해 개발되었으며, 꿀벌 여왕과 그 노동자 관리인을 통제 된 실험실 환경에서 농약에 노출시키는 방법을 확립하고 관련 반응을 주의 깊게 모니터링합니다.

농약 노출은 꿀벌 식민지의 모든 구성원에 큰 영향을 미칠 수 있습니다, 가장 중요한 회원을 포함, 여왕. 하지만 최근까지, 몇 가지 도구 이러한 효과 공부사용할 수 있다. 이 기술을 통해 연구자들은 현장에서 경험할 수 있는 조건을 시뮬레이션하는 통제된 조건하에서 여왕을 농약에 노출시킬 수 있습니다.

꿀벌 여왕 계란 누워 행동을 방해하는 것은 매우 쉽기 때문에 실험 전과 중에 근로자와 여왕을 다룰 때주의하는 것이 중요합니다. 이러한 절차를 시연하는 것은, 에이미 플로이드와 엘리자 Litsey, 침략적인 종 및 꽃가루 건강 연구 단위, 꿀벌 연구 실험실에 실험실 기술자가 될 것입니다. 먼저, 여왕 모니터링 케이지, 또는 QMC를 조립, 문 패널을 삽입하여, 다음 먹이 챔버 를 통해 먹이 챔버 문에 여왕 제외를 삽입, 입력하고 치료 된 다이어트에 연락에서 여왕을 유지합니다.

단일 ELP를 삽입합니다. 작업자가 케이지에 추가 될 때까지 피더 튜브를 추가하고 실험실 등급 테이프로 4 개의 피더 구멍을 일시적으로 덮지 마십시오. 꿀벌 식민지에서 덮인 작업자 무리가 들어있는 왁스 빗 프레임을 수집하고 배양 한 후, 닫힌 꿀벌을 곤충 장벽 페인트가 늘어선 열린 용기로 닦아 꿀벌이 기어 나가는 것을 방지합니다.

각 QMC의 계란 누워 챔버에 무게로 적어도 50 벌을 추가합니다. 다양한 유전 풀이 도입되도록, 적어도 세 개의 식민지에서 작업자 꿀벌의 유사한 수를 얻고, QMC에 꿀벌을 추가하기 전에 혼합 할 수 있습니다.

영수증 48시간 이내에 상업용 육종가에서 구입한 여왕을 사용하십시오. 여왕이 여전히 배송 케이지 안에 있는 동안, 투명 한 비닐 봉지에 놓습니다. 그런 다음 이산화탄소 가스 통에 연결된 플라스틱 튜브의 한쪽 끝을 가방 내부에 놓고 캐니스터 밸브를 부드럽게 열어 이산화탄소 가스가 흐를 수 있도록 합니다.

가방이 가스로 팽창하면 캐니스터 밸브를 닫고 가방을 닫아 가스내부를 가두세요. 30초 동안 또는 여왕이 움직이지 멈출 때까지 가방을 닫아 두십시오. 여왕이 의식이 없는 것으로 관찰되면 선적 케이지를 열어 여왕을 제거하십시오.

알을 놓는 방문을 부분적으로 열고 의식이 없는 여왕을 부드럽게 안에 놓고 뚜껑을 닫습니다. 각 QMC에 두 번째 ELP를 추가합니다. 두 개의 ELP 상단에 실험실 테이프를 배치하여 QMC 프레임에서 분리되지 않도록 하고 작업자가 케이지를 빠져나가는 것을 방지합니다.

케이지는 섭씨 34~35도, 상대 습도 50~70%의 안정적인 환경 조건을 가진 어두운 인큐베이터에 배치합니다. 농약으로 엮인 식단을 관리하기 위해 아세톤과 같은 적절한 용매로 농약의 스톡 솔루션을 준비하여 섭취화학의 바람직한 최종 농도를 달성할 수 있는 농도로 준비한다. 자당 용액, 상업용 꽃가루 보충제 또는 둘 다에서 농약 적 치료를 투여하십시오.

냉장 또는 실온, 50% 자당 용액에 적당한 양의 스톡 솔루션을 추가하여 같은 날 실험식단을 준비한다. 중간 속도로 소용돌이에 의해 철저하게 혼합. 꽃가루 보충제의 경우, 자당 용액에 농약 스톡 솔루션의 계산 된 금액을 추가하고 분말 보충에 추가하기 전에 철저하게 소용돌이.

식이 요법을 피더 튜브에 추가하고 QMC에 넣기 전에 피더 가중치를 기록하십시오. 계란 누워를 정량화하려면 인큐베이터에서 QMC를 제거하여 시작합니다. 명확한 ELP의 뒷면을 검사하고, 계란이 있는 경우 관심 있는 접시 앞의 문 패널을 제거합니다.

ELP 를 가로질러 테이프를 제거하고 ELP와 QMC 내부의 꿀벌 사이에 문 패널을 밉니다. 도어 패널을 제자리에 두고 ELP를 제거하고 ELP 셀 내부의 계란 수를 계산하고 기록합니다. 단단한 표면에 ELP 오픈 셀 측의 가장자리를 아래로 눌러 계란을 제거합니다.

계란이 빠지면 QMC의 빈 ELP를 교체하십시오. QMC 바깥쪽의 ELP 뒤에 있는 도어 패널을 부드럽게 제거하고 교체합니다. 두 번째 ELP에서 필요에 따라 반복하고 완료되면 QMC 전체에서 테이프를 교체합니다.

음식 소비를 모니터링하려면 음식을 2일마다 갓 준비한 식단으로 대체하십시오. 새로운 피더 튜브를 준비하고 계란 생산 모니터링 활동을 시작하기 전에 무게를 측정합니다. 오래된 튜브를 새로운 튜브로 바꾸고 오래된 튜브를 폐기하기 전에 무게를 측정합니다.

피더 튜브와 소비되지 않은 식단의 최종 체중을 동일한 튜브의 무게와 비교하여 식단 소비를 추정합니다. 하루에 한 번 확인하여 피더가 비어 있는지 확인합니다. 피더 튜브가 비어 있거나 비어 있는 경우 제거하고 리필하고, 튜브의 무게를 전후로 기록하고, QMC에 대한 2일 다이어트 소비 합계에 차이를 추가합니다.

QMC 실험 중 선택한 지점에서 이전에 설명한 대로 QMC에서 갓 낳은 알을 함유한 ELP를 제거하지만 ELP에서 계란을 빼내지 는 않습니다. 먼저 ELP를 PCR 플레이트 씰로 덮은 다음 범용 마이크로 플레이트 뚜껑을 덮고 포화 칼륨 황산염 용액으로 건조기 안에 놓습니다. QMC에서 ELP를 제거한 후 약 78시간 부화율을 평가합니다.

셀 의 바닥에 있는 C 자형 애벌레는 성공적인 부화 이벤트를 나타냅니다. QMC가 과잉 작업자로 채워진 경우, 실험 중에 선택한 시점에서 작업자 꿀벌을 샘플링하여 생리학의 치료 유발 변화를 평가합니다. 샘플링하기 전에 ELP와 QMC 내부 사이에 도어 패널을 배치하고 ELP를 제거합니다.

조심스럽게, 케이지의 기지에서 약 0.5 센티미터 문 패널을 들어 올리고 페더급 핀셋을 사용하여 QMC 내부에서 작업자 꿀벌을 제거합니다. 유전자 발현 분석을 위해 꿀벌을 액체 질소에 동결시키고 섭씨 80도에 보관하십시오. 수집된 꿀벌을 후속 분석을 위해 보존하고 원하는 샘플 수가 수집될 때까지 이 프로세스를 반복합니다.

식이 imidacloprid 치료 관련 변화는 푸아송 로그 선형 일반화 추정 방정식을 구현 하 여 평가 되었다, 자동 회귀 상관 매트릭스. 일일 계란 생산은 꽃가루 보충및 10억 분의 5 개의 imidacloprid를 포함하는 자당을 주어진 QMC에서 현저하게 낮았습니다. 용량 의존 효과 자당 및 꽃가루 보충 모두에서 투여 된 imidacloprid 치료에 대 한 각 QMC에서 생산 하는 계란의 총 수에 관찰 되었다.

QMC에서 관찰된 가장 큰 감소로 10억 분의 1의 이미다클로프리드를 공급했으며, 그 다음으로 꽃가루 보충제와 자당 10개 부품이 그 뒤를 이었다. 생산된 총 계란의 차이는 대조군과 QMC 사이에 관찰되지 않았으며, 10개의 부품당 10개의 부품을 공급하고 꽃가루 보충제만 먹였습니다. 꽃가루 보충, 물과 자당 소비는 매 48 시간 동안 기록 되었다 48 시간 10 또는 12 일.

자당 소비의 일일 속도 크게 실험 진행으로 증가, 하지만 꽃가루 보충 소비의 속도 감소. 꽃가루 소비의 높은 비율은 10 부분 당 10 부분-10 억 imidacloprid 꽃가루 보충에서 관리 될 때 관찰 되었다. 그리고 꽃가루 보충 및 자당 용액으로 10 또는 50 부품이 투여되었을 때 비율이 감소하였다.

오래된 꿀벌을 사용하는 것은 여왕의 수용을 보장하고 재활성화를 통해 노동자를 줄이는 데 중요합니다. 또한 중요한 것은 여왕을 주의 깊게 다루고 케이지를 안정적인 환경에서 유지하는 것입니다.