Name: 뉴질랜드 흰 토끼의 모성 예방 접종 연구에서 비강 내 예방 접종 및 우유 수집(Oryctolagus cuniculus) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 13 min
Description: 학습하세요 뉴질랜드 흰 토끼(Oryctolagus cuniculus)에서 비강 내 예방 접종 및 우유 수집 기법을 통한 모성 면역 연구 방법을. 이 프로토콜은 태반과 모유를 통한 항체 전이 평가에 활용됩니다.

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저자는 듀크 대학의 실험실 동물 자원 부서와 동물에게 제공되는 지원과 훌륭한 치료에 대한 그들의 축산 팀을 인정하고 싶습니다. 또한 저자는 원고의 오디오 및 비디오 부분에 대한 지원을 위해 병리학부 내의 PhotoPath 팀을 인식하고 싶습니다. 이 작품은 Staats 실험실에서 임의 연구 기금에 의해 지원되었다.

모든 절차는 듀크 대학 IACUC 정책에 따라 승인및 수행되었다.
참고: 필요한 재료는 재료 표에제공됩니다.
1. 토끼 세이션과 마취
<ol><li>아세프로마진을 근육질(IM)으로 투여하여 1 mg/kg의 투여량으로 여성 토끼(성적으로 성숙하고 약 5-30개월 된 세팅)를 진정시합니다. 동물의 크기에 따라 25G 바늘로 1 mL 주사기를 사용하십시오. 에팍스 근육은 근육 주사의 바람직한 사이트입니다. 참고: 아세프로마진은 피하 투여될 수 있지만, 보다 빠르게 작용하고 피부 병변발생을 감소시키기 때문에 IM은 실험실에서 선호된다.</li>
	<li>아세프로마진이 효과를 발휘할 수 있도록 10-15분 정도 기다립니다.</li>
	<li>연결된 코 콘을 동물의 코 위에 배치하여 토끼를 이소플루란으로 마취시합니다. 기화기를 최대 4리터/분 산소와 결합하여 최대 4%까지 조절합니다. 토끼는 이소플루란에 대한 혐오감이 높기 때문에 동물을 마스킹할 때 적절한 구속이 필요합니다.</li>
	<li>일단 완전히 마취되면, 피나, 페달 및/또는 palpebral 반사에 의해 평가된 바와 같이, 눈의 건조및 후속 각막 궤양을 방지하기 위하여 각 눈에 안과 윤활유를 적용하십시오.</li>
	<li>마취 중 반사 신경과 호흡을 지속적으로 모니터링하고 마취의 적절한 평면에 도달하면 이소플루란 속도를 1-2 %로 줄입니다.</li>
</ol>2. 비강 내 예방 접종
<ol><li>동물 취급 전에 예방 접종 솔루션을 준비하십시오.</li>
	<li>위에서 설명한 대로 토끼를 진정시하십시오.</li>
	<li>일단 실험실 구성원이 백신을 관리할 준비가 되고 토끼가 마취의 적당한 평면에 있으면, 이소플루란과 산소를 끄고 코 콘을 제거하십시오.</li>
	<li>토끼를 등쪽 의 비수성에 놓고, 백신을 투여하는 실험실 구성원에 의해 두 나레의 쉽게 접근및 시각화를 허용하는 대략 45° 각도로 목과 머리를 소품.</li>
	<li>백신 용액의 100 μL 이하로 파이펫을 적재하고 각 콧구멍에 용액을 신속하게 관리합니다. 파이펫은 비강 통로의 내측 측면을 향해 기울어진 대략 적인 45° 각도로 유지되어야 합니다. 참고: 예방 접종의 목적은 암말의 점막에 접촉하는 용액을 위한 것이므로 점막 조직의 마모 또는 자극을 초래하고 잠재적으로 nasally 투여 된 백신의 면역 원성에 영향을 미칠 수 있으므로 팁은 나레 안에 배치되어서는 안됩니다. 백신은 신속하게 투여되고 다른 나레에서 동일한 방식으로 수행되어야합니다.</li>
	<li>두 비강 통로에서 투여한 후, 백신 용액의 누출을 최소화하기 위해 30초 동안 등쪽 회복으로 토끼를 유지한다. 참고: 실험실은 일반적으로 한 번에 콧구멍당 100 μL 을 초과하지 않습니다. 더 큰 부피를 투여할 경우 최대 500 μL을 투여할 경우, 백신은 예방 접종 사이의 30초 휴식 기간을 가진 100 μL 알리쿼트에서 투여될 수 있으며, 백신의 추가 투여는 총 백신 부피가 전달될 때까지 각 투여 사이에 30초의 휴식과 함께 반복될 수 있다.</li>
	<li>예방 접종 후, 회복을 위해 통풍관에 토끼를 배치하고 엄격하게 예방 접종을 유지할 수있을 때까지 동물을 면밀히 모니터링하십시오.</li>
</ol>3. 우유 컬렉션
<ol><li>위에서 설명한 대로 수유 토끼를 진정시하십시오.</li>
	<li>알코올 면봉 / 닦아로 한계 귀 정맥 위에 피부를 청소합니다.</li>
	<li>1 mL 주사기와 25g 바늘을 사용하여, 우유 를 진정시키는 한계 귀 정맥을 통해 정맥내 옥시토신의 약 1-2 IU를 투여한다. 참고 : 원활한 근육 이완으로 인해 토끼가 옥시토신 투여 후 소변을 보거나 배변하는 것이 일반적입니다.</li>
	<li>옥시토신 투여 후, 거즈 조각으로 주사 부위에 압력을 가하십시오.</li>
	<li>토끼의 코 위에 마취 마스크를 유지하면서, 뒤늦은 분기에 토끼를 소품. 참고: 우유 수집은 동물과 함께 측면 의식으로 수행 할 수 있지만 실험실은 토끼가 마취 마스크로 토끼를 똑바로 잡고 있는 조수와 함께 엉덩이에 올려질 때 수집이 더 쉽다는 것을 발견합니다.</li>
	<li>멸균 튜브를 열어 우유 수집을 준비하고 유방 조직과 관련 젖꼭지를 찾습니다. 젖꼭지는 일반적으로 최근 간호에서 젖은 모피에 의해 포위되고, 유방 조직은 우유의 가득 차있을 때 쉽게 만져볼 수 있습니다.</li>
	<li>엄지와 집게 손가락 사이의 젖꼭지와 관련된 유방 조직을 잡고 젖꼭지 방향으로 선 조직에 부드럽고 마사지 압력을 가하십시오. 수집 튜브를 젖꼭지 위에 놓고 표현된 우유를 수집합니다. 참고: 옥시토신이 효과적이기까지는 몇 분 정도 걸릴 수 있으며, 우유 생산은 유방 땀샘마다 달라지는 것으로 보입니다. 우유 발현이 성공하지 못하면 몇 분 정도 기다리거나 추가 유방 땀샘으로 회전하십시오. 모든 젖꼭지에서 우유는 동일한 바이알에서 수집 할 수 있습니다. 일반적으로 수유 도에서 여러 밀리리터를 쉽게 수집할 수 있습니다.</li>
	<li>우유 수집 후, 이소플루란과 산소를 끄고 동물이 흉골 의 변칙을 유지할 수있을 때까지 밀접하게 모니터링되는 동안 토끼가 회복 할 수 있습니다.</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

위의 프로토콜에 설명되지는 않지만 토끼의 성공적인 번식은이 모성 모델과 우유 수집을 허용하기 위해 필요합니다. 토끼는 연구 환경에서 라이브 커버로 쉽게 사육됩니다. 그것은 사육을 위해 벅의 케이지로 전송하는 것이 좋습니다, 벅과 자신의 케이지에 보관하는 경우 영토와 공격적 될 수 있습니다. 여성이 15 분 후에 수용하지 않는 경우 (물거나 발성하는 것으로 표시됨) doe는 자신의 케이지에 다시 배치해야합니다. 온라인29를관찰 할 수있는 토끼 사육에 대한 몇 가지 유익한 비디오및 튜토리얼이 있지만 번식 후 남성은 일반적으로 넘어지고 발성 할 수 있습니다. 이 관찰되면, doe는 그녀의 케이지로 반환 할 수 있습니다. 벅은 정자 수30의감소없이 하루에 2-3 번 번식 할 수 있습니다. 우리의 IACUC 승인 프로토콜에서, 달러는 일주일에 10-12 를 사육하는 것으로 제한되고 소스는 단일 벅이 일반적으로 서비스 10-15가<sup class="xr...

모계 예방 접종 및 항체 전송의 연구는 여러 가지 이유로 매우 중요합니다, 이것은 면제 전송의 초기 경로와 신생아와 유아에 병원체와 질병에서 후속 보호. 모성 예방 접종은 이 취약한 기간1동안 특정 병원균과 관련된 이환율 및 사망률을 감소시킴으로써 전 세계 수준에서 모계 및 유아/아동 건강에 긍정적인 영향을 미칠 수 있는 잠재력을 가지고 있다. 이 전략의 주요 목표는 임신 내내 특정 모계 항체의 수준을 증가시키는 것입니다. 이러한 항체는 면역 체계가도전1,2,3에 적절하게 반응할 만큼 충분히 성숙해질 때까지 감염으로부터 보호하기에 충분한 수준으로 신생아와 유아에게 전달될 수있다. 이전 연구는 출생 시 더 높은 항체 티터가 파상풍, 등도, 호흡 싱크바이러스(RSV), 인플루엔자 및 그룹 B 연쇄상 구균 감염1,2,3을포함하여 신생아에서 수많은 다른 전염병의 완전한 보호 또는 지연된 발병 및 감소된 심각도와 연관된다는 것을 입증하였다.
인간에서, 모계 항체는 태반을 통해 수동적으로 전송되고 또한 간호를 통해 모유를 통해 전달됩니다. 이전 연구는 바이러스에 감염된 어머니로부터 인간의 모유에서 HIV 특정 IgA 수준이 바이러스의 감소 된 산후 전염과 관련이 있음을 입증했다, 모유 안티 HIV IgA에 대한 보호 역할을 제안4. 비인간 영장류에 대한 연구는 HIV에 대한 예방 접종이 모유에서 상당한 항체 반응을 유도 할 수 있음을 입증하고, 유사한 혈청 IgG 반응은 점막 예방 접종에 비해 전신에 따라 유도되었지만, 점막 예방 접종은 우유내에서상당히 높은 IgA 반응을 유도5,6.
이러한 연구에 대한 번역적으로 적합한 동물 모델을 식별하는 것은 모유를 통한 항체 전달뿐만 아니라 지동적 항체 전달의 태반 유형 및 메커니즘을 고려해야합니다. 혈청 (영장류, 설치류 및 토끼), 내피 (육식 동물), 및 상피 (말, 돼지 및 반추제)를 포함하여 마테르노 태아 인터페이스의 조직 유형과 층을 기반으로 포유동물에서 태반의 세 가지 주요 유형이 있습니다. 혈청 태반은 가장 침습적인 유형으로, 모계 혈액 공급과 초리온 또는 가장 바깥쪽 태아 막 사이의 직접적인 의사 소통을 가능하게 합니다. 트로포블라스트 층의 수에 기초하여, 영장류에서 발견되는 헤모모노코오레태반, 토끼의 혈액 투석 태반, 쥐와마우스에서관찰된 헤모티코알 태반 을 포함한 여러 가지 변이가 있다 7. 모계 혈액 공급과 초리온 사이의 이러한 직접적인 접촉은 임신 중 태반을 통해 항체의 수동 전달을 허용합니다. IgG는 인간 태반8을크게 교차시키는 유일한 항체 클래스이며, IgA는 인간 모유9에서발견되는 Ig의 우세한 클래스입니다. 과학적으로 관련 된 모델중 영장류 (인간 포함), 토끼 및 기니 피그만 우유10,11에서 자궁과 IgA에서 IgG를 전송합니다. 따라서 토끼 모델은 IgG의 트랜스태반 전달및 IgA의 수유 전달을 제어하는 인간에 필적하는 요인을 통합합니다.
모계 면역 및 백신 개발을 위한 뛰어난 모델로 봉사하는 것 외에도 토끼와 인간 비강 사이의 유사성은 비강 내 예방 접종을위한 적절한 모델입니다. 토끼 비강의 부피는 상대체질량(12)에기초한 설치류 모델보다 인간과 더 유사하다. 추가적으로, Casteleyn 외. 12는 비강 관련 림프구 조직 (NALT)이 설치류에 비해 토끼에서 더 볼륨하다는 것을 입증했다. NALT는 주로 복부 비강 고기의 복부 및 복부 및 복부 에 위치하고 토끼에서 비인두 고기의 측면 과 등쪽 측면에, 반면 설치류에서, 림프 조직은 비인두 고기의 복부 측면을 따라 존재12. 토끼에서, 자궁 내 및 라미나 프로프리아 림프구의 구조와 위치뿐만 아니라, 고립 된 림프구 여포, 인간(12)과유사하다.
모계 및 점막 면역을 위한 모형으로 토끼를 사용하는 추가적인 이점은 그들의 높은 fecundity 및 상대적으로 짧은 임신 기간을 포함합니다. 큰 소변 혈관 은 시리얼 수집을위한 혈액의 큰 볼륨에 상대적으로 쉽게 액세스 할 수 있습니다. 다양한 점막 시료는 모유13(수유 시), 점막 분비물 또는 세척(예: 구강14,15,16,기관지 알팔벨라 라베라13,17,18,19,질20,21, 20, 20) 및 20, 20, 20, 20, 20, 20을포함하여 항원 특이적 항체 반응 작용제용으로 수집될 수있다. 우유 샘플은 수유 중에 쉽게 수집하여 항원 특이적 항체 반응의 존재를 평가할 수 있습니다. 인간과 마우스만큼 풍부하지는 않지만 토끼 관련 연구 및 연구 결과에 다양한 실험 시약을 사용할 수 있습니다. 이 기사에서는 뉴질랜드 화이트 토끼(Oryctolagus cuniculus)에서비강 내 예방 접종 및 우유 수집을 설명하고 시연할 것입니다.

<table><tbody><tr><td>비강내 면역</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>마취기/기화기</td><td>수의사 장비</td><td>901807</td><td></td></tr><tr><td>피하주사바늘(25g)</td><td>테루모</td><td>07-806-7584</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란(250mL병)</td><td>패터슨 수의사</td><td>07-893-1389</td><td>2-4%</td></tr><tr><td>루어락 주사기(1mL)</td><td>에어타이트</td><td>07-892-7410</td><td></td></tr><tr><td>점막 백신</td><td>해당</td><td>없음 실험</td><td>용 백신</td></tr><tr><td>코 콘</td><td>McCulloch Medical</td><td>07891-1097</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁</td><td>VWR</td><td>53503-290</td><td></td></tr><tr><td>피펫터</td><td>VWR</td><td>89079-962</td><td></td></tr><tr><td>PromAce (Acepromazine maleate)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>07-893-5734</td><td>1mg/kg IM</td></tr><tr><td>Puralube Sterile 안과 연고</td><td>Dechra</td><td>07-888-2572</td><td></td></tr><tr><td>Milk Collection</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Prep 2-ply</td><td>Covidien</td><td>07-839-8871</td><td></td></tr><tr><td>마취기/기화기</td><td>수의사 장비</td><td>901807</td><td></td></tr><tr><td>피하 주사 바늘 (25g)</td><td>Terumo</td><td>07-806-7584</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란 (250mL 병)</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-893-1389</td><td>2-4%</td></tr><tr><td>Luer Lock Syringe (1 mL)</td><td>Air-Tite</td><td>07-892-7410</td><td></td></tr><tr><td>부직포 스폰지(4x4)</td><td>Covidien</td><td>07-891-5815</td><td></td></tr><tr><td>Nose Cone</td><td>McCulloch Medical</td><td>07891-1097</td><td></td></tr><tr><td>PromAce (Acepromazine Maleate)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>07-893-5734</td><td>1mg/kg IM</td></tr><tr><td>Puralube Sterile 안과 연고</td><td>Dechra</td><td>07-888-2572</td><td></td></tr><tr><td>멸균 원뿔형 바이알 (15mL)</td><td>Falcon</td><td>14-959-49B</td><td></td></tr></tbody></table>

뉴질랜드 흰 토끼의 모성 예방 접종 연구에서 비강 내 예방 접종 및 우유 수집(oryctolagus cuniculus)

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

태반과 인체의 항체 전달의 유사성으로 인해 토끼는 모성 예방 접종의 훌륭한 모델입니다. 이 연구 모델의 추가 장점은 번식 및 샘플 수집의 용이성, 상대적으로 짧은 임신 기간 및 큰 쓰레기 크기입니다. 예방 접종의 일반적으로 평가 된 경로는 피하 포함, 근육 내, 비강, 그리고 상인. 이러한 예방 접종에 대한 면역 학적 반응의 연대순 검출을 위한 비단말 샘플 수집은 댐과 키트 모두에서 혈액 의 수집을 포함하고, 수유에서 우유는 않습니다. 이 기사에서는 우리 실험실이 뉴질랜드 화이트 토끼(Oryctolagus cuniculus)의모성 예방 접종 연구에 활용 한 기술을 시연 할 것입니다.

전형적인 모계 내 비강 예방 접종 연구 설계에 대한 개요는 예방 접종, 사육, 발성, 수유 및 항체 전달을 통합한 도 1에묘사됩니다. 비록 설명 되지, 혈액 기준 선 측정에 대 한 초기 예방 접종 전에 정기적으로 연구의 나머지 부분에 걸쳐 수집 해야 합니다. 혈액은 가벼운 체기와 국소 진통제 (예를 들어, 리도카인 2.5 % 및 프리로카인 2.5 % 크림)와 중앙 귀 동맥을 통해 쉽게 얻을 수 있습니다. 항원 특이적 IgG 수준의 존재는 이러한 샘플에서 측정될 수 있다. 여성 토끼는 프로토콜에 설명되어 비디오에서 입증된 바와 같이 비강 내 경로를 통해 예방 접종을 받습니다. 연구에 따라, 백신 부스트를 요구할 수 있습니다 또는 추가 경로를 통해 제공 될 필요가 있을 수 있습니다 (예를 들어, 근육 또는 피하). 연구 개시 후 토끼는 사육됩니다. 우리는 이러한 연구에 대 한 높은 임신 율을 보장 하기 위해 사용 하는 공급 업체에서 입증 된 브리더를 구입 하는 것을 선호 합니다....

이 기사는 산모 예방 접종의 번역적으로 적합한 모델에서 점막 면역을 평가하는 수단으로 토끼(Oryctolagus cuniculus)를수유하여 내비강 내 백신의 투여 및 우유 수집을 설명하고 보여줍니다.

뉴질랜드 흰 토끼의 모성 예방 접종 연구에서 비강 내 예방 접종 및 우유 수집(Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...

모계 예방 접종 및 항체 전송의 연구는 여러 가지 이유로 매우 중요합니다 이것은 면제 전송의 초기 경로이며 신생아와 유아의 병원균 및 질병으로부터의 후속 보호입니다. 태반과 인체의 항체 전달의 유사성으로 인해 토끼는 모성 예방 접종의 훌륭한 모델입니다. 이 비디오 기사에서 우리는 우리의 실험실이 뉴질랜드 화이트 토끼의 모성 예방 접종 연구에 활용 한 기술을 보여줍니다, 비강 내 예방 접종 및 우유 수집을 포함.우리는 먼저 뉴질랜드 화이트 토끼에 있는 점막 모계 예방 접종 연구를 위한 예 타임라인 및 일련의 사건을 설명할 것입니다. 여성 토끼는 이 비디오에서 설명한 바와 같이 비강 내 경로를 통해 예방 접종을 받습니다. 연구에 따라, 백신 부스트를 요구할 수 있습니다 또는 추가 경로를 통해 제공 해야 할 수 있습니다., 근육 예방 접종 등.비록 묘사 되지, 혈액 기준선 측정에 대 한 초기 예방 접종 전에 수집 해야 합니다., 그리고 정기적으로 연구의 나머지 부분에 걸쳐. 혈액은 가벼운 체이드와 국소 진통제를 가진 중앙 귀 동맥에 의해 쉽게 얻을 수 있습니다. 항원 특이적 IgG 수준의 존재는 이러한 샘플에서 측정될 수 있다.토끼는 다음 사육된다. 우리는 이러한 연구에 대 한 높은 임신 률을 보장 하기 위해 사용 하는 공급 업체에서 입증 된 브리더를 구입 하는 것을 선호 합니다. 예방 접종 일정에 따라 토끼는 임신 기간 내내 추가 예방 접종을받을 수 있습니다.항원 특이적 IgG는 키트에 지반으로 전달된다. 약 30~32일 후에 임신후 임신이 불붙을 것입니다. 처음 며칠 동안 키트 처리를 제한하여 거부를 최소화하는 것이 좋습니다.혈액 샘플은 키트로부터 수집되어 트랜스플레이스로 전달된 항원 특이적 IgG 수준을 평가할 수 있다. 혈액은 초기 항원 특정 항체 수준을 평가하기 위하여 출생의 시간 또는 그 근처에 키트의 작은 수에서 집합될 수 있습니다. 다양한 영양소 외에도, 키트는 수유 하는 동안 수 유 도에서 항 원 특정 IgA를 받을.키트는 일반적으로 4~ 8주에 짜여져 있습니다. 젖을 짜기 전에 수유에서 쉽게 수집 할 수 있습니다이 비디오에서 설명 한 바와 같이. 수집된 우유 샘플은 항원 특이적 IgA의 검출을 위해 처리된다.연구에 따라, 백신 및 부스트는 키트에 투여될 수 있고 직렬 혈액 샘플은 측면 수페누스 정맥을 사용하여 아주 이른 나이에 키트로부터 수집될 수 있다. 우리는 이제 뉴질랜드 화이트 래빗에서 비강 내 예방 접종 및 우유 수집을 시연 할 것입니다.의정서. 모든 절차는 듀크 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 정책에 따라 승인 및 수행되었습니다.비강 내 예방 접종. 필요한 재료: 아세프로마진, 주사기 및 바늘, 안과 윤활유, 이소플루란, 코 콘, 파이펫 및 파이펫 팁, 점막 백신. 동물 취급 전에 예방 접종 솔루션을 준비하십시오.토끼는 근육질로 킬로그램 당 1 밀리그램의 아세프로마진으로 진정되고, 코 콘을 사용하여 이소플루란으로 마취됩니다. 눈꺼풀 반사에 의해 평가된 대로 완전히 마취되면, 눈의 건조와 후속 각막 궤양을 방지하기 위해 각 눈에 안과 윤활유가 추가됩니다. 일단 실험실 구성원이 백신을 관리할 준비가 되고 토끼가 마취의 적당한 평면에 있으면, 이소플루란과 산소를 끄고 코 콘을 제거하십시오.토끼를 등쪽 의 반수성에 놓고 백신을 투여하는 실험실 구성원에 의해 두 alars의 쉽게 접근 및 시각화를 허용하는 대략 45도 각도로 목과 머리를 소품. 백신 용액의 100 마이크로리터를 초과하지 않고 파이펫을 적재하고 신속하게 하나의 콧구멍에 대한 솔루션을 관리하고 두 번째 콧구멍에 대한 절차를 반복합니다. 파이펫은 대략 45도 각도로 유지되어야 합니다.비강 통로의 내측 측면을 향해 각도. 예방 접종의 목표는 용액이 나레의 점막에 접촉하는 것입니다. 따라서 이 점막 조직의 마모 또는 자극을 초래할 수 있으며 잠재적으로 nasally 투여 된 백신의 면역 genicity에 영향을 미칠 수 있으므로 팁은 nares 내에 배치되어서는 안됩니다.백신은 신속하게 투여되고 다른 콧구멍에서 동일한 방식으로 수행되어야합니다. 두 비강 통로에서 투여한 후, 토끼는 백신 용액의 누출을 최소화하기 위해 30초 동안 등쪽 회복으로 유지된다. 실험실은 일반적으로 한 번에 콧구멍 당 100 마이크로 리터를 투여하지 않습니다.더 큰 부피가 최대 총 500 마이크로리터로 투여될 경우, 백신은 예방접종 사이에 30초의 휴식 기간을 가진 100개의 마이크로리터 알리코트에서 투여될 수 있다. 그리고 백신의 추가 투여는 총 백신 부피가 전달될 때까지 각 투여 사이에 30초의 휴식으로 반복된다. 예방 접종 후, 회복을 위해 통풍관에 토끼를 놓고 흉골 의 침전을 유지할 수있을 때까지 동물을 면밀히 모니터링하십시오.어떤 경우에는, 백신 제형이 비강으로 완전히 전달되지 않을 수 있으며 백신 제형의 일부가 나레의 외부 부분에 남아 있을 수 있다. 이 경우, 비강으로 제대로 전달된 백신의 정확한 부피가 명확하지 않기 때문에, 실험에 정의되지 않은 변수를 추가할 것이기 때문에 추가 백신 물질의 재적용을 권장하지 않는다. nares에 백신 제형의 완전하고 일관된 납품을 제공하는 백신 전달 기술을 사용하는 것이 중요합니다.우유 컬렉션. 필요한 재료: 아세프로마진, 주사기 및 바늘, 알코올 면봉, 거즈, 안과 윤활유, 이소플루란, 코 콘, 옥시토신 및 수집 유리병. 토끼는 근육질로 킬로그램 당 1 밀리그램의 아세프로마진으로 진정되고, 코 콘을 사용하여 이소플루란으로 마취됩니다.눈꺼풀 반사에 의해 평가된 대로 완전히 마취되면, 눈의 건조와 후속 각막 궤양을 방지하기 위해 각 눈에 안과 윤활유가 적용됩니다. 알코올 면봉으로 한계 귀 정맥 위로 피부를 청소하십시오. 1밀 주사기와 25 게이지 바늘을 사용하여, 우유를 실망시키는 한계 귀 정맥에 의해 정맥내 옥시토신의 약 1~2개의 국제 단위를 투여한다.원활한 근육 이완으로 인해 토끼가 옥시토신 투여 후 소변을 보거나 배변하는 것이 일반적입니다. 옥시토신 투여 후, 주사 부위에 거즈 조각을 사용하여 기혈을 제공 하 게 압력을 가하십시오. 토끼의 코 위에 마취 마스크 나 코 콘을 유지하면서, 뒷마당에 토끼를 소품.사이드 노트로, 우유 수집은 또한 측면 의 복리후생에서 동물과 함께 수행 할 수 있지만, 실험실은 토끼가 마취 마스크와 함께 똑바로 토끼를 들고 조수와 엉덩이에 올려 질 때 수집이 더 쉽다는 것을 발견한다. 멸균 튜브를 열어 우유 수집을 준비하고 유방 조직과 관련 젖꼭지를 찾습니다. 토끼는 일반적으로 유방 땀샘의 4 5 쌍을 가지고 있습니다.젖꼭지는 일반적으로 최근 간호에서 젖은 모피에 의해 포위되고 유방 조직은 우유의 가득 차있을 때 쉽게 만져 볼 수 있습니다. 엄지와 집게 손가락 사이의 젖꼭지와 관련된 유방 조직을 잡고 젖꼭지 방향으로 선 조직에 부드러운 마사지 압력을 가하십시오. 수집 튜브를 젖꼭지 위에 놓고 표현된 우유를 수집합니다.옥시토신이 효과적이기까지 몇 분 정도 걸릴 수 있으며, 우유 생산은 유방 땀샘마다 달라지는 것으로 보입니다. 우유 발현이 성공하지 못하면 몇 분 정도 기다리거나 추가 유방 선으로 회전하십시오. 모든 젖꼭지에서 우유를 동일한 사악한에서 수집 할 수 있습니다.일반적으로 우유의 몇몇 밀리리터는 수유 도에서 쉽게 수집될 수 있습니다. 원하는 양의 우유가 수집된 후, 이소플루란과 산소를 끄고 토끼에서 코 콘을 제거하고 동물이 흉골 침전을 유지할 수있을 때까지 밀접하게 모니터링되는 동안 토끼가 회복 할 수 있도록하십시오. 대표적인 결과.그림 하나. 모성 연구를 위해, 가능한 한 빨리 임신을 결정하는 것은 doe가 다시 사육될 필요가 없다는 것을 확인하는 것이 도움이 됩니다. 임신 탐지를 위한 선택권은 인슐린 성장 인자 및 황체 호르몬의 측정과 같은 심근, 초음파, 방사선 사진, 체중 증가 및 분자 기술을 포함합니다.적절한 프로게스테론 수준은 토끼의 임신 유지를 위해 필요합니다. 따라서 몇몇 연구 결과는 또한 임신한 토끼에 있는 progesterone 수준을 평가하고 특히 중간 임신의 주위에 유기발생 도중, 비 임신 한 토끼에 대하여 높은 수준을 보여주었습니다. 그림 하나에 도시된 바와 같이, 높은 프로게스테론 수준은 벅에 의한 짝짓기 후에도 임신하지 않은 토끼에 비해 임신하지 않은 토끼에서 검출될 수 있다.혈청 프로게스테론 수준은 자동화된 화학발광성 분석체를 사용하여 측정되었다. 그림 2. 임신 중에 트랜스페이넨으로 옮겨진 항원 특이적 IgG는 엘리사에 의해 키트의 혈청에서 측정될 수 있다.혈액은 초기 항원 특정 항체 수준을 평가하기 위하여 출생의 시간 또는 그 근처에 키트의 작은 수에서 집합될 수 있습니다. 직렬 혈액 수집은 키트가 나이가 들어와 크기가 증가함에 따라 기술적으로 훨씬 쉽습니다. 그림 2에 묘사된 바와 같이, 키트내의 항원 특이적 IgG의 혈청 수준을 측정하고 모계 수준에 비해 측정될 수 있다.모성 으로 전송 된 IgG 수준은 출생시 더 높고 시간이 지남에 따라 감소합니다. 그림 3. 토끼 우유는 본 비디오에 도시된 바와 같이 수집될 수 있고, 엘리사에 의한 총 및 항원 특이적 항체 수준을 측정하기 위하여 처리될 수 있다.이 그림에 도시된 바와 같이, IgA는 키트로 수동 이송에 사용할 수 있는 모유 내의 전체 항체의 상당 부분을 구성한다. IgA와 IgG 수준은 IgM.요약보다 상당히 높습니다. 이 비디오 기사는 산모 예방 접종의 번역적으로 적합한 모델에서 점막 면역을 평가하기위한 수단으로 토끼를 수유에서 비강 내 백신의 투여 및 우유 수집을 설명하고 보여줍니다.묘사된 것은 예방 접종, 사육, 발성, 수유 및 항체 전송을 통합한 전형적인 모계 내 비강 예방 접종 연구 설계를 위한 요약 영상입니다.

intranasal-immunization-milk-collection-studies-maternal-immunization

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오에서는 토끼의 유선관에 관심 용액을 투여하는 기술을 설명하고 조영제의 고해상도 초음파 영상으로 전달을 확인합니다.

Rabbit Intraductal Injection: Rabbit Mammary Gland로의 관심 용액의 국부적 전달

이 비디오에서는 토끼 모델에서 상눈물샘의 안구 부분에 Concanavalin A를 주입하여 수성 결핍성 안구 건조증을 유발하는 절차를 보여줍니다. 이 모델은 안구건조증 치료를 위한 약물의 약동학 및 생체내 분포 분석에 유용합니다.

Performing Injection into Palpebral Portion of the Superior Lacrimal Gland: A Technique for Inducing Dry Eye Disease in Rabbit Model

이 비디오에서는 림프구 미토겐인 Concanavalin A를 토끼 눈의 하부 눈물샘에 접종하여 안구 건조증을 유발하는 방법을 보여줍니다. 초음파 또는 초음파 이미지는 주사 부위의 정확한 위치를 안내하고 접종의 성공 여부를 확인하는 데 사용됩니다.

Ultrasound-guided Concanavalin A Injection into inferior lacrimal gland: A technique to inoculate inferior lacrimal gland(하눈물샘에 Concanavalin A를 주입하는 기술) 토끼 모델에서 안구건조증을 유발하기 위해 Concanavalin A를 주입하는 기술

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