Name: ApoE에서 뒷다리 허혈의 변형 된 수술 모델-/- 소형 절개를 사용하여 마우스 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: 배우세요 ApoE-/- 마우스에서 소형 절개를 이용한 후지 허혈 수술 모델을 구축하는 방법을. 이 기법은 저침습성으로 혈관 및 근육 병리학 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

저자는 뛰어난 기술 지원에 대한 빅토리아 스쿠드, 알렉산더 슐룬드, 펠릭스 회너에게 감사드립니다.

참고: 모든 실험 절차는 EC 지침 EC 2010/63/EU에 따라 수행되었으며 현지 독일 법률(35-9185.81/G[1]239/18)의 승인을 받았습니다. C57BL/6J 배경이 29.6-38.0g인 10마리의 수컷 아포에 마우스는 12시간 광/암흑주기에 보관되어 서양 식단(콜레스테롤 1.25%, 지방 21%)과 8주 부터 12주 동안 물 광고 리비툼을 공급하였다. HLI는 아래에 설명된 바와 같이 20주 된 마우스에 수행되었다.
1. ApoE에서 HLI 유도-/- 마우스
<ol><li>수술에 필요한 장비와 도구를 준비합니다(재료 표 및 그림 1참조). 사용하기 전에 오토클레이브를 통해 수술 기구를 살균하고 수술 중에 유리 비드 멸균제를 사용하십시오.</li>
	<li>미다졸람(5mg/kg), 메데토미딘(0.05 mg/ml/kg), 펜타닐(0.5 mg/kg)의 혼합물을 모든 수술 전에 피하 주사(S.C.)로 마우스를 마취시킵니다.<ol>
<li>마취가 발병한 후, 눈에 수의사 연고를 사용하여 건조함을 방지하고 앞다리와 뒷다리에 페달 철수 반사가 없는지 확인합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>그 후 마우스를 가열 패드에 배치하여 코어 체온을 약 37°C로 유지합니다. 면 봉면과 제모 크림을 사용하여 오른쪽의 뒷다리 피부에서 모발을 조심스럽게 제거합니다. 참고: 제모 크림은 뒷다리, 특히 절개가 만들어질 인귀부위를 덮기 위해 충분한 양으로 사용되어야 합니다. 제모 크림은 3 분 미만의 기간 동안 사용되어야하며, 나중에 촉촉한 면 봉면 2 ~ 3 번 제거해야합니다.</li>
	<li>해부 현미경아래 가열 패드의 척추 위치에 마우스를 놓습니다. 마우스의 피부를 소독하기 위해 피부 방부제 (재료의 표참조)를 사용합니다. 그 후, 뾰족한 집게와 외과 가위를 사용하여 잉구이 영역의 중간에 약 3-4mm 절개를 합니다. 절차의 회로도는 그림 2를 참조하십시오.</li>
	<li>피하 지방 조직을 미세한 뾰족한 집게의 도움으로 조심스럽게 제거하여 근위 대퇴 신경 혈관 번들을 노출시하십시오. 조심스럽게 대퇴 칼집의 막을 관통하기 위해 미세 한 뾰족한 집게를 사용합니다. 대퇴신경(FN)과 대퇴정맥(FV)에서 조심스럽게 대퇴동맥(FA)을 옮기려면 식염수로 촉촉한 면봉을 사용한다.</li>
	<li>근교 FA를 통해 7-0으로 흡수 가능한 봉합사 2개를 통과하고 스프링 가위를 사용하여 더블 매듭을 만들어 두 동점 사이를 오가며 FA를 통과합니다.</li>
	<li>실사 FA를 노출하려면 절개 하부 가장자리를 통해 7-0 흡수 가능한 봉합사를 통과하고 절개를 뒷다리의 무릎 오른쪽 영역으로 부드럽게 드래그합니다.</li>
	<li>피하 조직을 조심스럽게 옆으로 움직여 신경 혈관 번들을 노출시하십시오. 미세 한 뾰족한 집안집을 사용하여 대퇴 칼집의 막을 관통하고 FV 및 FN에서 FA를 해부하십시오.</li>
	<li>실사 FA를 통해 흡수 가능한 봉합사 2개를 통과하고 더블 매듭을 만듭니다. 스프링 가위를 사용하여 두 관계 사이에 FA를 변환합니다. 참고: 왼쪽 사지에서 리시레이션이 수행되지 않았으며, 이는 각 마우스의 컨트롤역할을 합니다.</li>
	<li>그 후 6-0 흡수성 봉합사를 사용하여 절개를 바느질하십시오. 깨끗한 케이지에 가열 패드에 마우스를 놓고 복구 될 때까지 중요한 매개 변수를 계속 모니터링합니다. 수술 후 진통제 제공: Buprenorphine s.c. (0.1 mg/kg 체중 마다 8 시간 마다 48 h). 48 h 작업 후, 식수에서 메타미졸을 관리 (24 mg/5mL의 물은 200 mg/kg 4 배 매일).</li>
</ol>2. 자기 공명 이미징
참고: DLFA 가 끝난 지 하루 만에 마우스는 FA 막힘을 평가하기 위해 MRI 검사를 받아야 합니다.
<ol><li>마우스를 투명 유도 챔버에 놓고 마우스를 1.5-2%의 이소플루란으로 마취하여 오른쪽 반사를 상실할 때까지 주변 공기에 시동을 놓습니다.</li>
	<li>마우스를 물린 홀더가 장착된 가열된 동물 침대에 놓고 레이저 제어 시스템으로 자석쪽으로 배치합니다. 체온을 37±1°C에서 유지합니다.</li>
	<li>이미지 수집 중에 주변 공기에서 1.5-2 %의 이소플루란으로 마취를 유지하고 압력 프로브를 사용하여 호흡을 모니터링합니다.</li>
	<li>3차원(3D) 비행 시간(TOF) 혈관조영서열을 사용하여 횡단 슬라이스 방향으로 이미지를 획득하여 파라미터 에코 시간(TE)/반복 시간(TR)/플립 각도(FA) = 2ms/12 ms/13°, 4개의 평균, 178 x 144의 획득 매트릭스를 256 x 192및 12111로 재구성하여 1211mm의 해상도로 재구성하였다. 정맥에서 신호를 억제하려면 채도 슬라이스를 뒷다리에 disation로 배치합니다.</li>
</ol>3. 임상 평가 및 후속 조치
<ol><li>기능적 점수매기를 이용하여 수술 후1,3rd,5일및7일 동안 기능적 회복을 추정한다18,19(표 1).</li>
</ol>4. 히토로지 평가
<ol><li>수술 후 7일 후, 펜토바르비탈 주사(115 mg/kg)를 적용하여 마우스를 안락사시킵니다.</li>
	<li>좌측 심장 심실(마우스당 100mL)을 통해 1% 파라포름알데히드(PFA)를 함유한 인산염 완충식염(PBS). 4°C에서 하룻밤 사이에 4% PFA에서 마우스의 양측 위트로테미에(Gm)를 수정한다.</li>
	<li>이전에 설명된프로토콜(20)에따라 파라핀에 샘플을 포함하였다.<ol>
<li>마이크로톤에 파라핀 임베디드 조직 블록의 4-5 μm 두께의 부분을 잘라냅니다. 둥근 페인트 브러시의 도움으로 42 °C에서 유지 되는 수조에 절단 조직 섹션을 배치합니다.</li>
		<li>현미경 슬라이드를 45° 각도로 물에 삽입하고 수집할 섹션 그룹 아래에 조심스럽게 배치합니다.</li>
		<li>조심스럽게 물에서 슬라이드를 들어 올리고, 섹션이 슬라이드에 부착하고 37 ° C에서 벤치 탑 인큐베이터에서 밤새 건조 할 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>파라핀 섹션의 헤마톡시린/에오신(HE) 염색을 수행한다.<ol>
<li>섹션이 포함된 슬라이드를 슬라이드 홀더에 배치합니다. 신선한 자일렌 3개의 용기를 준비하고 슬라이드를 각 용기에 5분 동안 배치하여 섹션을 분리합니다.</li>
		<li>슬라이스를 96%, 80%, 70%, 50%, 30% 에탄올, 탈온수 5분으로 연속적으로 찍어 섹션을 수분화합니다.</li>
		<li>10 분 동안 헤마톡슬린 용액에 얼룩.</li>
		<li>슬라이스를 탈이온된 물 용기에 옮기고 흐르는 수돗물 아래에 5분 동안 놓아 헹구는 것입니다.</li>
		<li>현미경을 사용하여 헤마톡슬린 염색의 강도를 확인하십시오. 염색이 세포 핵을 명확하게 식별할 수 있으면 다음 단계로 계속하십시오. 염색 강도가 세포 핵의 식별을 용이하게하지 않거나 염색강도가 희미해지면 헤마톡시린 용액에 슬라이드를 1 분 동안 넣고 물로 세척을 반복한 다음 다시 확인하십시오.</li>
		<li>5 분 동안 eosin-Y 솔루션에 카운터 스테인.</li>
		<li>슬라이스를 탈수하여 분해된 물과 30%, 50%, 70%, 80%, 96%의 에탄올을 각각 10s씩 연속적으로 담그면 단면을 탈수합니다. 다음으로, 각각 10 초에 신선한 자일렌의 세 용기에 섹션을 순차적으로 놓습니다.</li>
		<li>슬라이드를 미세한 슬라이드 저장 맵에 수평으로 배치하고 섹션은 위쪽으로 향합니다. 슬라이드에 충분한 장착 매체를 추가하고 슬라이드에 커버립을 장착합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>파라핀 섹션의 면역히스토케미칼(IHC) 염색을 수행한다.<ol>
<li>반복 비카페인화 및 재수화 단계 4.4.1-4.4.2. 이어서, 10mM 나트륨 구연산 버퍼, pH 6로 용기에 섹션을 담그고, 마이크로웨이브에서 시료를 끓이도록 한다. 참고: 시료의 과다 또는 과소 가열로 인해 일관되지 않은 염색이 발생할 수 있으므로 10분 동안 끓는 점 바로 아래에서 온도를 유지합니다.</li>
		<li>다음으로 벤치탑의 섹션을 30분 동안 식힙니다. 그 후, PBS에서 섹션을 5 분 동안 세 번 씻으시면 하십시오. 조심스럽게 샘플 주변의 영역을 건조하고 소수성 펜을 사용하여 샘플 주위에 큰 원을 그립니다. . 참고: 샘플을 만지지 마십시오. 소수성 펜으로 표시하는 것은 소수성 경계를 생성하여 더 적은 양의 항체 용액의 사용을 용이하게 합니다.</li>
		<li>10분 동안 PBS에서 0.3% H2O2로 섹션을 배치하여 내인성 과옥시다제 활성을 담금질한다. 400μL의 블록 버퍼(PBS포함 3% 소 세럼 알부민 및 비이온 세제의 0.3%)를 가습 챔버의 실온에서 1시간 동안.</li>
		<li>PBS에서 5 분 동안 섹션을 씻으면 하십시오. 다음으로, 단면을 커버할 수 있을 만큼 희석된 안티CD31 항체(1:250)의 100-400 μL을 추가한다. 이에 따라, 가습 챔버에서 4 °C에서 하룻밤 동안 섹션을 배양한다. 참고: 단면도가 항체 용액으로 완전히 덮여 있는지 확인합니다.</li>
		<li>1 차적인 항체를 제거하고, PBS에서 각각 5 분 동안 섹션을 세 번 씻는다.</li>
		<li>DAB 농축액 1mL에 DAB 농축액 1방울을 첨가하여 3, 3'-디아미노벤지딘(DAB) 혼합물을 준비하고 잘 섞는다. 그 후, 단면에 DAB 혼합물의 100-400 μL을 추가하고, 허용 가능한 염색 강도가 관찰될 때까지 2분 동안 눈으로 면밀히 모니터링한다. 참고: 단면도가 DAB 혼합물로 완전히 덮여 있는지 확인합니다.</li>
		<li>그 후, 흐르는 수돗물 아래에서 5 분 동안 헹구십시오. 단계 4.4.3-4.4.5에 설명된 바와 같이 헤마톡슬린 염색을 수행한다.</li>
		<li>4.4.6 단계에서 설명된 eosin-Y 염색을 수행한다. 4.4.7 단계에서 설명된 탈수 단계를 수행한다.</li>
		<li>마운팅 매체를 사용하여 커버립으로 섹션을 장착했습니다. ImageJ를 사용하여 이전에 설명된 21과 같이 미세 혈관 밀도로 간주될 수 있는 5개의 무작위로 선택된 필드(40x)에서CD31양성 영역(%)의 백분율을 추정한다.</li>
	</ol></li>
</ol>5. 통계 분석
<ol><li>통계 분석 소프트웨어를 사용하여 결과를 표준 편차로 ± 표현하고 비교에 대해 페어링되지 않은 t-test를 수행합니다. P < 0.05가 통계적으로 유의하다고 생각해 보십시오.</li>
</ol>

저자는 기사 콘텐츠가 잠재적 이해 상충으로 해석 될 수있는 상업적 또는 재정적 관계가없는 경우 구성되었다고 선언합니다.

이 연구는 필요한 실험실 업그레이드없이 3-4mm 절개를 통해 FA의 근위 및 탈산 영역에서 이중 결찰을 사용하여ApoE-/-마우스에 HLI 모델을 확립하기 위한 수정, 단순화 및 외과 효율적인 접근법을 보고합니다. 이 방법의 주요 특징은 마우스 HLI 모델8,9,10,11,12,15,20,22, 23,24를 설명하는 이전에 보고된 연구 결과에 비해 절개크기가<sup clas...

말초 동맥 질환 (PAD)과 같은 혈관 질환연구를 위한 전임상 동물 모델에 대한 충족되지 않은 필요성이 있습니다. 진단 및 치료의 고급 발달에도 불구하고 2018 년1에서 PAD를 가진 2 억 명 이상의 환자가 있었고 그 수는 지속적으로 증가하고 있습니다. 비록 몇몇 새로운 치료 접근법2,3,4,5,6,7이 기술되었지만, 이러한 치료 양식의 성공적인 번역을 임상 응용 프로그램으로 성공적으로 번역하는 것은 어려운 작업으로 남아 있다. 따라서, 인간 질환 상태를 시뮬레이션하는 생체 내 실험 모델에서 안정적이고 관련성이 높은 이러한 새로운 치료 접근법의 잠재적 기전및 효율을 조사하여 PAD6,7을치료해야 한다.
고지혈증과 죽상 경화증 (AS)은 PAD의 발달을위한 주요 위험 요소입니다. ApoE-/-- 마우스(고지방 식단)는 비정상적인 지방 대사와 고지혈증을 표시하고, 이후ApoE-/-마우스를 임상적으로 관련 있는 PAD를 시뮬레이션하는 최선의 선택으로 동맥 경화성 플라크를 개발한다. 전임상 HLI 동물 모델은 전 세계8, 9,10, 11,12,13,14,15에 걸쳐 실험실에서 가장 널리 사용되는 접근법인 대퇴동맥(DLFA)의 이중 결찰을 통해 생성된다. 그러나, 이 접근은 일반적으로 상대적으로 크고 침략적인 절개를 요구합니다. 더욱이, 그것은 필연적으로 증가 된 통증 손상 및 염증으로 고통받는 동물 (특히 마우스)으로 이어지며, 이는 또한 후속 실험 결과에 영향을 미치는5,6,16,17. 이 논문은 매우 작은 절개를 사용하여APOE-/-마우스의 급성 만성 HLI 모델을 설명합니다.

<table><tbody><tr><td>10x 인산염 완충액 식염</td>수 <td>Roth</td><td>9143.1</td><td>헤마톡실린 및 에오신 염색 및 면역조직화학 염색에 사용</td></tr><tr><td>30% H2O2</td><td>Roth</td><td>9681.2</td><td>면역조직화학 염색</td></tr><tr><td>6-0 흡수성 봉합</td>사 <td>PROLENE</td><td>8776H</td><td>피부 봉합에 사용</td></tr><tr><td>6-0 흡수성 봉합</td>사 <td>PROLENE</td><td>EP8706</td><td>수술에 사용</td></tr><tr><td>7-0 흡수성 봉합</td>사 <td>PROLENE</td><td>EH8021E</td><td>동맥</td></tr><tr><td>7-0 absroable 봉합</td>사 결찰에 사용 <td>PROLENE</td><td>EP8755</td><td>수술에 사용</td></tr><tr><td>아세트산</td><td>Roth</td><td>6755.1</td><td>헤마톡실린 및 에오신 염색에 사용</td></tr><tr><td>Albumin Fraktion V</td><td>Roth</td><td>8076.2</td><td>면역조직화학 염색에 사용</td></tr><tr><td>오토클레이브</td><td>Systec GmbH</td><td>Systec VX-150</td><td>수술 기구</td></tr><tr><td>Axio vert A1 현미경</td><td>Carl Zeiss</td><td>ZEISS Axio Vert.A1</td><td>혈구 및 에오신 염색 및 면역조직화학 염색</td></tr><tr><td>Bruker BioSpec 94/20 AVIII</td><td>Bruker Biospin MRI GmbH</td><td>N/A</td><td>대퇴 동맥 막힘</td></tr><tr><td>스캔 Buprenovet Sine 0,3mg/ml</td><td>Bayer AG</td><td>2542 (WDT)</td><td>수술 후 통증 관리에 사용됩니다. 투여량 - 수술 후 48시간 동안 8시간마다 체중 0.1mg/kg</td></tr><tr><td>CD31 항체</td><td>Abcam</td><td>ab28364</td><td>면역조직화학 염색에 사용</td></tr><tr><td>물에서 Eosin Y 용액 0.5</td>% <td>Roth</td><td>X883.1</td><td>헤마톡실린 및 에오신 염색에 사용</td></tr><tr><td>에피토프 회수 용액 pH 6</td><td>Leica Biosystems</td><td>6046945</td><td>면역조직화학 염색에 사용</td></tr><tr><td>에탄올 &ge; 99,5 %</td><td>Roth</td><td>5054.1</td><td>헤마톡실린 및 에오신 염색 및 면역조직화학 염색에 사용</td></tr><tr><td>펜타닐</td><td>케이맨 화학</td><td>437-38-7</td><td>마취에 사용</td></tr><tr><td>미세한 포인트 집게 집게</td><td>Medixplus</td><td>93-4505S</td><td>신경 및 정맥에서 동맥을 분리하는 데 사용</td></tr><tr><td>유리 구슬 살균기</td><td>Simon Keller</td><td>Type 250</td><td>수술 기구의 살균에 사용</td></tr><tr><td>Graefe iris 집게 곡선</td><td>VUBU VUBU</td><td>VUBU-02-72207</td><td>피부와 피하 조직의 무딘 분리에 사용</td></tr><tr><td>헤어 리무버 크림, Veet (알로에 베라 포함)</td> <td>Reckitt Benckiser</td><td>108972</td><td>마우스 뒷다리에서 헤어 제거</td></tr><tr><td>가열판</td><td>ST &Ouml; RK-TRONIC</td><td>7042092</td><td>마우스의 새틀 온도를 유지하십시오</td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Roth</td><td>T865.2</td><td>헤마톡실린 및 에오신 염색 및 면역 조직 화학 염색에 사용</td></tr><tr><td>Leica 수술 현미경 Leica</td><td></td><td>M651</td><td>작업을 용이하게하기 위해 시야를 확대</td></tr>하십시오 <tr><td>Liquid DAB + Substrate Chromogen System</td><td>Dako</td><td>K3468</td><td>면역 조직 화학 염색</td></tr><tr><td>에 사용남성 ApoE-/- 생쥐</td><td>Charles River Laboratories</td><td>N/A</td><td>말초 동맥 질환 생쥐 모델</td></tr><tr><td>Medetomidine</td><td>Cayman Chemical</td><td>128366-50-7</td><td>설립</td></tr>에 사용 마취 <tr><td>마이크로 바늘 홀더</td><td>Black & Black Surgical</td><td>B3B-18-8</td><td>바늘을 잡고</td></tr><tr><td>마이크로 봉합사 묶는 집게</td><td>Life Saver Surgical Industries</td><td>PS-MSF-145</td><td>수술 중 매듭을 돕기 위해 사용</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Biobase</td><td>Bk-Mt268m</td><td>조직 절편에 사용</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Ratiopharm</td><td>44856.01.00</td><td>마취에 사용</td></tr><tr><td>MR 호환 소동물 모니터링 및 게이팅 시스템 모델 1025</td><td>SA 기기</td><td>MRI 스캔 중 동물의 활력 징후 모니터링</td><td>N/a</td></tr><tr><td>Octeniderm farblos</td><td>Sch&uuml; LKE & Mayr GmbH</td><td>180212</td><td>피부 소독에 사용</td></tr><tr><td>눈과 코 연고</td><td>Bayer AG</td><td>1578675</td><td>마취</td></tr><tr><td>파라 포름 알데히드</td><td>Roth</td><td>0335.1</td><td>조직의 고정에 사용</td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>Nembutal</td><td>76-74-4</td><td>마취에 사용</td></tr><tr><td>식염수</td><td>DeltaSelect</td><td>1299.99.99</td><td>사용 마취</td></tr><tr><td>스프링 핸들 가위 미세하고 날카로운 팁</td><td>블랙 & Black Surgical</td><td>B66167</td><td>동맥 절단에 사용</td></tr><tr><td>SuperCut 가위</td><td>Black & 검은 외과</td><td>B55992</td><td>피부 절단에 사용</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Roth</td><td>9002-93-1</td><td>면역 조직 화학 염색</td></tr><tr><td>서양 다이어트에 사용, 1.25 % 콜레스테롤</td><td>ssniff Spezialdi & auml; ten GmbH</td><td>E15723-34</td><td>생쥐용 다이어트</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Roth</td><td>4436.3</td><td>헤마톡실린 및 에오신 염색 및 면역조직화학 염색에 사용</td></tr></tbody></table>

apoe에서 뒷다리 허혈의 변형 된 수술 모델-/- 소형 절개를 사용하여 마우스

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

이 연구의 목적은 대부분의 동물 실험실에서 구현 될 수있는 마우스에서 급성 허혈을 유도하기 위해 수정 된 수술 방법을 도입하고 평가하는 것입니다. 대퇴동맥(DLFA)의 이중 결찰에 대한 기존의 접근법과는 달리, DLFA를 수행하기 위해 근위 대퇴동맥(FA)을 노출시키기 위해 올바른 인게날 부위에 대한 작은 절개가 이루어졌다. 이어서, 7-0 봉합사를 사용하여, 절개는 말단 FA를 노출하기 위해 무릎 영역으로 끌려갔다. 수술 후 0, 1, 3, 5 및 7일 동안, 뒷사지의 기능적 회복은 탈로프 스케일을 사용하여 시각적으로 평가되고 등급화되었다. 히스토로지평가는 DLFA 이후 7일 후에 동물을 안락사한 후 수행되었다. 절차는 성공적으로 10 ApoE-/- 마우스에 있는 오른쪽 다리에, 그리고 어떤 마우스는 후속 관찰 도중 정지했습니다. 10마리의 마우스 의 절개 크기는 5mm(4.2± 0.63mm) 미만이었다. MRI 결과는 허혈성 측의 FA 혈류가 명확하게 차단되었다는 것을 보여주었습니다. Tarlov 스케일 결과는 수술 후 뒷다리 기능이 현저히 감소하고 다음 7일 동안 서서히 회복되었다는 것을 보여주었습니다. 조직학적 평가는 허혈성 측에 상당한 염증 반응을 보였고 허혈성 뒷두발의 미세 혈관 밀도를 감소시키는 것으로 나타났다. 결론적으로, 이 연구는 DLFA를 사용하여 뒷다리 허혈 (HLI)을 수행하기 위해 소형 절개를 사용하여 수정 된 기술을 소개합니다.

아포에의 특성-/-- 마우스 DLFA 수술은 HLI 모델을 확립하기 위해 10마리의 마우스에서 성공적으로 수행되었으며, 수술 후 마우스 중 누구도 사망하지 않았습니다. 체중의 변화를 따르기 위해, 마우스는 DLFA 절차 (PRE DLFA) 및 DLFA 수술 후 7 일 전에 무게를 측정했다 (포스트 DLFA). 사전 DLFA 가중치는 29.6에서 38.0g(평균 34.74 ± 2.47g)이며, DLFA 이후 의 무게는 26.5에서 34.1g(평균 30.77 ± 2.15g)으로, 이는 전 DLFA가중치(P &lt; 0.05, 피겨 3)보다현저히 낮았다. 수술 시간은 15분에서 47분까지 다양했다(평균 34.2± 8.82분, 마취 시간을 포함하지 않음). 10마우스의 절개 크기는 3mm에서 5mm(평균 4.2 ± 0.63 mm)에 구역수색되었습니다....

이 문서는 작은 절개를 가진 마우스에 있는 심각한 허혈을 확립하기 위하여 능률적인 외과 접근을 보여줍니다. 이 방법은 실험실 업그레이드없이 대부분의 연구 그룹에 의해 적용 될 수있다.

ApoE에서 뒷다리 허혈의 변형 된 수술 모델-/- 소형 절개를 사용하여 마우스

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most ...

우리가 오늘 소개한 것은 ApoE 마우스에 뒷다리 이혈증을 확립하기 위하여 단순화된 수정되고 외과적으로 능률적인 방법입니다. 이 방법은 모든 동물 시설에서 구현할 수 있습니다. 용압 방법의 주요 장점은 5 밀리미터 미만의 절개를 사용하여 낮은 침습성입니다.이 방법에는 학습 hof가 있습니다. 따라서 최종 분석에 포함될 동물에 대해 작업하기 전에 미세 수술 모델을 연습하는 것이 좋습니다. 이 방법은 의학 의사인 Kaixuan Yan과 제 실험실의 학생에 의해 입증될 것입니다.수술에 필요한 장비와 도구를 준비하여 시작합니다. 마우스에 마취를 투여 한 후, 건조를 방지하기 위해 눈에 그 연고를 적용합니다. 그런 다음 마우스를 가열 패드에 놓고 코어 체온을 섭씨 약 37도에서 유지합니다.면 봉면과 제모 크림을 사용하여 오른쪽의 뒷다리 피부에서 모발을 조심스럽게 제거합니다. 해부 현미경아래 가열 패드의 척추 위치에 마우스를 놓습니다. 알코올을 사용하여 피부를 소독하고 절개 의 식물 측에서 멀리 면으로 닦아.뾰족한 집게와 외과 가위를 사용하여 인구이날 부위의 한가운데에서 약 3~4밀리미터절개를 한다. 조심스럽게 근위 대퇴 신경 혈관 번들을 노출하는 미세 뾰족한 집게의 도움으로 피하 지방 조직을 제거합니다. 식염수로 촉촉한 면봉을 사용하여 대퇴동맥을 대퇴신경과 대퇴정맥에서 조심스럽게 옮겨서 움직입니다.그런 다음 7.0 봉합사의 끝을 사용하여 대퇴 칼집의 막을 조심스럽게 관통합니다. 그런 다음 근위 대퇴 동맥을 통해 7-0 흡수 가능한 봉합사에 전달하고 스프링 가위를 사용하여 이중 매듭을 만듭니다. 그 후 두 관계 사이의 대퇴 동맥을 분리.절개 하부 가장자리를 통해 6-0 흡수 가능한 봉합사를 통과하고 후드 사지의 무릎 오른쪽 부위로 절개를 부드럽게 드래그하여 태아 동맥을 노출시합니다. 조심스럽게 피하 조직을 옆으로 움직여 신경 혈관 번들을 노출시합니다. 대퇴정맥과 대퇴신경으로부터 대퇴동맥을 해부하고 면화로 신경을 보호한다.그런 다음 7.0 봉합사의 끝을 사용하여 대퇴 칼집의 막을 관통합니다. 두 개의 7-0 흡수 성 봉합사를 탈모 성 동맥을 통과하고 스프링 가위를 사용하여 두 개의 동점 사이의 대퇴동맥을 트랜스포메이크합니다. 그 후, 6-0 흡수성 봉합사를 사용하여 절개를 바느질한다.깨끗한 케이지에 가열 패드에 마우스를 놓고 복구 될 때까지 중요한 매개 변수를 계속 모니터링합니다. MRI를 통해 다음 날 대퇴동맥 또는 DLFA의 이중 결찰의 성공을 결정합니다. DLFA 절차 전에, 마우스의 무게는 29.6에서 38.0 그램에 구역 수색했습니다.DLFA 수술 후 7 일, 무게범위 26.5 받는 사람의 34.1 그램, 이전 DLFA 무게 보다 훨씬 낮은. 오른쪽 FA의 근위 및 탈구 영역은 더 많은 구류를 보여주지 않았다. 탈로프 스케일 결과는 수술 후 하루 만에 크게 감소했습니다.그(것)들은 다음 일 동안 천천히 증가하더라도, 7 일까지 기준선 보다는 아직도 낮았습니다. 7마리의 마우스에 있는 허혈성 뒷다리의 발은 반대로 측에 비해 자연적으로 스트레칭할 수 없었습니다. 또한, 마우스 의 4개는 반대로 측에 비해 발의 약간의 변색을 나타냈다.오른쪽 GM 근육의 H&E 염색은 불규칙한 허혈성 괴사를 전시하는 근섬유를 밝혔는데, 여기서 확산위성 세포가 괴사 심섬유를 대체하고 질량또는 정기적인 분산으로 분배되었다. 다핵대식 세포에 의한 염증성 침투를 나타내는 근섬유는 정상적인 형태학적 특성을 잃었으며, 재생된 근섬유가 거의 존재하지 않았다. 이 재생된 근섬유의 횡단 구간은 둥글게 진행되었다.세포질은 적색으로 염색되었고 하나의 작은 핵 또는 다중 핵이 중앙에 위치했다. 그러나, 염증 패턴의이 종류는 왼쪽 GM에서 관찰 되지 않았다. CD31 항체 염색은 미세 혈관 밀도를 관찰하기 위해 수행, 허혈성 뒷다리가 비 허혈성 측보다 훨씬 더 많은 미세 혈관 밀도를 나타냈다. 가장 중요한 것은 대퇴동맥의 해부입니다.작업자는 미세 수술 기술뿐만 아니라 마우스 뒷다리 해부학에 익숙해져야합니다. 원칙적으로,이 방법은 또한 다리에 이혈 혈증 -reperfusion 부상을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이에 따라, 동맥은 재퍼퓨전을 허용하기 전에 부드러운 용기 클램프로 가려질 수 있다.

a-modified-surgical-model-hind-limb-ischemia-apoe-mice-using

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

일방적 hindlimb의 국소 빈혈의 유도에 대한 수술은 레이저 도플러 재관류 이미징에 의해 국소 빈혈의 확인과 증명합니다.

Hindlimb 국소 빈혈의 Murine 모델

우리는 단계별 절차와 필요한 장비에 대한 설명을 포함 손쥐 spinotrapezius 근육의 소설 동맥 결합 모델을 보여줍니다. 우리는 수술과 intravital 및 공 촛점 현미경을 사용하여 혈관 네트워크 리모델링 및 기능 vasodilation에 관한 관련 결과 측정을 설명합니다.

Microvascular 기능 및 리모델링에 Arteriolar 결합의 영향을 평가하기 위해 손쥐 Spinotrapezius 모델

제시 한 쥐의 등쪽 피하 지방 챔버의 창은 musculocutaneous 플랩의 급성 지속적인 허혈 영역을 시각화. 미세 혈관 및 혈류 역학의 정량의 직접적이고 반복적 인 평가를위한 생체 내에 에피 형광 현미경 수 있습니다. 형태 학적 및 혈역학 적 결과는 더 조직 학적 및 분자 분석과 관련 될 수있다.

마우스의 등쪽 피하 지방 상공 회의소에서 허혈성 조직 손상 : 피부 플랩 모델은 급성 영구 허혈을 조사하기

최소한의 침습적 조작으로 마우스의 심근 경색에 대한 재현성이 높은 모델을 설명합니다. 모델을 쉽게 수행할 수 있어 재현성과 생존율이 높습니다. 따라서 설명된 모델은 3R 원칙(Replacement, Refinement and Reduction)에 의해 요청되는 대로 필요한 동물의 수를 줄일 것입니다.

쥐 심근 경색을 유도 최소 침습 수술

슈퍼 미세 혈관 문합을위한 비 봉합 커프 기술을 적용 마우스에서 소성을 뒷다리 이식이 새로운 모델은, 혈관 복합 동종 이식 (VCA)에 관한 생체 역학적 면역 학적 연구를위한 강력한 도구를 제공합니다.

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

마우스에서 뒷다리 허혈의 외과적 유도는 혈관 신생을 검사하는 데 유용하지만, 현저한 허혈 유발 조직 괴사를 나타내는 특정 근친 마우스 균주에서는 손상됩니다. 점진적인 동맥 폐색의 유도를 통해 이 문제를 회피하기 위해 아메로이드 수축기를 사용하여 아급성 사지 허혈을 유도하는 방법이 설명되어 있습니다.

급성 및 아 급성 쥐 뒷다리 국소 빈혈하는 방법

우리는 실리콘으로 코팅된 봉합사를 사용하여 중대뇌동맥의 폐색에 의해 유도된 뇌졸중의 마우스 모델을 설명합니다. 이 프로토콜은 영구적인 폐색 또는 일시적인 허혈을 유도한 후 재관류를 유도하는 데 적용할 수 있습니다.

경색 지역의 중간 동맥 폐색 기술 및 시각화를 사용하여 마우스의 허혈성 뇌졸중 및 허혈 - 재관류 유도

여기에서, 중요한 뒷다리 허혈 실험 모형은 혈관 신생 치료의 효과를 평가하기 위하여 기능적, 적학 및 분자 시험의 건전지에 선행됩니다.

힌들보 리 허 혈의 뮤린 모델에서 치료 혈관 신생 평가

여기서는 미세 조작을 통해 좌측 전방 하행 관상동맥의 정밀 결찰에 의해 마우스에서 심근경색 또는 심근 허혈 재관류 손상을 유도할 수 있는 간단하고 재현 가능한 방법을 설명합니다.

마우스의 심근경색 및 심근 허혈-재관류 손상 유도

이 프로토콜은 대퇴 혈관을 클램핑 및 결찰을 통해 표재성 하상복부 혈관을 통한 혈류를 잘 시각화하고 조작할 수 있도록 하는 쥐의 피부 근막 피판을 채취, 봉합 및 모니터링하는 것을 설명합니다. 이것은 허혈성 전처리와 관련된 연구에 중요합니다.

쥐 모델에서 허혈성 전처리 효과를 연구하기 위한 표재성 하복부 동맥 축 플랩

우리는 이종 소성 후다리에서 목으로의 혈관 형성 종합 동체이식 마우스 모델을 제시합니다. 이 초미세수술 프로토콜은 0.3-0.5mm 혈관 문합을 포함하며, 나일론 필라멘트 유도와 정맥 커핑을 통합합니다. 이 연구는 관성 합성 동체 이식에서 내성, 허혈-재관류 손상, 면역학적 기전에 관한 번역 연구를 위한 신뢰할 수 있는 기반을 제공합니다.

쥐에서의 이소성 하지에서 목으로의 이식: 혈관 복합 동체이식의 초미세수술 모델

배우세요 ApoE-/- 마우스에서 소형 절개를 이용한 후지 허혈 수술 모델을 구축하는 방법을. 이 기법은 저침습성으로 혈관 및 근육 병리학 연구에 활용됩니다.

ApoE에서 뒷다리 허혈의 변형 된 수술 모델^-/- 소형 절개를 사용하여 마우스

더 많은 동영상 탐색