NAFLD/NASH의 쥐 모형에 초음파 및 전단 파 단층 사진 의 응용

초음파 및 전단 파 엘라스토피의 사용은 연구원이 무알코올 성 세포 형 간염의 모형에 있는 간 지방 및 섬유증에 있는 변경을 측정하는 것을 가능하게 합니다. 이 이미징 양식은 비침습적, 고처리량 및 임상적으로 전이 가능한 기술이며 약물 발견 중 비알코올성 간염 모델의 질병 단계 및 효능을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 시작하려면 6-7주 된 남성 Wistar Han rats를 150~175그램의 개별 환기 케이지에 넣고 적절한 침구를 약 22도, 12~12시간 의 빛/어두운 사이클로 40~70%의 상대 습도를 조절합니다.

1%콜레스테롤을 가진 콜린 결핍, 고지방 규정식을 가진 20개의 쥐를, 그리고 표준 실험실 설치류 차우를 가진 또 다른 20개의 쥐를 제공합니다. 이미징 기기를 설정하려면 이미징 부위에 온난한 표면을 배치하여 이미징 중에 동물을 따뜻하게 유지하고 흡입제 마취를 전달하기 위한 마취 코 콘을 수정합니다. 초음파 프로브 홀더를 사용하여 초음파 프로브를 원하는 위치로 이동하고 프로브가 동물에 놓이지 않도록하십시오.

쥐가 완전히 마취되면 유도 챔버에서 따뜻한 뜨거운 물이 순환 담요로 옮기습니다. 화학 적 제모 크림을 사용하여 쥐의 오른쪽에있는 골반에 늑골 케이지에서 머리카락을 제거합니다. 쥐를 왼쪽 측면 재배치 위치에 놓고 머리 위에 위쪽 발을 따뜻한 이미징 플랫폼에 테이프로 놓습니다.

계기판에 있는 환자 키를 누르고 연구 설계에 따라 피사체를 식별합니다. 쥐의 미온된 피부 부위에 소량의 따뜻한 초음파 젤을 발라주세요. 초음파 프로브를 이동하여 젤로 덮인 부위를 만집니다.

내부 장기의 라이브 B 모드 이미지가 화면에 나타나면 초음파 프로브를 엉덩이 위 부위로 약간 이동하여 요추 척추와 평행하게 이동합니다. B 모드 디스플레이를 사용하여 큰 신장 동맥 및 피질 수질 분리를 식별하여 오른쪽 신장을 찾습니다. 이미지의 단일 평면에서 간 부분을 관찰하고 기포 또는 그림자가 이미지에 존재하지 않도록합니다.

초점을 조정하고 신장 피질과 간 빈맥이 동일한 평면에 있는지 확인하여 선명한 이미지를 얻습니다. 흐리게 이미지를 캡처하지 않도록 화면을 동결 할 때 동물이 호흡 사이에 있는지 확인합니다. B 모드 비율을 선택하여 선택한 관심 영역에서 조직의 상대적 밝기를 측정합니다.

2 밀리미터 원을 만들고 신장의 오른쪽에 위치한 간 이미지에 관심 영역에 배치합니다. 신장 피질의 이미지에 새로운 원을 배치하여 간과 신장 피질에 원의 깊이를 동일하게 유지합니다. 제어판의 선택 버튼을 눌러 간신장 지수를 B 모드 비율로 표시하고 조직의 서로 다른 깊이및 평면에서 세 번 측정을 반복한 다음 평균을 계산합니다.

프로브를 오른쪽 하위 코스부분에서 가로방향으로 이동하여 B 모드를 사용하여 간을 찾습니다. 주로 빈약한 간 및 포탈 정맥 및 간 동맥과 같은 큰 혈관이없는 간의 명확한 영역을 찾은 다음 제어판의 SWE 버튼을 눌러 조직의 전단 탄력지도를 생성합니다. 그림자가 없는 부위에 간 캡슐 아래의 SWE 상자의 크기와 위치를 조정합니다.

상자가 가득 차있고 안정되면 쥐가 호흡 사이에있는 동안 제어판의 동결 버튼을 누릅니다. 계측기의 터치 디스플레이에 Q-Box를 탭하여 전단 파 탄력맵에서 관심 영역의 탄력성을 계산합니다. 원과 데이터 상자가 나타납니다.

균일한 착색으로 그림자없는 영역에 원을 배치하여 강성 영역을 피합니다. 간의 다른 지역에서 SWE 매핑 된 이미지를 수집하기 위해 복부에 프로브를 위아래로 또는 옆으로 이동하여 절차를 세 번 반복합니다. 완료되면 발에서 테이프를 제거하고 여분의 젤을 닦아냅니다.

쥐를 따뜻하고 건조한 케이지에 다시 넣고 완전히 회복할 수 있도록 합니다. 트랙 볼 및 선택 버튼을 사용하여 환자의 이름 옆에 있는 상자를 선택하여 데이터 분석에 필요한 모든 검사를 선택합니다. 파일을 내보낸 후 각 검사의 개별 JPG 파일을 열고 이미지의 오른쪽에 있는 데이터를 관찰합니다.

모든 데이터를 스프레드시트 또는 기타 데이터베이스 관리 소프트웨어에 복사하고 원하는 통계 분석을 수행합니다. 대조군과 콜린-결핍, 고지방 다이어트 그룹에서 간 신장 지수의 대표적인 이미지는 신장 피질에서 간 밝기가 거의 동일하다는 것을 나타내며, 간신장 지수는 대조군에서 1개 미만이었다. 고지방 식이그룹에서는 간밝기가 높아졌고, 간신장지수는 6주 만에 1.91, 12주 시점에서 1.79로 상승했다.

고지방 다이어트 그룹의 간장 색인 값은 고원에 도달하기 전에 처음 3 ~ 6 주 동안 빠르게 상승했습니다. 오일 레드 O 염료로 염색된 간 단면은 대조군에 비해 고지방 식이군에서 유의하게 증가한 스테인드 영역을 보였다. 또한 얼룩진 영역과 간 신장 지수 사이에 상관 관계가 발견되었습니다.

조직 강성은 12 주 이상 고지방 규정식 단에서 점차적으로 증가하고, 섬유증 때문에 23.1 kilopascals에 도달했습니다. 간 샘플은 섬유증의 지표로 콜라겐을 국소화하기 위해 피그리리우스 빨간색으로 염색되었다. 대조군에 비해 고지방 식이군에서 얼룩진 비율의 현저한 증가가 관찰되었다.

그리고 백분율 염색 된 영역과 전단 파 E 계수 수 사이에도 강한 상관 관계가 발견되었습니다. 트랜스듀서와 측정 원 이나 상자를 제대로 배치하는 것이 중요합니다. 이미지에서 아티팩트를 피하면 반복 가능하고 일관된 측정이 가능합니다.

시술 후, 간 트리글리세라이드 및 콜라겐 유전자 발현의 전 생체 측정은 또한 부검 조직에서 수행되어 이미징에서 본 결과를 확인할 수 있다.