Name: 애플 펄프에서 플루오-4/AM으로 세포질 Ca2+ 염색 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: 배우세요 사과 펄프 세포에서 Fluo-4/AM을 이용한 세포질 Ca²⁺ 염색 방법을. 효소 분해로 원형질체를 분리하고 형광 현미경으로 칼슘 동태를 관찰하여 과실 발달 및 품질 관리 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 사업은 산동성 농업다양성개선사업(2019LZGC007)과 산동현대농업산업기술시스템(SDAIT-06-05)의 과일나무 혁신팀이 지원했다.

1. 프토플라스트 추출
<ol><li>기본 용액 준비: 20 mM CaCl2,5 mM 2-(N-morpholino)에탄술포닉산, 0.4 M D-소르비톨. 참고: 기본 용액의 pH는 0.1M Tris 버퍼로 5.8로 조정되고 0.22 μm 수용성 필터를 통해 여과하고 4°C에 저장하였다.</li>
	<li>효소 용액 준비: 0.3%(w/v) Macerozyme R-10 및 0.5%(w/v) 셀룰라아제 R-10을 기본 솔루션과 함께 혼합합니다.</li>
	<li>1.5mL 원심분리기 튜브에 0.5mL의 효소 용액을 추가합니다. 건강하고 잘 익은 사과를 선택하십시오. 그런 다음 펄프를 10 x 5 x 1mm3 크기(그림 1A-1C)로슬라이스합니다.</li>
	<li>사과 과일 펄프 조각을 효소 용액을 함유한 1.5mL 원심분리기 튜브에 넣은 다음튜브(그림 1D)를닫습니다.</li>
	<li>1 h에 대 한 28°C에서 튜브를 배양 하 고 어둠 속에서 셰이커에서 70 rpm/min에서 흔들.</li>
	<li>펄프 조각을 씻으시면 됩니다. 모든 효소 솔루션을 흡인한 다음 기본 솔루션의 0.5mL를 추가합니다.</li>
	<li>실온에서 2 분 동안 300 x g의 원심 분리기.</li>
	<li>프토플라스트 서스펜션을 얻으려면 원심분리관의 바닥에서 용액을 흡인한다(도1E).</li>
</ol>2. 소분자 칼슘 이온 형광 염색
<ol><li>플루오-4/AM 로딩 솔루션을 1:1:2비율로 2mM 플루오-4/AM, 20% F-127, 10배 인산완충식(PBS:80m MM Na2HPO4,1.36M NaCI, 20mM KH2PO4,26mM KCI)으로 준비한다.</li>
	<li>플루오-4/AM 로딩 용제 1μL을 1.5mL 원심분리기 튜브에 존재하는 프토플라스트 서스펜션의 99 μL에 추가합니다. 형광염의 최종 농도가 5 μM인지 확인하십시오.</li>
	<li>La3+ 처리: 프토플라스트 서스펜션의 98 μL, 10mM La3+ 1 μL, 플루오-4/AM 로딩 솔루션 1μL로 100 μM La3+용액을 준비합니다. 용액을 섞고 튜브를 닫습니다.</li>
	<li>어둠 속에서 37 °C에서 30 분 동안 배양하십시오.</li>
	<li>상온에서 2 분 동안 300 x g에서 원심 분리로 프토플라스트를 씻으시면 됩니다. 용액의 70 μL을 흡인하고 기본 용액의 70 μL을 추가합니다.</li>
	<li>37°C에서 37°C의 프로토프스트 서스펜션을 30분 동안 배양하여 완전히 스테스테리프를 제거합니다.</li>
	<li>프토플라스트 서스펜션의 15 μL을 흡인하고 슬라이드에 떨어뜨립니다.</li>
	<li>형광 현미경(보충 도서 S1)에서관찰하십시오. 참고: 3.45 μm 픽셀 해상도의 3.2 MP(2048 x 1536) CMOS 센서와 같은 고감도컬러 카메라를 사용합니다.</li>
	<li>이미징(20x)을 위해 GFP 채널을 선택합니다. 밝기를 0.5로 설정합니다. 참고: 조명은 통합 된 하드 코팅 필터 세트와 조절 강도 LED 라이트 큐브입니다. 플루오-4/AM의 흥분 파장은 490 nm입니다.</li>
</ol>3. 확률 성생존 분석
<ol><li>플루오레세인 디아세테이트(FDA) 재고 용액 준비: 최종 농도가 1 mg/mL가 될 때까지 아세톤에 FDA를 용해하십시오.</li>
	<li>주식 용액 의 1 μL 및 아세톤의 99 μL로 FDA 작업 솔루션을 준비하십시오.</li>
	<li>99 μL의 프토플라스트 서스펜션에 FDA 작동 솔루션 1μL을 추가합니다. 위아래로 파이프팅하여 용액을 섞은 다음 튜브를 닫습니다. 참고: FDA의 최종 농도는 100 μg/L입니다.</li>
	<li>어둠 속에서 5 분 동안 실온에서 얼룩.</li>
	<li>슬라이드를 준비하고 형광 현미경으로 관찰하십시오.</li>
	<li>이미징을 위한 GFP 채널을 선택합니다(그림1F).</li>
</ol>4. 이미지 분석
<ol><li>이미지 분석 및 스프레드시트 소프트웨어(예: 이미지 프로 플러스 및 Excel 2010)를 사용하여 획득한 이미지를 분석합니다.</li>
	<li>형광강도(보충 도서 S2)를계산하기 위해 프톱서스트에서 두 개의 수직 직경을 선택합니다. 다른 치료하에서 모든 프토플라스트의 형광 강도를 측정하여 측정했습니다. 최종 처리를 위해 사진 편집 소프트웨어를 사용합니다.</li>
</ol>5. 통계 분석
<ol><li>통계소프트웨어(보충 도S3)를사용하여 통계 분석을 수행합니다. 데이터는 평균 ± SD에 표시됩니다. 학생의 t-시험은실험 그룹 간의 차이점을 분석하는 데 사용되었습니다.</li>
</ol>

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<li>Li, J., Yang, H. -q, Yan, T. -l, Shu, H. -r <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+indole+butyric+acid+on+the+transportation+of+stored+calcium+in+Malus+hupehensis+rhed.+Seedling%5BTitle%5D)+AND+%22Agricultural+Sciences+in+China%22%5BJournal%5D)">Effect of indole butyric acid on the transportation of stored calcium in Malus hupehensis rhed. Seedling.</a> Agricultural Sciences in China. 5 (11), 834-838 (2006).</li>
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</ol>

저자는 이 문서의 내용과 이해상충이 없다고 선언합니다.

이 연구에서는, 생존 성 전도는 효소 가수 분해에 의해 얻어졌다. 이 방법은 신선한 사과를 필요로합니다. 본 프로토콜은 연구 연구에 사용하기 위해 과일 펄프에서 많은 수의 프토플라스트를 신속하게 격리할 수 있게 합니다. 이 방법의 적용가능성은 '후지'에 만전을 기하지 않습니다. '두난'과 '꿀 크리스프'의 사과 펄프의 프톱스트도 동일한프로토콜(보충 도면 S4)을통해 추출할 수 있다. enzymolysis 후 프로토프스트 용액은 세포 파편을 포함, 이는 이전 방법에 비해 다소 향상되었다. 필수 세포 재료로서, 사과 펄프 프롬프는 세포 단백질 발현 기술, 단세포 염기서열 분석 및 기타 연구에 사용될 수 있다.
식물세포(30)에서화학형 성소 시약 염색에 관한 많은 방법이 있다. 예를 들어, 플루오-3/AM은 저온(4°C)으로 적재되어 루트 팁셀(31)을입력하였다. 플루오...

Ca2+ 식물 신호 변환 및 신진 대사 에 중요 한 역할을1,2. 또한, 저장5,6동안 경도, 당도 및 생리장애에 대한 감수성을 포함한 과일 품질 특성3,4를조절한다. 세포질 Ca2+ 신호 변환에 중요 한 역할을 하 고 식물 성장 및 개발을 조절7. 세포칼슘 항상성의 교란은 사과8,배9의갈색 반점 질환,토마토(10)의배부패에 쓰라린 구덩이를 유도할 수 있으며, 과일 품질에 영향을 미치고 심각한 경제적 손실을 유발할 수있다 3,11. 칼슘 이미징은 충분한 공간 적 및 시간적 해상도를 가지며 살아있는 세포12,13에서Ca2+ 역학을 관찰하는 중요한 방법입니다.
현재, 살아있는 세포에서 세포내 칼슘 이미징을 위한 두 가지 주요 방법이 있다: 하나는 화학적 소분자 형광프로브(14)를채택하고, 다른 하나는 유전자 인코딩 센서(GECI)15,16이다. 과일 나무에 안정적인 형질 전환 시스템을 확립하고 더 긴 과일 발달의 어려움을 감안할 때, GECIS는 과일 Ca2 + 형광 화상 진찰에 적합하지 않습니다.
플루오-4/AM과 같은 소분자 형광 프로브는 특별한 장점이 있습니다: 그들의 AM 에스테르 형태(세포 투과성 아세톡시메틸 에스테르 유도체)는 형질, 급속및 비 세포독성17을만드는 형질이 없는 살아있는 세포에 쉽게 대량으로 적재될 수 있다. 플루오-4/AM은 피루스 피리폴리아18과 페투니아,19의 꽃가루 튜브에 성공적으로 적재될 수 있을 뿐만 아니라 가드셀(20)과 아라비도시스(21)의루트 모발에 탑재될 수 있다.
현재, 펄프세포(22)의칼슘 형광 염색에 대한 보고는 거의 없다. 중요한 미네랄 요소로서 칼슘은 사과와 같은 나무 과일의 성장과 품질 관리에 중요한 역할을 합니다. 사과 나무는 전 세계적으로 중요한 경제 종으로 인식되고, 사과는 건강한 음식으로 간주됩니다23. 이 연구에서는 효소 가수분해를 통해 사과 과일 펄프에서 실행 가능한 전도를 얻은 다음 소분자 형광 시약을 세포질에 로드하여 Ca2+를검출했습니다.

<table><tbody><tr><td>10&times; 인산염 완충 식염</td>수 <td>Solarbio</td><td>P1022</td><td>PBS (인산염 완충 용액)는 인산염 완충 용액으로 비교적 안정적인 이온 환경과 pH 완충 용량을 제공 할 수 있습니다. 분자 클로닝 및 세포 배양을 위해 생물학에서 자주 사용되는 완충 염 용액입니다. pH는 7.4입니다.</td></tr><tr><td>2- (N- 모르 폴리노) 에탄 술폰산</td><td>Solarbio</td><td>M8010</td><td>생물학적 완충제</td></tr><tr><td>CaCl 2 &middot; 2H2O</td><td>Solarbio</td><td>C8370</td><td>염화칼슘 이수화물은 대부분 과립 형태의 흰색 또는 회색 화학 물질입니다.</td></tr><tr><td>셀룰라아제 R-10</td><td>Yakult Honsha</td><td>MX7352</td><td>식물 세포벽을 저하시킵니다.</td></tr><tr><td>D-소르비톨</td><td>Solarbio</td><td>S8090</td><td>보습 특성이 우수하고 건조를 방지하며 설탕, 소금 등이 결정화되는 것을 방지합니다.</td></tr><tr><td>F-127</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P6867</td><td>Pluronic F-127은 비이온성 계면활성제 폴리올(분자량 약 12500 Daltons)로, 생리학적 매체에서 수불용성 염료 및 기타 물질의 용해를 촉진하는 데 도움이</td></tr> 되는 것으로 밝혀졌습니다.<tr><td>FDA</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F1303</td><td>FDA는 형광을 활성화하는 데 필요한 효소 활성과 형광 제품의 세포 내 유지에 필요한 세포막 무결성을 모두 측정하는 생존 프로브 역할을 할 수 있는 세포 투과성 에스테라제 기질입니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>Fluo-4/AM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F14201</td><td>녹색 형광 칼슘 지시약 Fluo-4/AM은 칼슘 지시약 Fluo-3/AM의 개선된 버전입니다. Fluo-4/AM은 더 빠르게 로드되고 동일한 농도에서 더 밝습니다. 488nm 아르곤 이온 레이저로 잘 여기할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>형광 현미경</td><td>Thermo Fisher</td><td>EVOS Auto 2</td><td>형광 이미지를 관찰하십시오.</td></tr><tr><td>Macerozyme R-10</td><td>Yakult Honsha</td><td>MX7351</td><td>식물 조직을 분해하여 단일 세포를 분리합니다.</td></tr><tr><td>트리스</td><td>Solarbio</td><td>T8060</td><td>생화학 및 분자 생물학 실험에서 완충액 제조에 널리 사용됩니다.</td></tr></tbody></table>

애플 펄프에서 플루오-4/am으로 세포질 ca2+ 염색

Staining the Cytoplasmic Ca2+ with Fluo-4/AM in Apple Pulp

사이토솔릭 Ca2+는 식물 개발에 중요한 역할을 합니다. 칼슘 이미징은 세포질에서 Ca2+의 동적 변화를 감지하는 가장 다양한 방법입니다. 이 연구에서는 효소 가수분해에 의해 펄프 세포의 생존 가능한 전도를 얻었습니다. 격리된 프토프러스트들은 37°C에서 30분 동안 소분자 형광 시약(Fluo-4/AM)으로 배양되었다. 형광 프로브는 성공적으로 염색 된 세포색 Ca2 + 그러나 vacuoles에 축적되지 않았습니다. La3+,Ca2+ 채널 차단제, 세포질 형광 강도 감소. 이러한 결과는 Fluo-4/AM이 과일 육체에서 세포색 Ca2+의 변화를 감지하는 데 사용될 수 있음을 시사합니다. 요약하자면, 우리는 과일의 살 세포로부터 프톱서를 효과적으로 분리하고 펄프 세포의 세포질에 소분자 칼슘 형광 시약을 적재하여 Ca2+를 검출하는 방법을 제시한다.

상술한 프로토콜에 따라, 우리는 펄프(도1)로부터실행 가능한 프톱라스트를 얻기 위해 효소 방법을 사용했다. 일부 프톱라스에는 바쿨올레가 있었고, 다른 프로토프라스는 그렇지 않았다. Protoplasts는 Ca2+ 형광 표시등이 그(것)들에 로드되지 않았을 때 형광을 전시하지 않았습니다. 플루오-4/AM이 프토플라스트에 적재되었을 때, 세포질은 바쿨올이 아닌 형광이되었다(그림 2). 이 결과는 Fluo-4/AM이 세포질에서 Ca2+ 를 성공적으로 염색하고 구획화가 관찰되지 않았다는 것을24로나타냈습니다. 프토플라스트는 FDA로 5분 동안 염색되었고 세포질 형광을 보였습니다. 이것은 고온 (37 °C)이 확률 생존에 영향을 미치지 않는다는 것을 나타냈다.
La3+,Ca...

사과 펄프 세포의 분리된 전형세포는 세포질 Ca2+ 농도를 검출하기 위해 칼슘 형광 시약으로 적재되었다.

애플 펄프에서 플루오-4/AM으로 세포질 Ca2+ 염색

Cytosolic Ca2+ plays a key role in plant development. Calcium imaging is the most versatile method to detect dynamic changes in Ca2+ in the cytoplasm. In ...

중요한 미네랄 요소로서 칼슘은 사과와 같은 나무 과일의 성장과 품질 관리에 중요한 역할을 하며, 저장 시 경도, 당도, 저장 기간 및 생리장애를 조절할 수 있다. 칼슘 이미징은 세포질에서 칼슘 이온의 동적 변화를 감지하는 가장 서쪽 방법입니다. 형광4/AM과 같은 소분자 형광 지표는 칼슘 이온 특이적 선택성을 가지며 유연하고 신속한 비세포 독성인 에스테르화 인큐베이션에 의해 비침습적으로 적재될 수 있습니다.이 프로토콜은 소분자 화학형 시약 플루오-4/AM을 식물 성층세포에 적재하는 방법을 소개합니다. 1.5 밀리리터 원심분리기 튜브에 효소 용액0.5 밀리리터를 추가합니다. 건강하고 잘 익은 사과를 선택한 다음 펄프를 10배 5배 1입방 밀리리터 크기로 자른다.펄프 조각을 효소 용액에 넣은 다음 튜브를 닫습니다. 1 시간 동안 28도에서 튜브를 인큐베이션합니다. 어둠 속에서 70 rpm에 구타.그 후 펄프 조각을 씻고 모든 효소 용액을 흡인한 다음 0.5 밀리리터 기본 용액을 추가하십시오. 2 분 동안 300g의 속도로 원심 분리기. 프톱서스트 서스펜션은 바닥 용액을 흡입하여 얻을 수 있다.소분자 화학형 시약 염색. 플루오-4/AM 로딩 솔루션을 2 밀리몰러 플루오-4/AM, 20%ethyl127 및 1-1 대 2 비율로 10X 인산완충식염식염으로 준비한다. 플루오-4/AM의 마이크로리터 로딩 솔루션 1을 99 마이크로리터 프로토프스트 서스펜션에 추가합니다.형광염료의 최종 농도는 5 마이크로몰라입니다. 용액을 섞은 다음 튜브를 닫습니다. 동시에, 란탄은 작은 분자 화학 형광제의 칼슘 또는 고유성을 철분합니다.마이크로리터 1개 또는 10마이크로리터 더 랜타넘 아이언을 추가한 다음 플루오-4/AM의 마이크로리터 로딩 솔루션 1개를 98마이크로리터 프로토프라스트 서스펜션에 추가합니다. 라탄철의 최종 농도는 100 마이크로몰라입니다. 용액을 섞은 다음 튜브를 닫습니다.어둠 속에서 30 분 동안 37도에서 배양하십시오. 그 후, 2 분 동안 300 G의 속도로 원심 분리기. 17 마이크로리터 용액에 흡인하고 17 마이크로리터 기본 솔루션을 추가합니다.30분 동안 37도에서 프로토프스트 서스펜션을 30분 동안 배양하여 50마이크로리터 프토프러스트 서스펜션을 흡기하고 슬라이드에 떨어뜨립니다. 형광 현미경으로 관찰하십시오. 관찰할 배율과 GFP 채널을 20배 선택합니다.밝기를 0.5로 균일하게 조정합니다. 이 제안된 방법의 중요한 단계는 프톱서스트에 있는 얼룩을 세척하고 30 분 동안 배양하는 것입니다. 세척이 부족하면 관찰 중에 형광에 과도한 후원자가 발생하며 잠복이 있어 더 나은 로딩이나 프로브를 세포질로 재적재할 수 있습니다.Protoplasts 생존 분석 소요 99 마이크로 리터 protoplasts 30 분 동안 37도에서 배양 후. FD 솔루션에 1ml를 추가하여 프스토플라스트 서스펜션에 추가합니다. 용액을 여러 번 위아래로 피펫팅한 다음 튜브를 닫습니다.어둠 속에서 5 분 동안 실온에서 유지하십시오. 슬라이드를 준비하고 GFP 채널을 통해 형광 현미경으로 관찰하십시오. 우리는 당신에게 그림 하나 다음 결과를 제시한다.우리는 펄프에서 프톱을 얻는 모든 효소 방법을 사용합니다. 일부 프톱라스에는 바쿠올이 있었고 다른 프로토폴은 그렇지 않았습니다. 프루프는 5분 동안 FD로 염색되었고, 고온, 37도가 생존율 또는 전도도 2에 영향을 미치지 않는다는 것을 나타내는 세포질의 플로레스센트를 보여 준다.프톱서스트는 칼슘 철형 광등 표시기 중 하나에서 형광을 나타내지 않았거나 그 안에 적재되지 않았습니다. 플루오-4/AM보다 프루프라스트에 적재되었지만, 백석은 형광이 되었다. 칼슘 채널을 효과적으로 차단하는 란타눔 아이언은 세포막이 프로토프스트 플루오-4/AM 로딩에 첨가되었다.100 마이크로몰라 라나탄 다리미의 최종 농도에서 칼슘 형광 강도를 현저히 감소시다. 이 결과는 플루오-4/AM이 세포석에서 칼슘 철에 효과적으로 머무르고 칼슘 철함량의 역동적인 변화를 보여준다는 것을 더욱 보여주었습니다. 도 3 부토-4/AM 결과는 IMH 승인을 사용하여 분석되었으며 6.0 소프트웨어 플루오-4/AM 염색을 사용하여 라탄 섬의 첨가로 세포질 칼슘 철의 플로레시션 값을 현저히 감소시키는 것으로 분석되었다.이 비디오에서는 모든 전도가 효소 가수분해에 의해 얻어졌습니다. 우리는 성공적으로 37도에서 프톱서스트에 형광 프로브를로드. 더 이상, 방법은 전도의 생존에 영향을 미치지 않았다.요약하자면, 여기에 설명된 메서드는 상세합니다. 사과 펄프 세포에서 세포질 칼슘 이온의 동적 변화는 칼슘 관련 연구의 추가 목적을 위해 10 동등한 지원을 제공한다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

저하 및 재활용을위한 효모 공포의 산성 루멘에 organelles의 전달을 모니터링하는 강력한 방법이 설명되어 있습니다. 방법은 유전자 인코딩 듀얼 발광 형광 산도 - 바이오 센서 및 형광 현미경을 사용하여 개별 세포의 시각화와 대상 organelles의 특정 상표에 의존합니다.

효모에서 모니터링 Mitophagy을위한 형광 현미경 분석 Saccharomyces cerevisiae

의 연결을 네트워크를 개발 자발적인 활동은 칼슘에 민감한 지표 염료의 AM - 에스테르 양식을 사용하여 측정할 수 있습니다. 의 연결을 활성화를 나타내는 세포 내 칼슘의 변화는 하나 또는 두 개의 광자 이미징과 형광 표시기에 일시적 변화로 감지됩니다. 이 프로토콜은 발달 종속의 연결 네트워크의 범위에 대해 적용할 수...

두피 네트워크 개발에 기능성 칼슘 이미징

이 비디오에서는 쌍떡잎식물 식물인 애기장대(Arabidopsis thaliana)의 세포벽 내 셀룰로오스 침착을 시각화하는 염색 절차를 설명하며, 이는 β 결합 글루칸에 특이적으로 결합하여 자외선 아래에서 형광을 나타냅니다.

Calcofluor White staining: 쌍떡잎식물 줄기 절편의 세포벽에 있는 셀룰로오스 침전물의 UV 유도 형광 시각화를 위한 간단한 방법

우리는 기능적 신경 말단에서 화상 시냅스 소포 재활용 스티 릴 FM 염료의 사용을 설명한다. 이 프로토콜은 없습니다 만 유발하는 것이 아니라 또한 자연과 소형 시냅스 활동에 적용 할 수 있습니다. 프로토콜은 효과적으로 평가할 수 시냅스 이벤트의 다양한 확장한다.

유발, 자발적, 미니어처 시냅틱 활동을하는 동안 FM 염료를 사용하여 시냅틱 소포 재활용의 시험

식물 세포벽 구성은 조직 유형에 따라 다르며 리그닌, 셀룰로오스, 헤미셀룰로오스 및 펙틴을 포함할 수 있습니다. 세포 유형 수준에서 차이를 시각화하기 위해 다양한 염색 기술이 개발되었습니다. 이 논문은 일반적으로 사용되는 세포벽 염색 기술을 편집한 것입니다.

의 조직 화학 염색<em&gt; 애기 장대</em&gt; 차 전지 벽 요소

여기에 설명 된 형광 기반의 칼슘 동원 분석은 고아 G 단백질 결합 수용체 (GPCR에)의 기능 활성화 리간드 (들)의 식별을위한 중간 처리 역 약리학 심사 시스템입니다.

형광 기반의 칼슘 동원 분석에 의해 G 단백질 결합 수용체의 특성

현재 사용 가능한 대부분의 칼슘 지표는 배양된 평활근 세포의 근 소포체에서 방출된 칼슘의 간접적인 측정으로 세포질 칼슘 과도 현상을 정량화하는 데 사용됩니다. 이 프로토콜은 sarcoplasmic reticulum lum lumen 내에서 칼슘 신호를 직접 측정할 수 있는 특정 FRET 기반 지표의 사용을 설명합니다.

배양 된 평활근 세포의 근질 그물 자리 내 칼슘 변동 FRET 측정을 기반으로 공 촛점 이미지

미토콘드리아는 그들이 세포질 칼슘을 형성하는 2 + 세포 내 신호 전달 수 (2 + 칼슘)을 칼슘을 격리한다 그들의 내막 (Δ Ψm)에서 전기 잠재력을 활용할 수 있습니다. 우리는 형광 염료 및 공 초점 현미경을 사용하여 살아있는 세포에서 동시에 측정 미토콘드리아 칼슘 흡수 및 ΔΨ 분하는 방법을 설명합니다.

형광 현미경으로 살아있는 세포의 잠재적 인 미토콘드리아의 칼슘과 미토콘드리아 막의 동시 측정

이 프로토콜에서 우리 애기 꽃과 siliques, 몇 가지 기본적인 개간 기술의 적절 한 해 부에 대 한 기법을 설명 하 고 생식 구조의 전체 마운트 관측에 대 한 절차를 얼룩이 지기 선정.

전체-마운트 고 애기 꽃 기관 및 Siliques의 얼룩

중요한 형광 염료는 현대 곰팡이 세포 생물학에 있는 살아있는 세포 화상 진찰 분석을 위한 필수적인 공구입니다. 이 논문은 필라멘트 균류에서 플라즈마 막 역학, 내분비 / 외신 세포증 및 세포 벽 형태 형성을 추적하기위한 확립되고 덜 알려진 형광 염료의 응용 프로그램에 대해 자세히 설명합니다.

필라멘트 곰팡이의 살아있는 세포 이미징을 위한 막 및 세포벽 선택적 형광 염료의 적용

여기에서는 형광 단백질의 안정성을 유지하면서 식물 조직을 투명하게 만드는 방법에 대해 설명한다. 이 기술은 물리적 단면화없이 제거 된 식물 조직의 깊은 이미징을 용이하게합니다.

형광 이미징을 위한 식물 조직의 광학 클리어링

배우세요 사과 펄프 세포에서 Fluo-4/AM을 이용한 세포질 Ca²⁺ 염색 방법을. 효소 분해로 원형질체를 분리하고 형광 현미경으로 칼슘 동태를 관찰하여 과실 발달 및 품질 관리 연구에 활용할 수 있습니다.

애플 펄프에서 플루오-4/AM으로 세포질 Ca²⁺ 염색

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