Name: 미니 지방 흡입 기술을 사용한 인간 피하 지방 조직 샘플링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: 학습하세요 미니 지방 흡입 기술을 이용한 인간 피하 지방 조직 샘플링 방법을. 이 저위험 생검 기법은 대사 질환 연구와 지방 조직 생리학 이해에 필수적인 도구입니다.

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저자는 선언 할 자금이 없습니다.

참고 : University of Stirling NHS, 침습적 또는 임상 연구위원회는 아래에 설명 된 생검 절차를 승인했습니다. 이 절차를 사용하는 모든 연구는 적절한 독립 윤리위원회의 승인을 받아야합니다. 생검 응시자는 기관의 요구 사항에 따라 설명된 기술에 대한 공식 교육을 이수해야 합니다. 일반적으로 여기에는 보드 인증 의사가 설명한 지방 조직 생검 기술의 시연을 관찰 한 다음 감독 된 실습을 관찰하는 것이 포함됩니다. 연수생이 감독하에 자원 봉사자를 대상으로 10 번의 지방 조직 생검을 수행하면 절차에 대한 좋은 지식과 실습을 보장하기 위해 보드 인증 의사가 검사합니다. 그런 다음 보드 인증 의사는 개인에게 서명 된 검사 양식을 제공합니다.
1. 실험실 방 준비
<ol><li>실험실에 깨끗하고 닦을 수 있는 비다공성 표면과 참가자가 누울 수 있는 깨끗하고 편안한(바람직하게는 비다공성) 침대가 있는 적절한 개인실이 있는지 확인하십시오. 70 % 에탄올 스프레이와 깨끗한 종이 타월을 사용하여 생검 절차에 필요한 모든 표면을 청소하십시오. 필요한 경우 참가자를 지원할 깨끗한 베개 또는 쿠션을 제공하십시오.</li>
	<li>적절한 날카로운 물건 쓰레기통과 생물학적 위험 폐기물 봉투를 생검이 수행되는 지역에서 쉽게 접근 할 수 있고 생검을받는 사람이 쉽게 접근 할 수있는 곳에 보관하십시오.</li>
	<li>절차에 필요한 장비를 준비하고 참가자가 실험실에 도착하기 전에 새로 청소 한 일반 의료 트롤리에 설치하십시오 (그림 1). 필요한 소모품의 전체 목록은 재료 표를 참조하십시오.</li>
</ol>2. 참가자 준비
<ol><li>모든 참가자가 기관의 독립적인 윤리 위원회에서 요구하는 프로토콜에 따라 절차를 수행하기 전에 서면 사전 동의를 제공하도록 합니다. 또한 참가자들에게 절차에 사용 된 물질 (즉, 니켈, 크롬, 국소 마취제, 요오드, 조개류 및 고약)에 알레르기가 없는지 확인하기 위해 서면 설문지를 작성하도록 요청하십시오.</li>
	<li>참가자의 신원을 확인합니다. 참가자가 수행할 절차와 타박상, 통증 및 감염을 포함한 잠재적인 2차 영향을 이해하는지 확인합니다(표 1). 이전에 얻은 서면 동의와 함께 구두 동의를 수집합니다.</li>
	<li>참가자에게 마취제 및 생검 자체의 투여가 어떻게 느끼는지에 중점을 두어 절차가 어떻게 수행 될지 설명하십시오. 참가자가 진행하는 데 익숙한지 확인합니다. 참고: 국소 피하 마취제는 짧은 기간의 벌침과 유사한 따끔거림을 생성합니다. 많은 참가자들이 마취 투여를이 기술의 가장 불편한 부분으로보고합니다. 마취제가 효과를 발휘하면 참가자는 생검 중에 약간의 잡아 당기는 느낌 이상을 느끼지 않아야합니다.</li>
	<li>참가자가 국소 마취제 (특히 리도카인 또는 이와 유사한 것을 사용하는 경우 아미노 아미드 유형), 특정 금속 (니켈 및 크롬) 및 조개류 (요오드 기반 용액을 사용하는 경우)에 알레르기가 없는지 확인하십시오. 또한 참가자가 어떤 형태의 항응고제도 복용하지 않는지 확인하십시오.</li>
	<li>참가자에게 필요한 경우 방광을 비울 수있는 기회를 제공하여 4.1 단계에서 절차를 중단하거나 과도한 불편 함을 경험할 필요가 없도록하십시오.</li>
</ol>3. 생검 절차 - 생검 응시자를위한 지침
<ol><li>참가자가 앙와위 자세로 누워 있으면 배꼽 옆으로 약 5-10cm 떨어진 생검 부위를 확인하십시오. 알림: 참가자가 같은 날 여러 번의 생검을 받아야 하는 경우 각 생검에 대해 배꼽의 반대쪽에 있는 생검 부위를 식별합니다. 이렇게하면 각 생검 부위 사이의 최대 거리가 확보됩니다.</li>
	<li>표준 의료 지침에 따라 비누와 따뜻한 물로 손을 씻으십시오4.</li>
	<li>멸균 시트를 청소 된 트롤리 또는 작업 영역에 놓고 시트의 바깥 쪽 가장자리에만 닿도록주의하십시오.</li>
	<li>적절한 무균 기술을 사용하여 멸균 수술 장갑을 착용하십시오. 보조원이 장비를 만지거나 오염시키지 않고 준비된 멸균 시트에 떨어지는 방식으로 나머지 장비를 열도록 합니다. 보조자가 멸균 포장에서 도구를 꺼낼 때 물건을 만지지 않도록 주의하십시오.</li>
	<li>조수에게 작업 표면의 일부 멸균 거즈 (거즈를 과포화시키지 않고)에 소량의 요오드 기반 용액을 분배하도록 지시하십시오.</li>
	<li>멸균 거즈와 요오드 기반 용액을 사용하여 선택한 생검 부위 주변에서 약 5-10cm2 씩 소독하십시오. 피부가 제안된 생검 부위에서 바깥쪽으로 이동하는 나선형 동작으로 청소되었는지 확인합니다. 피부 청소 절차를 두 번 반복하십시오. 여분의 액체(예: 멸균 영역에서 흘러내림)는 새 멸균 거즈로 닦아서 제거합니다.</li>
	<li>조수와 함께 국소 마취 바이알 (이 프로토콜의 2 % 리도카인)의 내용물을 구두로 확인하고 만료일 내에 있음을 확인하십시오. 조수에게 열린 바이알을 거꾸로 잡고 21G 바늘을 사용하여 5mL의 국소 마취제를 주사기에 넣도록 지시하십시오. 바늘을 날카로운 물건 통에 버리고 주사기에 기포가 없는지 확인하십시오.</li>
	<li>주사기에 26G 바늘을 바르고 기포를 배출하십시오. 복부 피부와 지방 조직을 부드럽게 꼬집어 복벽에서 멀리 옮깁니다. 그런 다음 바늘을 피부 표면에 대해 10° 이하의 각도로 피하 조직에 수평으로 삽입합니다.<ol><li>주사기의 플런저를 추가로 0.5mL 빼냅니다(바늘이 혈관에 있지 않도록 하기 위해). 주사기에 혈액이 나타나면 바늘을 빼고 다른 각도로 다시 삽입하십시오.</li>
		<li>삽입 부위를 마취하기 위해 직경 2-4mm의 블렙을 올립니다.</li>
		<li>바늘을 피하 조직으로 전진시키고 부채꼴 패턴(그림 2)으로 ~1mL의 리도카인을 투여하고 마취제를 주입하기 전에 매번 플런저를 빼내도록 주의하십시오.</li>
		<li>26G 바늘을 제거 및 폐기하고, 21G 바늘을 주사기에 적용하고, 기포를 배출하고, 나머지 ~4mL의 리도카인을 부채꼴 패턴(그림 2)으로 투여하고, 마취제를 주입하기 전에 매번 플런저를 빼내도록 주의하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>국소 마취제가 효과를 발휘할 때까지 약 5분 정도 기다리십시오. 멸균 메스를 사용하여 생검 부위를 부드럽게 찌르면 i) 국소 마취제가 효과가 있는지 확인하고 ii) 마취 부위의 경계를 식별합니다. 필요한 경우 1-2 분 더 기다렸다가 다시 평가하십시오.</li>
	<li>국소 마취제가 효과가 있다고 만족하면 피부와 지방 조직을 부드럽게 꼬집고 (3.8 단계에서와 같이) 멸균 메스를 사용하여 피부에 작은 1-2mm 구멍을 뚫습니다. 알림: 이것은 14G 바늘의 진입을 용이하게 할 만큼 충분히 커야 하며 바늘을 닫는 데 봉합사가 필요하지 않을 만큼 충분히 작아야 합니다. 이 시점부터 약간의 출혈이 발생하는 것이 일반적이며, 이는 멸균 거즈 조각으로 조절할 수 있습니다.</li>
	<li>먼저 14G 바늘을 5mL 또는 10mL 주사기에 바릅니다. 그런 다음 피부와 지방 조직을 부드럽게 꼬집으면서 천자를 통해 바늘을 마취 부위의 대략 중앙과 피부 표면에 대해 10 ° 이하의 각도로 지방 조직에 점차적으로 삽입합니다. 알림: 3.11단계에서 바늘이 전진하는 모든 경우에 대해 주사기 각도를 10° 이하로 유지해야 합니다.<ol><li>플런저를 약 2.5mL 표시까지 당겨 흡입을 적용합니다. 지방 조직의 조각을 자르기 위해 바늘을 앞뒤로 빠르게 움직여 생검을 받으십시오. 약 30초 후 바늘과 주사기를 90° 비틀고 이 절차를 반복하여 지방 조직 조각을 분해한 다음 흡입에 의해 주사기로 흡인합니다. 알림: 다른 주사기 크기를 사용할 수 있습니다. 연구원은 주사기를 잘 잡고 진공 상태를 유지하기 위해 플런저 수축을 편안하게 유지할 수 있는 주사기 크기를 선택하는 것이 중요합니다. 진공을 유지하는 잠금 주사기를 사용할 수 있어 바늘 제어를 개선하고 생검 응시자 5의 인지된 어려움을 줄일 수 있습니다.</li>
		<li>3.11.1 단계의 약 45-60 초 후에 바늘을 제거하고 주사기 내용물을 계량 보트를 덮는 거즈 층에 비우십시오. 잠재적인 혈액 튀김을 방지하기 위해 바늘의 내강이 아래를 향하고 있는지 확인하십시오.</li>
		<li>3.11.1 및 3.11.2단계를 최대 3회 반복합니다. 참가자가 위의 절차를 반복하기 전에 진행하는 데 만족하는지 확인합니다.</li>
		<li>3.11.1 및 3.11.2단계를 수행하는 동안 보조자에게 분석/보관을 위해 샘플을 처리하고 준비하도록 지시합니다(섹션 5 참조).</li>
	</ol></li>
</ol>4. 생검 후 절차
<ol><li>지방 조직의 만족스러운 샘플 (즉, ~ 200mg)이 얻어지면 천자 상처 위에 멸균 거즈 1-2 층을 놓은 다음 얼음 팩을 그 위에 놓고 약 10 분 동안 단단한 압력을 가하여 지혈을 유도합니다.</li>
	<li>지혈이 발생하면 멸균 거즈로 요오드 기반 용액/말린 혈액을 닦아내고 흡수 패드가 있는 접착성 상처 드레싱을 해당 부위에 바릅니다. 참가자가 기분이 좋은지 확인하고 생검 사이트 사후 관리에 대한 구두 및 서면 지침을 제공하십시오.<ol><li>참가자들은 앞으로 며칠 동안 약간의 멍이 들 것이라고 강조한다. 4.1단계에서 얼음 팩에 의해 최소화되고 지속적인 효과 없이 해결되지만 이것이 상당할 수 있음을 알려주십시오.</li>
		<li>마취제가 닳은 후 참가자가 불편함/통증을 느끼면 패킷의 지침에 따라 파라세타몰과 같은 진통제를 복용해야 하지만 항응고제 활성이 있는 진통제(예: 이부프로펜 또는 아스피린)는 복용하지 않도록 권장합니다.</li>
		<li>생검 부위의 부기, 발적 또는 분비물은 감염의 징후라고 설명합니다. 드물게 이러한 징후나 증상이 발생하는 경우 참가자에게 의사 또는 지역 사고 및 응급실에서 긴급히 의학적 조언을 구하도록 지시하십시오. 참가자에게 의학적 조언을 구하는 경우 연구팀에도 알려야 함을 알립니다. 참고: 연구 직원으로서 생검 응시자나 조수는 의학적 조언이나 치료를 제공할 수 없습니다. 그러나 연구팀이 생검 절차로 인한 모든 합병증 사례를 알고 기록하는 것이 중요합니다.</li>
		<li>참가자는 절개 부위가 닫힐 때까지 48시간 동안 수영이나 지나치게 격렬한 활동을 피하도록 권장합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>사용한 날카로운 물건과 오염된 물질은 지정된 날카로운 물건 및/또는 임상 폐기물 용기에 버리십시오.</li>
	<li>70 % 에탄올 스프레이와 깨끗한 종이 타월을 사용하여 생검 절차에 사용 된 모든 표면을 청소하십시오. 일회용 및 비 일회용 침구 품목은 각각 폐기 또는 청소를 위해 적절한 임상 백에 넣으십시오.</li>
</ol>5. 샘플 처리-조수를위한 지침
<ol><li>멸균 핀셋과 0.9% 식염수를 사용하여 지방 조직 샘플을 헹구어 눈에 보이는 오염 물질(즉, 혈액, 혈관계)을 제거합니다. 그런 다음 디지털 저울을 사용하여 지방 조직 샘플을 칭량합니다. 다운스트림 분석을 위해 조직을 적절한 크기의 조각으로 나누고 멸균 핀셋을 사용하여 적절한 보관 튜브에 넣습니다. 지방 조직 생검을 포함하는 튜브를 -190°C에서 액체 질소에 담그고 샘플이 -80°C에서 보관될 때까지 급속 동결합니다. 알림: 어시스턴트는 잠재적인 샘플 분해를 최소화하기 위해 가능한 한 빨리, 일반적으로 샘플 흡인 후 3분 이내에 샘플 처리를 완료해야 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 선언 할 이해 상충이 없습니다.

설명 된 프로토콜 및 관련 비디오는 복부 영역에서 피하 지방 조직 샘플을 얻기위한 미니 지방 흡입 기술의 단계별 개요를 제공합니다. 이 연구 그룹은 참가자에게 부작용없이 124 개월 동안 총 19 건의 생검을 수행했습니다. 절차는 안전하고 설명 된 안전 조치를 따르는 경우 참가자 또는 생검 팀에 대한 위험을 최소화합니다. 무균 기술(멸균 장비를 오염시키지 않고 개봉 및 분배, 멸균 장갑을 적절하게 착용/제거, 일반적인 손 위생 포함)은 절차를 수행하는 연구원이 항상 유지해야 합니다(참가자의 감염 위험을 최소화하기 위해)6. 또한 사용한 날카로운 물건을 적절한 방식으로 폐기하면 바늘에 찔린 부상의 위험을 줄임으로써 연구원과 이 폐기물을 처리하는 다른 사람들의 안전을 보장할 수 있습니다7.
절차는 "저위험"으로 분류될 수 있지만 부작용을 최소화하기 위해 따라야 하는 무균 기술 및 적절한 폐기물 처리...

지방 조직은 인간의 대사 기능에 대한 유용한 정보를 제공 할 수 있습니다. 인간의 피하 지방 조직은 쉽게 접근 할 수 있습니다. 피하 지방 조직 추출 기술은 80 년대 중반에 처음 설명되었습니다1; 그 이후로 수율을 높이고 연구 참가자의 내약성을 개선하기 위해 초기 프로토콜이 개선되었습니다. 피하 지방 조직은 수많은 부위로부터 얻을 수 있으며, 가장 일반적으로 둔부1 및 복부2에서 얻을 수 있습니다. 후자의 샘플은 대사 질환 관련 맥락에서 더 가치있는 정보를 제공하기 때문에 더 바람직 할 수 있습니다3.
미니 지방 흡입 방법을 이용한 피하 지방 조직 생검은 비 임상 환경에서 안전하고 효율적으로 수행 할 수 있습니다. 보드 인증 의사의 적절한 교육을 받고 엄격한 무균 기술을 사용하여 연구원은 참가자와 조사자 모두에게 최소한의 위험으로 이러한 생검을 일상적으로 수행 할 수 있습니다. 생검 팀은 생검을 수행 할 사람과 조수, 즉 최소 2 명으로 구성되어야합니다.
생검을 담당하는 사람은 참가자의 신원을 확인하고, 참가자가 안전하게 절차를 수행할 수 있는지 확인하고(아래 프로토콜 단계 2.1-2.4 참조), 참가자가 절차 전반에 걸쳐 편안한지 확인하고, 절차 전반에 걸쳐 멸균 기술이 유지되도록 하고, 절차를 수행하고, 참가자에게 구두 및 서면 사후 관리 절차를 제공합니다. 보조자의 역할은 나중에 분석 및/또는 저장을 위해 얻은 지방 조직을 처리하고 신속하게 처리하는 것입니다. 조수는 또한 "비 멸균 손"이되어 참가자가 절차 전반에 걸쳐 편안하게 지낼 수 있도록함으로써 도움을줍니다. 이 비디오와 논문의 목적은 복부에서 피하 지방 조직을 안전하게 얻기위한 단계별 생검 절차를 설명하는 것입니다.

<table><tbody><tr><td>항목: 14 G needle 14 G x 3 1/8" 210 mm x 80 mm</td><td>B Braun</td><td>4665473</td><td>생검당: 1</td></tr><tr><td>항목: 21 G needle 21 G x 1 1/2" 0.8 mm x 38 mm</td><td>Terumo</td><td>AN*2138R1</td><td>생검당: 2</td></tr><tr><td>항목: 26 G&nbsp; needle 26 G x 1/2" 마이크로랜스 바늘 0.45 mm x 13 mm</td><td>BD</td><td>303800</td><td>생검당: 2</td></tr><tr><td>항목: 5 mL 주사기 5 mL luer</td><td>DB plastipak</td><td>302187</td><td>생검 기준: 2</td></tr><tr><td>항목: 접착성 상처 드레싱 Opsite Post-Op Dressing 9.5 x 8.5</td><td>Smith & 조카</td><td>6600709</td><td>생검당: 1</td></tr><tr><td>항목: 일회용 멸균 메스 일회용 메스 멸균 블레이드 번호 10</td><td>Swann Morton</td><td>/0501</td><td>생검당: 1</td></tr><tr><td>항목: Icepack BlueDot 재사용 가능한 핫/콜드 팩 26.5 cm x 13.0 cm</td><td>NuCare</td><td>F711</td><td>생검당: 1</td></tr><tr><td>항목: 요오드 기반 방부제 Videne 살균 용액</td><td>Ecolab Videne</td><td>3030440</td><td>Per 생검: q.s</td></tr><tr><td>항목: 리도카인 2% w/o 에피네프린 리도카인 2% 주사 5 mL</td><td>B Braun</td><td>3558553</td><td>생검당: 5 mL</td></tr><tr><td>항목: 비멸균 장갑 Starguard 민감성 분말 무료 니트릴 장갑</td><td>Starguard</td><td>SG-N-S</td><td>생검당: 쌍</td></tr><tr><td>항목: 염화나트륨 0.9% 나트륨 클로라이드 0.9% w/v 정맥 주입 BP</td><td>BBraun</td><td>S8004-5384</td><td>생검당: 질문</td></tr><tr><td>항목: 안정화 솔루션* RNAlater 안정화 솔루션</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AM7020</td><td>생검당: q.s</td></tr><tr><td>항목: 멸균 겸자 멸균 겸</td>자 <td>Rocialle</td><td>RML109-006</td><td>생검당: 1</td></tr><tr><td>항목: 멸균 거즈 면봉 비짠 면봉 멸균 7.5 x 7.5 cm</td><td>Prestige</td><td>1860</td><td>생검당: 5</td></tr><tr><td>항목: 멸균 장갑 Prestige 소프트 비닐 멸균 분말 무료 의료용 장갑</td><td>Prestige</td><td>S: P4301 M:P3302 L:P3301</td><td>생검당: 쌍</td></tr><tr><td>항목: 멸균 미세원심분리기 튜브 1.5mL 멸균 미세원심분리기 튜브</td><td>StarLab</td><td>I1415-5510</td><td>생검당: q.s</td></tr><tr><td>항목: 멸균 sheet 종이 일반 흰색 90 x 90 cm</td><td>Rocialle</td><td>RML 126-216</td><td>생검당: 1</td></tr><tr><td>항목 : 계량 보트 다이아몬드 모양 무게 보트</td><td>히드로 과학</td><td>HS1427C</td><td>생검 당 : 1</td></tr> <tr><td>* 선택 재료</td><td></td><td></td><td></td> 표시</tr></tbody></table>

미니 지방 흡입 기술을 사용한 인간 피하 지방 조직 샘플링

Human Subcutaneous Adipose Tissue Sampling Using a Mini-Liposuction Technique

지방 조직에 대한 연구는 대사 및 기타 상태를 이해하는 데 유용합니다. 인간의 피하 지방 조직에 접근 할 수 있습니다. 적절한 훈련과 무균 기술에 대한 엄격한 준수를 통해 피하 지방 샘플을 연구자가 비임상 환경에서 안전하고 효율적으로 얻을 수 있습니다. 배꼽에 국소 마취제를 투여 한 후, 5 또는 10 mL 주사기에 부착 된 14G 바늘을 피부를 통해 피하 조직으로 삽입합니다. 흡입 상태에서 주사기는 왕복 운동으로 이동하여 지방 조직 조각을 분리합니다. 플런저를 빼면 지방 조직 조각이 바늘을 통해 주사기로 흡인됩니다. 단일 생검은 약 200mg의 조직을 수집 할 수 있습니다. 이 생검 기술은 참가자와 연구 직원 모두에게 매우 안전합니다. 생검 후 참가자는 과도한 출혈을 피하기 위해 48시간 동안 수영과 지나치게 격렬한 활동을 피해야 하지만 대부분의 일상 활동을 재개할 수 있습니다. 참가자는 하루 안에 2번의 생검을 안전하게 받을 수 있으며, 이는 이 기술을 급성 중재 전후 연구에 적용할 수 있음을 의미합니다.

설명 된 지방 조직 생검 절차는 연구자가 인간 자원 봉사자로부터 피하 지방 조직 샘플을 얻는 효율적이고 위험이 낮은 기술입니다. 우리는 11 명의 건강한 정상 체중 여성 (연령, 27.4 ± 3.3 세, 체질량 지수 (BMI), 22.6 ± 1.5 kg.m2)에서 설명 된 절차를 사용하여 39 개의 피하 지방 조직 생검을 수행했습니다. 모든 참가자는 07-00 시간의 금식 기간 후 10:00에서 8:12 사이에 실험실에 참석했습니다. 이 지방 조직 생검 절차를 사용한 샘플 수율은 192.0 ± 97.1 mg (범위 = 32.8-393.6 mg)이었다 (그림 4). 참가자의 BMI는 모두 건강한 체중 범위 (범위 = 21.1-25.4 kg / m2) 내에 있었지만 생검 수율과 참가자 BMI (p = 0.643) 사이에는 관계가 관찰되지 않았습니다. 적절한 샘플 중량은 전형적으로 조직 수집의 2-3 회 (즉, 단계 3.11.1 및 3.11....

원고 및 관련 비디오는 배꼽 주변 영역에서 피하 지방 조직 샘플을 얻는 경피적 생검 기술을 보여줍니다. 이 방법은 지방 조직 내에서 다양한 매개 변수 (예 : 유전자 또는 단백질 발현, 효소 활성, 지질 함량)를 조사하는 저위험하고 효율적인 방법입니다.

Studies on adipose tissue are useful in understanding metabolic and other conditions. Human subcutaneous adipose tissue is accessible. With appropriate ...

이 기술은 전후 연구 설계를 구현하거나 특정 집단을 특성화하고 과도한 양의 신체 후 조직을 필요로하지 않는 모든 연구에 특히 적합합니다. 주요 장점은이 기술이 상대적으로 비용 효율적이고 거의 통증이 없다는 것입니다. 같은 날 동일한 참가자에 대해 여러 생검을 수행 할 수 있습니다.이 기술은 지방 조직 생리학, 특히 질병 및 대사 기능에 대한 이해를 도울 수 있습니다. 시작하려면 실험실에 깨끗하고 닦을 수 있는 비다공성 표면이 있는 적절한 개인실과 참가자가 앙와위 자세로 누울 수 있는 깨끗하고 편안한 침대가 있는지 확인하십시오. 그런 다음 70 % 에탄올 스프레이와 깨끗한 종이 타월을 사용하여 생검 절차에 필요한 모든 표면을 청소하십시오.다음으로 적절한 날카로운 일회용 쓰레기통과 생물학적 위험 허리 가방을 생검을 수행 할 영역과 생검을받는 사람의 손이 쉽게 닿는 곳에 두십시오. 참가자가 실험실에 도착하기 전에 새로 청소 한 일반 의료용 트롤리에 절차에 필요한 장비를 설치하십시오. 서면 동의를받은 후 참가자에게이 절차에 사용 된 재료에 알레르기가 없는지 확인하기 위해 서면 설문지를 작성하도록 요청하십시오.참가자의 신원을 구두로 확인한 후 참가자가 수행 할 절차와 타박상, 통증 및 감염을 포함한 잠재적 인 2 차 부작용을 이해했는지 확인하십시오. 서면 사전 동의 외에도 참가자로부터 구두 동의를받습니다. 다음으로, 마취제 및 생검 투여가 어떻게 느껴질 수 있는지 강조하는 절차를 참가자에게 설명하십시오.또한 참가자가 진행하는 데 익숙한지 확인하십시오. 다시 말하지만, 참가자가 국소 마취제, 특정 금속 및 조개류에 알레르기가 없고 참가자가 어떤 형태의 항응고제도 복용하지 않는지 확인하십시오. 참가자가 앙와위 자세로 누워 있으면 배꼽 옆으로 약 5-10cm 떨어진 생검 부위를 확인하십시오.그런 다음 표준 의료 지침에 따라 비누와 따뜻한 물로 손을 씻으십시오. 그리고 깨끗한 트롤리 또는 작업 영역에 멸균 시트를 놓고 시트의 바깥 쪽 가장자리에만 닿도록주의하십시오. 적절한 무균 기술을 사용하여 멸균 수술 장갑을 착용하십시오.그런 다음 조수에게 나머지 장비를 열어 만지거나 오염되지 않고 준비된 멸균 시트에 떨어지도록 합니다. 보조자가 멸균 포장에서 품목을 꺼낼 때 만지지 않도록하십시오. 다음으로, 조수에게 소량의 요오드 기반 용액을 멸균 거즈에 분배하도록 지시하십시오.그런 다음 제안 된 생검 부위에서 바깥쪽으로 이동하는 나선형 동작으로 피부를 소독하십시오. 여분의 액체가 있으면 신선한 멸균 거즈로 닦아서 제거하십시오. 조수와 함께 국소 마취 바이알의 내용과 만료일을 구두로 확인하십시오.그런 다음 조수에게 열린 바이알을 거꾸로 잡도록 지시하십시오. 그리고 21 게이지 바늘을 사용하여 주사기에 5 밀리리터의 국소 마취제를 그립니다. 바늘을 날카로운 스핀에 폐기하고 주사기에 기포가 없는지 확인하십시오.그런 다음 주사기에 26 게이지 바늘을 바르고 기포를 배출하십시오. 그런 다음 복부 피부와 지방 조직을 부드럽게 꼬집어 복벽에서 멀어지게하고 바늘을 피부 표면에 대해 10도 이하의 각도로 피하 조직에 수평으로 삽입합니다. 그런 다음 주사기의 플런저와 추가 0.5 밀리리터를 빼냅니다.주사기에 혈액이 나타나면 바늘을 빼고 다른 각도로 다시 삽입 한 다음 직경 2-4mm의 블렙을 들어 올려 삽입 부위를 마취하십시오. 바늘을 피하 조직으로 전진시키고 부채꼴 패턴으로 1 밀리리터의 리도카인을 투여하십시오. 26 게이지 바늘을 제거하고 폐기하십시오.그런 다음 주사기에 21 게이지 바늘을 바르고 나머지 4 밀리리터의 리도카인을 부채꼴 패턴으로 투여하십시오. 멸균 메스를 사용하여 5 분 후, 국소 마취제가 효과가 있는지 확인하고 마취 부위의 경계를 식별하기 위해 생검 부위를 부드럽게 찌릅니다. 그런 다음 1-2 분 더 기다렸다가 다시 평가하십시오.마취가 효과가 있다고 만족하면 피부와 지방 조직을 부드럽게 꼬집고 피부에 작은 1-2 밀리미터 구멍을 뚫습니다. 다음으로 14 게이지 바늘을 5 또는 10 밀리리터 주사기에 붙입니다. 그런 다음 피부와 지방 조직을 부드럽게 꼬집으면서 펑크를 통해 바늘을 피부 표면에 대해 10도 이하의 각도로 마취 부위의 대략 중앙에 지방 조직에 부드럽게 삽입합니다.플런저를 약 2.5밀리리터 표시로 당겨 흡입을 가합니다. 그런 다음 바늘을 빠르게, 앞뒤로 움직여 지방 조직 조각을 잘라 생검을 수집합니다. 30 초 후 바늘과 주사기를 90도 비틀고이 절차를 반복하여 지방 조직 조각을 분해 한 다음 흡입에 의해 주사기로 흡인합니다.약 1분 후, 바늘을 제거하고 주사기 내용물을 쇠퇴 보트를 덮는 거즈 층에 비우고 잠재적인 혈액 튀김을 방지하기 위해 바늘의 내강이 아래를 향하도록 합니다. 입증된 바와 같이 생검 수집의 절차를 최대 3회까지 반복하고, 매번 절차를 반복하기 전에 참가자가 진행하는 데 만족하는지 확인한다. 추가 샘플을 수집하는 동안 보조자에게 분석 또는 저장을 위해 이전에 수집된 샘플을 처리하고 준비하도록 지시합니다.만족스러운 샘플을 수집하면 천자 상처 위에 1-2 층의 멸균 거즈를 놓습니다. 그런 다음 얼음 팩을 놓고 약 10 분 동안 단단히 압력을 가하여 항상성을 유도합니다. 일단 항상성이 일어나면 임의의 요오드계 용액 또는 멸균 거즈로 건조된 혈액을 닦아내고, 흡수 패드가 있는 접착성 상처 드레싱을 해당 부위에 도포한다.참가자가 기분이 좋은지 확인한 후 생검 부위 사후 관리에 대한 구두 및 서면 지침을 제공하고 참가자가 앞으로 며칠 동안 약간의 멍이 들 가능성이 있음을 강조합니다. 사용한 날카로운 물건과 오염 된 물질을 지정된 날카로운 물건이나 임상 폐기물 용기에 넣은 다음 70 % 에탄올을 사용하여 생검 절차에 사용 된 모든 표면을 청소하고 침구의 일회용 및 비 일회용 품목을 적절한 임상 백이나 폐기 또는 세척에 각각 넣으십시오. 이 연구에서는 11 명의 건강한 정상 체중 여성에서 39 개의 피하 지방 조직 생검이 수행되었습니다.이 절차를 사용하여 평균 192 밀리그램의 샘플을 얻었습니다. 배꼽에 너무 가까운 생검 부위를 선택하면 불필요하게 광범위한 멍이 생길 수 있습니다. 지방 조직 생검 후 참가자가 경험하는 합병증 목록이 여기에 요약되어 있습니다.바늘이 근육의 더 깊은 층에 구멍을 뚫거나 피부의 다른 쪽을 관통하는 것을 방지하기 위해 항상 피부가 꼬집어 있는지 확인하십시오. 연습은 실제 참가자에게 시도하기 전에 훈련 된 의사가 교육을 수행하는지 완벽하게 확인합니다. 그리고 지방 조직을 분해하기 위해 바늘을 삽입 할 때 생검을하는 사람이 샘플을 분해 할만큼 충분히 확실한지 확인하십시오.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

때문에 비만 및 다른 동반 질환의 급격한 음의 연결, 역할 지방에 대한 연구는 질병에 재생 및 전반적인 건강을 보증합니다. 우리는 고립과 현장에서 사용하여 지방의 연구를 허용 지방 창고의 절제 및 생체 외 방법에 프로토콜을 제시한다.

현지화, 식별 및 절제 쥣과 지방이 종점의

우리는 유전자 발현 및 콜라겐 분해 활성을 평가하기 위해 쥐 서혜부(피하) 및 성선주위(내장) 지방 조직 저장소에서 기질 혈관 분획(SVF)을 분리하는 데 필요한 기술을 제시합니다. 이 방법에는 면역자기 세포 분리를 사용하여 Sca1고지방 유래 줄기세포(ASC)를 농축하는 것이 포함됩니다.

지방 창고 별 SCA1의 면역 자기 분리<sup&gt; 높은</sup&gt; 지방이 유래 줄기 세포 (의 ASC)

우리는 복 부 지방 조직 생 검 국 소 마 취 아래 수행 비 투 열 방법을 사용 하 여 표준화. 세 가지 경우의 과도 한 후 115 작업 (2.61%)에서 출혈 발생 했습니다. 우리는 복 부 지방 조직 수술 생 검 투 비 열 방법을 사용 하 여 적용할 수 있는 안전 하 게 건강 한 사람에 게 결론.

비 투 열 방법을 통해 복 부 피하 지방 조직 생 검에 대 한 기술

이 문서의 목적은 마우스에서 다른 흰색 adipose 조직 수집, 지방 샘플 처리 RNA를 추출 하는 단계별 절차를 제시 하는 것입니다.

마우스 지방 조직 수집 및 RNA 분석에 대 한 처리

지방 조직 혈관 창시자에서 흰색과 베이지색 adipocytes의 차별화는 비만에 대사 개선 위한 잠재력을 맺는 다. 우리는 CD34 + CD31 + 인간의 지방에서 내 피 세포 격리 및 후속 시험관에 확장 및 차별화 흰색과 베이지색 adipocytes에 프로토콜을 설명합니다. 여러 다운스트림 응용 프로그램을 설명 합니다.

절연, 확장, 및 Adipogenic CD34 + CD31 + 인간의 Omental 및 피하 지방 조직에서 내 피 세포의 유도

여기서, 우리는 폐쇄된 시스템 장치를 사용하여 인간 지방 조직 효소-무마이크로 단편화를 제시한다. 이 새로운 방법은 생체 내 이식, 시험관 내 배양, 및 추가적인 세포 격리 및 특성화에 적합한 지방 조직의 서브 밀리미터 클러스터의 획득을 허용한다.

세포 표현형 및 분비 특성화를 위한 인간 지방 조직 미세 단편화

본 프로토콜은 ADSC 단리를 위한 개선된 방법론을 기술하여 문헌에 비해 시간 이득과 함께 엄청난 세포 수율을 초래한다. 이 연구는 또한 장기 동결보존 후 비교적 많은 수의 생존 가능한 세포를 얻기 위한 간단한 방법을 제공합니다.

지방 조직에서 중간엽 줄기세포를 얻는 기술 및 장기 냉동 보존에서 기질 혈관 분획 특성 분석

여기에서 우리는 기능적 혈관화된 베이지색 지방 조직을 엔지니어링하기 위한 간단한 접근 방식으로 설치류 또는 인간 지방 조직에서 분리된 미세혈관 조각의 사용을 설명하는 자세한 프로토콜을 제시합니다.

Microvascular Fragments에서 Vascularized Thermogenic Adipose Tissue의 3차원 배양

여기에서는 자가 지방 조직을 서로 다른 물리화학적 특성과 기능을 가진 다양한 지방 구성 물질로 변환할 수 있는 프로토콜을 제시합니다.

지방을 특수 성분으로 전환하기 위한 혁신적인 지방 조직 분획

이 비디오 보고서에서는 활성화 및 우울한 조건에서 마우스의 견갑골 갈색 지방 조직에 대한 Cerenkov Luminescence Imaging(CLI)의 적용을 보여줍니다.

견갑골 갈색 지방 조직의 Cerenkov 발광 이미징

학습하세요 미니 지방 흡입 기술을 이용한 인간 피하 지방 조직 샘플링 방법을. 이 저위험 생검 기법은 대사 질환 연구와 지방 조직 생리학 이해에 필수적인 도구입니다.

미니 지방 흡입 기술을 사용한 인간 피하 지방 조직 샘플링

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