Name: 퇴행성 망막 질병을 위한 비인간 영장류 모형에 있는 망막 안료 상피 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-14T13:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 20 s
Description: 학습하세요 비인간 영장류에서 망막 안료 상피 세포 이식을 위한 새로운 수술 기법으로 황반부 외상 위험을 최소화하는 방법을. OCT 유도 박리 형성과 플루오르카본 액체 탬포네이드를 활용하여 정밀한 시각화와 안전한 이식을 가능하게 합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 연구는 IAF-PP (HMBS 도메인) (OrBID): OculaR BIomaterials 및 장치, A * STAR, 싱가포르 (H17/01/a0/013), NUS 스타트업 보조금 NUHSRO/2016/100/SU/01, NUHS 임상 과학자 프로그램 (NCSP) 보조금 및 국가 연구 재단 경쟁 연구 프로그램, 싱가포르 (NRF-CRP21-2018-0008) X.S.에, 홍레옹은 G.E.H. 및 B.V.S.에 교수 기금을 부여. 우리는 NHP 수술 준비 및 동물 후속 조치에 지원을 제공하기 위한 번역 전 임상 모델 플랫폼(싱가포르 안과 연구소, 싱가포르)의 수의학 팀을 인정하고 싶습니다. 우리는 통합 수술 내 OCT 장치OPMI-Lumera 700에 대한 기술 지원을 위해 C. 자이스 메디텍 싱가포르의 질 테오와 동료들에게 감사를 표하고 싶습니다.

Boris Stanzel은 이 연구에서 사용되는 계기(RPE 스크레이퍼)에 대한 미국 특허 9980851 보유하고 있습니다. C. 자이스 메디텍과 구더에서 보리스 스탠젤까지 연사 명예. 다른 저자들은 선언할 이해 상충이 없습니다.

하반신 RPE 이식에 대한 평가되는 두 가지 주요 접근법이 있습니다 - RPE 현탁액의 주입 및 단층 RPE 이식편이식의 이식. 두 메서드 간의 자세한 비교는 이 원고의 범위를 벗어납니다. 그러나, 단층 RPE 이식편의 이식은 RPE 세포가 현탁액보다 단층에서 더 조직되기 때문에 유리할 수 있다. 접목에 있는 RPE 세포는 생리적인 RPE 세포 층의 조직을 닮은 confluent 단층에서 조직되고 이식된 RPE 세포가 그들의 생리적 기능을 능력을 발휘할 수 있게 합니다. 이를 통해 셀 서스펜션에 비해 보다 정밀한 투약 매개 변수를 사용할 수 있으며, 이는 규제 작업 및 산업 확장과 매우 관련이 있습니다.
경전 공간에 RPE 패치 이식편을 전달하려면 황반의 신중한 조작과 피하 공간에서 이식편을 정확하게 삽입해야 합니다. miOCT와 같은 미세 수술의 기술적 진보와 수술 내 망막 조직 역학에 대한 더 나은 이해는이 절차의 학습 곡선을 감소시었습니다. 이 토론에서, 다음 측면의 근거가 설명 될 것이다: i) 수술 전 플라스미노겐 주입; ii) 수술 중 miOCT의 사용; iii) 사용자 정의 41 G 듀얼 보어 캐뉼러, 낮은 IOP 설정 및 PFCL을 사용하여 침전 물 생성을 위한; iv) 이식 전에 네이티브 RPE 세포 층의 긁힘; v) 면역원성 이식 거부를 줄이기 위해 시롤리무스, 트리암시놀론, 독시사이클린 및 미노사이클린을 사용한다.
수술 전 플라스미노겐 주사는 파라포벨 망막 접착을 방출합니다. 초기 실험에서는 단일 유체 파로 포베아를 분리하는 것이 어려웠습니다. miOCT를 사용하여 평가에, 이미지는 intraretinal 외상20의 기록과 더불어 네이티브 RPE에 파라포벨 외부 망막 접착의 존재를 밝혔습니다. 이러한 접착력은 망막 윤곽을 가로질러 퍼지는 하수 유체 파가 아닌 출혈의 수직 팽창으로 이어질 수 있으며, 그 결과 포브 외상이 발생할 수 있습니다. 플라스미노겐은 플라스민의 비활성 전구체이며, 섬유네틴과 라미닌을 표적으로 하는 프로테아제이다. Ocriplasmin은 인간 플라스민의 생체 공학 된 변종입니다, 식품 의약국 (FDA)과 유럽 의약품 기구 (EMA)에 의해 승인 또는 수반되는 황반 구멍없이 증상 진동성 견인의 치료를위해. 그러나, ocriplasmin 주입 후 낭포성 황반 부 종 개발의 사후 승인 보고서 retina23에 효소의 더 광범위 한 효과 제안 했다.
정확한 메커니즘은 확인되지 않았지만, 플라스민은 광수용체-RPE 접착을 담당하는 광수용체 매트릭스 원소의 분해를 통해 망막 접착력을 약화시킬 수 있음을 시사했다24. 이 프로토콜에서, NHP 눈은 파라포벨 외부 망막 접착을 풀어 주기 위하여 수술 1 주 전에 intravitreal plasminogen로 취급되었습니다. 광수용체-RPE 접착력이 약화된다는 가정 하에, 일반적으로 피하 유체 파20에 저항하는 탈발성 파라포벨 링을 포함한 신경 감각 망막을 분리하는 데 더 낮은 힘이 요구된다. 따라서 망막 결막 분리 중에 투여된 힘은 망막을 접선으로 스트레칭하는 대신 망막 윤곽을 가로질러 출혈을 확대하는 결과를 낳는다. 이것은 포브 눈물의 위험을 감소시킵니다. 그러나, 장기간 이식 생존에 플라스미노겐의 효과는이 프로토콜에서 공부되지 않았다는 점에 유의해야한다. 향후 연구는 이 효과를 결정하려고 시도해야 합니다.
miOCT는 무형 의 반응을 제공하여 침전물 분담 생성, 이식 이식 및 피하 유체 배수를 안내합니다. 수술 중, 황반의 외상성 조작은 좋은 이식 결과를 달성하는 열쇠입니다. 그러나, 조작과 관련된 황반의 미세 구조적 변화는 항상 작동 현미경에 분명하지 않을 수 있습니다. 이러한 절차에서 miOCT는 황반 구조의 실시간 3차원, 수술 중 피드백을 제공하는 중요한 도구입니다. miOCT는 유체 공기 교환을 사용하여 양골 분리, 이식 이식 및 침전물의 단계 중에 특히 유용합니다. foveal 분리 하는 동안, miOCT 는 bleb의 수직 및 수평 치수를 결정할 수 있습니다. 수술 현미경에 명확하게 시각화되지 않을 수 있는 포벨 미세 눈물은 miOCT에 의해 확인될 수 있다(도 3). 이식 이식 중에 miOCT 이미지는 종종 덜 투명하고 분리 된 망막을 통해 접목의 위치 또는 포베아에 대한 근접성을 보여 줌으로써 안내합니다. miOCT는 또한 어려운 이식 과정 25 도중 망막 접착의 가능한 지역을 강조할 수 있습니다25. 마지막으로, 하수 유체 배수 과정에서 miOCT는 완전한 망막-RPE 접목 접촉이 이루어질 때까지 침전유체 배수를 안정적으로 유도할 수 있습니다.
이중 보어 캐뉼라, 낮은 IOP 설정 및 PFCL 유리체 탐포네이드의 조합은 피망 분 결분 생성 시 황반 외상을 시너지 효과적으로 감소시킵니다. 접선 망막 스트레칭 및 유체 난류는 원치 않는 포골 눈물로 이어지는 포벨 분리를 위한 상하 BSS 주입 도중 생길 수 있습니다. 이러한 현상에 대응하기 위해, 주사가 시작되는 포팔 센터로부터의 상대적 위치 및 거리, 사출 부피 및 속도, 유리체 탐포나데, 피하 계측기의 선택, IOP 와 같은 요인들은 모두 20,26,27로 나타났다. 망막 스트레칭은 bleb 개시 부위27에서 가장 높을 수 있으므로 포베아에서 적절히 먼 위치에 배치되어야 합니다. 또한 IOP는 피망 블블을 만드는 동안 낮게 유지되어야 합니다. 눈의 IOP가 높을 때, 망막의 윤곽을 따라 팽창보다는 bleb 크기의 더 높은 수직 증가가 관찰되는 반면, 출혈은 낮은 압력20에서 얕습니다. 더욱이, 50 μL의 내트라비탈 주사는 NHP의 짧은 눈 길이를 감안할 때, 인간28에서 IOP를 효과적으로 두 배로 할 것이지만, 감하 주사 중 IOP 상승은 아마 인간보다 더 높고 더 빠를 것이다. 대부분의 Vitrectomy 기계는 IOP 변동에 대해 조정하는 동안, 조정은 동시가 아니라 오히려 부신 주사가 진행됨에 따라 발생하는 반응성 과정입니다. 따라서 IOP가 높을수록 망막 오버스트레칭 및 그 결과 포브 외상의 위험이 높아지습니다. 따라서, 침전 주입 시 안정적인 낮은 IOP를 유지하는 것이 필수적이다.
상용 20/41 G(DORC) 또는 주문 제작된 25/41 G 듀얼 보어 부레티날 캐뉼라가 사수 주입에 권장됩니다. 캐뉼라를 사용하면 유체가 지하 공간에 주입된 BSS에 대한 대가로 유리체 구멍을 빠져나갈 수 있습니다. 이것은 피하 주사 도중 IOP의 '동시' 규정을 보장합니다. 도 2에서는 이중 보어 캐뉼라의 회로도가 보입니다. 마지막으로, PFCL은 포골 눈물의 위험을 줄이기 위해 활용20,26,27. 옥탈린과 같은 PFCLs는 더 높은 특정 중력을 가지므로, 그들은 포벨 분리29 도중 망막에 하향 힘을 발휘합니다. 이것은 또한 포탈 분리 블블 생성 과정을 안정화하고 망막 윤곽을 따라 bleb의 확장을 향상시킵니다. 이 기술은 nAMD30으로 인해 대규모 하반출혈의 설정에서 rtPA의 피하 주사에 성공적으로 사용되었습니다.
네이티브 RPE의 사전 이식 제거는 RPE-광수용체 복합체의 복원을 가능하게 합니다. 호스트 RPE는 이식 이식 전에 제거되어야 합니다. 이는 RPE-광수용체 복합체의 복원이 요구되기 때문에 RPE 이식이 광수용체21을 지원하는 생리적 기능을 수행할 수 있도록 하기 때문이다. 호스트 RPE를 제거하지 않으면 기계적 장벽으로 포즈가 있어 이 단지의 복원을 방지할 수 있습니다. 그것은 RPE 독성 화학 물질의 관리를 통해 또는 제거의 물리적 수단을 사용 하 여 제거 될 수 있습니다. 화학적 제거 방법은 iodate31,32 나트륨의 전신 또는 적정 투여를 포함한다. 나트륨 iodate는 투여 시 광수용체, RPE 세포 및 Choriocapillaris의 광범위한 변성을 유발하므로 망막 및 전신 독성은 인체 실험에 대한 사용을 배제합니다32,33. 따라서, 물리적 인 수술 내 기술이 바람직하다. 다양한 물리적 방법이 개념화되었습니다. 물리적 인 방법을 활용하면 브루치의 멤브레인이 손상되지 않은 상태로 유지하는 것이 중요합니다. 많은 시험관 내 연구는 그대로 브루흐의 막에 RPE 이식 생존의 의존성을 입증했다34,35,36.
유압 탈면에 대한 시도는 브루흐의 막의 휴식, epiretinal 막 개발의 증가 속도 및 증식 유리체 병증과 관련이 있었으며, 그 결과 견인 망막 분리37이 발생했습니다. RPE 신부를 위해 제안된 다이아몬드 먼지주걱은 또한 브루치의 막에서 휴식으로 이어졌고, 그 결과 choroid에서 체하 공간으로세포 증식이 발생했습니다38. 흥미롭게도, 사용자 정의 확장 루프 악기는 토끼와 돼지의 눈에 브루치의 막의 보존과 과열 RPE를 제거 할 수 11,39. 기본 RPE의 제거는 AMD의 고급 위축 형태와 유사한 RPE 및 외부 망막 위축을 가진 동물 모델을 확립하는 데에도 유용합니다. RPE의 초점 영역이 황반에서 제거되면, RPE 상처는 나머지 RPE 세포의 비대를 통해 닫힙다. 그러나, 이러한 상처 치유 반응은 외부 핵층40의 위축과 연관된다. 동물 모델의 생성은이 원고의 범위를 벗어난 동안, 유사한 절차는 RPE 유래 세포 치료제의 시험을위한 고급 위축 AMD 표현형의 동물 모델을 만들 수 있습니다.
면역원생 이식 거부를 줄이기 위해 시롤리무스, 트리암시놀론, 독시사이클린 및 미노사이클린을 사용하여 감하 공간은 면역 특권 사이트로 생각된다, 그대로 혈액 망막 장벽 및 기타 요인에 의해 유지41. 줄기 세포 유도체의 피망 이식과 관련된 많은 연구에서 는 혈액 망막 장벽이 있는 면역 억제 약물이 이식 생존42에서 무시할 만한 역할을 합니다. 외부 혈액 망막 장벽은 RPE 세포 사이의 기본 RPE 층과 단단한 접합에 의해 형성될 것으로 생각됩니다. 네이티브 RPE 제거는 이식된 RPE 및 호스트 광수용체의 더 나은 통합을 허용하는 동안, 혈액 망막 장벽은 그 과정에서 중단되어 면역 거부의 가능성을 증가시킵니다. 고전적으로, T 세포는 신장과 liver43과 같은 그밖 기관의 이식 거부의 프로세스에 중심입니다. 따라서 망막 조직 이식을 위한 초기 면역 억제 요법은 이러한 적응성 면역 반응을 감소시키는 쪽으로 표적으로 삼았습니다.
라파엘린 억제제의 기계론적 표적인 시롤리무스와 칼시뉴린 억제제인 타크롤리무스는 적응형 면역 반응을 표적으로 하는 면역억제제의 예입니다. 그러나, 적당한 T 세포 억제에도 불구하고, 접목 생존율은 낮게 남아 있습니다. 또한, RPE 세포는 억제인의 방출을 통해 T 세포 활성화를 억제하고 조절T-cells44의 생성을 촉진하는 것으로 알려져 있다. 따라서 적응성 면역이 이식 거부에 유일한 기여자가 아닐 수 있다는 것이 점점 더 명백해지고 있습니다42. 셀룰러 제품의 부수 이식은 microglia45의 축적 및 활성화를 초래할 수 있습니다.
마이크로글리아는 망막의 대식세포입니다. 그(것)들은 2개의 주요 인구로 이루어져 있습니다: 1) 내부 망막 혈관증의 경피 현미경 및 2) 망막 조직 parenchyma 내의 microglia. microglia는 타고난 면역 반응의 일부이기 때문에 트리암시놀론과 같은 인트라비티리얼 글루코코르티코이드는 사이토카인 매개 증식46을 억제할 수 있습니다. 독시사이클린과 미노사이클린은 또한 마이크로글리아활성화를 억제할 수 있으며 47,48로 간주되어야 한다. 마지막으로, 접이식 대 RPE 동종 이식의 면역 거부의 차이는 불완전하게 이해된다49. 예를 들어, 유도된 다능줄기 세포 유래 RPE 세포에 대한 동산항체는 생체 내 면역 거부 모델의 혈청에서 보고되었다. 그러나, 이들 항체의 역할과 이식 생존에 있는 항체 중재거부의 중요성은 알려지지 않은 남아 있다50. 따라서 적응면역 억제를 위한 시롤리무스를 이용한 다약물 요법과 트리암시놀론, 독시사이클린 및 미노사이클린의 결합을 통해 타고난 면역 억제를 위한 약물 요법이 제안된다. 이 처방은 성공적으로 좋은 이식 생존 결과와 최소한의 전신 효과 토끼에서 사용되었습니다11.
이 수술 기술의 한계 이 논문은 NHP의 하수 공간에 RPE 이식 시트를 전달하는 가능한 수술 방법을 설명합니다. 그러나 이것이 유일한 최적화된 방법이라는 것을 의미하지는 않습니다. 다른 vitreo 망막 외과 의사는 계측 및 기술에 대한 다른 환경 설정을 가질 수 있습니다. 예를 들어, 이 이식 장치 설계는 더 단단한 세포담체로 서포트되는 평평한 임플란트만 제공할 수 있으므로 상대적으로 유연한(또는 압연) 임플란트에 적합하지 않을 수 있습니다. RPE 서스펜션 이식은 이 기술의 대부분을 생략할 수 있습니다. 따라서, 수술 세부 사항은 각 전달 전략에 따라 수정이 필요합니다.
퇴행성 망막 질환의 치료를 위한 세포 치료제에 대한 관심이 계속 증가함에 따라 NHP 동물 모델은 RPE 이식 생존에 영향을 미치는 요인을 연구하기 위한 전임상 연구에서 필수적입니다. 이 원고에서는 NHP 눈에서 하반신 단층 RPE 이식편을 원활하게 전달할 수 있도록 전략이 제안됩니다. 수술 중 합병증의 더 나은 시각화를 위한 방법도 권장됩니다. 이러한 방법은 세포 치료제의 사용이 확대됨에 따라 계속 개선될 것으로 예상됩니다. 향후 방법 논문은 또한 접목의 다양한 구조적 및 기능적 측면을 평가하기 위한 포괄적인 조사 목록을 제안하는 것을 고려해야 합니다.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.
The Authors section was updated from:
Ivan Seah*1, Zengping Liu*2,3,4, Daniel Soo Lin Wong3, Wendy Wong1, Graham E. Holder1,3,5, Veluchamy Amutha Barathi3,4,6, Gopal Lingam1,3,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
2Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR), 
3Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally
to:
Ivan Seah*1,2, Zengping Liu*1,3,4, Daniel Soo Lin Wong1, Wendy Wong2, Graham E. Holder1,2,5, Veluchamy Amutha Barathi1,4,6, Gopal Lingam1,2,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore 
2Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
3Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR) 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

RPE 이식은 상속되고 취득한 망막 퇴행성 질환의 치료에 큰 약속을 보유하고 있습니다. 이러한 조건은 망막색소침착증(RP, 로드콘 이영양증) 및 GA와 같은 고급 형태의 AMD를 포함하며, 이러한 장애는 전 세계적으로 현재 치료할 수 없는 실명의 상당한 비율을 나타낸다1,2. AMD의 고급 단계는 신생 혈관 AMD (nAMD) 및 GA로 분류됩니다. 항 혈관 내피 성장 인자 (anti-VEGF) 주사와 같은 nAMD에 대한 효과적인 치료 옵션이 있지만 GA 환자는 제한된 치료 옵션이 있습니다. RP는 진행성 망막 광수용체 변성을 특징으로 하는 유전망 질환의 고이질 성 그룹이다. 일부 환자에서, 원인 유전 적 결함은 광수용체보다는 RPE 내에 위치; 따라서, RPE 대체 요법은 유전자 치료가 가능하지 않다면 대체 전략일 수 있다.
이러한 조건에 대 한 효과적인 치료 개발에 중요 한 관심이 있다. 특히, RPE 이식은 잠재적인 치료 접근법으로 견인력을 얻고 있다3,4,5,6,7,8. 1980년대 RPE 이식에 대한 첫 번째 보고서가 등장한 이래, 이 분야는 다양한 RPE 세포 공급원, 전달 전략 및 질병 및 이식의 실험 모델을 포함하도록 확장되었습니다10,11,12,13,14. 다양한 동물 모델 중 NHP만이 인간과 공유하는 망막의 후방 극에 해부학 적 전문화인 '포베아 중앙 집중식'이있는 '황반 루테아'를 가지고 있습니다. 포베아는 고해상도 중앙 vision15를 가능하게 하는 매우 높은 밀도의 콘 광수용체를 함유하고 있습니다. NHP는 또한 인간에 비해 유사한 게놈 및 proteomic 메이크업16이 있습니다. 이러한 유사성은 인간의 망막17,18에 영향을 미치는 안구 질환의 연구를 위한 중요하고 적절한 동물 모델입니다.
이 원고는 면역 억제 된 NHP에서 PET 세포 캐리어에 의해 지원되는 RPE xenograft의 피황 이식 방법을 설명합니다. 토끼에서 피하 RPE 이식을 위한 경외 기술은 이전 원고19에서 기술되었다. 그러나, NHP에서, fovea의 존재는 수술 중 조작 20 도중 특정 주의가 필요합니다. 특히, 피하 유체 주입 방법이 망막20에 과도한 힘을 생성하는 경우 포벨 파열의 위험이 높다. 따라서 이 원고의 초점은 NHP에서 의도하지 않은 포약 외상의 위험을 줄이기위한 전략에 있습니다.
여기에는 포약 해부학의 실시간 시각화를 위해 수술 전 수술 전 비트라비탈 플라스미노겐 주입 및 수술 현미경 통합 광학 일관성 단층 촬영(miOCT)의 방출을 위한 사용이 포함됩니다. 낮은 IOP 설정에서 내막 PFCL 탐포네이드를 가진 맞춤형 25/41 G 이중 보어 침전 캐뉼라가 제안되어 foveal 분리의 보다 제어된 공정을 허용합니다. 또한 이식된 RPE 세포와 숙주 광수용체 간의 더 나은 통합을 허용하기 위해 이식 전에 네이티브 RPE를 외과적 제거하는 것이 좋습니다. 마지막으로, NHP 모델에 대한 peri-및 수술 후 전신 면역 억제 프로토콜은 이식 후 RPE xenograft의 생존을 개선하기 위해 기재된다11,21.

<table><tbody><tr><td>1% Mydriacyl (Tropicamide 1.0%) 멸균 안과 제제</td><td>Alcon</td><td>SIN 4715P</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>10% 중성 완충 포르말린</td><td>Leica</td><td>3800598</td><td>조직학 절차</td></tr><tr><td>2.5% Mydfrin(페닐에프린 염산염) 안과 용액</td><td>Alcon</td><td>No. 01785</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>25G AWH Vivid Chandelier</td><td>Synergetics</td><td>56.54.25P</td><td>수술</td></tr><tr><td>25 Ga Bi-Blade 유리체 절단기 결합 광시야 스텔라리스 엘리트 팩</td><td>Bausch & Lomb</td><td>SE5525WVB</td><td>외과 수술 절차</td></tr><tr><td>AMO ENDOSOL 안과 관개용 균형 소금 솔루션</td><td>Abbott Medical Optics</td><td>15020</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>Apo-minocycline</td><td>Apotex Inc</td><td>2084104</td><td>면역 억제</td></tr><tr><td>AUROVISC - Hypromellose 안과 솔루션 USP 2% w/v</td><td>Aurolab</td><td>TN 00002387</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>오토클레이브 MELAG, Vacuklav</td><td>MELAG</td><td>1131-B2300</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>Autostainer XL (ST5010)</td><td>Leica</td><td>2433</td><td>조직학 절차</td></tr><tr><td>균형 식염수 비</td><td>버 Visitec</td><td></td><td>581732 수술 절차</td></tr><tr><td>면봉</td><td>WINNER MEDICAL</td><td>1NA6-100</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>Diagnosys Espion E3 Console</td><td>Diagnosys</td><td>272</td><td>안과 영상</td></tr><tr><td>Doxycycline</td><td>Yung Shin</td><td>MAL 19950403AEZ</td><td>면역 억제</td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Merck Millipore</td><td>1.15935.0100</td><td>조직학 절차</td></tr><tr><td>ERG-Jet 콘택트 렌즈 전극</td><td>Fabrinal</td><td>F-06</td><td>안과 이미징</td></tr><tr><td>확장 가능한 PolyTip 캐뉼러 25 g / 38 G</td><td>MedOne</td><td>3247</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>FlexTip Brush (25 g) 1.5 mm</td><td>MedOne</td><td>3222</td><td>외과 수술 :</td></tr><tr><td>플루오레세인 10% Faure</td><td>Curatis AG</td><td>5030376</td><td>안과 영상</td></tr><tr><td>거즈 면봉</td><td>WINNER MEDICAL</td><td>1NP3275</td><td>수술</td></tr><tr><td>: 해밀턴 가스 밀폐 주사기 250 &마이크로; L</td><td>해밀턴</td><td>81101</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>하이델베르크 Spectralis HRA + OCT 컴퓨터 시스템</td><td>하이델베르크 엔지니어링</td><td>N.A.</td><td>안과 영상</td></tr><tr><td>Hematoxylin Gill II</td><td>Merck Millipore 3801520</td><td></td><td>조직학 절차</td></tr><tr><td>도립 현미경 이클립스 Ti-E 본체 (100-240V)</td><td>Nikon</td><td>33131</td><td>조직학 절차</td></tr><tr><td>케타민 주사</td><td>Ceva</td><td>37711/58317</td><td>외과 절차</td></tr><tr><td>탄산 리튬</td><td>Merck Millipore</td><td>1.05680.0250</td><td>조직학 절차</td></tr><tr><td>원숭이 플라스미노겐</td><td>Molecular Innovations</td><td>SKU-CYPLG</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>비접촉 광각 128도 안저 렌즈</td><td>C. Zeiss Medtech</td><td>Resight 700</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>부직포 안과 드레이프</td><td>Alcon</td><td>8065103120</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>안과 각막/공막 V-Lance 나이프 20G</td><td>Alcon</td><td>8065912001</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>파라핀 함유 스테이션</td><td>Leica</td><td>EG1150 H</td><td>조직학 절차</td></tr><tr><td>Paraplast High Melt Paraffin</td><td>Leica</td><td>39601095</td><td>조직학 절차</td></tr><tr><td>Phloxin B</td><td>Merck Millipore</td><td>1.15935.0025</td><td>조직학 절차</td></tr><tr><td>사전 분말 수술 장갑</td><td>MAXITEX</td><td>85-173-2 / 85-173-3 / 85-173-4</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>PRODINE 포비돈 - 요오드 용액 BP</td><td>ICM PHARMA</td><td>PMLBLP20-01</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>Righton Slit Lamp 모델 MW50D (RAA133CB)</td><td>Righton-OPH</td><td>5200162</td><td>Ophthamic imaging</td></tr><tr><td>로터리 마이크로톰</td><td>Leica</td><td>RM2255</td><td>조직학 절차</td></tr><tr><td>Safil Polyglycolic acid, braided, coated, absorbable surgical suture 7/0</td><td>B.Braun</td><td>G1048711</td><td>Surgical procedure</td></tr><tr><td>SHINCORT I.M. INJ. Triamcinolone Acetonide 40 mg/ mL</td><td>Yung Shin</td><td>SHI40 SGP-2610015-001</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>일회용 피하 주사 바늘 21 g</td><td>B.Braun</td><td>4657527</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>일회용 피하 주사 바늘 23 G</td><td>B.Braun</td><td>4657667</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>Sirolimus</td><td>Pfizer</td><td>SIN12034P</td><td>면역 억제</td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 피하 바늘 전극</td><td>OcuScience</td><td>F-E2</td><td>안과 이미징</td></tr><tr><td>Stellaris Elite 시력 향상 시스템</td><td>Bausch & Lomb</td><td>BL15455</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>Sterican 일회용 인슐린 바늘 긴 베벨 27 G 12 mm</td><td>B.Braun</td><td>4665406</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>Sterican 일회용 인슐린 바늘 긴 베벨 30 G 12 mm</td><td>B.Braun</td><td>4656300</td><td>수술</td></tr><tr><td>가운 + 2 핸드 타월</td><td>STERIL</td><td>APP10 00 01</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>Tegaderm 필름</td><td>3M</td><td>1626W</td><td>수술 방법</td></tr><tr><td>TERUMO 주사기 1cc/mL Luer SlipTip 바늘 포함 26G</td><td>Teruma</td><td>SS-01S</td><td>수술</td></tr><tr><td>TERUMO 주사기 3cc/mL Luer LockTip</td><td>Teruma</td><td>SS-03L</td><td>수술</td></tr><tr><td>TERUMO 주사기 5cc/mL Luer LockTip</td><td>Teruma</td><td>SS-05L</td><td>수술</td></tr><tr><td>절차 TobraDex(Tobramycin, Dexamethasone) 멸균 안과 연고</td><td>Alcon</td><td>제 01577</td><td>외과 수술</td></tr><tr><td>Topcon 망막 카메라 TRC-50DX</td><td>Topcon</td><td>948605</td><td>안과 영상</td></tr><tr><td>Vidisic Gel</td><td>Bausch & Lomb</td><td>GB41789155517</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>Xylazil-20</td><td>Ilium</td><td>38653/50276</td><td>수술 절차</td></tr><tr><td>Zeiss Opmi Rescan 700</td><td>Carl Zeiss Meditec AG</td><td>7210</td><td>수술 절차</td></tr></tbody></table>

퇴행성 망막 질병을 위한 비인간 영장류 모형에 있는 망막 안료 상피 이식

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

망막 색소 상피 (RPE) 이식은 상속되고 취득 된 망막 퇴행성 질환의 치료에 대한 큰 약속을 보유하고 있습니다. 이러한 조건에는 망막염 색소증(RP) 및 고령황변성(AMD)의 고급 형태(AMD)가 포함되며, 이는 지리적 위축(GA)과 같은 것이다. 함께, 이러한 장애는 전 세계적으로 현재 치료 할 수없는 실명의 상당한 비율을 나타냅니다. 이러한 충족되지 않은 의료 요구는 RPE 교체 의 개발 방법에 대한 높은 학문적 관심을 생성했다. 일반적으로 치료법의 전임상 테스트에 사용되는 동물 모델 중, 비인간 영장류 (NHP)는 황반이있는 유일한 동물 모델입니다. 이러한 해부학적 유사성을 인간의 눈과 공유함에 따라, NHP 눈은 RPE 세포 치료와 같은 고급 요법 의약제품(ATMP)의 개발을 위한 중요하고 적절한 전임상 동물 모델이다.
이 원고는 면역 억제 된 NHP에서 외과적으로 생성된 RPE 상처에 황반 (PET) 세포 캐리어 에서 배양 된 RPE 단층의 피하 이식 방법을 설명합니다. 황반의 중앙 변안 부분인 포베아(fovea)는 이식 중 가장 큰 기계적 약점의 부위입니다. 초기 피관 유체 주입이 망막에 과도한 힘을 생성하는 경우 포벨 외상이 발생합니다. 따라서, 퍼플루오로카본 액체(PFCL) 유리체 탐포네이드 하에서 느린 분사는 낮은 내압(IOP) 설정에서 이중 보어 침전 물 주입 캐뉼라로 권장되어 망막 결점을 생성한다. 
파라포벨 RPE-광수용체 유착을 방출하기 위해 인트라비탈 플라스미노겐 주입을 전처리하는 것도 좋습니다. 이러한 결합된 전략은 기존의 기술과 비교할 때 포약 눈물의 가능성을 줄일 수 있습니다. NHP는 RPE 세포 치료 개발의 전임상 상에서 핵심 동물 모델이다. 이 프로토콜은 NHP 눈에서 RPE 세포 치료의 전달과 관련된 기술적 과제를 해결합니다.

다모달 이미징 양식(fundus 사진, fundus 자동 불발 성 이미징 (FAF), 펀더스 형광성 혈관 조영술 (FFA)-초기 단계 및 후기 단계, 광학 일관성 단층 촬영 (OCT)) 성공적인 하반신 RPE 이식이식의 특징을 강조한다 (도 1). Fundus 사진은 시간이 지남에 따라 이동없이 fovea에서 RPE 이식 이식의 위치를 보여줍니다. FAF 이미징은 RPE 접목과 겹치는 하이퍼 오토플루오레션(흰색, 고강도 영역에 의해 입증된)의 최소한의 변화를 보여줍니다. 초기 및 후기 단계 FFA는 RPE 접목을 둘러싼 명백한 누출 (시간이 지남에 따라 확대되는 흰색, 고강도 영역에 의해 입증)을 표시하지 않습니다. 3일째의 초기 이미지는 이식 이식 전에 네이티브 RPE를 제거하기 때문에 창 결함을 보여줍니다. 황반 OCT 이미지는 시간이 지남에 따라 RPE 이식편위에 외부 망막 층 (특히, 광수용체 층)의 보존을 보여줍니다. 헤마톡클린과 에오신 염색은 미세눈물의 증거가 없는 망막 층을 보여줍니다. 접목 의 주변 위의 외부 핵 층의 보존은 RPE 세포가 광수용체 건강을 유지하는 그들의 생리적 기능을 수행하고 있음을 시사한다.
25/41 G 이중 보어 캐뉼라의 내피 및 외부 뷰는 IOP가 피하 주사 중에 제어되는 메커니즘을 강조합니다(그림 2). BSS는 중앙 긴 캐뉼라를 통해 침전유체 주입 시 하수 공간에 진입한다. 혈관 내 압력의 상당한 증가는 유리체 캐비티 내의 BSS가 캐뉼라의 더 큰 금속 보어를 통해 눈을 빠져나갈 수 있도록 합니다. 그런 다음 BSS는 캐뉼라를 따라 이동하여 결국 캐뉼라 허브 근처의 퇴신 항구에서 배출됩니다. 캐뉼라가 예상대로 작동하는지 여부를 평가하려면 캐뉼라 허브 근처의 송신 포트에서 유체가 흐르는지 확인합니다.
miOCT는 포브 분리 중에 작업 할 수있는 출혈 치수와 잠재적 인 포약 파열의 시각화를 허용합니다 (그림 3). 그림 3A1-A3는 포약 눈물로 결속의 경우를 강조한다. 도 3A1에서는, 열등한 결점이 외과 현미경의 밑에 보이는 동안, 눈물의 시각화는 어렵습니다. 그림 3A2는 눈물없이 출혈의 세로 부분을 보여줍니다. 도 3A3은 블렙의 수직 부분을 평가할 때 포브 라브를 나타낸다. 그림 3B1-B3는 눈물이 없는 채 성공적으로 생성된 결재를 보여줍니다.
ERG 파형에 상당한 열화가 없다는 것은 로드와 콘 광수용체 모두의 글로벌 기능이 피하 RPE xenografts로 유지된다는 것을 시사한다(도 4). ERG 파형은 망막의 전반적인 기능을 보여줍니다. 특히, 광수용체 기능의 손실을 결정하기 위해 A-waves에 주의를 기울여야 한다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig01.jpg"> 그림 1: 멀티모달 이미징을 통해 생체 내 분석. (A) 다양한 이미징 양식에 대한 왼쪽 눈 형하반 RPE 이식이식(좌측에서 오른쪽 컬럼: fundus 사진, 자동 불경, 펀더스 형광학-초기 단계, fundus 형광학 후기 단계, 광학 일관성 단층 촬영)의 생체 내 이미징에서 3개월까지 의 외형 편도 촬영(14일, 14일 까지) 개월 1, 3). fundus 사진의 별표는 망토절제술의 부위를 나타냅니다. 흰색 파선 화살표는 선 스캔 방향을 나타냅니다. fundus 자동 발광 이미징에 노란색 그려진 모양은 이식의 위치를 강조합니다. OCT 이미지의 흰색 삼각형은 접목의 각각의 측면 가장자리를 나타냅니다(색상 fundus 이미지의 선 스캔에 따라). (B) 헤마톡슬린과 위축포하에서 이식의 에신 염색 (수술 내 눈물로 인해) 층이 표지되어 있습니다. 스케일 바 = A (자동 형광 및 FA 이미지)의 1mm, A (OCT 이미지)의 200 μm, B의 100 μm. 약어: FA = 기금 혈관 조영술; OCT = 광학 일관성 단층 촬영; RGC = 망막 신경절 세포 층; INL = 내부 핵층; ONL = 외부 핵층; RPE = 망막 색소 상피. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig02.jpg"> 그림 2: 25/41 G 이중 보어 캐뉼라의 내피 및 외부 보기. (A) 25/41 G 이중 보어 캐뉼라의 내부 뷰는 피연 생성 시. 흰색 화살표는 침전 주사를 위해 더 긴 중앙 캐뉼라를 가리킵니다. 대시 된 화살표는 BSS가 눈을 빠져 나가는 데 통과하는 회귀 캐뉼라의 개구부를 가리킵니다. (B) 25/41 G 이중 보어 캐뉼라의 외부 보기. 별표는 혈관 내 BSS가 배수되는 캐뉼라 허브 근처의 송신 포트를 표시합니다. 약어: BSS = 균형 잡힌 염액. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig03.jpg"> 도 3: 수술 중 현미경 이미지와 궤적 눈물로 복잡한 피흘의 miOCT 이미지. (A1) 포약 눈물로 출혈로 세로(파란색) 및 횡방향(red)의 위치를 보여주는 수술 내 현미경 영상. (A2) 포발 영역(노란색 화살표)에서 피하 출혈을 나타내는 세로 miOCT 스캔. (A3) 망막 절제술(별표 및 피하 출혈(노란색 화살표)과 함께 포팔 눈물(흰색 화살촉)을 캡처하는 횡방향 miOCT 스캔. (B1) 성공적으로 형성된 결면에서 세로(파란색) 및 횡방향(red) 스캔의 위치를 보여주는 수술 내 현미경 이미지. (B2) 포발 영역(노란색 화살표)에서 피하 출혈을 나타내는 세로 miOCT 스캔. (B3) 횡방향 miOCT 스캔은 그대로 포베아(화이트 다이아몬드)로 성공적으로 생성된 감전 블B를 보여 주는 스캔입니다. 약어: miOCT = 현미경 통합 광학 일관성 단층 촬영. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig04.jpg"> 그림 4: RPE 이노이식 이식 눈의 ERG. 망막의 기능적 평가를 위해, 베이스라인(위행)과 3개월 후 이식 후(아래 줄)에서 수행된 RPE-xenografted 눈의 전체 필드 ERG 평가는 어두운 적응 또는 밝은 적응 조건하에서 임의의 반응 진폭, 타이밍 또는 파형에 대한 RPE 제노이식 이식의 유의한 효과를 나타내지 않습니다. 약어: RPE = 망막 색소 상피; ERG = 전기 전도사; DA = 어두운 적응; LA = 빛 으로 조정. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

비인간 영장류 (NHP)는 해부학적 및 유전적 유사성으로 인해 인간의 망막 세포 치료법을 연구하기위한 이상적인 모델입니다. 이 원고는 NHP 눈의 망막 색소 상피 세포의 피하 학적 이식 방법과 황반 조작과 관련된 수술 내 합병증을 방지하기위한 전략을 설명합니다.

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

망막 안료 상피 이식 이식 중 포약 외상은 나쁜 시각적 결과를 초래할 수 있습니다. 이 제안된 방법은 종래의 기술에 비해 포약 눈물의 가능성을 감소시킬 수 있다. 제안된 방법은 피하 접착 형 접착력의 방출, 망막 층의 더 나은 시각화 및 블렙 형성 중 접선 전단 력을 포함하여 포모 외상에 기여하는 여러 요인을 다룹니다.이 기술은 인트라비탈 플라스미노겐 전처리, 현미경 통합 OCT 유도 망막 결점 형성, 이중 보어 캐뉼라를 이용한 퍼플루오로카본 액체 유리체 탐포네이드를 수반하여 부드러운 시술로 포약 외상의 가능성을 생성합니다. 이 절차를 시연하는 것은 선임 연구원인 젠핑 리우 박사와 실험실의 연구 조교인 다니엘 수 린 웡(Daniel So Lin Wong)이 될 것입니다. 수석 컨설턴트인 고팔 링암 교수도 운영 절차를 시연할 것입니다.시작하려면, 360도 결막 절제술을 위해 림푸스 근처의 결막 절제술을 절개하기 위해 Vannas 가위를 사용하고 음루 절제술을 확대하기 위해 무딘 해부를 수행하십시오. 25 게이지 마이크로 바이트레오레티날 블레이드를 사용하여 오른쪽 눈의 8시 또는 왼쪽 눈의 4시에 3mm 절개를 합니다. 7-0 비릴 봉합사를 사용하여 25 게이지 사용자 지정 측면 포트 주입 캐뉼라와 봉합사를 삽입합니다.인트라비탈 위치를 확인한 후 균형 잡힌 염액 주입을 시작하고 20 밀리리터의 내혈압을 유지하기 위해 시스템을 설정합니다. 25 게이지 플랫 헤드 트로카를 사용하여 오른쪽 눈의 2시 또는 왼쪽 눈의 10시 방향에서 clera를 절개하십시오. 플랫 헤드 트로카에 25 게이지 샹들리에 빛을 삽입하고 끈적 끈적한 테이프로 빛을 고정합니다.광원을 약 60%로 조정하여 오른쪽 눈의 경우 10시 또는 2시에 왼쪽 눈을 위해 또 다른 경화증을 수행합니다. 매듭을 묶지 않고 경화증 주위에 U자형 비릴 7-0 봉합사를 놓습니다. 경화증을 통해 비트레토미 트로카를 삽입합니다.엔트리 포트 주변에서 vitrectomy를 수행하고 분당 최대 5, 000 컷, 최대 포부를 400mm의 수은으로 짧은 코어 비트레절제술을 수행합니다. 더 나은 유리체 시각화를 위해 트리암시놀론20~50마이크로리터를 주입합니다. 유리체체를 망막에서 분리하여 후방 유리체 분리를 유도합니다.시차 디스크 위에 비트레터를 배치하여 후방 유리체 분리를 부드럽게 유도할 수 있습니다. 어떤 절단을 포함하지 않고 수은의 최대 400 밀리미터에 포부에 vitrector을 유지합니다. 필요한 경우 25 게이지 안구 집게를 사용하여 유리피질을 찢어 분리를 용이하게합니다.커터로 후방 히알로이드 멤브레인을 열고 분리된 유리체 스커트를 유리체 베이스까지 제거합니다. 망막 표면에 남아있는 트리암시놀론을 흡인시합니다. 전방 및 중간 주변 망막까지 후방 극을 커버하기 위해 퍼플루오로카본 액체의 1~ 2 밀리리터를 주입합니다.피망 주사 캐뉼라로 눈을 입력합니다. 25 by 41 게이지 사용자 정의 듀얼 보어 침전 물 주입 캐뉼라 또는 25 by 38 게이지 피진 주입 캐뉼라를 사용 하 여 250 소리터 주사기에 연결 하 여 subretinal 주입 주사를 사용 하 여 subretinal 주입에 대 한. 내측 압력을 0~4밀리미터의 수은으로 설정합니다.국소화된 망막 분리를 유도하기 위해 BSS의 침전 주사를 부드럽게 수행한다. 일단 bleb는 fovea를 교차, BSS주입을 중지. 별도의 방향에서 두 번째 블레브를 만듭니다.두 블을 병합하여 포베아를 완전히 분리합니다. 수술 중 광학 일관성 단층 촬영 기능을 사용하여 블라인 형성을 시각화하여 선과 큐브 스캔이 고화질 모드로 되어 포베아에서 이미지를 획득할 수 있도록 합니다. 접두막의 절개를 수직 25 게이지 바이트레오레티날 가위로 1.5밀리미터로 확대하여 이식을 위한 피하 공간에 접근할 수 있도록 합니다.안구 내 압력을 50mm의 수은으로 설정합니다. 브러시 실리콘 팁 캐뉼라를 사용하여 퍼플루오로카본 액체를 제거합니다. 1.4mm 절개 칼을 사용하여 경화증을 확장하십시오.20 게이지 확장 루프 계측기를 입력하고 긁어내어 서브황숙주 망막 안료 상피를 제거합니다. 슈터 장치의 끝을 경화증을 통해 삽입하고 20 밀리미터의 수은의 내측 압력에서 유리체 구멍을 통과합니다. 브룩스 멤브레인을 향한 세포담체 측과 광수용체를 향한 이종이이식으로 망막 표면에서 생성된 망막 표면을 통해 침전 공간을 향해 임플란트를 주입한다.수술 중 광학 일관성 단층 촬영 기능을 가능하게 하여 임플란트 위치를 시각화합니다. 임플란트가 전하 망막으로 피하 공간 내 브룩스 멤브레인에 평평하게 쉬고 있는지 확인하기 위해 피하 주사 캐뉼라 또는 25 게이지 곡선 내 가위로 임플란트 위치를 조정하고, 생성된 망막에서 멀리 떨어져 있고 망토미 부위에 방해가 되지 않도록 한다. 기압-공기 교환을 위해 브러시 실리콘 팁 캐뉼라를 사용하고 망막이 임플란트 위로 다시 부착될 때까지 굴착 망막 분리 및 망막 가장자리 압착에서 침전 액을 부드럽게 흡인시합니다.그런 다음 수술을 마치려면 미리 배치된 7-0 비릴 봉합사를 사용하여 작업 포트 경화증을 닫습니다. 8시 경화증시 2밀리그램당 0.05 밀리리터를 투여하십시오. 샹들리에와 주입 캐뉼라를 제거합니다.비릴 봉합사로 이 경화증을 닫습니다. 안구 내 압력이 허용 범위 내에 있는지 확인하기 위해 눈을 찌르고 있습니다. 필요한 경우 30 게이지 바늘을 통해 여과 된 공기 또는 BSS를 주입하십시오.다양한 이미징 양식에 대한 왼쪽 눈 의 하반신 망막 안료 상피 이식 이식의 생체 내 이미징이 최대 3 개월 동안 수행되었다. fundus 사진은 포베아에서 이식 된 이식 된 이식이 시간이 지남에 따라 마이그레이션되지 않았음을 나타냅니다. fundus 자동 형광 화상 진찰은 망막 안료 상피 이식과 겹치는 하이퍼 자동 형광에 있는 최소한의 변경을 보여주었습니다.초기 및 후기 단계 fundus 형광 혈관 조영술은 접목을 둘러싼 누출을 나타내지 않았다. 황반 광학 일관성 단층 촬영 이미지는 시간이 지남에 따라 접목에 외부 망막 층의 보존을 보여 주며 망막 색소 상피 세포의 기능을 시사했습니다. HE 염색은 미세 한 눈물의 증거없이 그대로 망막 층을 보였다.수술 중 광학 응고 단층 촬영은 모경 분리 중에 체결 치수와 잠재적 인 포벨 눈물의 시각화를 가능하게합니다. 눈물의 존재는 출혈 형성을 방해 할 수 있습니다. 올바른 결점 형성의 성공은 눈물의 부재에 의해 표시되었다.망막의 기능적 평가를 위해 망막 색소 상피 의 전체 현장 전세뇌노그램 평가가 수행되었다. 전하계각파형에 상당한 열화가 없으면 로드와 콘 광수용체 의 기능이 제노이식으로 유지되었음을 시사한다. 국소화된 망막 결재를 만드는 동안, 제트 속도의 급격한 변화가 포살 눈물로 이어질 수 있으므로 매우 부드럽게 하십시오.이 단계를 천천히 수행하는 것이 foveal 부상을 줄이는 열쇠입니다. fundus 자동 형광, 형광 혈관 조영술 및 전기 생리학 연구와 함께 광학 일관성 단층 촬영을 포함한 다중 모달 이미징은 접목 및 그것에 영향을 미치는 요인의 생존가능성에 대한 더 큰 통찰력을 제공 할 수 있습니다.

retinal-pigment-epithelium-transplantation-non-human-primate-model

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

여기에서 우리는 쥐와 생쥐에 RPE 세포 덩어리를 망막하 주입하기 위한 멀티미디어 형식의 커뮤니티 승인 프로토콜을 제시합니다. 이 접근 방식은 망막 변성의 동물 모델에 이식할 때 이식된 RPE 세포의 구조 가능성, 안전성 프로필 및 생존 능력을 결정하는 데 사용할 수 있습니다.

서스펜션에 망막 색소 상피 세포를 제공하기 위해 설치류에서 망막 주사를 수행

망막 색소 상피 (RPE) 대체 전략 및 유전자 기반 치료는 여러 망막 퇴행성 조건이 고려된다. 임상 번역, 큰 눈 동물 모델은 환자에 적용 할 수있는 수술 기법을 연구해야합니다. 여기에서 우리는 다양하고 비용 효율적인 RPE 이식에 맞 망막 수술 토끼 모델을 제시한다.

토끼의 망막 수술에 대한 단계 프로토콜에 의해 단계

Subretinal 주입은 나이 관련 황 반 변성에 대 한 줄기 세포 대체 요법의 전 임상 연구에 널리 적용 되었다. 이 시각화 된 문서에서는, 우리 쥐 눈 세포를 제공 하는 트랜스 scleral 접근을 통해 덜 위험 하 고, 재현 고 정확 하 게 수정 subretinal 주입 기술을 설명 합니다.

쥐의 눈으로 인간 망막 안료 상피 세포의 트랜스 scleral Subretinal 이식에 대 한 세련 된 프로토콜의 개발

망막 색소 상피 세포 건조 연령 관련 황 반 변성의 고급 형태에 대 한 세포 보충 치료 될 수 있습니다. 이 프로토콜 지리적 위축의 눈이 큰 모델 및 질병의이 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식의 생성을 설명합니다.

지리적 위축의 눈이 큰 모델에 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 색소 상피 세포의 subretinal 이식

망막 조직을 인간의 양수 막과 동물 모델에 이식의 준비 위에 경작 인간의 pluripotent 줄기 세포에서 파생 된 망막 색소 상피 세포의 구성 하는 방법을 설명 합니다.

인간 배아 줄기 세포에서 파생 된 이식 적합 한 망막 색소 상피 조직 공학

여기서는 인간 만능줄기세포(hPSC) 유래 망막 조직을 대형 동물 모델의 망막하 공간에 이식하는 수술 기법을 제시합니다.

고양이과 거대 동물 모델에서 인간 배아 줄기 세포 유래 망막 조직의 망막하 이식

여기서, 다양한 포유류(마우스, 쥐, 토끼, 돼지 및 소)로부터 일차 홍채 및 망막 색소 상피 세포를 분리하고 변형시키는 프로토콜이 제시된다. 이 방법은 전 생체 분석 및 인간에게 양도 할 수있는 생체 내 연구를위한 다양한 셋업에서 안구 유전자 치료 접근 방식을 연구하는 데 이상적입니다.

비 바이러스 유전자 치료를 위한 포유류 1차 안료 상피 세포의 격리, 배양 및 유전 공학

망막 색소 상피(RPE)의 망막하 이식은 퇴행성 망막 질환 치료를 위한 가장 유망한 접근법 중 하나입니다. 그러나 큰 눈 동물 모델에 대한 전임상 연구의 성과는 여전히 도전적입니다. 이 보고서는 세포 운반체에 대한 RPE의 망막하 이식을 미니피그로 하기 위한 지침을 제시합니다.

Minipigs의 캐리어에 RPE의 망막하 이식: 수술 전 준비, 수술 기술 및 수술 후 관리에 대한 지침

야생형 원숭이로부터 얻은 망막 외식편을 시험관 내에서 배양하였다. 망막 변성 및 cGMP-PKG 신호전달 경로는 PDE6 억제제 zaprinast를 사용하여 유도하였다. 상이한 자프리나스트 농도에서 외식편에서의 cGMP 축적은 면역형광법을 사용하여 검증하였다.

원숭이 원숭이의 Organotypic Retinal Explant 배양

이 프로토콜은 망막 변성이 있거나 없는 마우스 수용자에서 수술 합병증 발생률이 낮은 망막하 세포 이식편을 안전하고 정확하게 전달하기 위한 동공 시야 유도 경공막 접근법을 제시합니다.

망막 변성 마우스 모델에서 망막하 이식편의 Transpupillary-Guided Trans-Scleral Transplantation

동결 보존 후 hESC 유래 광수용체 전구 세포의 제조 및 rd10 마우스에서 이러한 세포의 망막하 전달에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다.

rd10 마우스에서 인간 배아 줄기 세포 유래 광수용체 전구체의 망막하 전달

학습하세요 비인간 영장류에서 망막 안료 상피 세포 이식을 위한 새로운 수술 기법으로 황반부 외상 위험을 최소화하는 방법을. OCT 유도 박리 형성과 플루오르카본 액체 탬포네이드를 활용하여 정밀한 시각화와 안전한 이식을 가능하게 합니다.

퇴행성 망막 질병을 위한 비인간 영장류 모형에 있는 망막 안료 상피 이식

더 많은 동영상 탐색