Name: 벡터 유전자 전달을 위한 비인간 영장류에서 스텐센의 덕트를 통한 역행 파로티드 글랜드 주입 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 50 s
Description: 배우세요 비인간 영장류에서 스텐센의 덕트를 통한 역행 파로티드 글랜드 주입 기법으로 유전자 전달 및 백신 접종을 위한 재현 가능한 방법을 익히세요. 이 기술은 수술 경험이 없는 연구자도 쉽게 수행할 수 있습니다.

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저자는 절차 촬영에 자신의 시청각 지원에 대한 씨 Cagney 젠트리에게 감사드립니다. 우리는 또한이 프로젝트를 추구하는 학문적 지원을위한 헤프너 VA 의료 센터를 인정하고 싶습니다.

모든 절차는 동물 연구를 위한 의학 클락슨 캠퍼스의 웨이크 포레스트 학교에서 수행되었습니다. 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)는 윤리적 고려 사항에 대한 자문을 받았으며 절차의 세부 사항은 검토를 위해 제출되었습니다. 웨이크 포레스트 IACUC는 우리의 연구 프로토콜을 승인하고 모든 절차는 iacUC 승인 프로토콜 #A17-147에 따라 수행되었다.
1. 주입 장치 준비
<ol><li>크기 10 폴리에틸렌 튜브 (PET10)를 가위를 사용하여 25cm 길이로 잘라냅니다.</li>
	<li>검은 색 마커를 사용하여 한쪽 끝에서 1cm, 2cm에서 PET10을 표시합니다.</li>
	<li>Ad5-EGFP 용액의 0.5mL(109 바이러스 입자/mL)를 1mL(결핵) 주사기로 미리 채웁니다.</li>
	<li>주사기에 부착된 29-31 G 바늘을 통해 PET10 튜브의 비 표시끝을 밀어냅니다. 일반적으로 배율하에서 이 작업을 수행하는 것이 더 쉽습니다.</li>
	<li>튜브가 완전히 가득 차때까지 PET10에 솔루션을 주입하십시오 (무료 끝에서 보이는 드롭).</li>
	<li>수술 용 스크럽, 긴 소매 가운, 불투과성 장갑, 수술 용 마스크, 얼굴 방패, 헤어 보닛 및 신발 커버를 포함한 전체 표준 PPE를 사용합니다.</li>
</ol>2. 동물 준비
참고 : Cynomolgus 원숭이는 비디오 데모에 사용되었다. 다른 비 인간 및 인간 영장류의 해부학은 매우 유사하며 프로토콜은 다른 종과 관련이 있어야합니다.
<ol><li>타액 분비를 최소화하고 비염의 분포 및 보존을 최적화하기 위해 절차 15 분 전에 atropine의 0.05 mg/kg을 피하하십시오.</li>
	<li>근육 내 케타민/미다졸람(10-15 mg/kg의 케타민, 미다졸람 0.01-0.05 mg/kg)을 사용한 5mL 주사기를 사용하여 마취를 제공합니다. 진정된 동물이 의식이 없고 자극에 반응할 수 없을 때 적절한 마취를 확인합니다.</li>
</ol>3. 절차 수행
<ol><li>구강 리트랙터를 사용하여 입을 벌리면 버팀목이 됩니다.<ol>
<li>고무 패드는 주입 될 선과 반대입의 측면에 상단 치아 뒤에 하드 미각에 re트랙터의 한쪽 끝의 고무 패드를 배치합니다. 다른 쪽 끝의 고무 패드를 상부 리트랙터와 같은 면에 놓습니다. 리트랙터의 스프링 동작이 입을 확장하고 열 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>상부 2nd 어금니에 인접한 후방 뺨에 스텐센 덕트의 오프닝인 파로티드 유두를 확인한다. 이것은 배율에 대한 치과 루프를 사용하여 시각화하는 것이 가장 좋습니다.</li>
	<li>원물 팽창기의 지점으로 파로티드 유두를 부드럽게 팽창시다. 딜레이터의 지점을 유두의 중앙이나 개구부에 넣은 다음 부드럽게 앞뒤로 회전하는 것이 가장 좋습니다. 포인트는 천천히 유두를 입력하고 부드러운 회전의 약 20 - 30 s 이상 팽창한다.</li>
	<li>PET10 튜브를 팽창된 파로티드 유두에 삽입합니다. 이것은 불경한 끝에서 약 0.5cm 핀셋을 가진 PET10 관의 표시된 끝을 잡고 부드럽게 팽창한 유두에 관의 끝을 삽입해서 달성됩니다.<ol>
<li>튜브 슬라이드를 돕기 위해 작은 회전 움직임에 의해 용이하게되는 튜브를 부드럽게 전진시키고 핀셋0.5cm 근동을 이전 그립으로 재조정합니다. 2cm 표시가 파로티드 유두에 도달할 때까지 이 것을 반복합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>유두와 삽입 된 튜브 주위에 뺨에 시아노아크 릴레이트를 적용하고 건조 때까지 기다립니다 (특정 금액은 기록되지 않고 스텐센의 덕트 유두입구를 밀봉하기에 충분함). 이것은 전형적으로 1 분 미만 소요하고 parotid 유두를 밀봉하고 구강에 다시 불양의 유출을 감소시키는 것을 돕습니다.</li>
	<li>주사기 함량을 100 μL/min의 속도로 5분 이상 천천히 밀어 넣습니다. 이 느린 주입 속도는 덕트 내 압력의 급격한 증가로 인한 덕트 부상의 위험을 최소화합니다.</li>
	<li>PET10을 주입이 완료된 후 최소 5분 동안 그대로 둡니다. 덕트를 밀봉하고 비소가 파로티드 선에 남아 있도록 하십시오.</li>
	<li>부드러운 견인력으로 PET10을 제거하십시오. 시아노아크라이레이트는 튜브로 자유롭게 풀릴 수 있습니다.</li>
	<li>반대쪽에서 3.2~3.8단계를 반복합니다.</li>
	<li>두 parotids 주입 하 고 두 PET10 튜브 제거 후 천천히 구두 re트랙터를 해제. 참고: 양측의 전체 절차는 30분 미만이어야 합니다.</li>
</ol>4. 절차 후 치료
<ol><li>주입이 완료되고 스텐센의 덕트 탈유 후 마취 효과가 마모 될 때까지 동물을 관찰하십시오 (일반적으로 20-30 분 후 시술).</li>
	<li>동물 음료를 제공하고 완전히 깨어나서 음식을 제공하고 일상적인 치료를 재개하십시오.</li>
</ol>

<ol><li>Isenman, L., Liebow, C., Rothman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+secretion+of+mammalian+digestive+enzymes+by+exocrine+glands%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The secretion of mammalian digestive enzymes by exocrine glands.</a> The American Journal of Physiology. 276, 223-232 (1999).</li>
<li>Perez, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+epithelial+cells%3A+An+unassuming+target+site+for+gene+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Biochemistry+%26+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Salivary epithelial cells: An unassuming target site for gene therapeutics.</a> The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 42, 773-777 (2010).</li>
<li>Kochel, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+virus+serotype-1+DNA+vaccine+induces+virus+neutralizing+antibodies+and+provides+protection+from+viral+challenge+in+Aotus+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A dengue virus serotype-1 DNA vaccine induces virus neutralizing antibodies and provides protection from viral challenge in Aotus monkeys.</a> Vaccine. 18, 3166-3173 (2000).</li>
<li>Ponzio, T. A., Sanders, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+salivary+gland+as+a+target+for+enhancing+immunization+response%5BTitle%5D)+AND+%22Tropical+Diseases%2C+Travel+Medicine+and+Vaccines%22%5BJournal%5D)">The salivary gland as a target for enhancing immunization response.</a> Tropical Diseases, Travel Medicine and Vaccines. 3, 4(2017).</li>
<li>Baum, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+responses+to+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+for+radiation-induced+salivary+hypofunction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Early responses to adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA for radiation-induced salivary hypofunction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 19403-19407 (2012).</li>
<li>Voutetakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorting+of+Transgenic+Secretory+Proteins+in+Rhesus+Macaque+Parotid+Glands+After+Adenovirus-Mediated+Gene+Transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Sorting of Transgenic Secretory Proteins in Rhesus Macaque Parotid Glands After Adenovirus-Mediated Gene Transfer.</a> Human Gene Therapy. 19, 1401-1405 (2008).</li>
<li>Niedzinski, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+systemic+transgene+expression+after+nonviral+salivary+gland+transfection+using+a+novel+endonuclease+inhibitor%2FDNA+formulation%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Enhanced systemic transgene expression after nonviral salivary gland transfection using a novel endonuclease inhibitor/DNA formulation.</a> Gene Therapy. 10, 2133-2138 (2003).</li>
<li>Niedzinski, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+Enhancement+of+Nonviral+Salivary+Gland+Transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Zinc Enhancement of Nonviral Salivary Gland Transfection.</a> Molecular Therapy. 7, 396-400 (2003).</li>
<li>Samuni, Y., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+in+salivary+glands%3A+From+the+bench+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+-+Molecular+Basis+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Gene delivery in salivary glands: From the bench to the clinic.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. , (2011).</li>
<li>Voutetakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-Associated+Virus+Serotype+2-Mediated+Gene+Transfer+to+The+Parotid+Glands+of+Nonhuman+Primates%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adeno-Associated Virus Serotype 2-Mediated Gene Transfer to The Parotid Glands of Nonhuman Primates.</a> Human Gene Therapy. 18, 142-150 (2007).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

여기서 우리는 스텐슨의 덕트를 통해 parotid 선으로 역행 주입의 프로토콜을 설명합니다. 설명된 방법론은 유전자 치료 및 그밖 응용을 위한 사이트로 타액 조직의 유용성을 탐구하는 연구원에 의해 잠재적으로 이용될 수 있는 지도를 제공합니다.
절차의 성공을 보장하기 위한 여러 가지 중요한 단계가 있습니다. 무엇보다도 모든 절차 단계를 부드럽게 완료해야 합니다. 입의 강력한 브레이싱은 하악 서브럭스로 발생할 수 있습니다. 스테네센덕트에 용액을 신속하게 주입하거나 파로티드 유두의 강력한 수분 또는 신속한 주입은 급성 덕트 눈물이나 만성 덕트 협착증을 초래할 수 있습니다.
둘째, 마취가 투여되고 효과적인지 확인하십시오. 적절한 마취없이, 단계중 어느 것도 쉽게 달성 할 수 없으며 동물과 인간의 부상의 위험이 크게 증가합니다. 우리는 케타민과 미다졸람을 가진 근육 마취를 선택했습니다, 이는 비 인간 영장류 연구<sup class="xre...

타액선은 타액의 외분 생산으로 잘 알려져 있지만, 연구자들은 오랫동안혈류1에직접 단백질을 분비하는 능력을 인식하여 대체 호르몬이나 항체 생산과 같은 전신 투여를 위한 유전자 치료의 잠재적 인 표적이 되었습니다. 실제로, 타액선은 분비(재산 근육 부족), 벡터 확산을 제한할 수 있는 무거운 캡슐화, 비통합 벡터에 대한 안정성을 제공하는 잘 분화된 조직 등 다른 조직 표적에 비해 몇 가지 이점을 제공합니다. 또한 심각한 부작용이 발생할 경우 타액선은 생명에 중요하지 않으며 외과적으로 제거 될 수 있습니다. 즉시 직관적이지는 않지만, 파로티드 땀샘은 메인 배설덕트인 스텐센덕트2를통해 입에서 쉽게 접근할 수 있습니다.
유전자 치료를 위한 타액 조직의 장점을 감안할 때, 이 조직 표적을 탐구에 있는 관심이 증가하고 있습니다. 설치류, 개 및 비인간 영장류 모델에서 이미 수많은 연구가 수행되었으며 적어도 하나의 인간 임상 시험이3,4,5로진행중이다. 유전자 치료 목적을 위해이 조직 표적의 유용성을 더 탐구하고 개발하기 위해 더 많은 비 인간 영장류 연구가 수행되어야합니다. 이 논문은 비인간 영장류 모델에서 트랜스포메이션을 위한 벡터 유전자를 전달하기 위해 스텐센덕트를 통해 파로티드 땀샘에 접근하는 방법을 설명합니다. 선으로 들어갈 때 덕트의 내후및 해부학의 전달을 눈에 띄게 입증하기 위해, 방사선 대조를 이용하여 형광술이 수행되었다. 벡터의 성공적인 전도를 입증하기 위해, 아데노바이러스 혈청형 5(Ad5) 벡터에그fp 유전자가 사용되었다. Ad5는 타액 조직을 변형시킬 수 있는 잘 기술된 벡터이다. 궁극적인 임상 사용을 위해 너무 면역원성이지만, 효율적인 트랜스듀션을 보장하기 위해 이 데모 연구를 위해 Ad5 벡터를 선택했습니다. 향상된 녹색 형광 단백질 (EGFP) 생산을 평가하는 것은 변환 다음 벡터 유전자의 성공적인 전사 및 번역을 입증하는 잘 설명 된 방법이며 여기에서 수행되었습니다.

<table><tbody><tr><td>500 &마이크로; L 30게이지 바늘이 있는 U100 주사기</td><td>Becton Dickinson</td><td>328466</td><td>폐기물 감소를 위한 고정</td></tr><tr><td>바늘 접착제(예: Ethicon Dermabond)</td><td></td> <td>주입 중에 덕트의 튜브를 밀봉하고 유지하기 위한</td> 다양한 <td></td> 시아노아크릴레이트 접착제.</tr><tr><td>아트로핀 주사액</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07 869-6061</td><td>아트로핀 주입 0.54 mg/mL</td></tr><tr><td>BD 초미세 인슐린 주사기 30G</td><td>Walmart</td><td>N/A</td><td>0.5 mL 및 1.0 mL 크기의 Avilable.</td></tr><tr><td>시아노아크릴레이트(의료용 접착제)</td><td>Ethicon</td><td>DNX12</td><td>Dermabond 국소 피부 접착제</td></tr><tr><td>가벼운 아마존이 있는 치과 루프</td><td>(DDP)</td><td>B012M3IV80</td><td>Stensen의 덕트 유두의 시각화를 향상시키는 데 사용</td></tr><tr><td>유아 눈물샘 확장기</td><td>Surgipro</td><td>SPOI-137</td><td></td></tr><tr><td>케타민 주사 용액</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-803-6637</td><td>Ketaset inj. 100 mg/mL</td></tr><tr><td>눈물샘 확장기</td><td>Surgipro</td><td>SPOI-132</td><td>Stensen의 관을 다이얼하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Midazolam 주사 용액</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07 890-6698</td><td>Midazolam inj. 5mg/mL</td></tr><tr><td>가위</td><td>아마존(DDP)</td><td>N/A</td><td>PET10 튜브</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 튜브(PE-10)</td>를 절단하는 데 사용 Scientific <td>Comodities, Inc</td><td>BB31695-PE/1</td><td>30G 주사기를 연결하고 덕트에 삽입하는 튜브.</td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>Walmart</td><td>N/A</td><td>뺨에 시아노아크릴레이트를 바르는 데 사용</td></tr><tr><td>크기 10 폴리에틸렌 튜브(PET 10)</td><td>과학 상품</td><td>BB31695-PE/1</td><td>저밀도 폴리에틸렌 튜빙</td></tr><tr><td>작은 동물 입 따개</td><td>아마존(DDP)</td><td>B01F3LVJXC</td><td>동물의 입을 열어 두는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>핀셋</td><td>Amazon (DDP)</td><td>N/A</td><td>PET10 튜브를 Stenson의 덕트에 삽입하는 데 사용</td></tr><tr><td>염화아연</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7646-86-7</td><td>플라스미드 DNA에 포함됨</td></tr></tbody></table>

벡터 유전자 전달을 위한 비인간 영장류에서 스텐센의 덕트를 통한 역행 파로티드 글랜드 주입

Retrograde Parotid Gland Infusion through Stensen's Duct in a Non-Human Primate for Vectored Gene Delivery

침샘은 이미 인체 실험으로 이어지는 유망한 결과를 가진 유전자 치료를 위한 매력적인 조직 표적입니다. 그(것)들은 본질적으로 혈류량으로 단백질을 분비할 수 있고 쉽게 접근할 수 있습니다, 그(것)들을 유전자 전송에 의하여 대체 호르몬 생산 또는 예방 접종을 위한 잠재적으로 우수한 조직 사이트를 만들기. 유전자 전달을 위한 건의한 방법은 타액 덕트를 통해 경피 주입 및 역행 주입을 포함합니다. 우리는 비 인간 영장류에서 역행 타액 선동맥 주입 (RSGI)을 수행하는 방법을 보여줍니다. 우리는 parotid 유두의 식별, 기본 치과 도구를 사용하여 스텐슨의 덕트를 수착하고 밀봉하는 외상성 방법, 폴리에틸렌 튜브 및 시아노아크라이레이트, 적절한 주입 속도를 포함한 중요한 해부학 적 랜드 마크를 설명합니다. 이것은 전달의 가장 외상적인 방법이지만, 방법은 여전히 전달 될 수있는 부피 (<0.5 mL)와 덕트와 동맥에 외상의 잠재력에 의해 제한됩니다. 당사는 불소시경검사를 사용하여 인퓨아이 선으로 완전히 전달될 수 있음을 입증하고, 면역히스토케로 전달된 유전자의 전형 및 발현을 더욱 입증한다.

성공적인 절차, 변환 및 전사 도 1은 후방 우수한 뺨에2nd 어금니에 인접한 파로티드 유두를 나타낸다. 이미지는 또한 입 중괄호의 올바른 배치, 하드 입맛에 하나의 고무 끝 및 입시 종개에 다른 고무 끝을 보여줍니다. 도 2는 PET10의 2cm 마크에서 파로티드 유두의 성공적인 캔레이션 후 촬영한 이미지를 나타낸다. 도 3은 스텐센덕트를 통해 파로티드 선으로 용액의 분기를 보여주는 방사성 주입의 순간에 형광시경 이미지를 나타낸다. 이 불소 이미지는 내포제의 해부학 및 분포를 보여주는 유일한 의도에 대해 수행되었다. 벡터 전달을 위해 이 절차를 수행할 때불소 검사가 필요하지 않습니다. 도 4는 조직병리학에 적색으로 된 EGFP 면역염색을 나타낸다. 덕트 및 아시...

타액선은 유전자 치료를 위한 조직 표적 사이트로서, 특히 유전자 전달에 의한 예방 접종 영역에서 제안되었다. 역행 마루드 주입을 활용한 비인간 영장류 모델에서 유전자 전달을 시연합니다.

Salivary glands are an attractive tissue target for gene therapy with promising results already leading to human trials. They are inherently capable of ...

이 프로토콜은 역행 타액 선 주입의 절차를 자세히 보여주기 때문에 중요합니다. 절차는 벡터화 된 면역 프로피시스 또는 유전자 치료와 같은 다양한 의학적 이유로 사용될 수 있습니다. 이 기술은 쉽게 배우고 재현할 수 있습니다.저자는 구강 외과 의사가 아니거나 그러한 배경을 가지고 있음에도 불구하고 여러 번이 절차를 성공적으로 수행 할 수있었습니다. 마취 후 배율에 대한 치과 형근을 사용하고 파로티드 유두 또는 상부 두 번째 어금니에 인접한 후방 뺨에 스텐슨의 덕트의 개방을 식별합니다. 원추형 확장기의 점을 유두의 중앙이나 개구부로 배치하여 파로티드 유두를 부드럽게 팽창시키고 약 20~30초 동안 확장기를 앞뒤로 회전시합니다.다음으로, 핀셋을 사용하여 실외 끝에서 약 0.5센티미터에서 주사기를 함유하는 분리체에 부착된 폴리에틸렌 튜브의 표시끝을 잡고 튜브의 끝을 부드럽게 팽창유두리로 삽입한다. 튜브가 미끄러지는 데 도움이 되는 작은 회전 동작으로 튜브를 부드럽게 전진시키고, 핀셋은 0.5센티미터의 근접계를 이전 그립으로 재조정합니다. 2센티미터 표시가 파로티드 유두에 도달할 때까지 이 과정을 반복합니다.다음으로, 파로티드 유두를 밀봉하고 구강 내 의 폐포물의 유출을 줄이려면 유두 주위와 삽입 된 튜브에 뺨에 시아노아크릴레이트를 적용하십시오. 시아노아크릴레이트건조가 끝나면 분당 100 마이크로리터의 속도로 5분 이상 비핵을 천천히 주입하십시오. 주입이 완료된 후 튜브를 최소 5분 동안 제자리에 두고 덕트를 밀봉하고 비소가 파로티드 선에 남을 수 있도록 합니다.마지막으로, 부드러운 견인로 튜브를 제거하고 시아노아크라이레이트는 튜브와 함께 자유롭게 당겨집니다. 무선 콘트라스트 주입을 이용한 불소 검사는 스텐슨의 덕트를 통해 그리고 parotid 선으로 용액의 분기를 시연했습니다. parotid 선의 화학적 분석으로서 면역은 두 세포 유형모두에서 성공적인 트랜스듀션 및 전사를 나타내는 덕트 및 아시나르 세포 모두에서 EGFP에 대한 양성 얼룩을 드러냈다.이 절차의 주요 과제는 아마도 매우 부드럽고 천천히 수행해야 하는 유두에 폴리에틸렌 튜브를 도입하는 것입니다.

retrograde-parotid-gland-infusion-through-stensen-s-duct-non-human

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 cannulation을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 본 실험은 trypan 푸른 솔루션은이 기법을 효과적으로 타겟 선에 혼합을 제공하는 방법을 보여줍니다하고, 침샘의 재생을위한 잠재적인 약물 임상 / 세포 치료 등이 새로운 접근 방법의 신뢰성을 제안하는 다이로 사용됩니다.

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 Cannulation

출처: Tadokoro, T., et al. 성인 마우스에서 연하 아데노 관련 바이러스 9(AAV9) 벡터 전달. J. Vis. 경험. (2017년)이 비디오는 마우스의 척수에 유전자 전달을 위한 연막하 주입 기술을 보여줍니다. 이 절차에는 경막을 노출시키고, 연막을 천공하고, 형광 단백질 발현 유전자를 운반하는 재조합 아데노 관련 바이러스(rAAV)를 연막하 공간에 주입하는 과정이 포함됩니다. 주사 및 회복 후 바이러스는 척수 세포의 유전자 발현을 촉진하여 표적 유전자 발현을 연구할 수 있습니다.

유전자 발현을 평가하기 위한 마우스 척수에서 연막하 유전자 전달

이 연구는 스텐트의 코팅이 없는 금속 표면에 아데노바이러스 유전자 벡터의 가역적 부착을 보고하고 메쉬 디스크를 모델링합니다. 벡터 고정화에 사용되는 cross-linker의 가수분해에 따라 transduction-competent 바이러스 입자가 지속적으로 방출되면 혈관 세포와 스텐트 동맥에서 내구성 있는 부위 특이적 transgene 발현이 발생합니다.

가수 분해 크로스 링커를 통해 아데노 바이러스 벡터 닿는를 사용하여 금속 스텐​​트 표면에서 혈관 유전자 전송

두경부 방사선 요법의 주요 부작용인 타액선 기능 저하로 환자의 삶의 질을 떨어뜨립니다. 동물 모델에서 새로운 치료법의 효능을 입증하는 것은 임상 전환 전에 전제 조건입니다. 이 프로토콜은 쥐의 턱밑샘에 대한 후향 투여 및 국소 방사선 조사에 대해 설명합니다.

타액 기능 저하의 쥐 모델에서 Retroductal 턱밑 글 랜드 점적 및 현지화 된 분획 조사

이 방법은 토끼에 개재 정 맥 이식의 배치, 이식, 변환 및 내구성 transgene 식의 성과 설명합니다. 이로써 transgenes 이식할된 혈관에 단백질 제품의 생리 및 병 적인 역할 및 정 맥 이식 질병에 대 한 유전자 치료의 테스트의 조사.

일반적인 경 동맥 중재 이식 정 맥 경에서에서 튼튼한 Transgene 식의 토끼 모델

Submandibular 동맥을 지역 약물 전달 및 새로운 치료제의 개발에 대 한 이해 침 샘 생물학에서입니다. 선물이 배달 정확성과 실험의 재현성을 향상 시키는 업데이트 및 상세한 retroductal 주입 프로토콜. 여기에 소개 하는 응용 프로그램은 고분자 나노 입자의 배달.

Retroductal 나노 Murine Submandibular 동맥에 주입

여기에서, 우리는 마카크 두뇌에 있는 큰 피질 지역에 걸쳐 광유전학적 표현을 달성하기 위한 효율적이고 간단한 접근으로 피질로 바이러스 벡터의 자기 공명 (MR) 유도된 대류 강화한 납품 (CED)를 보여줍니다.

대류 온라인 MRI 이미지의 지도하에 Rhesus Macaque의 피질에 광유전학 아데노 관련 바이러스 벡터의 향상된 납품

현재 시행 된 바와 같이, 인간이 아닌 영장류의 광유전학은 바이러스 벡터를 뇌에 주입해야합니다. 최적의 주입 방법은 신뢰할 수 있어야 하며 많은 응용 분야에서 사후 조직학에서 쉽고 명확하게 식별되는 임의의 깊이의 개별 부위를 표적으로 삼을 수 있어야 합니다. 이러한 특성을 갖는 주입 방법이 제시된다.

마취 및 깨어 있는 행동하는 비인간 영장류 뇌에서 광유전학을 위한 AAV 벡터 주사

어린 쥐의 요추 수조에 주사를 놓는 수술 절차가 설명되어 있습니다. 이 접근법은 유전자 치료 벡터의 척수강내 전달에 사용되어 왔지만, 이 접근법은 세포 및 약물을 포함한 다양한 치료제에 사용될 수 있을 것으로 예상됩니다.

Intrathecal vector delivery in juvenile rats via lumbar cistern injection(요추 수조 주입을 통한 어린 쥐의 척수강내 벡터 전달)

이 기사는 산후, 청소년 및 런트 성인 마우스에 대해 최대 총 150μL의 후불동 주사에 대한 프로토콜과 동반 비디오를 제공합니다. 이 시술은 꼬리 정맥 주입이 불가능한 작은 마우스(15g)의 주사에 특히 적합합니다.

Retrobulbar Sinus 주사에 의한 출생 후, 청소년 및 Runted 성인 마우스에 대한 체계적인 치료

이 보고서는 마우스 신장으로의 효과적이고 안전한 유전자 전달을 위해 신우 를 통한 AAV 벡터의 국소 주입 방법을 자세히 설명합니다.

아데노 관련 바이러스 벡터의 느린 역행 신골 주사 를 통한 마우스 신장에 효과적이고 안전한 유전자 전달

배우세요 비인간 영장류에서 스텐센의 덕트를 통한 역행 파로티드 글랜드 주입 기법으로 유전자 전달 및 백신 접종을 위한 재현 가능한 방법을 익히세요. 이 기술은 수술 경험이 없는 연구자도 쉽게 수행할 수 있습니다.

벡터 유전자 전달을 위한 비인간 영장류에서 스텐센의 덕트를 통한 역행 파로티드 글랜드 주입

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