Single Molecule Fluorescence Energy Transfer Study of Ribosome Protein Synthesis

Yuhong Wang

doi:10.3791/62664

JoVE Journal
Biochemistry

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JoVE Journal Biochemistry

Single Molecule Fluorescence Energy Transfer Study of Ribosome Protein Synthesis

리보솜 단백질 합성의 단일 분자 형광 에너지 전송 연구

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08:07 min

July 6, 2021

DOI: 10.3791/62664-v

Yuhong Wang¹

¹Department of Biology and Biochemistry,University of Houston

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

단일 분자 형광 에너지 전달은 리보소말 단백질 합성 시 tRNA 역학을 추적하는 방법입니다. 개별 리보솜을 추적함으로써, 불동성 집단 집단이 식별되어 메커니즘에 빛을 비추게 됩니다. 이 방법은 다른 많은 복잡한 생물 시스템에서 동적 기능 관계를 밝히기 위해 일반적으로 생물학적 형성 변화를 추적하는 데 사용할 수 있습니다. 단일 분자 방법은 평균 효과로 인해 기존의 앙상블 방법에 의해 접근할 수 없는 비비율 제한 단계 및 낮은 인구밀도키 중간체를 관찰할 수 있다.

단일 분자 FRET는 리보소말 단백질 생합성 공정에 적합한 척도인 나노미터 거리에서 일어나는 역학을 포착할 수 있습니다. 리보솜은 본질적으로 불균일한 여러 요인과 구성 요소를 알로스터디 조정하여 작동합니다. 단일 분자 방법은 이러한 불합종 평균 효과에 의해 제한되지 않고 각 리보솜을 추적할 수 있다.

이 방법은 항생제가 약물 내성 세균 성 감염을 향해 새로운 약을 개발하는 리보솜 기능을 억제하는 방법을 공개합니다. 시작 EFTU, NOG 및 PAG 믹스를 섭씨 37도에서 2분간 1대2로 혼합하여 PRE를 준비한다. 인큐베이션 후, 1.1 대구 쿠션 초원심분리를 100회, 000배 G.Prepare를 사용하여 PRE를 정화하여 개시 EFTU, WG 및 PHE 믹스를 섭씨 37도에서 1대 2-2의 비율로 혼합하여 10분간 준비한다.

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