Name: 간 재생 전략으로 3차원 콜라겐 매트릭스 스캐폴드 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-29T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: 학습하세요 간 재생을 위한 3차원 콜라겐 매트릭스 스캐폴드 이식법을 쥐 모델에서. 이 조직공학 기법은 섬유증 간 질환의 새로운 치료 가능성을 보여주며 간 기능을 손상시키지 않습니다.

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저자는 실험 의학 단위의 실험실 동물 시설의 직원, 기술 및 외과 지원을위한 간호사 캐롤라이나 Baños G., 마이크로 사진지원을 위한 마르코 E. Gudiño Z. 및 간 조직학 지원을 위한 에릭 아포에게 감사를 표하고자 합니다. 국가위원회는과학기술(CONACyT),교부금 수 SALUD-2016-272579 및 PAPIIT-UNAM TA200515에 대한 연구를 지원했습니다.

본 연구는 유니버시다드 나시오날 오토노마 데 멕시코(UNAM)와 멕시코 병원 총독(CI/314/15)의 윤리위원회(DI/115/2015)의 윤리위원회에 의해 승인되었습니다. 이 기관은 실험실 동물의 생산, 관리 및 사용에 대한 모든 기술 사양을 충족하며 국가 법 (NOM-062-ZOO-1999)에 의해 합법적으로 인증됩니다. 이 연구를 위해 150-250g(6-8주 된) 수컷 위스타 쥐는 UNAM 의과 대학의 실험실 동물 시설에서 수득되었다.
1. 소 대퇴골에서 콜라겐 매트릭스 비계 를 얻기
<ol><li>멕시코의 보건 및 농업 당국에 의해 인증 된 도살장에서 소 대퇴골에서 condyle을 가져옵니다.<ol>
<li>정결 지방, 근육 및 연골을 외과 기기로 조심스럽게 해부합니다. 콘딜 조각을 톱 커터를 사용하여 3cm x3cm 조각으로 자르고 수건으로 지방과 혈액을 청소하십시오. 콘딜 조각을 물로 씻으시다.</li>
		<li>30분 동안 애니오닉 세제(10g/L)의 1L로 조각을 끓입니다(92°C). 콘딜 조각을 두 번 세척하여 음이온 세제의 잔재를 제거하십시오.</li>
		<li>필터 용지(0.5mm)를 사용하여 콘딜 조각을 3시간 동안 건조시다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>1.1단계(도1A)에언급된 조각으로부터 0.5cm의 삼각형(1cm x1cm x1cm)의 CMS를 준비한다.<ol>
<li>일정한 동요로 10 분 동안 0.5 M HCl의 100 mL에서 조각을 탈염. HCl을 제거합니다. 참고: 수산화나트륨(10M)으로 HCl을 중화한다.</li>
		<li>조각조각을 증류수 100mL, 매번 15분씩 일정한 동요로 세 번 헹구는 다. 1 시간 동안 필터 용지 (0.5mm)로 CMS를 건조시다.</li>
		<li>스테레오현미경(15)을 사용하여 CMS(모공 의 크기, 모공 형성 및 다공성 상호 연결)의 구조적 특성을 분석한다(도1B).</li>
		<li>CMS trabeculae(도 1C)의거친 표면을 분석하기 위해 스캐닝 전자현미경(16)을 사용합니다.</li>
		<li>CMS(도1D)의기계적 변화(가소성 및 유연성)를 평가하기 위해 해부 계측기를 사용하여 블렌딩 및 스트레칭을 한다.</li>
		<li>CMS를 살균 파우치에 넣고 과산화수소 플라즈마로 38분 간 살균합니다. 멸균 CMS를 원래 팩에 20-25°C의 건조 부위에 보관하여 사용까지 보관하십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 수술 부위의 준비 및 동물 모델의 취급 및 준비
<ol><li>수술 부위, 작업성, 미세 수술 현미경 및 시트를 2% 클로르헨시딘 용액으로 소독합니다. 열 살균을 통해 모든 수술 기구, 수술 용 스폰지, 면봉 및 일회용 수술 커튼을 살균 (121 ° C / 30 분 / 100 kPa)</li>
	<li>개쥐(n=5)를 그룹당 5마리의 쥐로 3개 그룹으로 할당합니다: 1. sham, 2. hepatectomy 및 3. hepatectomy 플러스 CMS, 그리고 일 3, 14 및 21 일에 모든 그룹을 따릅니다.<ol>
<li>케타민 (35 mg/kg) 및 자일라진 (2.5 mg/kg) 뒷사지에 근육질 관리. 참고: 진정제 기간은 일반적으로 30-40분 동안 지속됩니다.</li>
		<li>수술용 비누와 양날 블레이드를 사용하여 복부 피부(5cm x 2cm)를 면도하고, 국소 10% 포비도요오드 용액을3라운드 17번으로사용하여 피부를 소독한다.</li>
		<li>투과성 기도를 유지하기 위해 목을 과도하게 확장한 데큐비투스 등쪽 위치에 따뜻한 접시에 동물을 놓습니다(그림2).</li>
		<li>호흡 패턴과 사지의 철수 반사의 손실을 통해 마취의 깊이를 평가합니다.</li>
		<li>면도된 피부 주위에 일회용 수술 커튼을 놓고 메스가 있는 알부스 라인에 절개(2.5cm)를 만들어 시포이드 공정을 기준점으로 사용한다. 출혈을 방지하기 위해 복부 벽 혈관을 피하십시오.</li>
		<li>복부 리트랙터를 제자리에 놓고 복강을 관찰하십시오. 해부 집게를 사용하여 왼쪽 간 엽을 추출하여 금속 판에 놓습니다(도3A). 참고 : 가짜 그룹에서, 단지 왼쪽 간 엽을 추출한 다음 복강에 간을 반환합니다. 3-0 나일론 봉합사복벽과 피부를 봉합합니다.</li>
		<li>CMS가 없는 실험 군에서는 메스 블레이드와 멸균 메스 블레이드(#15)를 사용하여 두 컷으로 간 절제술(약 40%)을 수행합니다. 삼각형 금속 템플릿(1cm x 1cm x 1cm)을 사용하여 간절제술(도 3B)을수행합니다.</li>
		<li>간 출혈을 방지하기 위해 간 가장자리에 면봉으로 수술 압축을 5 분 동안 유지하십시오.</li>
		<li>수술 전에 20 분 동안 멸균 식염수 용액으로 CMS를 수분하십시오. 간 조직과 CMS 사이에 4개의 바늘 봉합사를 사용하여 간 절제술 부위에 CMS를 이식하여 생체 재료의 변위를 방지합니다. 7-0 흡수성 폴리프로필렌 봉합사(도3C)를사용하십시오. 참고: 두 번째 수술에서 봉합사를 제거하지 마십시오. 봉합사는 CMS 이식 부위를 식별하는 참조로 사용할 수 있습니다.</li>
		<li>간을 복강으로 되돌리고 3-0 나일론 봉합사로 복벽과 피부를 봉합합니다. 수술요오드에 젖은 스폰지로 수술 절개를 두 라운드로 청소하십시오. 동물의 활력 징후를 관찰하고 모니터링합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 수술 후 치료
<ol><li>메글루민 플루신을 관리 (2.5 mg/kg) 뒷다리에 근육질. 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받은 진통을 관리한다.</li>
	<li>마취 복구를 위해, 온도 조절 (23 °C)이있는 소음없는 지역에 실험실 동물 침구가있는 개별 폴리 카보네이트 상자에 동물을 놓습니다.</li>
	<li>동물의 회복을 관찰하고 2 시간 동안 물과 음식 소비를 모니터링하십시오. 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받아 수술 후 동물을 모니터링합니다.</li>
</ol>4. 혈청에서 간 기능의 평가
<ol><li>수술 전 마취동물의 측면 꼬리 정맥(500 μL)과 평가일 3, 14 및 21에서 혈액 샘플(500 μL)을 수집한다.</li>
	<li>실온에서 850 × g/10분에서 혈액 샘플을 원심분리합니다(23°C); 세럼을 분리하고 사용할 때까지 -80 °C에 보관하십시오.</li>
	<li>간 기능 테스트의 패널수행: 혈청 알부민 (ALB), 알칼리 인스파타제 (ALP), 알라닌 아미노 트랜스퍼라제 (ALT), 아스파르타테 아미노 트랜스퍼라제 (AST), 총 빌리루빈 (TB), 직접 빌리루빈 (DB)(표 1).</li>
</ol>5. 안락사 및 조직 관리
<ol><li>전술한 프로토콜을 따라 각 평가(일 3, 14 및 21일)에 대해 동물을 마취한다.</li>
	<li>기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 통해 안락사.</li>
	<li>복강의 장기를 관찰하고 CMS의 유무에 관계없이 샴과 실험군의 간절제술 영역의 사진을 찍을 수 있도록 메스와 함께 알부 라인에 절개(5-6cm)를 수행한다.</li>
	<li>간 샘플 (2cm x 2cm; 0.40-0.45 g) 모든 연구 그룹 동물에서 하 고 후속 조직 평가를 위한 24 시간 대 한 4% 포름알데히드 용액에 배치.</li>
</ol>6. 조직학적 분석
<ol><li>간 조직을 4% 포름알데히드로 보존하고 일련의 알코올 농도(60%, 70%, 80%, 90%, 100%)를 사용하여 조직을 탈수합니다. 자일렌 (1h)에 배치하고 파라핀16에내장 .</li>
	<li>8개의 슬라이드를 준비하기 위해 마이크로토메로 파라핀 블록을 4 μm 두께섹션으로 잘라냅니다.</li>
	<li>H&E와 마슨의 삼색 염색16을수행합니다.</li>
	<li>CMS의 유무에 관계없이 간의 대표적인 영역을 선택하기 위해 가벼운 현미경으로 얼룩진 부분을 관찰하십시오. 4배, 10배, 40배율로 포토마이크로그래프를 얻고 적절한소프트웨어(18)를 사용하여 이미지를 처리합니다(재료표참조).</li>
</ol>

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</ol>

저자는 경쟁적인 재정적 이익이 없다고 선언합니다. 벤자민 레온-만실라는 미타 드 닥터라도 엔 시엔시아스 바이오메디카, 유니버시다드 나시오날 아우토노마 데 멕시코(UNAM)의 박사 과정 학생으로, DGAPA-UNAM 펠로우십을 받았다.

장기 이식은 간 섬유증 또는 간경변 환자에서 치료의 주류입니다. 몇몇 환자는 이 절차에서 유익합니다, 대기자 명단에 있는 환자를 위한 치료 대안을 제공하는 것을 필요하게 하는. 조직 공학은 재생 잠재력2,4,13을가진 발판 및 세포를 사용하는 유망한 전략입니다. 간 부분의 제거는 이 혈관화된 기관의 경질 출혈 때문에 이 절차에서 중요한 단계입니다. 따라서 수술용 침대의 혈안이 이러한 합병증을 방지하기 위해 수행해야 합니다. 더욱이, 조직-생체 물질 상호 작용을 보장하기 위해 필수적인 CMS에 간 조직의 결합은 봉합사의 사용을 통해 촉진됩니다. 그러나, 그것은 간 찢 고 나중에 출혈을 일으키는 것을 피하기 위해 신중 하 게 수행 해야 합니다.
본 원에 제안된 생체 물질은 소 기원(xenogenic)이지만, 쥐에 생체...

간은 항상성 및 단백질 생산1을유지하는 데 관여하는 가장 중요한 기관 중 하나입니다. 불행히도, 간 질환은 전 세계적으로 사망의 주요 원인입니다. 간경변과 간세포 암종을 포함하는 간 손상의 고급 단계에서 간 이식은 임상적으로 권장되는 절차입니다. 그러나, 기증자의 희소성과 성공적인 이식의 낮은 비율로 인해 조직 공학 (TE) 및 재생 의학 (RM)에 있는 새로운 기술이2,3개발되었습니다.
TE는 염증, 섬유성 및 부종 장기 및 조직의 복원을 촉진하기 위해 줄기 세포, 비계 및 성장 인자4의 사용을포함1,5,6. 스캐폴드에 사용되는 생체 재료는 기본 ECM을 모방하여 유도 된 세포 리모델링7에대한 물리적, 화학적 및 생물학적 단서를 제공합니다. 콜라겐은 진피, 힘줄, 장 및 구심8,9로부터얻은 가장 풍부한 단백질 중 하나입니다. 더욱이, 콜라겐은 바이오프린팅 또는 전기방사(10,11)을통해 2차원 및 3차원 스캐폴드를 생성하는 바이오 폴리머로서 수득될 수 있다. 이 그룹은 간 조직의 재생을 위한 뼈 근원에서 콜라겐의 사용을 보고하는 첫번째입니다. 또 다른 연구는 소 콜라겐에서 합성 된 비계의 사용을보고, 이는 피부에서 얻은, 균질적이고 밀접하게 위치 모공을, 그들 사이의 통신없이12.
탈세포화는 네이티브 ECM을 보존하여 줄기 세포 전위13,14를가진 세포의 후속 편입을 허용한다. 그러나, 이 절차는 마우스, 쥐, 토끼, 돼지, 양, 가축 및 말3,14에서간, 심장, 신장, 소장 및 오줌 방광에 있는 실험 단계에 아직도 있습니다. 현재, 절제된 간 질량 량은 동물 간 절제술 모델 중 어느 모델에서도 대체되지 않는다. 그러나, 세포 증식 및 혈관 신생을 가능하게 하는 추가 지원 또는 네트워크(생체 재료)의 사용은 간 완구기능의 신속한 복원을 위해 필수적일 수 있었다. 따라서, 스캐폴드는 만성 간 질환에서 조직을 재생하거나 복구하는 대체 접근법으로 사용될 수 있으며, 차례로 간 이식의 기증 및 임상 합병증으로 인한 제한을 제거합니다.

<table><tbody><tr><td>음이온성 세제</td><td>Alconox</td><td>Z273228</td><td></td></tr><tr><td>생검 카세트</td><td>Leica</td><td>3802453</td><td></td></tr><tr><td>Camera DMX</td><td>Nikon</td><td>DXM1200F</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>클로르헥시딘 글루코네이트 4%</td><td>BD</td><td>372412</td><td></td></tr><tr><td>커버 안경 25 mm x 40 mm</td><td>Corning</td><td>2980-224</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>200-M</td><td>CAS 17372-87-1</td></tr><tr><td>에틸 알코올, 순수</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459836</td><td>CAS 64-17-5</td></tr><tr><td>Flunixine meglumide</td><td>MSD</td><td>Q-0273-035</td><td></td></tr><tr><td>유리 슬라이드 75 mm x 25 mm</td><td>Corning</td><td>101081022</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Merck</td><td>H9627</td><td>CAS 571-28-2</td></tr><tr><td>염산 37%</td><td>Merck</td><td>339253</td><td>CAS 7647-01-0</td></tr><tr><td>케타민</td><td>Pisa agropecuaria</td><td>Q-7833-028</td><td></td></tr><tr><td>광학 현미경</td><td>Nikon</td><td>Microphoto-FXA</td><td></td></tr><tr><td>Microsurgery 실체 현미경</td><td>Zeiss</td><td>OPMI F170</td><td></td></tr><tr><td>Microtainer 노란색 케이프</td><td>Beckton Dickinson</td><td>365967</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica</td><td>RM2125</td><td></td></tr><tr><td>모델 동물: Wistar 쥐</td><td>Universidad Nacional Aut&oacute; M&eacute; xico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nylon 3-0 (Dermalon)</td><td>Covidien</td><td>1750-41</td><td></td></tr><tr><td>폴리프로필렌 7-0</td><td>Atramat</td><td>SE867/2-60</td><td></td></tr><tr><td>포비돈-요오드10% 피부 용액</td><td>Diafra SA de CV</td><td>1.37E+86</td><td></td></tr><tr><td>스캐닝 전자 현미경</td><td>Zeiss</td><td>DSM-950</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨, 펠릿</td><td>J. T. Baker</td><td>3722-01</td><td>CAS 1310-73-2</td></tr><tr><td>소프트웨어 ACT-1</td><td>Nikon</td><td>Ver 2.70</td><td></td></tr><tr><td>실체 현미경</td><td>Leica</td><td>EZ4Stereo 8X-35X</td><td></td></tr><tr><td>Sterrad 100S</td><td>Johnson and Johnson</td><td>99970</td><td></td></tr><tr><td>Surgipath paraplast</td><td>Leica</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td>바늘 (27G x 13mm)이있는 1 mL의 SynringeSensiMedical</td><td></td> <td>LAN-078-077</td><td></td></tr><tr><td>조직 처리기 ( Histokinette)</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek TEC 5 (Tissue embedder)</td><td>Sakura Finetek USA</td><td>5229</td><td></td></tr><tr><td>Trichrome stain kit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT15</td><td></td></tr><tr><td>Unicell DxC600 Analyzer</td><td>Beckman Coulter</td><td>BC 200-10</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Pisa agropecuaria</td><td>Q-7833-099</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>534056</td><td>CAS 1330-20-7</td></tr></tbody></table>년

간 재생 전략으로 3차원 콜라겐 매트릭스 스캐폴드 이식

Three-Dimensional Collagen Matrix Scaffold Implantation as a Liver Regeneration Strategy

간 질환은 전 세계적으로 사망의 주요 원인입니다. 과도한 알콜 소비, 고지방 규정식 및 C형 간염 바이러스 감염은 섬유증, 간경변 및/또는 간세포 암종을 승진시합니다. 간 이식은 고급 질병 단계에서 환자의 수명을 개선하고 연장하기 위해 임상적으로 권장되는 절차입니다. 그러나 이식의 10%만이 장기 가용성, 외과 전 및 수술 후 수술 및 높은 비용과 직접 상관 관계가 있습니다. 세포 외 매트릭스 (ECM) 비계조직 복원을위한 대안으로 등장했다. 생체 적합성 및 접목 수용은 이러한 생체 재료의 주요 유익한 특성입니다. 간 의 크기와 정확한 기능을 복원하는 능력은 간 간 절제술 모델에서 평가되었지만, 스캐폴드 또는 멸종 된 간 질량의 부피를 대체하기 위한 일종의 지원의 사용은 평가되지 않았습니다.
부분 적인 간 절제술은 소 콘딜로부터 콜라겐 매트릭스 스캐폴드 (CMS)의 이노 삽입을 가진 쥐 간에서 수행되었다. 좌간 엽 조직을 제거 (약 40%), CMS의 동등한 비율은 수술로 이식되었다. 간 기능 테스트는 외과 수술 전후에 평가되었다. 3일, 14일, 21일 후, 동물들은 안락사되었고, 거시적 및 점학적 평가를 수행했다. 3일과 14일에, 지방 조직은 21일째에 혈관 신형성 및 CMS 재흡수와 같이 거부 또는 감염의 임상적인 증거가 없는 CMS를 둘러싸고 관찰되었습니다. CMS에 인접한 세포의 사소한 염증 과정 및 이동의 히스토릭 증거가 있었다, 헤마톡시린과 eosin으로 관찰 (H&E) 및 마슨의 삼색 얼룩. CMS는 간 조직에서 잘 수행 하 고 조직 재생 및 만성 간 질환에서 복구를 공부 하기 위한 유용한 대안 이 될 수 있습니다.

뼈 탈염은 모공의 원래 모양이나 상호 연결을 변경하지 않고 CMS의 기계적 특성에 영향을미칩니다. CMS는 임의의 형상을 가질 수 있으며, 따라서 선택된 장기 또는조직(19)의크기 및 형상으로 조절될 수 있다. 본 프로토콜에서는 삼각형 CMS(도1A-D)를사용하였다. 쥐 모델은 간에서 CMS 제노임플란트의 재생 능력을 평가하기 위해 사용되었다. 간은 경화되고 연약한 기관이더라도, 이 프로토콜에서 수행된 외과 적 절차는 CMS가 제자리에 남아 있는지 확인했습니다(그림 2 및 도 3A-C). 왼쪽 엽의 40%의 부분 적인 간 절제술은 임플란트와 토착 p...

간 질환은 섬유증이나 간경변증을 촉진하는 많은 원인에 의해 유도됩니다. 이식은 건강을 회복하기위한 유일한 옵션입니다. 그러나 이식 가능한 장기의 희소성을 감안할 때 대안을 모색해야합니다. 우리의 연구는 동물 모델에서 간 조직에 콜라겐 비계의 이식을 제안한다.

Liver diseases are the leading cause of death worldwide. Excessive alcohol consumption, a high-fat diet, and hepatitis C virus infection promote fibrosis, ...

이 방법은 간 재생을 촉진하기 위해 간에서 비계로 콜라겐 매트릭스의 임플란트를 배치하는 것을 포함한다. 이 이식 방법은 절제된 조직의 모양과 풍선의 복원을 탐구하는 전략가의 문을 열어 마취, 수술 기간 및 회복 시간을 감소시킵니다. 이 방법은 간 섬유증의 모형을 관련시키는 재생을 승진시키기 위하여 이용될 수 있습니다, 뿐만 아니라 그밖 포유류 종.이 방법은 부상당한 조직의 복원을 촉진하기 위해 조직 공학 및 재생 의학을 기반으로합니다. 수술 부위 작업 테이블, 미세 수술 현미경 및 시트를 2 % 클로르헨시딘 용액으로 소독 한 다음 멸균 식염수 용액의 소 콘딜레에서 얻은 콜라겐 매트릭스 스캐폴드를 20 분 동안 수화하십시오. 다음으로, 수술 용 비누와 양날 블레이드를 사용하여 마취 된 6 - 8 주 된 남성 Wistar 쥐의 복부 피부를 면도 한 다음 10 % povidone 요오드 용액을 사용하여 피부를 세 번 소독합니다.투과성 기도를 유지하기 위해 목을 과도하게 확장한 데큐비투스 등쪽 위치에 동물을 따뜻한 접시에 놓습니다. 호흡기 패턴과 사지의 철수 반사손실을 통해 마취의 깊이를 평가한다. 그런 다음 면도된 피부 주위에 일회용 수술 커튼을 놓고 xiphoid 과정을 기준점으로 사용하여, 해부 집게로 알피스 라인에 2.5 센티미터 절개를하고 출혈을 방지하기 위해 복부 벽 혈관을 피하기 위해주의를 기울입니다.복부 반굴을 배치 한 후, 복강을 관찰하십시오. 해부 집게를 사용하여 왼쪽 간 엽을 추출하여 금속 판에 놓습니다. 멸균을 하나씩 1센티미터 삼각형 금속 템플릿을 사용하여 간 절제술을 수행합니다.간 출혈을 방지하기 위해 간 가장자리에 면봉으로 수술 압축을 5 분 동안 유지하십시오. 다음으로, 7-O 비흡수성 폴리프로필렌 봉합사를 사용하여 간 조직과 스캐폴드 사이에 4개의 바늘로 간 절제술 부위에 수화 콜라겐 매트릭스 스캐폴드를 이식하여 생체 물질의 변위를 방지한다. 간을 복강으로 되돌리고 3-O 나일론 봉합사로 복벽과 피부를 봉합합니다.수술요오드에 젖은 스폰지로 수술 절개를 두 번 청소하고 동물의 활력 징후를 모니터링하십시오. 그런 다음 동물을 측면 디큐비투스 위치에 놓습니다. 진통제를 투여한 후 온도 조절이 있는 소음 이없는 공간에 실험실 동물 침구가 있는 개별 폴리카보네이트 상자에 동물을 배치합니다.마취에서 회복을 관찰하고 2 시간 동안 물과 음식 소비를 모니터링하십시오. 3일, 14일 및 21일에서 콜라겐 매트릭스 스캐폴드를 유한하고 없이 샴그룹과 실험군 간의 간 기능차이는 없었으며, 이는 콜라겐 매트릭스 스캐폴드가 간 기능을 방해하지 않는다는 것을 나타낸다. 3일째에 대한 조직학적 분석은 간에서 콜라겐 매트릭스 스캐폴드의 존재가 이물질 반응을 촉진하지 않았으며 느슨한 결합 조직의 눈에 띄는 존재가 관찰된다는 것을 보여준다.14일과 21일에, 느슨한 결합 조직은 간세포에 둘러싸인 콜라겐 매트릭스 스캐폴드 trabeculae로 더 풍부하여 간세포가 콜라겐 매트릭스 스캐폴드로 이동했다는 것을 시사합니다. 혈관에 의해 관개된 간구세포의 영역을 볼 수 있고 콜라겐 매트릭스 스캐폴드 trabeculae에 포동하는 간세포는 때때로 느슨한 결합 조직에 의해 포위된다. 간 절제술을 수행하는 동안, 감염을 방지하고 간출혈을 방지하기 위해 나중에 압축을 적용하기 위해 무균 기술을 사용합니다.또한 콜라겐 매트릭스 스캐폴드의 이식에 7-O 봉합사를 사용하여 찢어지는 것을 방지하십시오. 섬유성 동물 모델에서 콜라겐 매트릭스 스캐폴드를 이식한 후 간 재생을 위한 비노겐성 이식의 장점을 평가할 수 있다. 간 박베질량을 대체하기 위해 콜라겐 매트릭스 스캐폴드를 사용하는 것은 지금까지 평가되지 않았다.이 유전 물질은 만성 간 질환 의 분야에서 또 다른 치료 옵션으로 길을 포장합니다.

three-dimensional-collagen-matrix-scaffold-implantation-as-liver

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

재관류의 decellularization는 기관의 세포외 기질 구성과 마이크로 아키텍처를 유지 전체 간 공사장 공중 발판을 생산하는 새로운 기술입니다. 여기에, hepatocytes과 재관류의 decellularization 이후 repopulation를 사용하여 전체 오르간 공사장 공중 발판을 준비하는 방법이 설명되어 있습니다. 기능 및 transplantable 간 이식이 기술을 사용하여 생성할 수 있습니다.

전체 간은의 Decellularization 및 Recellularization

복잡한 조직의 고도로 조직화된 구조를 만들려면 여러 재료 및 세포 유형을 통합된 복합체로 조립해야 합니다.  이 조합 설계는 강력한 섬유질 기질 염기를 포함하는 두 가지 별개의 생물학적으로 파생된 물질과 새로운 혈관 형성을 향상시키기 위한 내피 세포와 장기 특이적 층상 세포 시트를 통합합니다.

조직 공학 : 계층화 된 세포 시트의 전달을위한 다세포 3D 비계 건설

이 연구에서는 콜라겐, 평활근 세포 및 내피 세포를 직접 배양하여 살아있는 혈관 조직을 신속하게 만드는 기술을 제시합니다. 또한 엔지니어링된 혈관 조직의 기계적 특성화를 위한 새로운 프로토콜이 설명됩니다.

혈관 조직 재생을위한 엔지니어링 3D Cellularized 콜라겐 젤

조직 공학은 종종 조직 재생을위한자가 이식을 만들기 위해 체외 확장에 포함되어 있습니다. 본 연구에서는 조직 확장 재생 및 생체 내에서 재구성하기위한 방법이 체외 세포 및 생체 물질의 처리를 최소화하기 위해 개발되었다.

압축 된 콜라겐에 다진 조직 : 단일 무대 재건 복구를위한 세포 함유 Biotransplant

생체 내 조직의 구조적 특징, 구성 요소 및 기계적 특성과 유사한 3차원 구조를 엔지니어링하기 위해 혁신적인 생체 제조 기술이 개발되었습니다. 이 기술은 새로 개발된 희생 재료인 BSA 고무를 특징으로 하며, 이 고무는 세부적인 공간 특징을 전달하여 다양한 조직의 생체 내 구조를 재현합니다.

세 가지 차원 생체 모방 기술 ​​: 소설 Biorubber는 콜라겐 하이드로 겔에 마이크로 및 매크로 스케일 아키텍처를 정의 작성합니다

이 원고는 새로운 3차원 간세포 배양 플랫폼, 역콜로이드 결정 골격 및 간세포 거동을 평가하기 위한 수반되는 기술의 제작을 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다. 크기 조절 가능한 기공, 상호 연결성 및 세포 외 기질 단백질을 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG) 골격에 접합하는 능력은 Huh-7.5 세포 성능을 향상시킵니다.

반전 콜로이드 결정체 폴리 (에틸렌 글리콜) 비계의 제작 : 간 조직 공학을위한 삼차원 세포 배양 플랫폼

우리 쇼케이스 경도 정렬된 astrocytic somata 소설 소재 넣음 내 프로세스의 자기 조립, 3 차원 번들의 개발. 이러한 "생활 건설 기계", 아직 테스트-베드 neurodevelopmental 메커니즘을 공부 하거나 감독 신경 마이그레이션 및 axonal neuroregeneration를 용이 하 게 하 역할 수 센티미터 길이, 확장 미크론 단위 직경을 전시 설계 길입니다.

3 차원 조직 설계 정렬 사이토 네트워크 발달 메커니즘을 정리 하 고 신경 재생을 촉진 하

이 프로토콜 cryogelation 기술로 제작을 통합 하 여 탄력 있는 3D macroporous microcryogels의 제작을 설명 합니다. 재생 치료를 촉진 하기 위하여 쉽게 주입된 비보 수 또는 생체 외에서 높은 처리량 마약 검사에 대 한 배열로 조립 셀 로딩 시 3D microtissues 생성 됩니다.

주 사용 재생 치료와 높은 처리량 마약 검사에 대 한 3D Microtissues

이 프로토콜은 섬유성 기질 구획을 동반한 3D 생체 모방 모델을 제공합니다. 생리학적으로 관련된 하이드로겔을 사용하여 기질 세포 외 매트릭스의 생체 물성 특성, 세포 상호 작용, 종양 성장 및 전이의 활성 중재자를 모방합니다.

튜닝 가능한 바이오 물속성과 3D 환경에서 종양-스트로마 상호 작용을 연구하는 간암을 위한 생체 모방 모형

현재 프로토콜은 비알코올성 지방간염(NASH) 동안 세포외 기질(ECM) 리모델링의 역학을 시각화하기 위한 신뢰할 수 있는 플랫폼을 구축하기 위해 간 상피내 관류/탈세포화 및 이광자 현미경 방법을 최적화합니다.

비알코올성 지방간염 마우스 모델에서 간 세포외 기질의 3D 이미징

오가노이드는 장기 개발, 약물 발견 및 질병 연구를 위한 맞춤형 조직 모델링에 혁명을 일으켰습니다. 오가노이드 엔지니어링은 복잡한 합성 조직을 만드는 것으로 발전합니다. 목표는 형태 형성, 조립체 기술 및 생체 매트릭스를 통합하여 조직 공학을 발전시키는 것입니다. 이 프로토콜은 간 기관 형성을 모델링하고 합성 조직 구축에 대한 지침을 수립하는 데 도움이 됩니다.

인간 세포주를 사용하여 간 기관 형성 모델링, 조립체 구축 및 합성 조직 설계를 위한 체외 배양 기술

학습하세요 간 재생을 위한 3차원 콜라겐 매트릭스 스캐폴드 이식법을 쥐 모델에서. 이 조직공학 기법은 섬유증 간 질환의 새로운 치료 가능성을 보여주며 간 기능을 손상시키지 않습니다.

간 재생 전략으로 3차원 콜라겐 매트릭스 스캐폴드 이식

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