Name: 성인 얼룩말 피시의 무딘 힘 부상의 효과를 연구하는 확장 가능한 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: 학습하세요 성인 얼룩말 피시에서 무딘 힘 외상성 뇌손상을 유도하는 Marmarou 낙하법을 이용한 신경과학 연구 방법입니다. 이 기법은 뇌손상 후 신경재생 메커니즘과 다양한 병리 변화를 조사하는 데 활용됩니다.

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저자는 그들의 사려 깊은 토론에 대한 하이드 실험실 구성원을 감사하고 싶습니다, 제브라피시 관리 및 축산에 대한 프레이만 생명 과학 센터 기술자, 그리고 악기와 서비스의 사용에 대한 노틀담 광학 현미경 코어 / NDIIF 의 대학. 이 작품은 노틀담 대학의 제브라피시 연구 센터, 노틀담 대학의 줄기 세포 및 재생 의학 센터, NIH R01-EY018417 (DRH), 국립 과학 재단 대학원 연구 펠로우십 프로그램 (JTH), 노트르 담 (JTH)의 LTC 닐 하이랜드 펠로우십의 국립 안과 연구소에서 보조금을 지원받았습니다. 자유 펠로우십(JTH)과 팻 틸만 장학금(JTH)의 센티넬.

브라위피쉬는 프레이만 생명과학 센터의 노틀담 제브라피시 시설에서 자랐으며 유지되었습니다. 이 원고에 설명 된 방법은 노틀담 동물 관리 및 사용위원회의 대학에 의해 승인되었다.
1. 외상성 뇌 손상 패러다임
<ol><li>시스템 물 1L에 2-페녹시에탄올 1mL를 추가하십시오(1L의 탈온화 된 RO 물에 인스턴트 오션 60 mg).</li>
	<li>실온에서 2L의 시스템 물을 포함하는 배수 복구 탱크를 준비합니다.</li>
	<li>원하는 볼 베어링 무게와 강철/플라스틱 튜브의 원하는 길이 와 직경을 선택하고 에너지와 충격력을 결정합니다. 참고: 튜브는 경로 나 이동 속도를 변경하지 않고 볼 베어링이 통과 할 수있는 내부 직경을 가져야합니다.<ol>
<li>충격에 따라 운동 에너지를 결정합니다. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/62709/62709eq01.jpg"> 여기서, KE = 운동 에너지, m = 질량(kg), g = 중력, h = 높이(m)가 드롭포인트에서 물고기까지. 참고: J. J. 에서 운동 에너지를 1,000으로 곱하여 mJ를 결정합니다. KE 는 볼 베어링이 고정 된 위치에서 떨어질 때 발생하는 가속 물체를 기반으로합니다.</li>
		<li>얼룩말 두개골 (총 거리 9.1cm)과 1.5g (6.4mm 직경) 볼 베어링의 플레이트 위 1.5cm를 끝내는 7.62cm 길이의 강철 / 플라스틱 튜브를 사용하여 온화한 TBI (miTBI)를 생성합니다. 이들은 1.33 mJ의 운동 에너지를 생성합니다. 이 손상은 경험적으로 혈관 상해, 경막막/무산혈 혈종 형성, 신경 세포 죽음 및 심각도 의존적인 방식으로 인간 인구에서 보고된 것을 크게 회수하는 인식 손상과 같은 주요 병리학TBI 마커에 근거를 둔 miTBI에 해당하기로 결정되었습니다.</li>
		<li>운동 에너지 miTBI 계산 = <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/62709/62709eq02.jpg">
</li>
		<li>제브라피쉬 두개골(총 거리 14.2cm)과 2.08mJ의 운동 에너지를 생성하는 1.5g(직경 6.4mm) 볼 베어링의 플레이트 위로 1.5cm 를 끝내는 12.7cm 길이의 강철/플라스틱 튜브를 사용하여 적당한 TBI(moTBI)를 생성합니다.</li>
		<li>운동 에너지 moTBI 계산 = <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/62709/62709eq03.jpg">
</li>
		<li>7.62cm 길이의 강철/플라스틱 튜브를 사용하여 심한 TBI(sTBI)를 생성하여 제브라피쉬 두개골(총 거리 9.1cm)과 3.3g(직경 8.38mm) 볼 베어링의 플레이트 위로 1.5cm 를 종료하여 2.94mJ의 운동 에너지를 생성합니다.</li>
		<li>운동 에너지 sTBI 계산 = <img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/62709/62709eq04.jpg">
</li>
	</ol></li>
	<li>페트리 접시에 모델링 점토(도 1, 1단계)를 채우고 무딘 악기(즉, 집게 의 뒷면)를 사용하여 추가 모델링 점토(그림 1, 2단계)가 있는 제기 플랫폼(5cm x 1.5cm)을 만듭니다.<ol>
<li>면도날을 사용하여 제기된 플랫폼을 대략 2개의 동일한 반으로 세로로 나눕니다(그림 1, 3단계, 빨간색 파선). 두 반쪽을 성인 물고기의 길이를 수용 하는 채널로 형성 (그림 1, 단계 4). 추가 점토를 사용하여 물고기 몸의 ~ 2/3을 고정하여 머리를 노출시키는 벽을 구축하십시오.</li>
		<li>부상 시 헤드의 회전이나 반동을 피하기 위해 헤드를 지지하기 위해 벽에 수직으로 노출된 헤드 부위에 작은 지지체를 성형한다(도 1, 4단계). 참고: 채널은 등쪽에서 물고기를 지원할 만큼 깊어야 하지만 여전히 머리가 주변 점토 위에 안주하도록 해야 합니다. 또한, 머리 지원은 낮은 하악골과 아가미를 지원하는 물고기의 자연적인 곡률을 따라야한다.</li>
		<li>떨어뜨린 중량이 채널의 측면에 의해 방해되지 않았는지 확인합니다(그림 1, 4단계).</li>
	</ol></li>
	<li>미니 홀 펀치와 22g 스틸 깜박임으로 직경 3mm의 강철 디스크를 만듭니다. 각 디스크는 여러 번 사용될 수 있습니다.</li>
	<li>1:1000(1mL/1 L, 0.1%) 2-페녹시에탄올이 꼬리 꼬집기까지 50-100mL의 비커에 배치하여 한 마리의 물고기를 마취시킵니다.</li>
	<li>물고기, 등쪽 을 위로 배치, 몸이 측면에 고정되도록 채널 내의 점토 금형에 원하는 충격 점을 중심으로 머리에 3mm 22g 강철 디스크를 배치 (도 1, 단계 5).<ol>
<li>물고기가 머리를 한쪽으로 기울지 않도록 가능한 한 수직으로 정렬되어 고르지 못한 영향을 줄 수 있습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>표준 링 스탠드와 암 클램프를 사용하여 강철/플라스틱 튜브를 고정하므로 튜브의 바닥은 제브라피시의 머리 위로 1.5cm 입니다(그림 1, 6단계). 튜브가 직선인지 확인하십시오.<ol>
<li>튜브를 내려다보고 튜브가 강판 위에 정렬되었는지 확인합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>볼 베어링(경미하고 중간 정도의 TBI의 경우 1.5g, 중증 TBI의 경우 3.3g)를 소정의 높이(1.3.3-1.3.5단계설명)에서 원하는 신경해부학 적 영역 위에 위치한 강판에 튜브를 내려 놓아 원하는 신경해부학적 영역(예를 들어, 소뇌, 도 1, 5 단계 5)을 원하는 중증도에 대한 무딘 TBI 의 중증도를 생성한다. 부상당한 물고기를 복구 탱크에 배치하여 모니터링합니다. 참고: 부상의 심각도에 따라 사망률 또는 토닉 클로닉 발작이 발생할 수 있습니다. 물고기가 TBI 다음 시간의 장시간 동안 응답하지 않는 경우, 꼬리 핀치를 관리하고 통증 반응을 평가하기 위해 전송 파이펫 이나 집게를 사용합니다.</li>
</ol>2. 성인 얼룩말피에서 TBI 후 발작 점수
<ol><li>섹션 1에 설명된 부상 프로토콜에 따라 물고기를 마취하고 다치게하고 부상당한 물고기를 시스템 물 2 L의 배수 복구 탱크에 놓습니다.</li>
	<li>복구 탱크에 배치 된 직후시작 외상 후 발작의 흔적에 대한 물고기를 관찰. 관찰 시간(즉, 1h)을 설정하고 발작 점수(아래에 설명됨), 각 발작 의 지속 시간 및 발작을 경험한 물고기의 백분율을 포함한 모든 발작 활동을 기록합니다(그림 2A). 참고: 발작은 부상 시 즉시 발생할 수 있으며, TBI 이후의 시간 또는 일도 발생할 수 있습니다. 발작은 장기적으로 지속될 수 있고 단 하나 물고기는 다중 발작이 있을 수 있습니다. 1 시간 이상 관측 시간을 설정하면 발작 률의 전반적인 추세를 잘 나타낼 수 있습니다.</li>
	<li>성인 얼룩말 물고기 발작 표현형에 대한 Mussulini18 지침을 사용하여 물고기 점수. 참고: 추적 소프트웨어를 사용하지 않고는 발작 점수를 3 미만으로 평가하기가 어렵습니다. 따라서 소프트웨어 없이 평가가 수행될 때 3개 이상 발작 점수만 기록해야 합니다.</li>
</ol>3. 뇌 해부
<ol><li>아가미 운동이 중단될 때까지 2-페녹시에탄올의 1:500(2mL/1 L, 0.2%) 용액으로 물고기를 안락사시키고 원하는 엔드포인트에서 핀 핀치에 반응하지 않습니다.</li>
	<li>페트리 접시에 모델링 점토를 채우고 해부 중에 몸을 지탱할 수 있는 작은 캐비티를 만듭니다.</li>
	<li>물고기, 등쪽을 점토 몰드에 올려 놓습니다. 물고기의 몸체 중간에 중간선을 통해 해부 핀 1개를 놓고 머리 의 밑면 뒤에 두 번째 핀 ~5mm를 놓습니다.</li>
	<li>해부하는 빛 현미경에서, 무뚝뚝하게 #5 Dumont 집게의 쌍으로 시신경을 끊고 눈을 제거합니다 (그림 2A).</li>
	<li>현미경을 통해 볼 때 장편 끝이 가장 멀리 되도록 물고기를 지향 (그림 2B). 참고: 다음 단계는 오른손잡이 개인을 위한 것입니다. 왼손잡이 개인은 미러 방향으로 다음 단계를 수행하는 것을 선호할 수 있습니다.</li>
	<li>#5 집게를 사용하여 집안판의 한쪽 끝을 천천히 배치하여 고의적인 가위 동작이 로스트랄 끝으로 이동하고 오른쪽 정수리 및 정면 플레이트(그림 2C)를 제거합니다.<ol>
<li>해부 동안 뇌를 관통하지 않도록 집게를 45° 이하의 각도로 유지하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>물고기를 시계 방향으로 90° 회전시. 왼쪽 정수리 플레이트 아래에 #5 집게의 한쪽 끝을 놓고 동일한 가위 동작을 사용하여 뇌의 전체 등쪽 측면을 노출하는 왼쪽 정수리 및 전두엽 판을 제거합니다(그림 2D, E).</li>
	<li>#5 포셉으로 맥실라를 무뚝뚝하게 변형시합니다. 후각 전구를 보존하고 관심 영역인 경우 손상되지 않습니다.</li>
	<li>#5 포셉(그림 2F)으로 오른쪽 오퍼클, 프리오퍼클, 인터로퍼클 및 서브퍼클을 제거합니다.</li>
	<li>#5 포셉을 사용하여 칼바륨 개구부의 caudal 끝에 있는 근육을 무뚝뚝하게 절제하여 척수를 노출시십시오.</li>
	<li>#5 포셉으로 척수를 무뚝뚝하게 변질합니다. 조심스럽게 뇌 아래에 집게를 배치하고 부드럽게 칼바륨에서 뇌를 제거합니다. 참고 : 뇌를 꼬집어하지 마십시오. 집게를 사용하여 뇌를 "요람"하거나 caudally 절제하고 노출된 척수를 뇌를 기동하는 핀치 포인트로 활용하십시오.</li>
	<li>로커 플랫폼에서 4°C에서 하룻밤 사이에 9부 100% 에탄올에서 1부 37% 포름알데히드로 제거된 뇌를 수정합니다.</li>
</ol>4. 제브라피쉬 뇌에 대한 부종 연구
<ol><li>섹션 1에 설명된 부상 프로토콜에 따라 물고기를 마취하고 다치게하고 물고기가 자유롭게 수영을 시작할 때까지 복구 탱크에서 회복 할 수 있도록합니다.</li>
	<li>1 일 동안 정상적인 주택 조건에 다시 물고기를 배치합니다.</li>
	<li>시간이 경과 한 후, 1:500 2-페녹시에탄올에서 물고기를 안락사.</li>
	<li>섹션 3에 설명된 프로토콜에 따라 전체 뇌 또는 관심 영역을 해부하고 뇌를 작은 계량 보트에 즉시 배치합니다. 참고: 두뇌를 옮길 때주의를 기울여야 하며, 미세한 집게를 사용하여 뇌를 찌르거나 긁지 않고 계량 보트에 부드럽게 배치하여 조직의 손실을 초래할 수 있습니다.</li>
	<li>라벨 (부상 그룹과 뇌 수) 및 규모에 추가 작은 건조 계량 보트를 타고. 정확한 측정을 위해 최소 0.001g을 측정할 수 있는 스케일을 사용합니다.</li>
	<li>타르 건조 계량 보트에 뇌를 전송하고 뇌의 젖은 무게를 기록합니다. 그들은 등쪽 측이 위를 향하고 무게 보트에 평평하게 누워 있도록 뇌를 오리엔팅.</li>
	<li>건조 계량 보트와 뇌를 혼성화 오븐에 넣고 8시간 동안 60°C로 설정합니다.</li>
	<li>건조 후, 뇌는 건조 계량 보트에 충실 할 수 있으며 제거하고 새로운 타르 작은 무게 보트로 전송하기 어려울 수 있습니다. 이 건조 한 두뇌에 손상 및 조직의 손실 귀 착될 수 있습니다, 집게와 두뇌를 꼬집어 하지 마십시오. 대신, 미세 한 집게를 함께 꼬집어, 뇌의 복부 측면에서 시작, 위쪽으로 움직임에 국자.</li>
	<li>수식을 사용하여 각 뇌의 수분 함량을 결정합니다(그림 4): <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/62709/62709eq05.jpg">
</li>
</ol>5. 신경축을 가로 질러 세포 증식을 표시하고 고정 된 조직을 준비.
<ol><li>ddH2O 의 2mL에서 10mM 5-에티닐-2'-데옥시리딘(EdU)을 준비한다.</li>
	<li>1:1000mL(1mL/1 L, 0.1%) 2-페녹시에탄올에서 한 번에 3~4마리의 물고기를 마취하여 물고기가 꼬리 꼬집어 반응하지 않을 때까지(섹션 1에 설명된 프로토콜 사용).</li>
	<li>젖은 스폰지에 부분 절개를하고 개구부, 복부 측면에 한 번에 하나의 물고기를 배치합니다.</li>
	<li>30G 바늘을 사용하여 10mM EdU의 ~40 μL을 물고기의 몸에 주입하십시오. 물고기는 시스템 물로 채워진 지주 탱크로 돌아갑니다. 참고: 반복 주사는 다른 시점에서 수행될 수 있고 증식 세포의 더 많은 수를 레이블을 지정하고 1 주 이상의 추적 기간이 원하는 경우 필요할 수 있습니다.</li>
	<li>섹션 3에 설명된 대로 뇌를 수집하고 9부 100% 에탄올의 2mL를 포함하는 5mL 유리 바이알에 1부 37% 포름알데히드로 배치한다. 로커 플랫폼에서 4°C에서 뇌를 수정합니다. 참고: 로커 또는 셰이커 플랫폼은 뇌가 바닥에 쉬고 전체 뇌의 텔렌스팔론이 컬링되는 것을 금지합니다.</li>
	<li>뇌를 고치는 데 사용되는 유리 유리 바이알에서, 내림차순 에탄올 시리즈의 세척, 75%, 50%, 25%, 각각 15분, 실온에서 로커에 5%의 자당/PBS로 1.5h 세척이 뒤따랐다. 로커 플랫폼에 4° C에서 30% 자당/PBS에 밤새 유리 유리 병에 두뇌를 저장합니다.</li>
	<li>30% 자당/PBS에서 뇌를 제거하고 12웰 플레이트(웰당 1개의 치료그룹)로 이송하고, 2부조직 동결배지와 1부 30%의 자당/PBS로 구성된 2:1 용액으로 채워진 웰을 이체한다. 로커 플랫폼에서 4°C에서 하룻밤 동안 뇌를 배양합니다.</li>
	<li>4°C에서 2-24h에 대해 100% TFM에서 12웰 플레이트 내의 다음 웰행으로 뇌를 옮기는다.</li>
	<li>냉동 척을 사용하여 TFM에 뇌를 건조 얼음의 원하는 방향으로 포함시킵니다.</li>
	<li>저온 절제 (16 μm 두께 의 섹션)를 수행하고 양전하 슬라이드의 섹션을 수집합니다. 1 시간 동안 슬라이드 워머에 건조 슬라이드 다음 -80 ° C에 저장하거나 면역 작용으로 계속.</li>
	<li>조직 섹션 주위 슬라이드에 소수성 장벽을 준비하고 20 분 동안 슬라이드 워머에 건조 할 수 있습니다.</li>
	<li>PBS에서 슬라이드를 5분 간 간 간략하게 씻어낸 다음 PBS-Tween 20(0.05%)에서 각각 10분 동안 두 번 세척합니다.</li>
	<li>EdU 세포 증식 키트 및 제조업체의 지침을 사용하여 EdU 탐지를 수행합니다.</li>
	<li>슬라이드를 분석하고 형광 EdU 표지 된 세포를 상피 현미경 또는 공초점 현미경을 사용하여 정량화합니다. 개별 셀을 명확하게 구분하려면 최소 40배의 목표가 필요합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Centers for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveillance+Report+of+Traumatic+Brain+Injury-related+Emergency+Department+Visits%2C+Hospitalizations%2C+and+Deaths-United+States%2C+2014%5BTitle%5D)+AND+%22Centers+for+Disease+Control+and+Prevention%2C+U.S.+Department+of+Health+and+Human+Services%22%5BJournal%5D)">Surveillance Report of Traumatic Brain Injury-related Emergency Department Visits, Hospitalizations, and Deaths-United States, 2014.</a> Centers for Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services. , (2019).</li>
<li>Galgano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+brain+injury%3A+current+treatment+strategies+and+future+endeavors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+transplantation%22%5BJournal%5D)">Traumatic brain injury: current treatment strategies and future endeavors.</a> Cell transplantation. 26 (7), 1118-1130 (2017).</li>
<li>Santiago, L. A., Oh, B. C., Dash, P. K., Holcomb, J. B., Wade, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+clinical+comparison+of+penetrating+and+blunt+traumatic+brain+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+injury%22%5BJournal%5D)">A clinical comparison of penetrating and blunt traumatic brain injuries.</a> Brain injury. 26 (2), 107-125 (2012).</li>
<li>Korley, F. K., Kelen, G. D., Jones, C. M., Diaz-Arrastia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergency+department+evaluation+of+traumatic+brain+injury+in+the+United+States%2C+2009-2010%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Head+Trauma+Rehabilitation%22%5BJournal%5D)">Emergency department evaluation of traumatic brain injury in the United States, 2009-2010.</a> The Journal of Head Trauma Rehabilitation. 31 (6), 379-387 (2016).</li>
<li>Faul, M., Xu, L., Wald, M., Coronado, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFaul%2C+M+%22Traumatic+Brain+Injury+in+the+United+States%3A+Emergency+Department+Visits%2C+Hospitalizations+and+Deaths%22">Traumatic Brain Injury in the United States: Emergency Department Visits, Hospitalizations and Deaths</a>. , (2010).</li>
<li>Campbell, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch3+and+DeltaB+maintain+M%C3%BCller+glia+quiescence+and+act+as+negative+regulators+of+regeneration+in+the+light-damaged+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Notch3 and DeltaB maintain Müller glia quiescence and act as negative regulators of regeneration in the light-damaged zebrafish retina.</a> Glia. 69 (3), 546-566 (2021).</li>
<li>Green, L. A., Nebiolo, J. C., Smith, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+exit+the+CNS+in+spinal+root+avulsion%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Microglia exit the CNS in spinal root avulsion.</a> PLoS Biology. 17 (2), 3000159(2019).</li>
<li>Hentig, J., Byrd-Jacobs, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+zinc+sulfate+results+in+differential+effects+on+olfactory+sensory+neuron+subtypes+in+the+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Exposure to zinc sulfate results in differential effects on olfactory sensory neuron subtypes in the adult zebrafish.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (9), 1445(2016).</li>
<li>Ito, Y., Tanaka, H., Okamoto, H., Oshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neural+stem+cells+and+their+progeny+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Characterization of neural stem cells and their progeny in the adult zebrafish optic tectum.</a> Developmental Biology. 342 (1), 26-38 (2010).</li>
<li>Becker, C., Becker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+zebrafish+as+a+model+for+successful+central+nervous+system+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Restorative+Neurology+and+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Adult zebrafish as a model for successful central nervous system regeneration.</a> Restorative Neurology and Neuroscience. 26 (2-3), 71-80 (2008).</li>
<li>Alyenbawwi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seizures+are+a+druggable+mechanistic+link+between+TBI+and+subsequent+tauopathy%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Seizures are a druggable mechanistic link between TBI and subsequent tauopathy.</a> eLife. 10, 58744(2021).</li>
<li>Kaslin, J., Kroehne, V., Ganz, J., Hans, S., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+of+neuroepithelia-like+and+radial+glia-like+progenitor+cells+in+cerebellar+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct roles of neuroepithelia-like and radial glia-like progenitor cells in cerebellar regeneration.</a> Development. 144 (8), 1462-1471 (2017).</li>
<li>McCutcheon, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+traumatic+brain+injury+in+adult+zebrafish+demonstrates+response+to+injury+and+treatment+comparable+with+mammalian+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">A novel model of traumatic brain injury in adult zebrafish demonstrates response to injury and treatment comparable with mammalian models.</a> Journal of Neurotrauma. 34 (7), 1382-1393 (2017).</li>
<li>Skaggs, K., Goldman, D., Parent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitotoxic+brain+injury+in+adult+zebrafish+stimulates+neurogenesis+and+long-distance+neuronal+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Excitotoxic brain injury in adult zebrafish stimulates neurogenesis and long-distance neuronal integration.</a> Glia. 62 (12), 2061-2079 (2014).</li>
<li>Kishimoto, N., Shimizu, K., Sawamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+regeneration+in+a+zebrafish+model+of+adult+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Neuronal regeneration in a zebrafish model of adult brain injury.</a> Disease Models & Mechanisms. 5 (2), 200-209 (2012).</li>
<li>Kroehne, V., Freudenreich, D., Hans, S., Kaslin, J., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+the+adult+zebrafish+brain+from+neurogenic+radial+glia-type+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Regeneration of the adult zebrafish brain from neurogenic radial glia-type progenitors.</a> Development. 138 (22), 4831-4841 (2011).</li>
<li>Marmarou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+diffuse+brain+injury+in+rats.+Part+I%3A+Pathophysiology+and+biomechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">A new model of diffuse brain injury in rats. Part I: Pathophysiology and biomechanics.</a> Journal of Neurosurgery. 80 (2), 291-300 (1994).</li>
<li>Mussulini, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seizures+induced+by+pentylenetetrazole+in+the+adult+zebrafish%3A+a+detailed+behavioral+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Seizures induced by pentylenetetrazole in the adult zebrafish: a detailed behavioral characterization.</a> PloS One. 8 (1), 54515(2013).</li>
<li>Kalueff, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+comprehensive+catalog+of+zebrafish+behavior+1.0+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond.</a> Zebrafish. 10 (1), 70-86 (2013).</li>
<li>Xiong, Y., Mahmood, A., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+traumatic+brain+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Animal models of traumatic brain injuries.</a> Nature Reviews Neuroscience. 14, 128-142 (2013).</li>
<li>Amamoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+axolotls+can+regenerate+original+neuronal+diversity+in+response+to+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Adult axolotls can regenerate original neuronal diversity in response to brain injury.</a> eLife. 5, 13998(2016).</li>
<li>Yamamoto, S., Levin, H., Prough, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild%2C+moderate+and+severe%3A+terminology+implications+for+clinical+and+experimental+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Mild, moderate and severe: terminology implications for clinical and experimental traumatic brain injury.</a> Current Opinion in Neurology. 31 (6), 672-680 (2008).</li>
<li>Lund, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderate+traumatic+brain+injury%2C+acute+phase+course+and+deviations+in+physiological+variables%3A+an+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Trauma+Resuscitation+and+Emergency+Medicine%22%5BJournal%5D)">Moderate traumatic brain injury, acute phase course and deviations in physiological variables: an observational study.</a> Scandinavian Journal of Trauma Resuscitation and Emergency Medicine. 24, 77(2016).</li>
<li>Levin, H., Arrastia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis%2C+prognosis%2C+and+clinical+management+of+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Diagnosis, prognosis, and clinical management of mild traumatic brain injury.</a> The Lancet Neurology. 14 (5), 506-517 (2015).</li>
<li>Ruff, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+diagnosing+a+mild+traumatic+brain+injury%3A+a+National+Academy+of+Neuropsychology+education+paper%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Clinical+Neuropsychology%3A+The+Official+Journal+of+the+National+Academy+of+Neuropsychologists%22%5BJournal%5D)">Recommendations for diagnosing a mild traumatic brain injury: a National Academy of Neuropsychology education paper.</a> Archives of Clinical Neuropsychology: The Official Journal of the National Academy of Neuropsychologists. 24 (1), 3-10 (2009).</li>
<li>Ganz, J., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neurogenesis+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">Adult neurogenesis in fish.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 8 (7), 019018(2016).</li>
<li>Grandel, H., Kaslin, J., Ganz, J., Wenzel, I., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+and+neurogenesis+in+the+adult+zebrafish+brain%3A+origin%2C+proliferation+dynamics%2C+migration+and+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells and neurogenesis in the adult zebrafish brain: origin, proliferation dynamics, migration and cell fate.</a> Developmental Biology. 295, 263-277 (2006).</li>
<li>Lahne, M., Nagashima, M., Hyde, D. R., Hitchcock, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+Muller+glia+to+regenerate+retinal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Reprogramming Muller glia to regenerate retinal neurons.</a> Annual Review of Visual Science. 6, 171-193 (2020).</li>
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신경 외상 및 관련 후유증에 대한 조사는 오랫동안 기존의 비 재생 설치류 모델에 중점을 두어 왔습니다20. 최근에는 재생 모델에 다양한 형태의 CNS 손상을 적용한 연구9,11,13,14,21. 통찰력이 있지만, 이러한 모델은 인간 인구에서 흔히 볼 수 없는 부상 방법(관통 외상, 화학 절제, 폭발) 및/또는 부상이 확장가능하지 않으므로 인간 인구에서 관찰되는 심각도 의존병리학의 이질성을 완전히 해결하지 못하여 제한됩니다22,23,24,25</...

외상성 뇌 손상 (TbIs)은 글로벌 건강 위기와 사망과 장애의 주요 원인입니다. 미국에서는 매년 약 290만 명이 TBI를 경험하고, 2006-2014년 사이에 TBI 또는 TBI 후유로 인한 사망률은 50%1 이상 증가했습니다. 그러나, 결핵은 그들의 병인학, 병리학 및 임상 프리젠 테이션에서 주로 상해의 기계장치에 부분적으로 기인합니다 (MOI), 이는 또한 처리 전략 및 예측 예후2에 영향을 미칩니다. 비록 결핵은 다양 한 MOI에서 발생할 수 있습니다., 그들은 주로 관통 또는 무딘 힘 외상의 결과. 관통 외상은 결핵의 작은 비율을 나타내고 즉각적이고 주변 찔린 뇌 부위에 국한되는 심각하고 초점 상해를 생성3. 대조적으로, 무딘 힘 TBI는 일반 인구에서 일반적입니다, 단절의 범위에 걸쳐 (온화한, 보통, 심한), 여러 뇌 영역에 영향을 미치는 확산, 이질성, 글로벌 상해를 생산1,4,5.
Zebrafish (Danio rerio)는 중추 신경계 (CNS)6,7,8,9에 걸친 광범위한 신경 학적 모욕을 검사하는 데 활용되었습니다. Zebrafish는 또한 포유류와 달리 CNS 손상을 복구하기 위한 선천적이고 강력한 재생 반응을 가지고 있습니다10. 현재 zebrafish 외상 모델은 침투, 절제, 화학 적 모욕 또는 압력 파동을 포함한 다양한 부상 방법을 사용합니다11,12,13,14,15,16. 그러나, 이들 각각의 방법은 거의 인간 인구에 의해 경험되지 않는 MOI를 활용, 부상 단절의 범위에 걸쳐 확장 할 수 없습니다, 무딘 힘 TBI 후보고 이질성 또는 심각도 의존 TBI 후이를 해결하지 않습니다. 이러한 요인은 인간 인구에서 TBI의 일반적인 형태와 관련된 병리학의 기본 메커니즘을 이해하기 위해 제브라피시 모델의 사용을 제한 (가벼운 무딘 힘 부상).
우리는 상해 병리학, TBI 후유증의 진행 및 타고난 재생 반응을 조사할 수 있는 방법을 제공하는 신속하고 확장 가능한 무딘 힘 TBI 제브라피시 모델을 개발하는 것을 목표로 했습니다. 우리는 일반적으로 사용되는 설치류 Marmarou17 체중 방울을 수정하고 성인 얼룩말 물고기에 적용했습니다. 이 모델은 온화하고 중간정도에서 중증에 이르는 다양한 절단 범위를 산출합니다. 이 모델은 또한 발작, 부종, 경막 및 추적 혈종, 신경 세포 죽음 및 학습 및 기억 장애와 같은 인지 적자를 포함하여 심각도 의존적 방식으로 인간 TBI 병리학의 여러 측면을 재구성합니다. 부상 후 며칠, 병리학 및 적자가 사라지고 손상되지 않은 컨트롤과 유사한 수준으로 돌아갑니다. 추가적으로, 이 제브라피쉬 모형은 상해 엄격에 관하여 신경축에 걸쳐 강력한 증식 및 신경 재생 반응을 표시합니다.
여기에서는 무딘 힘 외상의 설정 및 유도, 외상 후 발작 점수, 혈관 부상 평가, 뇌 섹션 준비 지침, 부종 정량화 에 대한 접근 및 부상 후 의 확산 반응에 대한 통찰력을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>2-페녹시에탄올</td><td>시그마 Alderich</td><td>77699</td><td></td></tr><tr><td>#00 벅샷</td><td>레밍턴</td><td>RMS23770</td><td>sTBI용 3.3g 무게</td></tr><tr><td>#3 벅샷</td><td>레밍턴</td><td>RMS23776</td><td>miTBI/moTBI#5용 1.5g 무게</td></tr> <tr><td>Dumont 집게</td><td>WPI</td><td>14098</td><td></td></tr><tr><td>5-에티닐-2'-데옥시우리딘</td><td>Life Technologies</td><td>A10044</td><td>EdU</td></tr><tr><td>5ml 유리 바이알</td><td>VWR</td><td>66011-063</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU 세포 증식 키트</td><td>Life Technologies</td><td>C10340</td><td></td></tr><tr><td>CytoOne 12웰 플레이트</td><td>USA Scientific</td><td>CC7682-7512</td><td></td></tr><tr><td>인스턴트 오션</td><td>인스턴트 오션</td><td>SS15-10</td><td></td></tr><tr><td>슈퍼 프로스트 사후 충전 슬라이드</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>Super PAP 펜 리퀴드 블로커</td><td>Ted Pella</td><td>22309</td><td></td></tr><tr><td>티슈 냉동 매체</td><td>VWR</td><td>15148-031</td><td></td></tr></tbody></table>

성인 얼룩말 피시의 무딘 힘 부상의 효과를 연구하는 확장 가능한 모델

A Scalable Model to Study the Effects of Blunt-Force Injury in Adult Zebrafish

무딘 힘 외상성 뇌 손상 (TBI) 머리 외상의 가장 일반적인 형태, 이는 단절의 범위에 걸쳐 복잡 하 고 이종이 불 쌍이 이차 효과 결과. 인간에서 TBI다음 잃어버린 뉴런을 대체하거나 재생하는 메커니즘은 없지만, 제브라피쉬는 뇌를 포함하여 몸 전체에 뉴런을 재생하는 능력을 가지고 있습니다. 무딘 힘 TBI다음 얼룩말 피시에 전시 된 병리학의 폭을 검사하고 후속 뉴런 재생 반응의 기초 메커니즘을 연구하기 위해, 우리는 성인 얼룩말 피시에 사용하기 위해 일반적으로 사용되는 설치류 Marmarou 체중 방울을 수정했습니다. 우리의 간단한 무딘 힘 TBI 모델은 확장 가능, 온화한 유도, 보통, 또는 심한 TBI, 그리고 접촉 과 외상 후 발작, 부종, 경막 및 추적 혈종 혈종, 인지 장애등 인간의 TBI 다음 관찰 표현형의 많은 재구성, 각각 부상 심각도 의존적 인 방식으로 표시. 부상 후 몇 분 이내에 나타나기 시작하는 TBI 후유한은 부상 후 7 일 이내에 거의 손상되지 않은 제어 수준으로 돌아갑니다. 재생 과정은 부상 후 48시간(hpi)부터 시작하며, 최고 세포 증식은 60마치에 의해 관찰됩니다. 따라서, 우리의 zebrafish 무딘 힘 TBI 모형은 제브라피시에 유일하게 신경 재생의 기계장치와 더불어 질병 개시 및 진행을 조사할 수 있는 인간 TBI와 유사한 특징적인 1 차 및 이차 상해 TBI 병리를 생성합니다.

부상 유도 장비를 준비하면 성인 얼룩말물고기에 확장 가능한 무딘 힘 TBI를 제공하는 빠르고 단순한 수단을 사용할 수 있습니다. 부상 모델의 등급 심각도는 혈관 부상이 가장 쉽고 눈에 띄는 병리학 중 하나이지만 성공적인 부상의 몇 가지 쉽게 식별 할 수있는 메트릭을 제공합니다 (그림 3). 부상 중에 사용되는 물고기의 변형은이 지표를 쉽게 또는 식별하기 어렵게 만들 수 있습니다. 야생형 AB어(WTAB, 도 3A-D)를 사용하는 경우, 혈관 손상의 식별은 착색으로 인한 miTBI 또는 moTBI 및 손상되지 않은 대조군 물고기를 구별하기 어려울 수 있다(도 3A-C). 부상 후, miTBI 물고기는 ...

우리는 무딘 힘 외상성 뇌 손상 (TBI) 및 후속 신경 재생의 기초 메커니즘에 따라 병리학의 폭을 검사하기 위해 성인 얼룩말 물고기에 대한 Marmarou 체중 드롭 모델을 수정했습니다. 이 무딘 힘 TBI 모델은 확장 가능, 온화한 유도, 보통, 또는 심한 TBI, 인간의 TBI에서 관찰 부상 이질성을 다시 수상.

Blunt-force traumatic brain injuries (TBI) are the most common form of head trauma, which spans a range of severities and results in complex and ...

이 프로토콜은 성인 얼룩말피에서 확장 가능한 무딘 힘 외상성 뇌 손상을 유도하는 간단하고 빠르며 재현 가능한 방법을 제공합니다. 이 무딘 힘 외상성 뇌 손상을 겪는 성인 얼룩말 물고기는 무딘 힘 TBI로 고통받는 인간에서 관찰 된 많은 특성을 나타냅니다. 절차를 시연하는 것은 제임스 헨티그 씨와 제 실험실에서 박사 과정 학생 두 명인 Kaylee Cloghessy 씨가 될 것입니다.먼저 페트리 접시에 모델링 점토를 채우는 것으로 시작합니다. 그런 다음 손가락이나 한 쌍의 집게 뒷면을 사용하여 추가 모델링 점토가있는 제기 플랫폼을 만듭니다. 제기된 플랫폼을 면도날을 사용하여 약 2개의 약 반쪽으로 세로로 나눕니다.두 반쪽을 채널로 구성하여 성인 물고기의 길이를 수용합니다. 추가 점토를 사용하여 벽을 구축하여 머리가 노출된 물고기 몸체의 2/3을 확보하십시오. 부상 시 헤드의 회전이나 반동을 피하기 위해 벽에 수직으로 노출된 헤드 부위에 작은 지지체를 성형합니다.채널의 측면이 감소된 무게를 방해하지 않도록 합니다. 미니 홀 펀치를 사용하여 22 게이지 스틸 깜박임에서 3mm 스틸 디스크를 만듭니다. 마취된 물고기는 등쪽을 위로 업하여 수로 내의 점토 몰드에 꼬리 꼬집어 반응하지 않고 몸에 고정되도록 합니다.원하는 충격점을 중심으로 3밀리미터 22게이지 스틸 디스크를 머리에 놓습니다. 물고기가 수직으로 정렬하여 머리가 한쪽으로 기울어지지 않도록 하여 고르지 못한 영향을 줄 수 있습니다. 표준 링 스탠드와 암 클램프를 사용하여 강철 또는 플라스틱 튜브를 고정하여 직선이 되도록 하여 튜브의 바닥이 제브라피시 머리 위로 1.5cm 높이입니다.튜빙을 내려다보며 강판 위에 정렬되도록 합니다. 부상의 원하는 심각도에 따라 적절한 볼 베어링을 선택합니다. 소정의 높이에서 강판에 튜브를 떨어 뜨립니다.그런 다음 부상당한 물고기를 복구 탱크에 배치하여 모니터링합니다. 페트리 접시에 모델링 점토를 채우고 해부 중에 몸을 지탱할 수 있는 작은 캐비티를 만듭니다. 등쪽면을 위로 올려 놓고, 물고기를 점토 몰드에 놓습니다.두 개의 해부 핀을 배치, 하나는 몸중간을 통해 다른 약 5 머리의 기지 뒤에 밀리미터. 5 개의 Dumont 집게 를 사용하여 시신경을 무뚝뚝하게 끊고 눈을 제거하십시오. 오른쪽 정수리 플레이트 아래에 5 개의 집게의 한쪽 끝을 놓습니다.고의적인 가위 동작이 로스트랄 끝으로 이동하고 오른쪽 정면 플레이트를 제거합니다. 그런 다음 물고기를 시계 방향으로 90도 회전시합니다. 왼쪽 정수리 플레이트 아래에 5 개의 집게의 한쪽 끝을 놓고 동일한 가위 동작을 사용하여 왼쪽 정수리 및 전두엽 판을 제거하여 뇌의 전체 등쪽 측면을 노출시합니다.5 개의 집게를 사용하여 후각 전구가 보존되고 손상되지 않도록 맥실라를 무뚝뚝하게 변형시하십시오. 동일한 포셉을 사용하여 오른쪽 오퍼클, 프리오퍼클, 인터로퍼클 및 스보퍼클을 제거합니다. 그런 다음 칼바륨의 caudal 끝에 있는 근육을 무뚝뚝하게 절제하여 척수를 노출시합니다.집게를 사용하여 척수를 무뚝뚝하게 변질합니다. 집게를 조심스럽게 뇌 아래에 놓고 칼바륨에서 뇌를 부드럽게 제거합니다. 텍스트 원고의 지침을 사용하여 전체 뇌 또는 관심 영역을 해부하고, 미세 한 집게를 사용하여 작은 계량 보트에 즉시 뇌를 배치, 찌르거나 뇌를 긁어하지 주의.타르 건조 계량 보트에 뇌를 전송하고 뇌의 젖은 무게를 기록합니다. 등쪽을 향한 등무게 보트에 평평하게 놓기 위해 뇌를 지향합니다. 그런 다음 뇌와 건조 계량 보트를 8시간 동안 섭씨 60도로 설정하여 혼성화 오븐에 놓습니다.건조되면 새로운 타르작은 계량 보트로 뇌를 옮기려면 미세한 집게를 함께 꼬집어 뇌의 복부 측면에서 시작하여 위쪽으로 움직입니다. 젖은 스폰지에 부분 절개를합니다. 복부 측으로 개구부에서 한 번에 한 마리의 물고기를 놓고 30 게이지 바늘을 사용하여 10 밀리머 EdU의 약 40 마이크로 리터를 물고기의 몸에 주입하십시오.그런 다음 물고기를 시스템 물로 채워진 지주 탱크로 되돌려 보입니다. 앞에서 언급한 바와 같이 뇌를 수집하고, 9부 100%에탄올의 2밀리리터를 함유한 9밀리리터 유리 바이알에 그룹으로 배치하여 37%의 포름알데히드에 배치한다. 로커 플랫폼에서 섭씨 4도에서 뇌를 수정합니다.냉동 척을 사용하여 TFM에 뇌를 건조 얼음의 원하는 방향으로 포함시킵니다. 혈관 부상이 모델을 통해 성공적인 부상을 식별하기 위해 가장 쉽고 눈에 띄는 병리학 중 하나인 것으로 나타났습니다. 손상 중에 사용되는 물고기의 변형으로 변경 된 표시기를 식별하는 기능.야생형 AB의 혈관 손상 식별은 색소 침착으로 인해 온화하거나 적당한 TBI와 손상되지 않은 대조군 어류를 구별하기가 어려웠습니다. 부상 후, 온화한 TBI 물고기는 최소한의 표면 찰과상을 표시하고, 적당한 TBI 물고기는 제한된 뇌 출혈을 나타냈다. 부상의 정도는 심한 TBI 물고기에서 명백했다.대조적으로, 혈관 상해는 albino 또는 Casper 물고기를 사용할 때 쉽게 확인할 수 있습니다. 부상으로 인한 뇌의 붓기는 부종을 사용하여 평가되었다. 대조적으로, 적당한 TBI와 가혹한 TBI는 중요한 부종, 1 dpi 및 3 dpi를 가지고 있었습니다, 그러나 적당한 TBI와 가혹한 TBI둘 다의 유체 함량은 5 dpi에 의해 손상되지 않은 통제를 닮은 수준으로 돌아왔습니다.이 무딘 힘 부상 신경 축에 걸쳐 강력한 세포 증식 응답 결과. 증가된 EdU 라벨링은 손상되지 않은 컨트롤에 비해 전뇌의 심실 및 심실 영역에서 관찰되었다. 부상당한 두뇌는 손상되지 않은 물고기 두뇌에 비해 심층 회색 영역, 광학 섬유 엽 및 전방 시상 하부의 양상에서 증가 EdU 라벨을 표시했습니다.가혹한 TBI에 따라, 힌드뇌에 있는 신경 생성 지구는 손상되지 않은 두뇌에 비해 증가한 세포 증식을 전시했습니다. 부상의 적절한 유도를 위해, 물고기가 곰팡이에 고정되고 안정되어 있는지 확인하고, 튜브가 센터 의 충격을 피하거나 체중 방울 궤적을 변경하기 위해 직선인지 확인하십시오. 이 절차는 반복적인 머리 외상 또는 상해 유도한 재생 연구에 특히 적용될 재생 모형에 적용된 신속하고 비용 효과적인 무딘 힘 상해 유도 방법을 제공합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오에서는 수정된 제브라피시 배아를 실체 현미경으로 적척한 다음 콜레스테롤 합성 억제제에 노출시켜 유충에서 혈관 파열과 뇌출혈을 유발합니다. 뚜렷한 붉은 반점으로 식별할 수 있는 출혈성 유충은 이후 추가 분석을 위해 현미경으로 분리됩니다.

제브라피시 유충의 약물 유발 출혈 모델링

척추 절개 한 후, 성인 zebrafish의 육주 후 손상에 의한 기능 회복이있다. 유생의 투명성과 빠른 복구를 이용하려면, 우리는 애벌레 척수에 병행하는 방법을 제시한다. 절개 한 후, 우리는 3 일 후 부상으로 이일 후 상해에서 시작 감각 회복을 관찰하고 C-굴곡 운동.

애벌레 Zebrafish의 척수 절개

제브라피시 성체 신경 발생 및 재생의 세포 및 분자 메커니즘을 밝히기 위해 우리는 제브라피시 성체 텔렌스팔론에서 기계적 손상을 일으키는 침습적 수술과 면역조직화학 또는 현장 교잡화에 의한 찌른 반구의 변화를 모니터링하는 프로토콜을 개발했습니다.

Zebrafish의 성인 Telencephalon의 자상 부상 : 척추 동물의 뇌 신경 발생과 재생을 조사하는 방법

여기에서는 겐타마이신 주사로 급성 신장 손상을 유발하여 성인 신장 재생을 연구하는 신뢰할 수 있는 방법을 제시합니다. 우리는 부상이 겐타마이신 투여량과 환경 온도에 따라 달라진다는 것을 보여주며, LHX1a+가 새로운 네프론을 개발하기 위해 현장 교잡법을 사용합니다.

겐타 마이신 유도 부상으로 성인 Zebrafish의에서 신장 재생

이 기사는 제브라피시 배아에서 기계적 혈관 손상을 일으키는 방법을 설명합니다. 이 부상 모델은 실시간 현미경 검사에 이상적으로 적합한 유기체에서 지혈, 부상 관련 염증 및 상처 치유를 연구하기 위한 플랫폼을 제공합니다.

Zebrafish의 태아에서 기계 선박 부상

여기, 우리 3 성인 zebrafish 부상 모델 및 면역 억제 약물 치료와 결합 된 그들의 사용을 설명합니다. 우리는 거기에 뼈 강화 작용을 감지 및 조직 재생의 이미징에 지침을 제공 합니다.

성인 Zebrafish 부상 모델 뼈 조직 재생에 Prednisolone의 효과 연구

여기에서 우리는 인간의 뇌 내 출혈 (ICH)의 맥락에서, 제 브라 피쉬 애벌레에 있는 두뇌에 있는 출혈 뒤에 뇌 손상, 운동 적자 및 신경 염증을 정량화 하는 프로토콜을 제시 합니다.

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이 프로토콜은 신장 독성 제로 cisplatin를 사용하여 성인 얼룩말 피시에 급성 신장 상해 (AKI)를 유도하는 절차를 설명합니다. 신장 조직에서 염증및 세포사멸을 분석하기 위한 기술과 2가지 기술의 재현성을 평가하는 단계, 각각 세포측정및 TUNEL을 상세히 설명했다.

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성인 제브라피쉬의 기계적 뇌 손상 모델은 높은 재생 능력을 조절하는 분자 메커니즘을 조사하기 위해 설명됩니다. 이 방법은 형광 면역 염색을 사용하여 재생 반응을 평가하기 위해 여러 종의 작은 물고기의 시신경에 찔린 상처 손상을 만드는 것을 설명합니다.

재생 능력의 비교 분석을 위해 Zebrafish와 Medaka를 사용한 성인 시신경의 찔린 상처 부상 모델

척수 손상 후 기능적 회복이 가능한 성인 제브라피쉬는 신경 재생의 선천적 메커니즘을 밝히는 최고의 모델 시스템입니다. 여기에서는 수영 지구력과 수영 행동 분석을 척수 재생의 기능적 판독으로 설명합니다.

성인 제브라 피쉬의 수영 지구력 및 수영 행동 평가

이 프로토콜은 성인 제브라피쉬에서 여러 꼬리 근소체의 심각한 손상을 유도하는 냉동 손상 모델을 설명합니다. 이 방법은 비포유류 척추동물에서 심각한 조직 손실 후 골격근 재생을 연구하기 위한 새로운 접근 방식을 제공합니다.

성인 제브라피쉬에서 꼬리 꽃자루의 골격근 재생을 연구하기 위한 냉동 손상 모델

학습하세요 성인 얼룩말 피시에서 무딘 힘 외상성 뇌손상을 유도하는 Marmarou 낙하법을 이용한 신경과학 연구 방법입니다. 이 기법은 뇌손상 후 신경재생 메커니즘과 다양한 병리 변화를 조사하는 데 활용됩니다.

성인 얼룩말 피시의 무딘 힘 부상의 효과를 연구하는 확장 가능한 모델

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