Name: 생체 내 적용을 위한 나린제닌 용액의 제조 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 18 s
Description: 배우세요 나린제닌 용액 제조법을 DMSO, Tween 80, 생리식염수를 이용하여 생체 내 투여용으로 준비하는 방법을. 이 프로토콜은 항당뇨 및 골다공증 효과 평가를 위한 약리학 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (81973607 및 81573992)의 지원을 받았습니다.

설명 된 조사는 국가 연구위원회의 실험 동물 관리 및 사용 지침을 준수했으며 상하이 중국 전통 의학 대학 동물 관리 및 사용위원회의 승인을 받았습니다. 실험을 수행할 때 안전을 위해 실험실 코트, 일회용 니트릴 장갑 및 고글이 필요합니다.
1. 생체 내 적용에 필요한 용매의 제조 및 나린제닌의 추정
<ol><li>다음 용매를 준비하십시오 : 트윈 -80 (최종 농도 범위 : 0.5 % -1 %), DMSO, 글리세린 (최종 농도 범위 : 15 % -20 %), 에탄올 (최종 농도 범위 : 근육 주사의 경우 12 %)22 및 0.9 % PS.</li>
	<li>복용량, 마우스 수 및 주사 빈도를 기준으로 필요한 나린제닌의 양을 추정합니다.<ol><li>10 마리의 마우스 (C57BL / 6, 수컷, 5 주령, SPF)에게 8 주 동안 일주일에 5 일 나린 제닌을 투여하도록 주문하십시오. 마우스를 특정 병원체가 없는(SPF) 상태로 유지하십시오. 참고: 복강 주사에 필요한 용량은 20mg/kg b.w.23입니다.</li>
		<li>다음 계산에 따라 나린제닌 160mg의 무게를 측정합니다: 20mg/kg x 0.02kg/마우스 x 10마우스 x 5일/주 x 8주 = 160mg.</li>
	</ol></li>
	<li>생체 내에서 주입할 나린제닌의 농도를 계산합니다.<ol><li>마우스의 체중을 기준으로 권장 용량을 준비하십시오. 각 마우스에 적용되는 나린제닌의 권장 부피는 체중의 1%(0.3mL)입니다. 이 실험에서는 마우스 당 0.2mL를 사용했습니다.</li>
		<li>총 부피를 계산합니다: 마우스당 0.2mL x 마우스 10마리 x 주 5일 x 8주 = 80mL.</li>
		<li>재고에 있는 나린제닌의 농도를 계산하십시오: 160 mg/80 mL 용매 = 2 mg/mL.</li>
		<li>매일 부피를 계산하십시오 : 마우스 당 0.2mL x 마우스 10 마리 = 2mL.</li>
	</ol></li>
</ol>2. 해산
<ol><li>에탄올 용액<ol><li>2mg/mL의 나린제닌 용액을 준비하려면 3.52mg의 나린제닌을 계량하고 2.0mL 튜브에 넣습니다. 참고: 2mg/mL의 농도를 달성하기 위해 필요한 총 부피는 1760μL입니다(계산: 3.52mg/1760μL = 2mg/mL).</li>
		<li>빠르게 스핀다운하여(2000초 동안 30 x g ) 나린제닌 분말이 튜브 바닥에 가라앉도록 합니다(그림 1A).</li>
		<li>튜브에 8.8 μL의 100 % 에탄올을 첨가하여 필요한 총 부피에 대해 0.5 % (v / v) 용액을 준비합니다2. 나린제닌은 완전히 용해되지 않습니다(그림 1B).</li>
		<li>튜브에 100% 에탄올 79.2μL를 계속 첨가하여 필요한 총 부피에 대해 5%(v/v) 용액을 준비합니다(계산: (79.2μL + 8.8μL) / 1760μL x 100% = 5%). 나린제닌은 완전히 용해되지 않습니다(그림 1B).</li>
		<li>단계 2.1.4에 설명된 대로 5% 에탄올을 포함하는 튜브에 1672μL의 0.9% PS를 추가합니다. 이것은 에멀젼을 생성합니다 (그림 1D). 용액을 원심분리기(30초 동안 2000 x g )하여 나린제닌이 용액에 완전히 용해되었는지 확인하였다. 용해되지 않은 나린제닌의 백색 침전물이 용액에 나타납니다 (그림 1E).</li>
	</ol></li>
	<li>DMSO 솔루션<ol><li>2mg/mL의 나린제닌 용액을 준비하려면 3.95mg의 나린제닌을 칭량하고 2.0mL 튜브에 넣습니다. 참고: 2mg/mL의 농도를 달성하기 위해 필요한 총 부피는 1975μL입니다(계산: 3.95mg/1975μL = 2mg/mL).</li>
		<li>빠르게 스핀다운하여(2000초 동안 30 x g ) 나린제닌 분말이 튜브 바닥에 가라앉도록 합니다.</li>
		<li>튜브에 9.8μL의 DMSO를 추가하여 0.5%(v/v) 용액을 준비합니다(계산: 9.8μL/1975μL x 100% = 5%). 나린제닌은 완전히 용해됩니다(그림 2A).</li>
		<li>88.2 μL의 DMSO를 튜브에 첨가하여 필요한 총 부피에 대해 5%(v/v) 용액을 준비합니다(계산: (88.2 μL + 9.8 μL) /1975 μL x 100% = 5%). 나린제닌은 완전히 용해됩니다(그림 2B).</li>
		<li>1877 μL의 0.9% PS(v/v 퍼센트 중 95%)를 단계 2.2.4에서 제조된 용액에 첨가한다. 에멀젼이 생성됩니다 (그림 1C). 용액을 원심분리기(30초 동안 2000 x g )하여 나린제닌이 용액에 완전히 용해되었는지 확인하였다. 용해되지 않은 나린제닌의 백색 침전물이 용액에 나타납니다 (그림 1D).</li>
	</ol></li>
	<li>트윈-80 및 DMSO 솔루션<ol><li>2mg/mL의 나린제닌 용액을 준비하려면 6.69mg의 나린제닌을 칭량하고 5.0mL 튜브에 넣습니다. 참고: 2mg/mL의 최종 농도를 달성하기 위해 필요한 총 용액 부피는 3345μL입니다(계산: 6.69mg/3345μL = 2mg/mL).</li>
		<li>빠르게 스핀다운하여(2000초 동안 30 x g ) 나린제닌 분말이 튜브 바닥에 가라앉도록 합니다.</li>
		<li>117.7 μL의 DMSO를 첨가하여 필요한 총 부피에 대하여 3.5%(v/v) 용액을 제조합니다(계산: 117.7 μL /3345 μL x 100% = 3.5%). 나린제닌은 완전히 용해됩니다(그림 3A).</li>
		<li>2.3.3 단계에서 제조된 용액에 트윈 80 117.7μL를 첨가하여 3.5%(v/v) 트윈 80 및 3.5%(v/v) DMSO를 달성한다. 나린제닌의 완전한 용해를 관찰합니다(그림 3B).</li>
		<li>2.3.4단계에서 준비한 용액을 0.9% PS(v/v 퍼센트 93%)의 3109.6μL가 포함된 5.0mL 튜브에 천천히 넣고 잘 흔들어 명백한 나린제닌 용액을 얻습니다(그림 3C).</li>
		<li>2.3.5단계에서 제조된 용액을 실온(RT)에서 2시간 동안 그대로 두십시오. 해결책은 가시적 인 침전물없이 여전히 분명합니다 (그림 3D).</li>
	</ol></li>
	<li>생체 내 투여를 위한 나린제닌 용액의 제조<ol><li>단계 1.2.2에 따라 160mg의 나린제닌(160mg/2mg/mL = 80mL)의 무게를 잰다.</li>
		<li>3.5%(v/v) 용액을 얻기 위해 2.8mL의 DMSO를 추가합니다(계산: 2.8mL / 80mL x 100% = 3.5%)</li>
		<li>그런 다음 2.4.2단계에서 제조된 용액에 트윈 80 2.8mL를 추가하여 3.5%(v/v) 트윈 80 및 3.5%(v/v) DMSO를 얻습니다.</li>
		<li>단계 2.4.3에서 제조된 용액을 4개의 튜브에 분취하고, 튜브 당 1.4 mL[(2.8 mL + 2.8 mL)/4 = 1.4 mL].</li>
		<li>0.9% PS의 18.6mL를 5개의 15mL 튜브에 분취합니다.</li>
		<li>단계 2.4.3에서 제조된 용액(원액) 및 2.4.5를 4°C(2.8 mL + 2.8 mL + 18.6 mL x 4 = 80 mL)에서 저장한다.</li>
		<li>140μL의 원액(단계 2.4.3)을 취하여 1860μL의 0.9% PS와 혼합하여 1일 동안 투여할 2mL의 나린제닌 용액을 준비합니다.</li>
		<li>0.2μm 필터를 통해 용액을 여과합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>3. 나린제닌 용액 투여
<ol><li>취급 및 구속<ol><li>뚜껑을 열기 전에 케이지와 손에 70-75 % 알코올을 뿌리십시오. 꼬리 바닥을 잡고 마우스를 단단한 표면에 놓고 꼬리를 부드럽게 뒤로 배치합니다.</li>
		<li>왼쪽 엄지 손가락과 검지로 귀 뒤의 목덜미를 잡고 작은 손가락과 약지 사이에 꼬리를 놓습니다. 뒤쪽 끝이 약간 올라간 상태에서 마우스를 앙와위 자세로 유지하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>주사<ol><li>복부 피부가 팽팽 해 지도록 마우스의 뒤쪽 피부를 잡으십시오.</li>
		<li>방광, 간 또는 기타 내부 장기에 부딪히지 않도록 바늘과 복부 표면 사이, 복부의 오른쪽 아래 또는 왼쪽 사분면 사이에서 10° 각도로 바늘(인슐린 주사기)을 밀어 넣습니다.</li>
		<li>바늘을 두개골 방향으로 3-5mm 피하 투여 한 다음 복강 내로 45 ° 각도로 삽입하십시오.</li>
		<li>바늘이 복벽을 통과하고 저항이 사라지면 흡인을 수행하여 역류 물질이 빠져 나오지 않았는지 확인하십시오. 그런 다음 용액을 천천히 밉니다.</li>
		<li>주입 후 바늘을 천천히 당겨 약간 돌려 누출을 방지하십시오. 권장 부피는 50-100 μL/10 g입니다.</li>
		<li>남은 나린제닌은 생물학적 위험 용기에 폐기하십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>4. 혈당 검사
알림: 주사 1일 전과 주사 후 1개월 및 2개월 후에 혈당을 검사하십시오.
<ol><li>혈당 검사 전에 15 시간 동안 마우스를 금식하십시오. 물은 계속 제공 될 수 있습니다.</li>
	<li>테스트 스트립을 열고 날짜를 표시하십시오. 개봉 후 3개월 이내에 테스트 스트립을 사용하십시오. 테스트 스트립을 2-30 °C에서 보관하십시오. 습기가 형성되지 않도록 스트립을 제거한 후 뚜껑을 단단히 닫으십시오.</li>
	<li>동물을 유도 챔버에 넣습니다. 이소플루란의 경우 4%, 산소의 경우 4L/min의 유도 수준에서 기화기를 켭니다. 동물이 완전히 마취 된 후, 코 콘으로 마취제를 유지하고 마취제 전달을 이소 플루 란의 경우 1.5 %, 산소의 경우 0.4L / min 수준으로 유지하십시오.</li>
	<li>70%-75% 알코올에 적신 면봉/면봉으로 꼬리를 닦습니다.</li>
	<li>꼬리의 가장 낮은 지점에서 시작하여 25G 바늘 찌름으로 측면 꼬리 정맥에 작은 구멍을 뚫고 피 한 방울을 짜냅니다.</li>
	<li>티슈 페이퍼로 혈액 방울을 닦으십시오.</li>
	<li>다른 혈액 한 방울을 짜내고 테스트 스트립의 가장자리에 모으십시오.</li>
	<li>혈당 측정기에 표시된 결과를 읽고 기록하십시오.</li>
	<li>출혈을 멈추려면 멸균 거즈로 마우스 꼬리를 꼬집고 75 % 알코올로 해당 부위를 닦으십시오.</li>
	<li>추가의 샘플은 꼬리를 두개골로 이동하는 유사한 기술에 의해 수득될 수 있다.</li>
</ol>5. 트랩 염색
<ol><li>슬라이드 준비<ol><li>일주일에 한 번 마우스에서 공복 혈당 검사를 수행하십시오. 혈당 수치가 11.1 mmol / L (성공적인 II 형 당뇨병 마우스 모델 24를 나타냄)≥ 때 CO2를 사용하여 마우스를 안락사시킨 다음 자궁 경부 전좌를 수행하고 요추 4-6일 (L4-L6) (공복 혈당 검사 중에는 안락사가 수행되지 않음).</li>
		<li>L4-L6 샘플을 4% 파라포름알데히드로 24시간 동안 고정한 다음(파라포름알데히드의 부피가 조직 부피의 >20배인지 확인) 수돗물의 연속 흐름에서 2시간 동안 세척합니다.</li>
		<li>샘플을 석회질을 제거하려면 샘플이 연화 될 때까지 정적 조건에서 RT에서 2 주 동안 10 % 에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA) 용액에 담그십시오. 석회질 제거 용액의 부피가 조직/샘플 부피의 20-30배인지 확인하십시오. EDTA 솔루션을 격일로 변경하십시오.</li>
		<li>탈수기를 사용하여 샘플을 탈수하십시오.<ol><li>표본을 조직 처리 내장 카세트에 넣습니다. 연필을 사용하여 카세트에 번호를 매기십시오.</li>
			<li>탈수기 프로그램을 다음과 같이 설정하십시오 : 2 시간 동안 75 % 알코올, 1 시간 동안 85 % 알코올, 1 시간 동안 95 % 알코올, 2 시간 동안 95 % 알코올, 2 시간 동안 무수 에탄올 (I), 2 시간 동안 무수 에탄올 (II), 2 시간 동안 무수 에탄올 (III), 1 시간 동안 크실렌 (I), 1 시간 동안 크실렌 (II), 1 시간 동안 크실렌 (III), 파라핀 왁스 (I)는 2 시간 동안, 파라핀 왁스 (II)는 2 시간 동안 RT에서.</li>
		</ol></li>
		<li>샘플을 파라핀 왁스에 삽입합니다.<ol><li>파라핀 임베딩 스테이션의 카세트 트레이에 파라핀 왁스를 넣고 60 °C로 가열합니다. 탈수된 표본을 최소 2시간 동안 담그십시오.</li>
			<li>티슈 카세트를 카세트 트레이에 넣고 예열합니다.</li>
			<li>파라핀 저장소에 파라핀 왁스를 넣고 60 ° C로 가열합니다.</li>
			<li>2시간 후 조직 카세트와 표본을 모두 작업 영역으로 가져갑니다. 예열 된 파라핀 왁스를 파라핀 저장소에서 조직 카세트에 붓습니다. 표본을 파라핀 왁스에 넣고 파라핀 왁스가 조직을 완전히 덮는지 확인한 다음 즉시 카세트를 착빙 스테이션으로 옮깁니다.</li>
			<li>마이크로톰을 사용하여 파라핀이 내장된 샘플을 5-6μm 섹션으로 절단합니다. 섹션을 40°C의 따뜻한 물에 10초 미만 동안 펼칩니다. APS(아미노 실란) 코팅 유리 슬라이드에서 섹션을 수집합니다. 슬라이드를 RT에서 1시간 동안 건조시킨 다음 슬라이드를 60°C로 설정된 오븐으로 밤새 옮깁니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>트랩 시약 준비<ol><li>기본 스톡 배양 용액 준비: 무수 아세트산나트륨 9.2g, L-(+) 타르타르산 11.4g, 빙산 2.8mL를 증류수 1000mL에 녹입니다. pH를 4.7-5.0으로 조정하고 최대 6 개월 동안 RT에서 보관하십시오.</li>
		<li>나프톨 에테르 용액 준비: 에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 5mL에 나프톨 AS-BI 인산염 0.1g을 녹입니다. 4°C에서 최대 5주 동안 보관하십시오.</li>
		<li>아질산나트륨 용액 준비: 아질산나트륨 1g을 증류수 25mL에 녹입니다. 4 °C에서 보관하십시오.</li>
		<li>파라로사닐린 염료 준비: 2N HCl 20mL(물 417mL에 HCl 83mL)에 파라로사닐린 염기 1g을 추가합니다. 교반 플레이트를 사용하여 베이스를 녹이고 사용하기 전에 여과하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>트랩 염색<ol><li>두 개의 코플린 병에 50mL의 기본 스톡 배양 용액을 채우고 37°C 오븐에 2시간 동안 둡니다.</li>
		<li>코플린 병 1 개를 가져 와서 0.5mL의 나프톨 에테르 용액을 첨가하십시오.</li>
		<li>슬라이드를 Coplin 병에 넣고 37°C에서 1시간 동안 배양합니다. 참고: 각 그룹에 대해 최소 3개의 슬라이드를 준비합니다.</li>
		<li>배양 시간이 끝나기 몇 분 전에 아질산 나트륨 용액 1mL와 파라로 사닐린 염료 1mL를 첨가하십시오. 30초 동안 부드럽게 섞고 2분 동안 그대로 두십시오.</li>
		<li>5.2.2단계에서 준비한 용액을 기본 저장 용액이 들어 있는 예열된 다른 Coplin 병에 추가합니다. 용액을 잘 혼합하고 5.3.3 단계에서 Coplin 용기에서 슬라이드를 삽입합니다.</li>
		<li>RT에서 15-20 분 동안 배양하십시오.</li>
		<li>다른 코플린 병에 200mL의 PBS로 슬라이스를 5분 동안 헹굽니다.</li>
		<li>Coplin 병에 100 초 동안 30 % 헤 마톡실린으로 슬라이스를 카운터 염색합니다.</li>
		<li>슬라이스를 85%, 95%, 100% 알코올(200mL)로 각각 2분 동안 탈수하고 크실렌(200mL)에서 2분 동안 3회 처리합니다. 코플린 병을 사용하여 각 단계를 수행하십시오.</li>
		<li>수지를 사용하여 커버 슬립으로 커버 유리의 섹션을 고정합니다. 기포가 끼이지 않도록하십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>6. 엘리사
<ol><li>샘플 준비<ol><li>마우스의 대퇴골과 경골에서 연조직을 제거하십시오. 거즈로 뼈를 청소하십시오.</li>
		<li>뼈 샘플을 1mL 미세 원심분리 튜브에 넣고 샘플 튜브를 -80°C에서 보관합니다. 알림: 샘플은 액체 질소 탱크에 6 개월 이상 보관할 수도 있습니다.</li>
		<li>뼈 샘플의 무게를 잰다. 1:10의 비율로 0.9 % PS로 희석하십시오. 예를 들어, 0.1g의 뼈를 1mL의 PS로 희석하십시오.</li>
		<li>튜브에 3mm 지르코니아 비드를 추가하고 샘플을 70Hz에서 30초 동안 3x 분쇄하고 그 사이에 20초 휴식을 취합니다.</li>
		<li>샘플을 4°C 및 12,000 x g 에서 5분 동안 원심분리합니다. 상청액을 수집하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>엘리사 분석 키트 알림: 제조업체에서 지정한 분석 프로토콜에 따라 ELISA를 수행하십시오.<ol><li>표준물질, 블랭크 및 시료의 각 희석액 100μL를 적절한 웰에 추가합니다. 37°C에서 90분 동안 배양한다.</li>
		<li>각 웰에서 액체를 따라 내고 100μL의 비오티닐화 검출 항체 작업 용액을 추가합니다. 37°C에서 1시간 동안 배양합니다.</li>
		<li>용액을 따라 내고 각 웰에 350 μL의 세척 완충액을 첨가한다. 1 분 동안 담그고 3 번 반복하십시오.</li>
		<li>각 웰에 100μL의 HRP 접합체 작업 용액을 추가합니다. 37°C에서 30분 동안 배양합니다.</li>
		<li>솔루션을 따라 내십시오. 6.2.3단계에 설명된 대로 세척 과정을 5회 반복합니다.</li>
		<li>기질 시약 90μL를 추가합니다. 빛으로부터 보호되는 37°C에서 15분 동안 배양합니다.</li>
		<li>정지 용액 50μL를 추가합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>플레이트 리더를 사용하여 450nm에서 각 웰의 흡광도를 기록합니다.</li>
	<li>표준 곡선 생성<ol><li>연속적으로 희석된 단백질 농도에 대한 각각의 평균 흡광도 값을 플로팅합니다.</li>
		<li>점을 결합하여 최적 맞춤 곡선을 만듭니다. 적절한 컴퓨터 응용 프로그램(스프레드시트)을 사용하여 표준 곡선 방정식을 생성합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>각 시료의 흡광도 값을 표준곡선 방정식에 대입하여 각 시료의 농도를 구한다.</li>
</ol>

<ol><li>Stoye, D. Solvents. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStoye%2C+D+%22Ullmann%27s+Encyclopedia+of+Industrial+Chemistry%22">Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry</a>. , Wiley Online Library. (2000).</li>
<li>Bouchard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+solvent-based+dissolution+method+to+sample+volatile+organic+compound+vapors+for+compound-specific+isotope+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+A%22%5BJournal%5D)">Optimization of the solvent-based dissolution method to sample volatile organic compound vapors for compound-specific isotope analysis.</a> Journal of Chromatography A. 1520, 23-34 (2017).</li>
<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+substances+to+laboratory+animals%3A+routes+of+administration+and+factors+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%3A+JAALAS%22%5BJournal%5D)">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 50 (5), 600-613 (2011).</li>
<li>Vandenberg, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormones+and+endocrine-disrupting+chemicals%3A+low-dose+effects+and+nonmonotonic+dose+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Hormones and endocrine-disrupting chemicals: low-dose effects and nonmonotonic dose responses.</a> Endocrine Reviews. 33 (3), 378-455 (2012).</li>
<li>Hernández-Aquino, E., Muriel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effects+of+naringenin+in+liver+diseases%3A+Molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Beneficial effects of naringenin in liver diseases: Molecular mechanisms.</a> World Journal of Gastroenterology. 24 (16), 1679-1707 (2018).</li>
<li>Den Hartogh, D. J., Tsiani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antidiabetic+properties+of+naringenin%3A+A+citrus+fruit+polyphenol%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Antidiabetic properties of naringenin: A citrus fruit polyphenol.</a> Biomolecules. 9 (3), (2019).</li>
<li>Tutunchi, H., Naeini, F., Ostadrahimi, A., Hosseinzadeh-Attar, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naringenin%2C+a+flavanone+with+antiviral+and+anti-inflammatory+effects%3A+A+promising+treatment+strategy+against+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Naringenin, a flavanone with antiviral and anti-inflammatory effects: A promising treatment strategy against COVID-19.</a> Phytotherapy Research. 34 (12), 3137-3147 (2020).</li>
<li>Zaidun, N. H., Thent, Z. C., Latiff, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combating+oxidative+stress+disorders+with+citrus+flavonoid%3A+Naringenin%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Combating oxidative stress disorders with citrus flavonoid: Naringenin.</a> Life Sciences. 208, 111-122 (2018).</li>
<li>Tsuhako, R., Yoshida, H., Sugita, C., Kurokawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naringenin+suppresses+neutrophil+infiltration+into+adipose+tissue+in+high-fat+diet-induced+obese+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Medicines%22%5BJournal%5D)">Naringenin suppresses neutrophil infiltration into adipose tissue in high-fat diet-induced obese mice.</a> Journal of Natural Medicines. 74 (1), 229-237 (2020).</li>
<li>Annadurai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antihyperglycemic+and+anti-oxidant+effects+of+a+flavanone%2C+naringenin%2C+in+streptozotocin-nicotinamide-induced+experimental+diabetic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Antihyperglycemic and anti-oxidant effects of a flavanone, naringenin, in streptozotocin-nicotinamide-induced experimental diabetic rats.</a> Journal of Physiology and Biochemistry. 68 (3), 307-318 (2012).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naringenin+improves+insulin+sensitivity+in+gestational+diabetes+mellitus+mice+through+AMPK%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrition+%26+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Naringenin improves insulin sensitivity in gestational diabetes mellitus mice through AMPK.</a> Nutrition & Diabetes. 9 (1), 28(2019).</li>
<li>Devan, S., Janardhanam, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Naringenin+on+metabolic+markers%2C+lipid+profile+and+expression+of+GFAP+in+C6+glioma+cells+implanted+rat%27s+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Effect of Naringenin on metabolic markers, lipid profile and expression of GFAP in C6 glioma cells implanted rat's brain.</a> Annals of Neurosciences. 18 (4), 151-155 (2011).</li>
<li>Burke, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naringenin+enhances+the+regression+of+atherosclerosis+induced+by+a+chow+diet+in+Ldlr-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Naringenin enhances the regression of atherosclerosis induced by a chow diet in Ldlr-/- mice.</a> Atherosclerosis. 286, 60-70 (2019).</li>
<li>Assini, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naringenin+prevents+obesity%2C+hepatic+steatosis%2C+and+glucose+intolerance+in+male+mice+independent+of+fibroblast+growth+factor+21%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Naringenin prevents obesity, hepatic steatosis, and glucose intolerance in male mice independent of fibroblast growth factor 21.</a> Endocrinology. 156 (6), 2087-2102 (2015).</li>
<li>Alifarsangi, A., Esmaeili-Mahani, S., Sheibani, V., Abbasnejad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+citrus+flavanone+naringenin+prevents+the+development+of+morphine+analgesic+tolerance+and+conditioned+place+preference+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Drug+and+Alcohol+Abuse%22%5BJournal%5D)">The citrus flavanone naringenin prevents the development of morphine analgesic tolerance and conditioned place preference in male rats.</a> The American Journal of Drug and Alcohol Abuse. 47 (1), 43-51 (2020).</li>
<li>Sirovina, D., Oršolić, N., Gregorović, G., Končić, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naringenin+ameliorates+pathological+changes+in+liver+and+kidney+of+diabetic+mice%3A+a+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Occupational+Hygiene+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Naringenin ameliorates pathological changes in liver and kidney of diabetic mice: a preliminary study.</a> Archives of Occupational Hygiene and Toxicology. 67 (1), 19-24 (2016).</li>
<li>Nguyen-Ngo, C., Willcox, J. C., Lappas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-diabetic%2C+anti-inflammatory%2C+and+anti-oxidant+effects+of+Naringenin+in+an+In+vitro+human+model+and+an+in+vivo+murine+model+of+gestational+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Nutrition+%26+Food+Research%22%5BJournal%5D)">Anti-diabetic, anti-inflammatory, and anti-oxidant effects of Naringenin in an In vitro human model and an in vivo murine model of gestational diabetes mellitus.</a> Molecular Nutrition & Food Research. 63 (19), 1900224(2019).</li>
<li>Ahmed, L. A., Obaid, A. A. Z., Zaki, H. F., Agha, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naringenin+adds+to+the+protective+effect+of+L-arginine+in+monocrotaline-induced+pulmonary+hypertension+in+rats%3A+favorable+modulation+of+oxidative+stress%2C+inflammation+and+nitric+oxide%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Naringenin adds to the protective effect of L-arginine in monocrotaline-induced pulmonary hypertension in rats: favorable modulation of oxidative stress, inflammation and nitric oxide.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 62, 161-170 (2014).</li>
<li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naringenin+ameliorates+kainic+acid-induced+morphological+alterations+in+the+dentate+gyrus+in+a+mouse+model+of+temporal+lobe+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Naringenin ameliorates kainic acid-induced morphological alterations in the dentate gyrus in a mouse model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroreport. 27 (15), 1182-1189 (2016).</li>
<li>Matsui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early-stage+Type+2+diabetes+mellitus+impairs+erectile+function+and+neurite+outgrowth+from+the+major+pelvic+ganglion+and+downregulates+the+gene+expression+of+neurotrophic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Early-stage Type 2 diabetes mellitus impairs erectile function and neurite outgrowth from the major pelvic ganglion and downregulates the gene expression of neurotrophic factors.</a> Urology. 99, 1-7 (2017).</li>
<li>Sharma, G., Ashhar, M. U., Aeri, V., Katare, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+late-stage+diabetes+mellitus+and+-associated+vascular+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of late-stage diabetes mellitus and -associated vascular complications.</a> Life Sciences. 216, 295-304 (2019).</li>
<li>Rowe, R. C., Sheskey, P. J., Owen, S. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRowe%2C+RC+%22Handbook+of+Pharmaceutical+Excipients%22">Handbook of Pharmaceutical Excipients</a>. , Pharmaceutical Press. London, Chicago. (2003).</li>
<li>Fallahi, F., Roghani, M., Moghadami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Citrus+flavonoid+naringenin+improves+aortic+reactivity+in+streptozotocin-diabetic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Citrus flavonoid naringenin improves aortic reactivity in streptozotocin-diabetic rats.</a> Indian Journal of Pharmacology. 44 (3), 382-386 (2012).</li>
<li>Liu, F., Yang, H., Zhou, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+characteristics+of+induced+and+spontaneous+db%2Fdb+mouse+models+of+type+2+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Laboratorium+Animalis+Scientia+Sinica%22%5BJournal%5D)">Comparison of the characteristics of induced and spontaneous db/db mouse models of type 2 diabetes mellitus.</a> Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica. 22 (6), 54-59 (2014).</li>
<li>Liu, S., Dong, J., Bian, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dual+regulatory+effect+of+naringenin+on+bone+homeostasis+in+two+diabetic+mice+models%5BTitle%5D)+AND+%22Traditional+Medicine+and+Modern+Medicine%22%5BJournal%5D)">A dual regulatory effect of naringenin on bone homeostasis in two diabetic mice models.</a> Traditional Medicine and Modern Medicine. 03 (02), 101-108 (2020).</li>
<li>Sun, C., Wu, Z., Wang, Z., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ethanol%2Fwater+solvents+on+phenolic+profiles+and+anti-oxidant+properties+of+beijing+propolis+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of ethanol/water solvents on phenolic profiles and anti-oxidant properties of beijing propolis extracts.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2015, 595393(2015).</li>
<li>Huaman-Castilla, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+temperature+and+ethanol+concentration+on+the+global+recovery+of+specific+polyphenols+in+an+integrated+HPLE%2FRP+process+on+carm%C3%A9n%C3%A8re+pomace+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">The impact of temperature and ethanol concentration on the global recovery of specific polyphenols in an integrated HPLE/RP process on carménère pomace extracts.</a> Molecules. 24 (17), Basel, Switzerland. (2019).</li>
<li>van Thriel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicology+of+solvents+%28including+alcohol%29%5BTitle%5D)+AND+%22Reference+Module+in+Biomedical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Toxicology of solvents (including alcohol).</a> Reference Module in Biomedical Sciences. , (2014).</li>
<li>Linakis, J. G., Cunningham, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+concentration+of+ethanol+injected+intraperitoneally+on+taste+aversion%2C+body+temperature%2C+and+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Effects of concentration of ethanol injected intraperitoneally on taste aversion, body temperature, and activity.</a> Psychopharmacology. 64 (1), 61-65 (1979).</li>
<li>Magwaza, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+methods+for+extracting+and+quantifying+phenolic+compounds+in+citrus+rinds%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Science+%26+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Rapid methods for extracting and quantifying phenolic compounds in citrus rinds.</a> Food Science & Nutrition. 4 (1), 4-10 (2016).</li>
<li>Smith, E. R., Hadidian, Z., Mason, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+single--and+repeated--dose+toxicity+of+dimethyl+sulfoxide%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">The single--and repeated--dose toxicity of dimethyl sulfoxide.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 141 (1), 96-109 (1967).</li>
<li>Colucci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+of+dimethyl+sulphoxide+effects+%28DMSO%29+on+experimental+in+vivo+models+of+nociception+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">New insights of dimethyl sulphoxide effects (DMSO) on experimental in vivo models of nociception and inflammation.</a> Pharmacological Research. 57 (6), 419-425 (2008).</li>
<li>Kawakami, K., Oda, N., Miyoshi, K., Funaki, T., Ida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solubilization+behavior+of+a+poorly+soluble+drug+under+combined+use+of+surfactants+and+co-solvents%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Solubilization behavior of a poorly soluble drug under combined use of surfactants and co-solvents.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 28 (1-2), 7-14 (2006).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

식물 화학 용액의 제조는 생체 내에서의 적용을위한 기초입니다. 이 프로토콜에서, 나린제닌 용액의 제조는 에탄올, DMSO, Tween 80 및 0.9% PS와 같은 상이한 용매를 사용하여 입증되었다. 완전히 용해된 상태의 용액은 몇 시간 동안 실온에 유지되도록 하여 추가로 모니터링한 다음 생체 내에서 사용하기 전에 여과해야 합니다.
용매 측정은 이 프로토콜에서 중요한 단계입니다. 화합물을 용해시키기위한 많은 용매 옵션이 있으며, 그 중 에탄올, DMSO 및 PS가 가장 널리 사용됩니다. 에탄올은 극성이 높은 특성으로 인해 많은 수 불용성 화합물을 용해시켜 수소 결합을 허용하여 극성 및 비극성 물질을 모두 용해시킬 수 있습니다. 또한, 에탄올의 농도는 식물 화학 화합물의 특성을 결정할 수 있습니다. 예를 들어, 75 중량 % 에탄올 / 물 용매는 폴리 페놀의 가장 높은 수율을 추출하는 데 가장 적합한 것으로 간주되며 가장 강력한 항산화 특성을 가지고...

약물 스크리닝을위한 식물 화학 화합물의 사용에 관한 연구가 증가함에 따라 최적의 효과를 평가하기 위해 식물 화학 용액을 준비하는 접근법에주의를 기울일 가치가 있습니다. 용해 방법, 투여량 및 농도와 같은 많은 측면이 화합물1을 제조할 때 고려되어야 한다.
용매 기반 용해는 유기 화합물 제조1에 널리 사용됩니다. 일반적으로 사용되는 용매에는 물, 오일, 디메틸 설폭 사이드 (DMSO), 메탄올, 에탄올, 포름산, 트윈, 글리세린 등이 포함됩니다2. 화합물이 위 위관영양에 의해 투여될 때 용해되지 않은 물질이 포함된 현탁액이 허용되지만, 완전히 용해된 용질은 정맥내 투여에 중요합니다. 오일 용액, 현탁액 및 에멀젼은 모세관 색전증을 유발할 수 있으므로, 특히 정맥 내, 근육 내 및 복강 내 주사를 투여 할 때 화합물 제조를위한 수용액이 제안됩니다3.
유효 용량 범위는 화합물마다 다르며 동일한 화합물로 치료되는 질병 사이에서도 다양합니다. 유효 및 안전한 용량과 농도의 결정은 문헌 및 예비 실험4에 의존한다. 여기서, 나린제닌 화합물의 제조가 예로서 입증된다.
폴리페놀 화합물인 나린제닌(4,5,7-트리하이드록시-플라바논)은 간 보호5, 항당뇨병6, 항염증제7 및 항산화 활성8에 대한 질병 치료에 연구되었습니다. 생체 내 적용의 경우, 나린제닌의 경구 투여가 일반적으로 사용됩니다. 이전 연구에서는 경구 위관 영양 9,10,11,12로 투여되는 50-100mg/kg의 0.5%-1% 카르복시메틸셀룰로오스, 0.5% 메틸셀룰로오스 용량, 0.01% DMSO 및 생리식염수(PS)에 나린제닌 용액을 준비하는 것을 보고했습니다. 게다가, 다른 연구에서는 3g/kg/d 3.6의 용량으로 경구 섭취를 위해13,14%(wt/wt)의 차우로 나린제닌을 보충했다고 보고했습니다. 연구에서는 에탄올 (0.5 % v / v), PS 및 DMSO를 사용하여 10-50 mg / kg15,16,17,18에서 복강 내 주사 용 나린 제닌을 용해시키는 것으로보고되었습니다. 측두엽 간질에 대한 연구에서, 마우스는 PS19에 용해 된 0.25 % 카르복시 메틸 셀룰로오스에 현탁 된 나린 제닌을 주사 받았다. 이러한 연구에서는 나린제닌 용액을 준비하기 위해 다른 용매를 사용했다고 보고하지만 용해 상태 및 동물 반응과 같은 자세한 내용은 보고되지 않았습니다.
이 프로토콜은 당뇨병 유발 골다공증에서 생체 내 적용을 위한 나린제닌 용액을 제조하는 절차를 소개합니다. 주사액의 제조는 용매 및 화합물의 제조, 투여량 추정, 용해 공정 및 여과를 포함한다. 투여량은 문헌 연구 및 예비 실험을 기반으로 3일 동안 매일 주사를 투여한 후 마우스를 모니터링하고 마우스 행동에 따라 투여량을 수정하여 결정하였다. 최종 선택된 농도 (20 mg / kg BW)는 고지방 식단과 스트렙토 조 토신 (STZ) 유발 당뇨병 마우스20,21에서 8 주 동안 주당 5 일 복강 내 투여되었습니다. 당뇨병성 골다공증에서 나린제닌의 효과는 혈당 검사, 마이크로 CT, 주석산 내성 산 포스파타제(TRAP) 염색 및 효소 결합 면역 흡착 분석(ELISA)에 의해 평가되었습니다.
전반적으로, 40-400 mg / mL의 농도 범위에서 나린 제닌은 에탄올 또는 DMSO 또는 5 % (에탄올 또는 DMSO)와 95 % PS (v / v)에 완전히 용해되지 않는 것으로 관찰되었다. 그러나, 나린제닌은 3.52% DMSO, 3.52% 트윈 80, 및 92.96% PS의 혼합물에 완전히 용해되었다. 자세한 절차는 연구자가 생체 내 적용을 위한 주사 용액으로 화합물을 준비하는 데 도움이 될 것입니다.

<table><tbody><tr><td>1.5 mL&nbsp; 마이크로튜브Corning</td><td>Science (Wujiang) Co.</td><td>23218392</td><td>홀딩 액체</td></tr><tr><td>자동 탈수기</td><td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td><td>LEICA ASP 300S</td><td>탈수 샘플</td></tr><tr><td>혈당 테스트 스트립</td><td>Johnson & 존슨 (중국) Medical Equipment Co.</td><td></td><td></td>4130392</tr><tr><td>원심분리기</td><td>MIULAB</td><td>미세한 원심분리기</td><td>원심분리기 원심분리기</td></tr><tr><td>탈수기</td><td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td><td>라이카&nbsp; ASP300S</td><td>탈수</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>E918BA0041</td><td>Co-Solvent</td></tr><tr><td>ELISA 분석 키트</td><td>Elabscience Biotechnology Co., Ltd</td><td>마우스 COL1(콜라겐 타입 I) ELISA 키트: E-EL-M0325c 마우스&nbsp; CTX I ELISA 키트: E-EL-M0366c 마우스 PICP ELISA 키트: E-EL-M0231c 마우스 PINP ELISA 키트: E-EL-M0233c</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 앱솔루트</td><td>시노팜 화학 시약Co., Ltd</td><td>10009218</td><td>Co-Solvent</td></tr><tr><td>에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td>A501118-0500</td><td>TRAP 염색</td></tr><tr><td>에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)</td><td>시노팜 화학 시약(주</td><td>) 10009617</td><td>석회질</td></tr><tr><td>제거 필터</td><td>Merck Millpore LTD.</td><td>Millex-GP, 0.22 &마이크로; m</td><td>필터 용액</td></tr><tr><td>빙산</td><td>Sinopharm 화학 시약Co., Ltd</td><td>10000218</td><td>TRAP 염색</td></tr><tr><td>포도당 측정기</td><td>Johnson & 존슨 (중국) Medical Equipment Co.</td><td>원터치 울트라 뷰</td><td>일련 번호:COJJG8GW</td></tr><tr><td>그라인더</td><td>Shanghaijingxin Experimental Technology</td><td>Tissuelyser-24</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute</td><td>D005</td><td>TRAP</td></tr><tr><td>염색 인슐린 주사기</td><td>Shanghai Kantaray Medical Devices Co.</td><td>0.33 mm x 13 mm, RW LB</td><td>복강 내 주사</td></tr><tr><td>L-(+) 주석산</td><td>Sinopharm 화학 시약Co., Ltd</td><td>100220008</td><td>TRAP 염색</td></tr><tr><td>현미경</td><td>OLYMPUS</td><td>sz61</td><td>관측</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica Microsystems (Shanghai) Trading Co.</td><td>LEICA RM 2135</td><td>단면</td></tr><tr><td>소형 분리기</td><td>Hangzzhou Miu Instruments Co., Ltd.</td><td>&nbsp; 소형 6KC</td><td>분리기</td></tr><tr><td>나프톨 AS-BI 인산염</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>BCBS3419</td><td>트랩 염색</td></tr><tr><td>Naringenin</td><td>Jiangsu Yongjian Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>102764</td><td>용질</td></tr><tr><td>파라핀 임베딩 스테이션</td><td>Leica Microsystems (Shanghai) Co.</td><td>라이카&nbsp; EG 1150 H, 라이카&nbsp; EG 1150 C</td><td>Embed&nbsp;</td></tr><tr><td>샘플 Pararosaniline base</td><td>BBI Life Sciences</td><td>E112BA0045</td><td>TRAP</td></tr><tr><td>염색 피펫</td><td>eppendorf</td><td>2&ndash; 20 & 마이크로; L, 100&ndash; 1000 &마이크로; L, 20&ndash; 200 &마이크로; L</td><td>&nbsp; 전사식 액체</td></tr><tr><td>플레이트 리더</td><td>BioTek Instruments USA, Inc.</td><td>BioTek CYTATION 3 이미징 리더</td><td>ELISA</td></tr><tr><td>수지</td><td>Shanghai Yyang Instrument Co., Ltd.</td><td>중성 발삼</td><td>TRAP 염색</td></tr><tr><td>식염수(0.9 PS)</td><td>Baxter Healthcare (Shanghai) Co., Ltd</td><td>A6E1323</td><td>용제</td></tr><tr><td>아세트산 나트륨 무수</td><td>Sinopharm 화학 시약Co., Ltd</td><td>Merck-1.06268.0250 | 250g</td><td>TRAP 염색</td></tr><tr><td>아질산나트륨</td><td>Sinopharm 화학 시약Co., Ltd</td><td>10020018</td><td>TRAP 염색</td></tr><tr><td>Tween-80</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., 주식 회사.</td><td>E819BA0006</td><td>유화제</td></tr><tr><td>지르코니아 구슬</td><td>Shanghaijingxin 실험 기술</td><td>11079125z 454g</td><td>연삭</td></tr></tbody></table>

생체 내 적용을 위한 나린제닌 용액의 제조

Preparation of Naringenin Solution for In Vivo Application

화합물(파이토케미컬) 용액의 제조는 약물 스크리닝과 같은 연구에 적용되기 전에 간과되지만 중요한 단계입니다. 화합물의 완전한 가용화는 안전한 사용과 비교적 안정적인 결과를 위해 필요합니다. 여기서, 고지방 식이에서 나린제닌 용액을 제조하고 이의 복강내 투여를 위한 프로토콜과 스트렙토조토신(STZ) 유도 당뇨병 모델을 예로 들 수 있다. 소량의 나린제닌(3.52-6.69mg)을 사용하여 각각 에탄올, 디메틸설폭사이드(DMSO) 및 DMSO 플러스 생리 식염수(PS)로 재구성한 트윈 80을 포함한 용매에서 가용화를 테스트했습니다. 화합물의 완전한 가용화는 용액의 색상, 원심 분리 후 침전물의 존재 여부 (30 초 동안 2000 x g ) 또는 용액을 실온 (RT)에서 2 시간 동안 방치함으로써 결정된다. 안정한 화합물 / 식물 화학 용액을 얻은 후, 생체 내 연구에 필요한 화합물의 최종 농도 / 양은 용매 전용 (PS 없음) 스톡 용액에서 제조 한 다음 원하는대로 PS와 희석 / 혼합 할 수 있습니다. 마우스에서 나린제닌의 항당뇨병 골다공증 효과(20mg/kg BW, 2mg/mL에서 복강 내 투여)는 혈당, 골량(micro-CT) 및 골 흡수율(TRAP 염색 및 ELISA)을 측정하여 평가했습니다. 상세한 유기/식물화학 용액 준비를 원하는 연구원은 이 기술의 이점을 누릴 수 있습니다.

고지방 식이 및 STZ 유발 당뇨 마우스의 체중은 STZ 처리 후 0-8주에서 대조군과 비교하였을 때 감소하는 것으로 나타났다. 나린제닌 처리된 마우스의 체중 감소는 4주차에 처리되지 않은 마우스(STZ 그룹)에 비해 유의했습니다. 대조군과 STZ 그룹은 동일한 부피의 PS를 투여하였다(표 1). 당뇨병 마우스의 혈당 수치는 STZ 유도 후 1 개월 이내에 극적으로 증가했습니다. 그런 다음 동물 모델이 확립되었을 때 2 개월 전에 관찰 된 수준으로 자동으로 감소했습니다. 나린제닌 치료는 1개월과 2개월에 혈당 수치를 각각 51.8% 및 34.8% 낮췄습니다(표 2). STZ 유발 당뇨병 마우스는 각각 뼈 부피/조직 부피(BV/TV)(30.97%) 및 섬유주 수(Tb.N)(11.4%)의 감소로 나타난 바와 같이 골 손실을 나타냈습니다. 이 두 매개 변수 값의 변화는 나린제닌 치료가 뼈 손실을 크게 구출했음을 시사합니다 (표 3). N.oc/...

여기서, 상기 프로토콜은 생체내 복강 내 투여를 위한 나린제닌 용액의 제조를 제시한다. 나린제닌은 디메틸설폭사이드, 트윈 80 및 식염수의 혼합물에 완전히 용해된다. 나린제닌의 항당뇨병성 골다공증 효과는 혈당 검사, 주석산 내성 산 포스파타제 염색 및 효소 결합 면역 흡착 분석에 의해 평가되었습니다.

The preparation of a compound (phytochemical) solution is an overlooked but critical step prior to its application in studies such as drug screening. The ...

최적의 효과 평가를 위해 식물 화학 용액을 제조하기위한 약물 스크리닝 접근법을위한 식물 화학 성분에 대한 연구가 증가함에 따라이 프로토콜의 장점은 간단한 조작과 저렴한 비용이었습니다. 이 프로토콜은 약리학의 약물 스크리닝을 다루는 연구자에게 도움이 될 것입니다. 소비 비용을 고려하여 예비 실험을 위해 소량의 식물 화학 화합물로 시작하는 것이 좋습니다.둘째, 일반 주사기 위에 인슐린 주사기를 사용하는 것이 좋습니다 에탄올에서 밀리리터 당 2 밀리그램의 나린 제닌 용액을 준비하려면 3.52 밀리그램의 나린 제닌 분말의 무게를 달아 2 밀리리터 튜브에 첨가하십시오. 튜브를 빠르게 돌려 튜브 바닥에 분말을 정착시킵니다. 다음으로 8.8 마이크로 리터의 100 % 에탄올을 튜브에 첨가하여 0.5 % 용액을 준비합니다.그런 다음 79.2 마이크로 리터의 100 % 에탄올을 튜브에 첨가하여 5 % 용액을 준비합니다. 다음으로, 1.672 % 용액이 들어있는 튜브에 0.9 % 생리 식염수 5 밀리리터를 첨가하십시오. 이것은 에멀젼을 생성합니다.그런 다음 원심 분리기는 나린 제닌이 용액에 완전히 용해되었는지 확인하기 위해 튜브를 거부했습니다. 용해되지 않은 나린 제닌의 백색 침전물이 용액에 나타날 수 있습니다. 다음으로, DMSO에서 밀리리터 당 2 밀리그램의 나린 제닌 용액을 준비하기 위해, 3.95 밀리그램의 나린 제닌 분말의 무게를 달아 2 밀리리터 튜브에 첨가한다.빠른 회전 후 9.8ml의 DMSO를 튜브에 추가하여 8.5 % 용액을 준비합니다. 그런 다음 88.2 마이크로 리터의 DMSO를 튜브에 첨가하여 5 % 용액을 준비합니다. 다음으로 1.877 밀리리터의 0.9 % 식염수를 용액에 첨가하십시오.이로 인해 에멀젼이 생성됩니다. 용액을 원심분리하여 나린제닌이 완전히 용해되었는지 확인합니다. 용해되지 않은 백색 침전물이 용액에 나린제닌이 나타날 수 있습니다.다음으로, Tween 80 및 DMSO에서 밀리리터 당 2 밀리그램의 나린 제닌 용액을 준비하고, 6.69 밀리그램의 나린 제닌 분말의 무게를 달아 5 밀리리터 튜브에 첨가한다. 튜브를 빠르게 스핀다운하고 117.7마이크로리터의 DMSO를 추가하여 3.5% 용액을 준비합니다. 그런 다음 117.7 마이크로 리터의 트윈 80을 용액에 첨가하여 3.5 % 트윈 80 및 3.5 % DMSO 농도를 얻습니다.이 용액을 3109.6 마이크로 리터의 0.9 % 식염수가 들어있는 다른 5 밀리리터 튜브에 천천히 첨가하고 잘 흔들어 투명한 나린 제닌 용액을 얻습니다. 2 시간 후, 용액은 눈에 보이는 침전물없이 깨끗하게 유지됩니다. 나린제닌 용액을 투여하려면 5주 된 C57 검은 수컷 6마리 쥐의 꼬리 밑부분을 들어 올려 꼬리를 부드럽게 뒤로 젖히는 단단한 표면에 놓습니다.그런 다음 왼쪽 엄지 손가락과 검지로 귀 뒤의 목 자국을 잡고 꼬리를 새끼 손가락과 약지 사이에 놓습니다. 뒤쪽 끝이 약간 올라간 상태에서 마우스를 앙와위 자세로 유지하십시오. 나린제닌 용액을 주입하려면 복부 피부가 팽팽해지도록 마우스 등의 피부를 잡습니다.그런 다음 바늘을 복부의 오른쪽 아래 또는 왼쪽 사분면에 10도 각도로 밀어 넣습니다. 방광, 간 또는 기타 내부 장기에 부딪히지 않도록하십시오. 바늘을 두개골 방향으로 3-5 밀리미터 동안 피하 실행 한 다음 복강 내로 45도 각도로 삽입하십시오.바늘이 복벽을 통과하면 천천히 용액을 밀어냅니다. 주사 후 바늘을 천천히 당겨 누출을 방지하기 위해 약간 회전시킵니다. 혈당 검사를 수행하려면 테스트 스트립을 열고 날짜를 표시하십시오.25 게이지 바늘 찌름으로 측면 꼬리 정맥에 작은 구멍을 뚫고 피 한 방울을 짜냅니다. 티슈 페이퍼로 혈액 방울을 닦은 후 다른 혈액 방울을 짜내고 테스트 스트립 가장자리에 모으십시오. 혈당 측정기에 표시된 결과를 읽고 기록하십시오.스트렙토조토신이 유발된 고지방 사료를 급여한 당뇨 마우스의 체중은 스트렙토조토신 처리 후 8주째 대조군 마우스에 비해 감소하였다. 4주차에 나린제닌 처리된 마우스의 체중 감소는 처리되지 않은 마우스에 비해 유의했습니다. 당뇨병 마우스의 혈당 수치는 스트렙토 조토 신 유도 후 1 개월 이내에 극적으로 증가했습니다.2 개월 후 2 개월 전에 관찰 된 수준으로 자동 감소했습니다. 대조적으로, 나린제닌 치료는 STZ에 비해 혈당 수치를 한 달에 51.8%, 두 달에 34.8% 낮췄습니다. 대조군과 비교하여, 스트렙토 조토신 유도 당뇨병 마우스는 조직 부피 및 섬유주 수에 의한 뼈 부피의 감소로 나타난 바와 같이 골 손실을 나타냈다.한편, 나린제닌 치료는 뼈 손실을 크게 구했습니다. 섬유주 뼈 면적당 파골세포 수에 의해 나타난 파골세포 활성은 대조군과 질환 모델 사이에 통계적 유의성이 관찰되지 않았지만, 당뇨병 마우스에서 증가하였다. 대조군 및 스트렙토조토신 유도 마우스의 섬유주 뼈 및 파골세포의 TRAP 염색이 여기에 표시됩니다.나린제닌 치료는 파골세포 활동을 유의하게 감소시켰다. 당뇨병 동물에서 1형 콜라겐의 C-말단 텔로펩타이드는 68.09%, 제1형 프로콜라겐의 N-말단 프로펩타이드는 204.88% 상승하여 골 흡수율이 급격히 증가했습니다. 그러나 나린제닌 치료는 골 흡수율의 두 지표를 모두 유의하게 감소시켰습니다.따라서 정확한 복용량을 피펫팅하는 것은 어렵습니다. 팁을 절단하면 피펫팅이 더 쉽고 정확해집니다. 또는 필요한 부피를 질량으로 변환 할 수 있으며 나중에 쉽게 변환 할 수 있습니다.각 방광 포도당 실험 전에 모든 동물의 공복 시간은 전체 실험 동안 그대로 유지되어야 한다.

preparation-of-naringenin-solution-for-in-vivo-application

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

전자 상자 성체의 공명 (EPR) 분광학은 철 (II)-N-메틸-D-glucamine dithiocarbamate, 철 (MGD)를 사용하여 인간 neutrophils에서 소 대동맥 내피 세포와 초과 산화물 라디칼 음이온에서 질소 산화물을 감지하기 위해...

질소 산화물과 세포로부터 전자 상자 성체의 프로그램 공명 분광학에 의한 초과 산화물 음이온 급진적가 탐지 스핀 트랩을 사용하여

생산 블리드 워터 (PBW)는 산화 구리 나노 입자 (CuO-NPs)로 처리되고 배양 된 인간 세포에서 세포 독성을 평가했다. 이 프로토콜의 목표는 CuO-NP 처리로 인한 독성의 변화를 평가하는 세포 배양 형식으로 네이티브 환경 샘플을 통합하는 것이 었습니다.

우라늄에서 구리 산화물 나노 입자에 의한 미량 원소의 제거<em&gt; 현장에서</em&gt; 복구 블리드 물과 세포 생존에 미치는 영향

이 원고는 형광 현미경을 사용하여 단일 세포 NO• 변동을 실시간으로 모니터링하기 위해 유전적으로 인코딩된 산화질소(NO•) 프로브(geNOps)를 적용하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 개별 내피 세포 수준에서 Ca2+로 트리거된 NO• 형성은 geNOps와 화학적 Ca2+ 센서를 결합하여 시각화되었습니다.

유전자 인코딩 된 형광 산화 질소의 응용 프로그램 (• NO) 단일 세포에서 NO • 신호의 실시간 이미징을위한 프로브의 geNOps,

여기에서는 4 가지 단계 (담금질, 달인, 여과 및 농축)의 erxian decoction (EXD) 준비 과정을 제시하고 준비된 EXD 함유 혈청을 쥐에게 투여하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 생약과 생체 외 연구에 적용 할 수 있습니다.

약초의 준비 : Er-Xian의 달임과 Er-Xian 함유 세럼<em&gt; In Vivo</em&gt; 및<em&gt; 체외에서</em&gt; 실험

여기, 선물이 vivo에서confocal 현미경 검사 법, 그리고 비보에 의해 식물 조직에서 이미징 nanoceria 청소 합성 및 선생님 (반응성 산소 종)에 대 한 세 륨 산화물 나노 입자 (nanoceria)의 특성에 대 한 프로토콜 nanoceria 선생님 confocal 현미경 검사 법에 의해 청소의 모니터링.

식물 반응 산소 종에서 Vivo에서 음이온 세 륨 산화물 나노 입자의 촉매 청소

여기에서는 고감도의 화학 발광 기반 분석을 사용하여 산화 질소 및 이의 생물학적 관련 유도체를 검출하기위한 프로토콜을 제시합니다.

산화 질소 및 그 유도체의 검출을위한 화학 발광 기반 분석 및 자동 산화 및 니트로화 화합물

이 프로토콜은 나노 에멀젼 오피오포고닌 D 보조제가 효과적인 세포 면역 반응을 촉진하는지 여부를 평가하기 위한 상세한 방법을 제시합니다.

체외 나노에멀젼 백신 보조제인 오피오포고닌 D의 세포 활성 평가

본 프로토콜은 NIR-II 광학 이미징 장치를 사용한 마우스의 상세한 실시간 NIR-II 형광 이미징 동작을 설명합니다.

혈관 및 종양 이미징을 위한 밝은 NIR-II 형광 프로브

여기에서는 엔도솜 유래 나노소포체의 대규모 생산을 위한 자기 분리 보조 고속 균질화 방법을 생물학적 기원과 천연 세포외 소포체(EV)의 생물학적 기원과 유사한 구조, 형태 및 단백질 조성을 공유하는 새로운 유형의 엑소좀 모방체(EM)로 설명합니다.

엔도솜 유래 소포의 대규모 생산을 위한 자기 분리 보조 고속 균질화 방법

이 프로토콜에서는 항원 특이적 전신 및 점막 반응을 촉진하기 위한 보조제로 사용할 수 있는 양이온성 나노에멀젼 캡슐화 레티노산(RA)을 개발했습니다. FDA 승인 RA를 나노에멀젼에 첨가함으로써, 나노에멀젼의 근육 주사 후 질과 소장에서 항원 특이적 sIgA를 촉진시켰다.

OVA 특이적 전신 및 점막 반응을 촉진하기 위한 보조제로서의 양이온성 나노에멀젼 캡슐화 레티노산

배우세요 나린제닌 용액 제조법을 DMSO, Tween 80, 생리식염수를 이용하여 생체 내 투여용으로 준비하는 방법을. 이 프로토콜은 항당뇨 및 골다공증 효과 평가를 위한 약리학 연구에 활용됩니다.

생체 내 적용을 위한 나린제닌 용액의 제조

더 많은 동영상 탐색