Name: 악성 말초 신경 시스 종양 세포에서 Floxed 대립 유전자의 Ex vivo 절제에 의한 종양 발생에서 유전자 기능 정의 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: 학습하세요 악성 말초 신경 시스 종양에서 Floxed 대립 유전자의 ex vivo 절제 방법을 통해 배아 치사성 유전자 녹아웃이 종양 성장에 미치는 영향을 연구하는 기법입니다. 유전자 조작 마우스 모델을 활용하여 생체 내 기능 상실 효과를 분석하고 종양 생물학의 새로운 연구 방향을 제시합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

이 연구는 국립 신경 질환 및 뇌졸중 연구소 (R01 NS048353, R01 NS109655), 국립 암 연구소 (R01 CA122804), 국방부 (X81XWH-09-1-0086, W81XWH-11-1-0498, W81XWH-12-1-0164, W81XWH-14-1-0073 및 W81XWH-15-1-0193) 및 어린이 종양 재단 (2014-04-001 및 2015-05-007)의 보조금으로 지원되었습니다.

<ol><li>Ricciuti, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-drug+conjugates+for+lung+cancer+in+the+era+of+personalized+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cancer+Biology%22%5BJournal%5D)">Antibody-drug conjugates for lung cancer in the era of personalized oncology.</a> Seminars in Cancer Biology. 69, 268-278 (2019).</li>
<li>Litak, J., Mazurek, M., Grochowski, C., Kamieniak, P., Rolinski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-L1%2FPD-1+axis+in+glioblastoma+multiforme%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">PD-L1/PD-1 axis in glioblastoma multiforme.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (21), 5347(2019).</li>
<li>Roskoski, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+FDA-approved+small+molecule+protein+kinase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Properties of FDA-approved small molecule protein kinase inhibitors.</a> Pharmacological Research. 144, 19-50 (2019).</li>
<li>Heffner, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supporting+conditional+mouse+mutagenesis+with+a+comprehensive+cre+characterization+resource%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Supporting conditional mouse mutagenesis with a comprehensive cre characterization resource.</a> Nature Communications. 3, 1218(2012).</li>
<li>Longo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ErbB4+promotes+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+pathogenesis+via+Ras-independent+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Communication+and+Signaling%22%5BJournal%5D)">ErbB4 promotes malignant peripheral nerve sheath tumor pathogenesis via Ras-independent mechanisms.</a> Cell Communication and Signaling. 17 (1), 74(2019).</li>
<li>Kazmi, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+overexpressing+neuregulin-1+model+neurofibroma-malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+progression+and+implicate+specific+chromosomal+copy+number+variations+in+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice overexpressing neuregulin-1 model neurofibroma-malignant peripheral nerve sheath tumor progression and implicate specific chromosomal copy number variations in tumorigenesis.</a> American Journal of Pathology. 182 (3), 646-667 (2013).</li>
<li>Brosius, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuregulin-1+overexpression+and+Trp53+haploinsufficiency+cooperatively+promote+de+novo+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropatholica%22%5BJournal%5D)">Neuregulin-1 overexpression and Trp53 haploinsufficiency cooperatively promote de novo malignant peripheral nerve sheath tumor pathogenesis.</a> Acta Neuropatholica. 127 (4), 573-591 (2014).</li>
<li>Ducatman, B. S., Scheithauer, B. W., Piepgras, D. G., Reiman, H. M., Ilstrup, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors.+A+clinicopathologic+study+of+120+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Malignant peripheral nerve sheath tumors. A clinicopathologic study of 120 cases.</a> Cancer. 57 (10), 2006-2021 (1986).</li>
<li>Gassmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aberrant+neural+and+cardiac+development+in+mice+lacking+the+ErbB4+neuregulin+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Aberrant neural and cardiac development in mice lacking the ErbB4 neuregulin receptor.</a> Nature. 378 (6555), 390-394 (1995).</li>
<li>Tidcombe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+and+mammary+gland+defects+in+ErbB4+knockout+mice+genetically+rescued+from+embryonic+lethality%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Nationall+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Neural and mammary gland defects in ErbB4 knockout mice genetically rescued from embryonic lethality.</a> Proceedings of the Nationall Academy of Sciences of the United States of America. 100 (14), 8281-8286 (2003).</li>
<li>Golub, M. S., Germann, S. L., Lloyd, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+characteristics+of+a+nervous+system-specific+erbB4+knock-out+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Behavioral characteristics of a nervous system-specific erbB4 knock-out mouse.</a> Behavioral Brain Research. 153 (1), 159-170 (2004).</li>
<li>Huijbregts, R. P., Roth, K. A., Schmidt, R. E., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophic+neuropathies+and+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors+in+transgenic+mice+overexpressing+glial+growth+factor+beta3+in+myelinating+Schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hypertrophic neuropathies and malignant peripheral nerve sheath tumors in transgenic mice overexpressing glial growth factor beta3 in myelinating Schwann cells.</a> Journal of Neuroscience. 23 (19), 7269-7280 (2003).</li>
<li>Jackson-Fisher, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+Neu%2FErbB2-induced+mammary+tumors+is+unaffected+by+loss+of+ErbB4%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Formation of Neu/ErbB2-induced mammary tumors is unaffected by loss of ErbB4.</a> Oncogene. 25 (41), 5664-5672 (2006).</li>
<li>Byer, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tamoxifen+inhibits+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+growth+in+an+estrogen+receptor-independent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-oncology%22%5BJournal%5D)">Tamoxifen inhibits malignant peripheral nerve sheath tumor growth in an estrogen receptor-independent manner.</a> Neuro-oncology. 13 (1), 28-41 (2011).</li>
<li>Kang, Y., Pekmezci, M., Folpe, A. L., Ersen, A., Horvai, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+utility+of+SOX10+to+distinguish+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+from+synovial+sarcoma%2C+including+intraneural+synovial+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Pathology%22%5BJournal%5D)">Diagnostic utility of SOX10 to distinguish malignant peripheral nerve sheath tumor from synovial sarcoma, including intraneural synovial sarcoma.</a> Modern Pathology. 27 (1), 55-61 (2014).</li>
<li>Longo, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+genomic+characterization+of+a+sporadic+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Establishment and genomic characterization of a sporadic malignant peripheral nerve sheath tumor cell line.</a> Scientific Reports. 11 (1), 5690(2021).</li>
<li>Chomczynski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reagent+for+the+single-step+simultaneous+isolation+of+RNA%2C+DNA+and+proteins+from+cell+and+tissue+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples.</a> Biotechniques. 15 (3), 532-537 (1993).</li>
<li>Bolger, A. M., Lohse, M., Usadel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trimmomatic%3A+a+flexible+trimmer+for+Illumina+sequence+data%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Trimmomatic: a flexible trimmer for Illumina sequence data.</a> Bioinformatics. 30 (15), 2114-2120 (2014).</li>
<li>Grozdanov, P. N., Li, J., Yu, P., Yan, W., MacDonald, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cstf2t+regulates+expression+of+histones+and+histone-like+proteins+in+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Andrology%22%5BJournal%5D)">Cstf2t regulates expression of histones and histone-like proteins in male germ cells.</a> Andrology. 6 (4), 605-615 (2018).</li>
<li>Kaur, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD63%2C+MHC+class+1%2C+and+CD47+identify+subsets+of+extracellular+vesicles+containing+distinct+populations+of+noncoding+RNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">CD63, MHC class 1, and CD47 identify subsets of extracellular vesicles containing distinct populations of noncoding RNAs.</a> Scientific Reports. 8 (1), 2577(2018).</li>
<li>Avraham, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satellite+glial+cells+promote+regenerative+growth+in+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Satellite glial cells promote regenerative growth in sensory neurons.</a> Nature Communications. 11 (1), 4891(2020).</li>
<li>Love, M. I., Huber, W., Anders, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderated+estimation+of+fold+change+and+dispersion+for+RNA-seq+data+with+DESeq2%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">Moderated estimation of fold change and dispersion for RNA-seq data with DESeq2.</a> Genome Biology. 15 (12), 550(2014).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+normalization+and+differential+expression+analyses+using+RNA-Seq+data+from+726+individual+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Comparison of normalization and differential expression analyses using RNA-Seq data from 726 individual Drosophila melanogaster.</a> BMC Genomics. 17, 28(2016).</li>
<li>Eden, E., Navon, R., Steinfeld, I., Lipson, D., Yakhini, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GOrilla%3A+a+tool+for+discovery+and+visualization+of+enriched+GO+terms+in+ranked+gene+lists%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">GOrilla: a tool for discovery and visualization of enriched GO terms in ranked gene lists.</a> BMC Bioinformatics. 10, 48(2009).</li>
<li>Huang, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+DAVID+Gene+Functional+Classification+Tool%3A+a+novel+biological+module-centric+algorithm+to+functionally+analyze+large+gene+lists%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">The DAVID Gene Functional Classification Tool: a novel biological module-centric algorithm to functionally analyze large gene lists.</a> Genome Biology. 8 (9), 183(2007).</li>
<li>Mi, H., Muruganujan, A., Casagrande, J. T., Thomas, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+gene+function+analysis+with+the+PANTHER+classification+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Large-scale gene function analysis with the PANTHER classification system.</a> Nature Protocols. 8 (8), 1551-1566 (2013).</li>
<li>Subramanian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+set+enrichment+analysis%3A+a+knowledge-based+approach+for+interpreting+genome-wide+expression+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Nationall+Academy+of+the+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Gene set enrichment analysis: a knowledge-based approach for interpreting genome-wide expression profiles.</a> Proceedings of the Nationall Academy of the Sciences of the United States of America. 102 (43), 15545-15550 (2005).</li>
<li>Merico, D., Isserlin, R., Stueker, O., Emili, A., Bader, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+map%3A+a+network-based+method+for+gene-set+enrichment+visualization+and+interpretation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Enrichment map: a network-based method for gene-set enrichment visualization and interpretation.</a> PLoS One. 5 (11), 13984(2010).</li>
<li>Yoon, S., Kim, S. Y., Nam, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+gene-set+enrichment+analysis+of+RNA-Seq+data+with+small+replicates%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Improving gene-set enrichment analysis of RNA-Seq data with small replicates.</a> PLoS One. 11 (11), 0165919(2016).</li>
<li>Koch, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beginner%27s+guide+to+analysis+of+RNA+sequencing+data%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">A beginner's guide to analysis of RNA sequencing data.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 59 (2), 145-157 (2018).</li>
<li>Turk, A. N., Byer, S. J., Zinn, K. R., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+xenografting+of+human+luciferase-tagged+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells+for+in+vivo+testing+of+candidate+therapeutic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Orthotopic xenografting of human luciferase-tagged malignant peripheral nerve sheath tumor cells for in vivo testing of candidate therapeutic agents.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (49), e2558(2011).</li>
<li>Faul, F. E., Lang, A. G., Buchner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((G%2APower+3%3A+a+flexible+statistical+power+analysis+program+for+the+social%2C+behavioral%2C+and+biomedical+sciences%5BTitle%5D)+AND+%22Behavior+Research+Methods%22%5BJournal%5D)">G*Power 3: a flexible statistical power analysis program for the social, behavioral, and biomedical sciences.</a> Behavior Research Methods. 39 (2), 175(2007).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+of+origin+in+the+embryonic+nerve+roots+for+NF1-associated+plexiform+neurofibroma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Cells of origin in the embryonic nerve roots for NF1-associated plexiform neurofibroma.</a> Cancer Cell. 26 (5), 695-706 (2014).</li>
<li>Mo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+neurofibroma+model+from+induced+pluripotent+stem+cells+delineates+tumor+pathogenesis+and+developmental+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Humanized neurofibroma model from induced pluripotent stem cells delineates tumor pathogenesis and developmental origins.</a> Journal of Clinical Investigation. 131 (1), 139807(2021).</li>
<li>Chau, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+therapeutic+efficacy+of+a+novel+pharmacologic+inducer+of+apoptosis+in+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Preclinical therapeutic efficacy of a novel pharmacologic inducer of apoptosis in malignant peripheral nerve sheath tumors.</a> Cancer Research. 74 (2), 586-597 (2014).</li>
<li>Dodd, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF1%28%2B%2F-%29+Hematopoietic+cells+accelerate+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+development+without+altering+chemotherapy+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">NF1(+/-) Hematopoietic cells accelerate malignant peripheral nerve sheath tumor development without altering chemotherapy response.</a> Cancer Research. 77 (16), 4486-4497 (2017).</li>
<li>Eckert, J. M., Byer, S. J., Clodfelder-Miller, B. J., Carroll, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuregulin-1+beta+and+neuregulin-1+alpha+differentially+affect+the+migration+and+invasion+of+malignant+peripheral+nerve+sheath+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Neuregulin-1 beta and neuregulin-1 alpha differentially affect the migration and invasion of malignant peripheral nerve sheath tumor cells.</a> Glia. 57 (14), 1501-1520 (2009).</li>
</ol>

저자는 공개 할 이해 상충이 없습니다.

여기에 제시된 상세한 방법은 MPNST의 GEM 모델을 사용하여 개발되었습니다. 그러나, 관심있는 종양 조직이 개별 세포 내로 분산될 수 있다면, 이들 방법론은 GEMs에서 발생하는 다양한 종양 유형에 대해 쉽게 적응할 수 있다. 플록스된 대립유전자가 i) 종양을 스크리닝하기에 충분한 마우스를 수득하는 것을 어렵게 만들 수 있는 감소된 생존, 또는 ii) 충분한 종양 보유 마우스를 수득하는 것을 어렵게 만들 수 있는 증가된 종양 잠복기를 초래하지 않도록 하는 것이 중요하다. 플록스 대립 유전자가 생존에 영향을 미치지 않으면 두 코호트의 생존은 동등합니다. 종양 잠복기에 아무런 영향을 미치지 않는 경우, 유사한 시간 과정을 가진 두 코호트 모두에서 동등한 수의 종양 보유 마우스가 발생해야합니다.
유사한 접근법이 유도성 조건부 녹아웃 동물33,34를 생성하기 위해 조건부 녹아웃 ...

지난 이십 년 전에 인간 암의 치료는 DNA를 손상시키거나 DNA 합성을 억제함으로써 빠르게 증식하는 세포 집단을 광범위하게 표적으로 삼는 방사선 요법 및 화학 요법제에 크게 의존했습니다. 이러한 접근법은 암세포 성장을 억제했지만, 장내 상피 세포 및 모낭 세포와 같은 정상적인 빠르게 증식하는 세포 유형에도 해로운 부작용이있었습니다. 최근에, 암 치료는 개별 환자의 신 생물의 성장에 매우 중요한 신호 전달 경로 내에서 단백질을 정확하게 표적화하는 화학 요법제를 활용하기 시작했습니다. 일반적으로 "정밀 의학"이라고하는이 접근법은 모노클로날 항체 및 소형 분자 억제제의 끊임없이 확장되는 레퍼토리의 개발로 이어졌습니다. 이들 제제는 종양 세포 증식 및 생존을 효과적으로 억제하면서 종래의 화학요법제 및 방사선요법으로 보이는 정상 세포 유형에 대한 해로운 부작용을 회피한다. 인간 암의 치료에 사용되는 모노클로날 항체는 가장 일반적으로 표적 세포 표면 분자, 예컨대 성장 인자 수용체 1 (예를 들어, 막-스패닝 수용체 티로신 키나제의 큰 패밀리) 및 면역 반응 조절제2 (예를 들어, 프로그램된 세포 사멸 단백질 1, 프로그램된 사멸-리간드1)를 표적으로 한다. 소분자 억제제는 세포내 표면 단백질 또는 세포내 위치하는 신호전달 단백질 중 하나를 억제할 수 있다3. 그러나, 이러한 새로운 치료제를 효과적으로 채용하기 위해서는, 특정 암이 후보 치료제에 의해 표적화되고 있는 분자에 의존한다는 것이 확립되어야 한다.
이러한 새로운 치료제는 더 집중된 효과를 가지고 있지만, 그들 중 다수는 여전히 하나 이상의 단백질의 작용을 억제한다. 또한, 다양한 효과 및 특이성을 갖는 다수의 제제가 종종 특정 단백질을 표적화하기 위해 이용가능하다. 결과적으로, 전임상 조사 동안, 후보 단백질을 치료 표적으로 검증하기 위해 유전자 절제와 같은 추가적인 접근법을 사용하는 것이 현명하다. 단백질을 치료 표적으로서 검증하는데 특히 유용한 접근법 중 하나는 관심있는 특정 암 유형을 개발하는 유전자 조작된 동물 모델에서 후보 단백질을 코딩하는 유전자를 절제하는 것이다. 이 접근법은 널 돌연변이 (자연 돌연변이, 유전자 조작 된 널 돌연변이 [ "녹아웃"), 또는 유전자 트랩에 의해 도입 된 널 돌연변이)를 가진 마우스가 이용 가능하고 마우스가 성인기까지 생존 할 수있는 경우 상대적으로 간단 할 수 있습니다. 불행히도, 이러한 기준을 충족하는 null 돌연변이를 가진 마우스는 종종 사용할 수 없으며, 일반적으로 null 돌연변이가 배아 적으로 또는 출생 후 삶의 첫날에 사망을 초래하기 때문입니다. 이러한 상황에서, 관심있는 종양 유형을 개발하기 쉬운 마우스는 대신 관심있는 유전자의 주요 세그먼트가 loxP 부위 ( "floxed")에 의해 측면 인 마우스로 교차 될 수 있으며, 이는 Cre 재조합 효소를 발현하는 이식 유전자를 종양 세포 내로 도입함으로써 유전자가 절제되도록 허용한다 (조건부 녹아웃). 이 방법은 몇 가지 이점을 제공합니다. 첫째, Cre 구동기가 종양에서 발현되지만 종래의 녹아웃에서 사망을 초래한 세포 유형에서는 발현되지 않는 경우, 이러한 접근법은 잠재적으로 후보 치료 표적을 검증할 수 있다. 둘째, 후보 단백질을 코딩하는 유전자를 종양 세포에서 절제하지만 종양-관련 섬유아세포 또는 면역 세포와 같은 다른 종양내 요소에서는 검출하지 못하도록, 조사자는 치료 표적의 세포-자율 및 비-세포-자율 효과를 구별할 수 있게 한다. 마지막으로, 타목시펜-유도성 Cre 구동기(CreERT2)는 조사자가 종양 발달의 여러 단계에서 관심있는 유전자를 삭제하고 후보 치료제가 효과적일 가능성이 가장 높은 창을 정의할 수 있게 한다.
불행히도, GEM 모델에서 발생하는 종양에서 조건부 녹아웃의 사용을 제한 할 수있는 기술적 인 문제도 있습니다. 예를 들어, 종양 세포에서 발현되고 생명에 필수적인 정상 세포에서 유전자 결실을 피하는 Cre 구동기는 이용가능하지 않을 수 있다. 과소 평가 될 수있는 또 다른 문제는 Cre 및 CreERT2 드라이버가 종종 마우스에서 플록스 된 대립 유전자를 가변적으로 절제하여 GEM 암에서 null 돌연변이에 대한 모자이크증을 초래한다는 것입니다. 이것이 발생하면, 표적화된 유전자가 절제되지 않은 종양 세포는 계속해서 빠르게 증식할 것이고, 절제된 대립유전자로 종양 세포를 과성장시킬 것이다. Cre 구동선에서의 모자이크주의는 표적화된 혈통에서의 비유비쿼터스 Cre 발현으로 인해 그리고 Cre 발현4와 무관하게 개별 세포에서의 실패한 재조합에 의해 발생할 수 있다. 이것은 셀 유형에 의존하는 Cre 드라이버의 알려진 현상이며 실험 설계 및 데이터 해석 중에 고려해야합니다. 모자이시즘은 녹아웃의 효과를 가릴 수 있으며 관심있는 유전자가 종양 세포 증식 및 / 또는 생존에 필수적이지 않으므로 유효한 치료 표적이 아니라는 잘못된 결론을 내릴 수 있습니다.
이러한 문제 중 몇몇은 수용체 티로신 키나제 erbB4가 MPNST 세포5에서 잠재적인 치료 표적인지 여부를 결정하기 위해 시도된 이전 연구에서 직면되었다. 이들 연구에서, 마우스는 슈완 세포 특이적 미엘린 단백질의 조절하에 뉴레귤린-1 (NRG1) 이형아교세포 성장 인자-β3 (GGFβ3)를 코딩하는 전이유전자를 발현하는 것을 프로모터제로 사용하였다 (P0-GGFβ3 마우스). P0-GGFβ3 마우스는 상염색체 우성 종양 감수성 증후군 신경섬유종증 유형 1(NF1)6을 갖는 환자에서 보이는 신경섬유종 병인 및 신경섬유종-MPNST 진행의 과정을 되풀이하는 과정을 통해 MPNST가 되도록 진행하는 다발성 신경섬유종을 개발한다. Trp53 널 돌연변이를 갖는 마우스에 교차시, 생성된 P0-GGFβ3; Trp53+/- 마우스는 cis-Nf1+/-에서 볼 수 있는 바와 같이 MPNSTs de novo를 개발하고; Trp53+/- 마우스.
이러한 MPNST는 세계 보건기구 (WHO) 등급 II에서 인간7에서 볼 수있는 WHO 등급 IV 병변으로의 진행을 재조정합니다. P0-GGFβ3 마우스에서, MPNSTs는 삼차 신경 (58 %) 및 척추 등쪽 신경 뿌리 (68 %)에서 기존의 플렉시 폼 신경 섬유종 내에서 발생한다7; P0-GGFβ3에서 발생하는 MPNSTs; Trp53+/- 마우스는 매우 유사한 분포를 갖는다. 인간에서 MPNST는 좌골 신경에서 가장 흔하게 발생하며 상완 신경총, 척추 신경 뿌리, 미주, 대퇴골, 정측, 천골 신경총, 포플라이트 폐쇄기 및 후부 경골 및 척골 신경이 뒤 따른다 8. 이러한 GEM 모델에서의 이러한 종양 분포는 인간에서 보이는 것과는 다소 다르다. 그러나, P0-GGFβ3 및P0-GGFβ3에서 발생하는 MPNSTs; Trp53+/- 마우스는 조직학적으로 인간 MPNST와 동일하고, 인간 MPNST에서 보이는 많은 동일한 돌연변이를 가지고 있으며, NF1 환자에서 보이는 신경섬유종-MPNST 진행의 과정을 재분석한다. P0-GGFβ3 또는 P0-GGFβ3의 생성; Erbb4-/-였던 Trp53+/- 마우스는 두 개의 Erbb4 널 대립유전자를 가진 마우스가 심장 결함9에 이차적인 배아 10.5일째에 utero에서 죽기 때문에 실현가능하지 않았다. 심장 특이적 Erbb4 전이유전자 (α-미오신 중쇄 (MHC)-Erbb4)를 도입함으로써 심장에서 Erbb4 발현을 구출하는 것은 생존 가능한 Erbb4-/- 마우스 10을 초래하기 때문에, 복잡한P0-GGFβ3을 갖는 마우스의 생성; Trp53+/-;α-MHC-Erbb4; Erbb4-/- 유전자형을 시도하였다.
그러나, 교미는 예상된 멘델 비율에서 마우스를 생성하지 않았고, 이는 원하는 유전자형이 해롭다는 것을 나타낸다. 따라서, P0-GGFβ3의 생성; Floxed Erbb4 대립유전자11 및 CreERT2 드라이버를 갖는 Trp53+/- 마우스는 이들 마우스에서 발생하는 MPNST에서 Erbb4의 결실을 허용하도록 시도되었다. 이 동물들에서, 손상되지 않은 Erbb4 대립 유전자를 가진 수많은 종양 세포가 여전히 존재했다 (모자이크증). 관찰 된 모자이크주의는 비효율적 인 타목시펜 전달로 인해 조직 내 재결합 효율의 차이가 발생할 수 있습니다. 자발적인 보상 메커니즘의 가능성은 Erbb4 발현에 대한 요구 사항을 우회함으로써 타목시펜 매개 재조합에서 모자이크주의에 더 기여할 수 있습니다. Trp53의 손실로 인해 종양 세포는 데이터의 해석을 혼란스럽게 할 수있는 추가적인 자발적인 "허용적"돌연변이에 취약해질 수 있습니다. Erbb4-온전한 MPNST 세포가 다른 종양 세포에서 Erbb4를 절제하는 결과를 가릴 가능성이 높아 보였기 때문에이 접근법은 포기되었습니다.
이러한 장애물은 Cre 재조합효소 및 eGFP를 발현하는 아데노바이러스를 사용하는 매우 초기 통과 MPNST 세포에서 Erbb4를 절제하기 위한 방법론의 개발로 이어졌다. 이들 세포는 FACS를 사용하여 감염되지 않은 세포로부터 분리될 수 있으며, 이는 절제된 Erbb4 유전자에 대한 모자이크주의를 현저하게 감소시킨다. 이하에는, 이를 달성하기 위해 사용된 방법들이 시험관내 및 생체내에서 유전자 절제의 효과를 평가하기 위해 사용된 방법들과 함께, 설명된다. 다음 프로토콜은 생체내 동종이식편 종양 성장 평가 전에 생체외 절제에 대해 관심있는 배아 치사 유전자의 플록스 대립유전자를 운반하는 종양을 생산하는 종양 보유 마우스를 생산하는 방법의 예이다. 여기에는 Erbb4 절제가 동위원소 동종이식편에서의 종양 세포 증식, 생존 및 시험관내 및 증식, 생존 및 혈관신생에 미치는 영향을 분석하기 위해 사용되는 접근법에 대한 설명이 포함된다.

<table><tbody><tr><td>Ad5CMV-eGFP</td><td>유전자 전달 벡터 코어, 아이오와 대학교</td><td>VVC-U 아이오와-4</td><td></td></tr><tr><td>Ad5CMVCre-eGFP</td><td>유전자 전달 벡터 코어, 아이오와 대학교</td><td>VVC-U 아이오와-1174</td><td></td></tr><tr><td>알렉사 568 2차 항체</td><td>Thermo/Fisher</td><td>GaR A11036</td><td></td></tr><tr><td>Bioconductor 오픈 소스 소프트웨어 바이오 인포매틱</td>스 <td>바이오 컨덕터</td><td>http://www.bioconductor.org</td><td>4.4단계에 사용되는 대체 통계 분석 도구</td></tr><tr><td>CD31</td><td>Abcam</td><td>ab28364</td><td></td></tr><tr><td>Celigo Image Cytometer</td><td>Nexcelom Bioscience</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cell Stripper</td><td>Corning</td><td>25-056-Cl</td><td>킬레이트제 혼합물</td></tr><tr><td>DAB 염색 키트</td><td>Vector Labs</td><td>MP-7800</td><td></td></tr><tr><td>DAVID (Database for Annotation, Visualization, and Integrated Discovery)</td><td>DAVID</td><td>https://david.ncifcrf.gov</td><td>4.5단계</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>15-013-Cl</td><td></td></tr><tr><td>DreamTaq 및 Buffer(유전형 분석 PCR)</td><td>Thermo/Fisher</td><td>EP0701 및 K1072</td><td></td></tr><tr><td>erbB4 항체</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-284</td><td></td></tr><tr><td>erbB4 항체</td><td>Abcam</td><td>ab35374</td><td></td></tr><tr><td>erbB4에 사용되는 기능 강화 분석 소프트웨어 항체</td><td>Millipore</td><td>HFR1: 05-1133</td><td></td></tr><tr><td>FACS Sorter</td><td>BD Biosciences</td><td>Aria II</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma</td><td>F6886</td><td></td></tr><tr><td>GenomeSpace 도구 및 데이터 소스</td><td>GenomeSpace</td><td>https://genomespace.org/support/tools/</td> <td>4.5단계를 위한 여러 유형의 오픈 소스 생물 정보학 도구에 대한 일반 리소스</td></tr><tr><td>Glutamine</td><td>Corning</td><td>25-005- </td><td></td>Cl</tr><tr><td>Gorilla Gene Ontology enRIchment anaLysis and visuaLizAtion tool</td><td>Gorilla</td><td>N/A, http://cbl-gorilla.cs.technion.ac.il</td><td>4.5단계에 사용되는 기능 강화 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>GSEA Gene Set Enrichment Analysis</td><td>Broad Institute</td><td>N/A, https://www.gsea-msigdb.org/gsea/index.jsp</td><td>4.5단계에 사용되는 기능 강화 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>HSD: Athymic Nude-FOxn1nu 마우스</td><td>Envigo (formerly Harlan Labs)</td><td>69</td><td></td></tr><tr><td>Illumina HiSeq2500 (차세대 DNA 시퀀서)</td><td>4.2단계에 사용되는</td> <td>Illumina</td><td>Hi Seq 2500</td> DNA 시퀀서</tr><tr><td>Lasergene: ArrayStar 유전자 발현 및 변이 분석</td><td>DNAStar LaserGene 소프트웨어</td><td>N/A</td><td>소프트웨어 4.4단계에 사용되는 통계 및 정규화 분석</td></tr><tr><td>Lasergene: SeqMan NGen 염기서열 정렬 어셈블리</td><td>4.3 단계에 사용되는 소프트웨어 정렬 4.3</td> 단계에 사용되는 <td>N/A</td><td>소프트웨어 정렬</td></tr><tr><td>Matrigel, 저성장 인자 기저막 매트릭스</td><td>Corning</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>NRG1-beta</td><td>사내</td><td>SLC에서 생성, R & 에서 상업적으로 이용 가능 D 시스템(396-HB-050/CF).</td><td></td></tr><tr><td>Nuclear Stain Hoeschst 33342</td><td>Thermo</td><td>62249</td><td></td></tr><tr><td>Panther 유전자 온톨로지 분류 시스템</td><td>Panther</td><td>http://pantherdb.org</td><td>4.5단계에 사용되는 기능 농축 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>Partek(BWA aligner 및 분석기)</td><td>Partek, Ver 7</td><td></td><td>4.3단계에 사용되는 소프트웨어 정렬 및 통계/정규화</td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Corning</td><td>30-002-Cl</td><td></td></tr><tr><td>프라이머 1 : 5&prime;-CAAATGCTCTCTCTCTGTTCTTTGT GTCTG- 3&prime;</td><td>Eurofins Genomics</td><td>Primer 1 + 2: 250&thinsp; bp ErbB4 널 곱 및 350&thinsp; bp Floxed ErbB4 제품;</td><td></td></tr><tr><td>프라이머 2: 5&prime;-TTTTGCCAAGTTCTAATTCCATC AGAAGC-3&prime;</td><td>Eurofins Genomics</td><td>Primer 1 + 2: 250&thinsp; bp ErbB4 널 곱 및 350&thinsp; bp Floxed ErbB4 제품;</td><td></td></tr><tr><td> Primer 3: 5&prime;-TATTGTGTTCATCTATCATTGCA ACCCAG-3&prime; </td><td>Eurofins Genomics</td><td>Primer 1 + 3: 350&thinsp; bp 야생형 ErbB4 제품.</td><td></td></tr><tr><td>프로피듐 요오드</td><td>피셔</td><td>51-351-0</td><td></td></tr><tr><td>프로테옴 프로파일러 포스포-키나아제 어레이</td><td>R& D Systems</td><td>ARY003B</td><td></td></tr><tr><td>실시간 glo</td><td>Promega</td><td>G9712</td><td>생물 발광 세포 생존율 분석</td></tr><tr><td>ToppGene Suite</td><td>ToppGene</td><td>https://toppgene.cchmc.org</td><td>4.5단계에 사용되는 기능 농축 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>Trizol(산-콰니디늄-페놀 및 콜로포름 기반 시약)</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>Tyramide 신호 증폭 키트</td><td>퍼킨 엘머</td><td>NEL721001EA</td><td></td></tr></tbody></table>

악성 말초 신경 시스 종양 세포에서 floxed 대립 유전자의 ex vivo 절제에 의한 종양 발생에서 유전자 기능 정의

Defining Gene Functions in Tumorigenesis by Ex vivo Ablation of Floxed Alleles in Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells

인간 암의 핵심 단백질을 정확하게 표적으로 삼는 신약 개발은 암 치료제를 근본적으로 변화시키고 있습니다. 그러나 이러한 약물을 사용하기 전에 표적 단백질이 특정 암 유형에서 치료 표적으로 검증되어야합니다. 이 검증은 종종 암의 유전자 조작 마우스 (GEM) 모델에서 후보 치료 표적을 코딩하는 유전자를 녹아웃하고 이것이 종양 성장에 어떤 영향을 미치는지 결정함으로써 수행됩니다. 불행히도, 기존의 녹아웃에서의 배아 치사율과 조건부 녹아웃에서의 모자이크주의와 같은 기술적 인 문제는 종종이 접근법을 제한합니다. 이러한 한계를 극복하기 위해, GEM 모델에서 생성된 악성 말초 신경 시스 종양(MPNSTs)의 단기 배양에 관심 있는 플록싱된 배아 치사 유전자를 절제하기 위한 접근법이 개발되었다.
이 논문은 적절한 유전자형을 갖는 마우스 모델을 확립하고, 이들 동물로부터 단기 종양 배양을 도출한 다음, Cre 재조합효소 및 강화된 녹색 형광 단백질(eGFP)을 발현하는 아데노바이러스 벡터를 사용하여 플록싱된 배아 치사 유전자를 제거하는 방법을 기술한다. 형광 활성화 세포 분류 (FACS)를 사용하여 아데노바이러스로 형질도입된 세포의 정제 및 유전자 절제가 세포 증식, 생존력, 전사체 및 동위원소 동종이식편 성장에 미치는 영향의 정량화를 상세화한 다음, 상세히 설명한다. 이러한 방법론은 시험관내 및 생체내에서 치료 표적을 확인하고 검증하기 위한 효과적이고 일반화 가능한 접근법을 제공한다. 이러한 접근법은 또한 감소된 시험관내 성장 아티팩트를 갖는 저통과 종양 유래 세포의 재생 가능한 공급원을 제공한다. 이를 통해 표적 유전자의 생물학적 역할은 분비물에 의해 매개되는 이동, 침윤, 전이 및 세포간 통신과 같은 다양한 생물학적 과정에서 연구될 수 있게 한다.

도 4는 P0-GGFβ3을 형질도입할 때 얻어지는 전형적인 결과를 도시한다; Trp53-/+; Ad5CMV-eGFP 아데노바이러스 또는 Ad5CMV-Cre/eGFP 아데노바이러스를 갖는 Erbb4fl/fl MPNST 세포(그림 4A). 배양물을 형광 현미경으로 관찰하여 eGFP 발현 세포를 확인하고 위상차 현미경으로 10x (상단) 및 40x (하단)에서 동일한 분야에 존재하는 총 세포 수를 결정합니다. 이어서, eGFP를 발현하는 세포의 백분율은 원하는 경우 계산될 수 있다. 대표적인 FACS 출력 데이터는 보충 그림 S2에 도시되어 있다. FACS 이후, eGFP 발현 세포의 백분율은 현저하게 증가될 것이며, 각 분야의 거의 모든 세포가 eGFP를 발현한다. 형질감염 효율에 따라 Cre 매개 유전자 ...

여기에서, 우리는 유전자 조작된 마우스 모델 유래 종양 에서 생체내에서 배아 치사되는 유전자 녹아웃을 수행하기 위한 프로토콜을 제시하고, 이어서 녹아웃이 종양 성장, 증식, 생존, 이동, 침윤 및 시험 관내 및 생체내에서 전사체에 미치는 영향을 평가한다.

악성 말초 신경 시스 종양 세포에서 Floxed 대립 유전자의 Ex vivo 절제에 의한 종양 발생에서 유전자 기능 정의

The development of new drugs that precisely target key proteins in human cancers is fundamentally altering cancer therapeutics. However, before these ...

이 프로토콜은 배아 치사 유전자 녹아웃의 종양 성장 역할을 연구하기 위한 대안적인 생체내 방법을 제공한다. 이 방법의 장점은 일반적으로 배아 치사성인 유전자 녹아웃이 생체 내에서 그들의 기능 상실 효과를 연구하기 위해 유전자 조작된 마우스 모델로부터 유래된 종양에서 수행될 수 있다는 것이다. 이 기술은 전통적인 유전자 녹아웃 마우스 모델로부터 달성할 수 없는 배아 필수 유전자의 생체내 역할을 연구할 필요가 있는 질환에 적용될 수 있다.동물 모델을 생성하는 데는 적절한 재조합이 달성되도록 하기 위해 아데노바이러스 감염에 대한 최적의 MOI를 결정하기 위해 시간이 걸리고 경험적 테스트가 요구된다. 우선, 원하는 유전자형을 가진 마우스를 확인하십시오. 종양을 가진 마우스가 인간 종말점에 도달하면 마우스를 안락사시키고 멸균 메스 나이프를 사용하여 종양을 제거하십시오.메스 나이프를 사용하여 빵 덩어리 스타일의 절단으로 종양을 세 개의 절편으로 해부하여 초기 통과 배양 생성 및 분석 분석을 위해 플래시 동결을 포매하는 포르말린 고정 파라핀을위한 조직 세그먼트를 생성합니다. 다섯 마이크로미터 두께의 포르말린 고정, 파라핀 포매된 조직 절편을 헤마톡실린과 에오신으로 염색합니다. 병리학자가 종양을 확인하면 면역 조직 화학 염색을 수행하여 종양 진단을 확인하십시오.갓 채취한 악성 말초 신경 외피 종양 조직을 얼음 위에 얼음처럼 차가운 멸균 PBS 10밀리리터에 넣은 다음, 이를 멸균 작업 영역으로 옮겨 조기 통과 배양을 확립한다. 종양 조직을 두 개 내지 4밀리미터 조각으로 분쇄하고, 10 밀리리터의 성장 배지를 함유하는 10 평방 센티미터 처리된 조직 배양 접시에 여덟 내지 10회 트리투레이트한다. 이들 조직을 10 나노몰 뉴레귤린-1 베타 및 2개의 마이크로몰 포스콜린으로 보충된 고 글루코스 DMEM-10 성장 배지에서 배양한다.조기에 계대된 종양 세포를 1.5배의 밀도로 10 내지 10 평방 센티미터 당 여섯 번째 세포로 시드하고 DMEM-10 성장 배지를 함유하는 조직 배양 접시를 처리하였다. 12 내지 16시간 후, 부착성 배양물을 2 내지 4밀리리터의 DPBS로 세척하고, 세포를 무혈청 DMEM의 10 밀리리터에서 세포당 대략 400개의 플라크 형성 단위로 아데노바이러스로 감염시킨다. 감염 48시간 후, 약 50 내지 100% 양성 세포로 효율적으로 감염되었는지 확인하기 위해 형광 현미경으로 EGFP 신호에 대한 세포

defining-gene-functions-tumorigenesis-ex-vivo-ablation-floxed-alleles

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

안정 immunodeficient 생쥐의 좌골 신경에 루시페라제 - 태그 인간의 악성 말초 신경 칼집 종양 세포를 접목하는 방법이 설명되어 있습니다. 스터디 그룹에 동물 임의의 분리를위한 종양 이식과 기준의 적절한 설립을 증명하기 위해 bioluminescence 이미징의 사용도 설명합니다.

대한 인간 루시페라제 태그가 추가된 악성 주변 신경 쉬스 종양 세포 Orthotopic Xenografting 생체내에</em후보 치료 대리점> 테스트

플록스, 조건부 발암성 대립유전자로 조작되고 바이러스 Cre 매개 재조합을 통해 형질전환된 마우스에서 채취한 표현형 야생형 성상세포와 신경 줄기세포는 syngeneic, immune-competent littermate의 뇌에 형질전환된 세포의 orthotopic 주입에 의해 in vitro 및 in vivo에서 성상세포종 발병기전을 모델링하는 데 사용할 수 있습니다.

모델링 성상 세포종 병인 체외와 생체 대뇌 피질의 성상이나 조건, 유전자 조작 쥐에서 신경 줄기 세포를 사용하여

Drosophila imaginal disc epithelia의 모자이크 클론 분석은 종양 형성의 유전 및 세포 메커니즘을 연구하는 강력한 모델 시스템입니다. 여기에서는 GAL4-UAS 시스템을 사용하여 Drosophila wing imaginal discs에서 종양을 유도하는 프로토콜을 설명하고 종양 표현형을 분류하는 진단 방법을 소개합니다.

종양의 유도 및 진단<em&gt; Drosophila</em&gt; 상피 디스크 상피 세포

우리는 유전자 조작 마우스 모델에서 발생하는 종양과 해당 인간 종양 유형에서 발생하는 종양의 치료 표적을 식별하고 비교하기 위해 게놈 분석 및 기능적 게놈 스크리닝을 활용하는 종간 비교 종양유전체학 접근 방식을 개발했습니다.

악성 말초 신경초 종양의 마우스 모델에서 치료 표적을 식별하기 위한 유전자 프로파일링 및 게놈 규모 드롭아웃 스크리닝

우리는 유전자 조작 쥐의 신경계 신생물이 인간 쥐의 병리를 정확하게 재현하는지 여부를 평가하는 방법론을 개발했습니다. 여기서는 이러한 조직학적 기술, 정의된 병리학적 기준 및 배양 방법론을 P 0-GGFβ3 마우스 모델에서 발생하는 신경섬유종 및 악성 말초 신경초 종양에 적용합니다.

유전자 조작 마우스 모델에서 악성 말초 신경초 종양 식별, 진단 및 등급 지정

신경섬유종증 1형(NF1)은 성장을 위해 특정 신경 미세 환경이 필요한 양성 말초 신경초 종양(신경섬유종)을 유발합니다. NSG 마우스에 인간 슈완 세포의 신경내 주사를 사용하여 최적화된 동소 이종이식 모델이 개발되었습니다. 이 모델은 인간 신경섬유종을 요약하고 치료 전략을 평가할 수 있는 귀중한 플랫폼을 제공합니다.

신경섬유종증 1형 신경섬유종에 대한 동소 좌골 신경 이종이식편

이 프로토콜은 초파리의 눈 / 더듬이 가상적인 디스크 (EAD에게)에서 형광 표시, 유 전적으로 정의 클론 종양을 생성하는 방법을 보여줍니다. 그것은 세 번째 령 유충과 방법을 시각화하고 유전자 발현 변화와 종양 침입을 정량화를 처리하는 방법에서 EAD 뇌를 해부하는 방법에 대해 설명합니다.

그만큼<em&gt; 초파리</em&gt; 가상적인 디스크 종양 모델 : 유전 모자이크를 사용하여 유전자 발현 및 종양 침윤의 시각화 및 정량화

이 프로토콜에서는 이미지 거주 종양 침투 CD8 T 세포 인간 폐 종양 조각 내 붙일 결합 된 항 체와 함께 표시 하는 방법을 설명 합니다. 이 기술은 confocal 현미경 검사 법을 사용 하 여 CD8 T 세포 이동의 실시간 분석을 허용 한다.

전 비보 인간의 폐 종양에 거주 CD8 T 림프 톨의 이미징 조각 사용 하 여 Confocal 현미경 검사 법

낮은 분야 (L-밴드, 1.2 g h z) 전자 상자성 공명 녹는 nitroxyl 및 trityl 프로브를 사용 하 여 유방암의 마우스 모델에서 종양 microenvironment에 생리 적으로 중요 한 매개 변수 평가 대 한 시연입니다.

Vivo에서 PH, pO2, 산화 환 원 상태, 고 농도의 인산 염 및 종양 Microenvironment에 티의 EPR 평가

이 프로토콜 설명 합니다 자세한 워크플로 생성에 대 한 immunomodulators, 예를 들어 bispecific T 세포 engagers를 인코딩 하는 홍 역 바이러스를 사용 하 여 표현 위한 oncolytic 바이러스의 비보 특성화 전. 응용 프로그램 및 다른 벡터 플랫폼 및 transgenes 적응 임상 번역 소설 immunovirotherapeutics의 개발을 가속화할 것 이다.

종양 대상 Immunomodulation에 대 한 paramyxoviruses: 설계 및 평가 전 비보

학습하세요 악성 말초 신경 시스 종양에서 Floxed 대립 유전자의 ex vivo 절제 방법을 통해 배아 치사성 유전자 녹아웃이 종양 성장에 미치는 영향을 연구하는 기법입니다. 유전자 조작 마우스 모델을 활용하여 생체 내 기능 상실 효과를 분석하고 종양 생물학의 새로운 연구 방향을 제시합니다.

악성 말초 신경 시스 종양 세포에서 Floxed 대립 유전자의 Ex vivo 절제에 의한 종양 발생에서 유전자 기능 정의

더 많은 동영상 탐색