Name: 소분자 화합물의 신속하고 정량적 검출을 위한 측면 흐름 면역크로모그래피 스트립 개발 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: 배우세요 측면 흐름 면역크로모그래피 스트립 제작 방법을. 염화금산과 구연산나트륨으로 교원질 금을 합성하고, 글래스 파이버 멤브레인을 이용해 결합체 패드를 준비한 뒤 PVC 보드에 조립하는 전체 과정을 상세히 다룹니다.

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이 작품은 중앙 부서와 제휴 한 고등 학습 기관의 기초 연구 기금에 대한 특별 기금에 의해 지원되었다. 우리는 중국 의학의 베이징 대학의 고전 처방 기본 연구 팀의 지원을 주셔서 감사합니다.

이 연구에서 수행 된 모든 절차는 중국 의학의 베이징 대학의 윤리 검토위원회에 의해 승인되었다 (승인 번호 2017BZYYL00120).
1. 콜로이드 골드의 준비 및 특성화
참고: 콜로이드 금 합성의 경우, 콜로이드 금이 용기의 내벽에 쉽게 흡착되어 불순물에 의해 침전되기 쉽기 때문에, 콜로이드 금의 합성 및 저장을 위한 용기는 산(증류수 40mL, 농축 황산 360mL, 농축 황산 360mL, 농축 황산 20g)에 철저히 세척되어야 합니다. 구연산 환감 방법을 사용하여 콜로이드 골드를 합성하였다.
<ol><li>마그네틱 교반기를 켜고 플라스크(250mL)를 믹서에 놓습니다.</li>
	<li>각각 4% 금 염화산 용액과 1% 구연산 용액을 준비합니다.</li>
	<li>120mL의 증류수를 둥근 바닥 플라스크에 넣고 가열하여 온도성 자기 교반기에서 끓입니다.</li>
	<li>끓는 것을 유지하고 빠르게 0.5 mL의 4 % 클로로우릭 산과 5 mL의 1 % 구연산 나트륨을 추가하십시오.</li>
	<li>용액의 색상을 관찰합니다. 옅은 노란색 클로로우릭 산 용액은 몇 분 안에 와인을 붉게 합니다.</li>
	<li>용액이 무색에서 투명 와인 레드로 바뀌기 전까지 10 분 동안 계속 가열하십시오.</li>
	<li>온도 조절 성 자기 믹서의 힘을 끄고 실온으로 냉각하고 혼합물을 깨끗한 병으로 옮습니다. 4 °C에 보관하십시오.</li>
	<li>자외선 분광및 TEM 이미징에 의하여 AuNPs의 크기와 형태를 결정합니다. 참고: 다양한 용도에 대한 콜로이드 금 입자의 크기는 구연산 나트륨 및 클로로우릭산의 비율을 변경하여 얻을 수 있습니다.</li>
</ol>2. AuNPs-mAb 컨쥬게이트 합성
참고: 항체가 정전기 흡착에 의해 콜로이드 금에 결합하기 때문에 단백질 표면과 콜로이드 금의 전하가 결합 강도에 직접적인 영향을 미칩니다. 따라서, 완충pH 값은 항체-콜로이드 골드 컨쥬게이트의 안정성에 영향을 미치는 중요한 인자이다. SSD 및 안티 SSD mAbs는 이 프로토콜의 예로 사용됩니다.
<ol><li>커플링 pH 평가<ol>
<li>NaCl 용액 100μL(10% m/v)를 8개의 튜브에 추가합니다.</li>
		<li>0.1 M K2CO3로pH 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12에서 AuNP 솔루션을 조정합니다.</li>
		<li>100 μL의 콜로이드 골드 용액(pH 조정 5-12)을 NaCl을 포함하는 8개의 튜브에 추가합니다.</li>
		<li>블렌딩 후 몇 분 동안 용액을 견딜 수 있습니다. 각 튜브 용액의 색상 변화를 관찰하고 빨간색으로 남아있는 튜브를 기록합니다.</li>
		<li>AuNP-mAb 컨쥬게이트를 준비하기 위한 최적의 pH 값으로K2CO3 및 안정적인 솔루션 색상을 가장 적게 첨가하여 pH 값을 선택합니다. 참고: 프로브가 AuNP에 의해 파괴될 수 있으므로 pH 미터를 사용하지 마십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>항체 양 평가<ol>
<li>NaCl 용액 100μL(10% m/v)를 8개의 튜브에 추가합니다.</li>
		<li>각 튜브에 최적의 pH가 있는 콜로이드 골드 용액 100 μL을 추가합니다.</li>
		<li>상기 8개의 튜브에 단클론 항체 용액(단백질 농도 0.1 mg/mL-3.2 mg/mL)을 추가한다.</li>
		<li>블렌딩 후 몇 분 동안 용액을 견딜 수 있습니다. 각 튜브 용액의 색상 변화를 관찰하고 빨간색으로 남아있는 튜브를 기록합니다.</li>
		<li>AuNP-mAb 컨쥬게이트를 준비하기 위한 최적의 mAb 양으로서 mAb의 가장 낮은 농도와 안정적인 용액 색으로 항체 양을 선택한다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>재서스펜션 버퍼 준비: M Tris-HCl(pH 8.8), 1% (w/v) BSA, 0.5% (v/v) 트위엔 20 및 1% (v/v) PEG 20000을 추가하고 잘 혼합합니다.</li>
	<li>AuNP-mAb 공주물의 합성<ol>
<li>콜로이드 골드 용액 10mL를 복용하고 0.1 M K2CO3을 사용하여 최적의 pH 값으로 용액을 조정하십시오.</li>
		<li>SSD mAbs를 적절한 농도로 천천히 추가하고 실온에서 30 분 동안 흔들어주세요.</li>
		<li>4°C에서 10분 동안 83 x g(1,000 rpm)에서 혼합물을 원심분리합니다. 불순물 또는 침전 된 콜로이드 금을 포함하는 침전물을 제거하십시오.</li>
		<li>4°C에서 30분 동안 8,330 x g(10,000 rpm)에서 혼합물을 원심분리합니다. 상체를 버리고 침전은 콜로이드 골드-mAb 컨쥬게이트입니다.</li>
		<li>강수량을 소화하기 위해 재서스펜션 버퍼를 추가합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 스트립 의 집회
참고: 나중에 플로우 면역 분석의 경우 멤브레인 물질의 선택 및 전처리가 검사해야 하는 시험에 직접적인 영향을 미칩니다. 면역 크로마토그래피 스트립은 샘플 패드, 컨쥬게이트 패드, 니트로셀룰로오스(NC) 멤브레인, 흡수패드 및 PVC보드(도 1)로구성된다. 멤브레인 물질은 불균일성을 제거하기 위해 스테레오 현미경 검사법에 의해 검사되고 평가되어야합니다.
<ol><li>NC 멤브레인을 PVC 보드에 2cm 떨어져 보드의 흡입 끝의 가장자리에서 붙여 넣습니다.</li>
	<li>SSD-BSA(2 mg/mL)를 테스트 라인(1mm 너비)으로 NC 멤브레인(2cm 떨어져)에 드롭와이즈를 추가하고, NC 멤브레인(1.5 mg/mL)에 드롭와이즈를 제어 라인(1mm 폭)으로 추가합니다. 추가된 단백질의 양을 제어합니다.</li>
	<li>흡수 패드를 NC 멤브레인 위의 PVC 시트에 부착하고 NC 멤브레인과 2mm 겹칩니다.</li>
	<li>유리 섬유 멤브레인을 AuNPs-mAb 컨쥬게이트 용액에 잠급합니다. 37°C에서 인큐베이터에서 젖은 멤브레인을 건조시킵니다.</li>
	<li>유리 섬유 멤브레인을 길이 5cm, 너비 2cm로 다듬어 컨쥬게이트 패드로 사용하십시오.</li>
	<li>전처리된 컨쥬게이트 패드를 NC 멤브레인 아래에 붙여 넣습니다. NC 멤브레인과 겹치는 길이는 0.1cm여야 합니다. 참고: 유리 섬유막은 단백질을 결합하고 방출하는 강력한 능력을 가지고 있습니다.</li>
	<li>퓨전 3 멤브레인을 길이 1.8cm, 너비 3.5cm로 다듬어 시료 패드로 사용하십시오.</li>
	<li>샘플 패드를 PVC 보드에 붙여 넣은 다음 컨쥬게이트 패드와 2mm 겹칩니다.</li>
	<li>조립된 종이 보드를 절단기를 사용하여 3.5mm 너비의 스트립으로 자르고 배치 라미네이션 시스템을 사용하여 압축합니다.</li>
	<li>마지막으로, 테스트 스트립을 쉘에 넣고 건조제가 들어있는 알루미늄 호일 가방에 밀봉하고 빛에서 멀리 보관하십시오. 이제 ICS가 조립됩니다. 참고: 위의 실험실 절차입니다. 생산에서 금 살포 장비와 크로스 멤브레인 계측기는 금을 분사하고 T 와 C 라인을 만드는 데 사용됩니다.</li>
</ol>4. 정량적 검출
<ol><li>샘플 용액 50μL을 샘플 구멍에 떨어뜨려 크로마토그래피 공정을 관찰합니다. 참고: 흡수 패드에 의해 구동되는 모세관 작용의 결과로, 샘플 용액은 스트립의 다른 쪽 끝으로 이동합니다. 샘플 용액이 컨쥬게이트 패드에 도달하면 샘플내의 SSD(항원)는 패드상에 미리 로드된 AuNPs-mAb와 반응한다. 용액이 이동하여 T라인에 도달하면 SSD가 없는 AuNPs-mAb는 SSD-BSA(항원-담체 단백질 컨쥬게이트)에 의해 선택적으로 포획되어 T-line상에 적색으로 나타난다. 그런 다음 솔루션이 C 선으로 마이그레이션되어 AuNPs-mAb가 이 지역의 염소 항 마우스 IgG에 의해 캡처되어 C 선에 빨간색으로 표시됩니다.</li>
	<li>휴대용 스트립 판독기로 스트립을 분석합니다. 이 기계는 테스트 라인의 비율을 제어 선(T/C)에 제공할 수 있습니다.</li>
	<li>ICS 테스트의 특이성, 감도, 반복성 및 안정성을 평가합니다. 참고: 정성적 감지하에 빨간색 줄 하나가 양수 결과(제어 선)를 나타냅니다. 두 개의 빨간색 선은 음의 결과(테스트 및 제어 선)를 나타냅니다. 제어 선이 없는 경우 테스트가 유효하지 않은 것으로 간주됩니다.</li>
</ol>

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</ol>

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이 작품에서, 우리는 천연 제품 유래 소분자에 대한 mAbs의 준비를위한 프로토콜을 제시한다. 절차에서 주의를 필요로하는 필수 단계와 문제가 설명되었으며, 우리는 작은 분자 SSD를 사용하여이 프로토콜의 유용성을 예로 제시했습니다. 예스펙트럼, TEM 이미지, 정량적 결과 및 방법론적 조사가 대표 데이터에 표시됩니다. 따라서, 우리는 콜로이드 금 생산, AuNP-mAb 컨쥬게이션 및 스트립 조립 전략이 여기에 제시된 표적 분자를 빠르게 검출하는 데 사용될 수 있는 새로운 면역분석의 생성을 초래한다는 것을 입증하였다.
면역 크로마토그래피 스트립은 조작이 용이하며 반응이 매우 빠습니다. 50μL의 시료만 필요하며 5분 이내에 감지가 완료됩니다. 대조적으로, 또한 면역 분석인 ELISA 방법은, 다중 세정 및 긴 잠양을 포함하여 몇 시간이 필요합니다. 다중 세척 및 긴 인큐베이션 기간은 시료 매트릭스의 비특이적 반응을 효과적으로 제거하여 신호 값을 증가시킴으로써 신호 대 잡음 비율 및...

멤브레인 기반 측면 흐름 면역 크로마토그래피 스트립(ICSs)은 저비용 및 신속한 검출을 위한 유용한 도구입니다. 면역 크로마토그래피 의 마커로서 캐리어 및 콜로이드 골드로서 니트로셀룰로오스 멤브레인은 가장 일반적으로 사용되는 POCT(치료 시점 테스트) 방법이며, 프로젝트의 테스트 범위가 더 넓다. 임신 중 모니터링에 대한 본래의 적용에서, 그들의 사용은 혈액 응고 상태1,2,심근 상해3,수의학4,농약 잔류물5,전염병6 및 약물 농도를 모니터링하기 위해 확장되었습니다. 더 많은 유형의 샘플을 소변, 타액, 전혈, 혈청 및 기타 체액7,8,9를포함하여 더 많은 유형의 샘플을 평가할 수 있다.
최근 몇 년 동안, HPLC, UPLC, LC-MS 및 ELISA를 포함하여 장애의 진단에 있는 바이오마커를 검출하기 위한 수많은 새로운 분석이 개발되었습니다, 이는 민감하고 정확하고, 믿을 수 있고 특정합니다. 그러나 이러한 방법은 정교한 계측, 복잡한 전처리 및 시간이 많이 소요되는 처리9가필요합니다. 따라서 약용 활성 화합물의 자체 및 실시간 검출을 위한 보다 신속하고 편리한 치료 시점 진단 전략을 개발하는 것이10,11로긴급하다.
ICS의 인기, 특히 일반적인 테스트에 대 한, 그들의 사용의 용이성에 의해 구동 된다, 그들은 전문가 또는 정교한 악기 설정 필요 하지 않기 때문에12. 즉, 특별한 훈련을 받지 않은 사람은 스트립이나 자체테스트(13)를조작할 수 있습니다. 시험 결과는 5분 안에 얻어질 수 있으며, 이는 현장검사(14)에사용될 수 있다는 것을 의미한다. 또한, 우리의 계산에 따르면, 스트립의 비용은 1RMB 보다 낮을 수 있습니다15,이는 테스트가 홍보 저렴 의미16. 따라서 ICS는 비교적 정확하고 간단하며 저렴한 일회용 장치입니다. 콜로이드골드(17)및18을 기반으로 한 ICS도 빠른 COVID-19 검출에 적용된다.
ICS의 원리는 샌드위치 ICS 및 경쟁 ICS로 나눌 수 있습니다. 도 1A는 주로 종양 마커, 염증인자 및 인간 융골 생식선 호르몬(HCG, 초기 임신 항원)을 포함한 단백질과 같은 거대 분자 물질을 검출하는 데 사용되는 샌드위치 ICS의 회로도다. 이 방법에서, 항원의 상이한 에피토프를 표적으로 한 쌍항체가 사용되고, 포획 항체는 시험선으로서 NC 멤브레인상에서 건조된다. 표지된 항체는 컨쥬게이트 패드에서 건조되고, 이차 항체는 대조군선으로서 사용된다.
도 1B는 주로 소분자 물질(MWCO &lt; 2000 Da)을 검출하는 데 사용되는 경쟁ICS의 회로도다. 코팅 항원은 NC 멤브레인에 시험선으로 고정되고, 표지된 항체는 컨쥬게이트 패드에서 건조된다. 검출 하는 동안, 샘플 및 표지 된 항체 는 모세관 작용 하에서 검출 라인을 통해 흐르고, 코팅 된 항원경쟁적으로 샘플에서 무료 항원결합 및 검출 라인에 적색을 개발한다.
최근에는천연물(19)에대한 단일클론 항체 생성 의 절차를 설명했다. 이 작품에서는 신속한 현장 검출을 위해 준비된 항SSD mA20을 기반으로 한 새로운 측면 흐름 면역 분석제를 개발했습니다. 결과는 면역 크로마토그래피 분석이 천연 제품 유래 화합물을 검출하기 위한 필수불가결하고 편리한 도구임을 나타냅니다.
<img alt="측면 흐름 면역분석 다이어그램; 표지된 항체, 테스트 라인을 사용한 샘플 처리를 보여줍니다." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62754/62754fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 도 1 면역크로마토그래피 분석의 회로도 도면 (A)샌드위치 면역 크로마토그래피 테스트 스트립. (B)간접 경쟁 면역 크로마토그래피 테스트 스트립. 이 수치는 2018 년21에서 수정되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62754/62754fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

<table><tbody><tr><td>클로로오우르산 용액(HAuCl4)</td><td>Tianjin Fu Chen 화학 시약 공장</td><td>JY-SJ102</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>AMRESCO</td><td>332</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 튜브 15mL</td><td>Corning</td><td>430645</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 튜브 50mL</td><td>Corning</td><td>430828</td><td></td></tr><tr><td>ELISA 플레이트, 96웰</td><td>NUNC</td><td>655101</td><td></td></tr><tr><td>여과지</td><td>Sinopharm</td><td>H5072</td><td></td></tr><tr><td>유리 섬유 막</td><td>Jieyi</td><td>XQ-Y6</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티 마우스 IgG 항체</td><td>적용 Gen:</td><td>C1308</td><td></td></tr><tr><td>니트로 셀룰로오스 막</td><td>Millipore</td><td>millipore 180</td><td></td></tr><tr><td>ovalbumin</td><td>베이징 BIODEE</td><td>5008-25g</td><td></td></tr><tr><td>PEG20000</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td>RNBC6325</tr><tr><td>피펫 10mL</td><td>COSTAR</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>피펫 25mL</td><td>FALCON</td><td>357525</td><td></td></tr><tr><td>반 강성 PVC 시트</td><td>Jieyi</td><td>JY-C104</td><td></td></tr><tr><td>구연산 나트륨</td><td>베이징 화학 작품</td><td>C1034</td><td></td></tr><tr><td>소듐 오디</td><td>에이트 Sinopharm Chemical</td><td>BW-G0008</td><td></td></tr><tr><td>Sulfo-GMBS</td><td>Perbio Science 독일</td><td>22324</td><td></td></tr><tr><td>TipOne 팁 1,000 &마이크로; L</td><td>Starlab</td><td>S1111-2021</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Solarbio</td><td>77-86-1</td><td></td></tr><tr><td>TWEEN 20</td><td>Solarbio</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr></tbody></table>

소분자 화합물의 신속하고 정량적 검출을 위한 측면 흐름 면역크로모그래피 스트립 개발

Development of a Lateral Flow Immunochromatographic Strip for Rapid and Quantitative Detection of Small Molecule Compounds

멤브레인 기반 측면 흐름 면역 크로마토그래피 스트립(ICSs)은 저비용 자가 진단을 위한 유용한 도구이며 독소, 생리지수 및 임상 바이오마커 검출에 효율적으로 적용되어 왔다. 이 프로토콜에서, 우리는 신속하고 민감하고 정량적인 측면 흐름 면역 분석술 (AuNP를 마커로 사용하여 프로브로)를 개발하는 단계에 대한 자세한 설명을 제공합니다. 절차는 콜로이드 금의 준비 및 특성화, AuNP-mAb 공수의 합성, 면역 크로마토그래피 스트립의 조립 및 분석의 방법론적 조사를 설명합니다. 결과는 최종 스트립이 생리학적 및 생물학적 지수의 신속하고 정확한 분석에 대체 도구를 제공 할 수있는 작은 분자의 신속하고 편리한 자가 진단을 위해 더 활용 될 수 있음을 보여 주었다.

콜로이드 골드의 특성화 준비된 콜로이드 골드 솔루션은 클라렛 레드였습니다. TEM 분석은 AuNPs(그림2A-D)의형태 와 모양을 결정하는 데 사용되었습니다. 도 2A 및 도 2B는 입자가 모양의 다각형이며 균일하게 분포되어 있음을 보여줍니다. AuNPs의 평균 직경은 약 14nm(도2C)인것으로 나타났다. AuNP의 고해상도 TEM(HRTEM) 이미지는 도 2D 및 도 2E에표시됩니다. 개별 AuNP에서 가져온 HRTEM 이미지는 0.117 nm의 간격이 있는 연속 프린지 패턴을 보여줍니다. 5개의 금 콜로이드 용...

Membrane-based lateral flow immunochromatographic strips (ICSs) are useful tools for low-cost self-diagnosis and have been efficiently applied to toxin, ...

절차는 콜로이드 금의 준비와 면역 크로마토그래피 스트립의 조립을 설명합니다. 첫째, 클로로우릭산과 구연산 나트륨은 콜로이드 금의 합성에 사용하였다. 구연산 나트륨을 클로로우릭 산 용액에 첨가하고 적절한 입자 크기로 콜로이드 금을 얻기 위해 삶아졌습니다.합성, 콜로이드 골드 항체 공주. 원심분리 후 콜로이드 금 입자는 적절한 용액으로 용해된 다음 콜로이드 골드 용액을 얻기 위해 다시 중단되었습니다. 유리 섬유 멤브레인을 컨쥬게이트 패드를 준비하기 위해 유리 섬유 멤브레인을 컨쥬에침한다.T 라인과 C 라인으로 NC 막에 인공 항원 및 이차 항체를 떨어 뜨립니다. NC 멤브레인, 흡수막, 샘플 패드 및 유리 섬유 멤브레인을 각각 PVC 보드에 부착합니다. 조립된 종이 보드를 3.5밀리미터 너비스트립으로 자른다.결선불금 염산 용액과 1% 구연산 용액을 각각 1% 마그네틱 교반기를 켜고 플라스크를 믹서에 놓습니다. 120 밀리리터 증류수를 둥근 바닥 플라스크에 넣고 가열하여 온도성 자기 교반기에서 끓입니다.끓는 것을 유지하고 0.5 밀리리터를 전체 퍼센트 클로로우릭 산과 1 % 나트륨 구연산의 5 밀리리터를 추가하십시오. 5~10분간 계속 가열합니다. 옅은 노란색에서 와인 레드로 변경 되는 솔루션의 색상을 관찰 합니다.온도 조절 성 자기 믹서의 힘을 끄고 실온으로 냉각시키고 혼합물을 깨끗한 병에 넣습니다. 4 센티미터에 저장합니다. 금 나노 입자는 Tyndall 효과를 보여줍니다.금 나노 입자의 크기와 형태는 자외선 분광법 및 전송 전자 현미경 이미징에 의해 결정되었다. 8개의 튜브에 100개의 마이크로리터 염화나트륨 용액을 추가합니다. 코로이드 골드 솔루션을 리터당 0.1 mol을 사용하여 pH 5 ~ 12로 조정합니다.염화 나트륨을 함유한 8개의 튜브에 콜로이드 골드 용액 100마이크로리터를 추가합니다. 블렌딩 후 몇 분 동안 포스트를 위해 서 있습니다. 각 튜브 용액의 색상 변화를 관찰하고 빨간색으로 남아있는 튜브를 기록합니다.탄산칼륨의 가장 낮은 양과 안정적인 용액 색을 컨쥬게이트를 준비하기 위한 최적의 pH 값으로 pH 값을 선택한다. 동일한 접근 방식을 적용했습니다. 색상 변화를 관찰하고 빨간색으로 남아있는 튜브를 기록합니다.최적의 mAB 양으로 mAB의 가장 낮은 농도와 안정적인 용액 색으로 항체 양을 선택한다. 10 밀리리터 콜로이드 골드 용액을 복용하고 탄산칼륨 당 0.1 mol을 사용하여 최적의 pH 값으로 용액을 조정하십시오. SSd mAB를 적절한 농도로 천천히 추가하고 실온에서 30 분 동안 흔들어줍니다.2000 RPM에서 혼합물을 4센티미터에서 20분 동안 원심분리합니다. 침전된 콜로이드 골드의 불순물을 함유한 침전물을 제거합니다. 10, 000 RPM에서 40분 동안 혼합물을 원심분리합니다.상부체를 폐기합니다. 침전은 콜로이드 골드 mAB 컨쥬게이트입니다. 트리스 염산, BSA, 트위엔 20 및 PEG 20, 000을 추가한 다음 잘 혼합하여 재서스펜션 버퍼를 준비합니다.재서스펜션 버퍼를 추가하고 침전을 분리합니다. 유리 셀룰로오스 멤브레인, 폴리에스테르 셀룰로오스 멤브레인 및 PVC 보드를 포함하는 멤브레인 재료 스트립. 멤브레인 물질은 불균일성을 제거하기 위해 멸균 현미경으로 추적하고 평가해야합니다.먼저, NC 멤브레인을 PVC 보드에 2센티미터 를 보드 의 단면 끝의 가장자리에서 놓습니다. 둘째, NC 멤브레인에 밀리리터 SSd-BSA당 2밀리그램을 테스트 라인으로 상층부에서 2센티미터 로 떨어뜨리고 NC 멤브레인에 밀리리터 골드 안티마우스 IgG당 1.5밀리그램을 제어 라인으로 하부 가장자리에서 2cm 떨어진다. 흡수 패드를 NC 멤브레인 위의 PVC 시트에 부착하고 NC 멤브레인과 2 밀리미터 겹칩니다.유리 섬유 멤브레인을 길이 5cm, 너비 2cm로 다듬고 컨쥬게이트 패드로 사용하십시오. 유리 섬유 막을 금 나노입자 mAB 컨쥬게이트 용액에 담급니다. 잠시 동안 몸을 담그면 금 나노 입자 mAB 흡수를 합니다.인큐베이터의 넓은 멤브레인을 37도 건조시킵니다. NC 멤브레인 아래에 전처리된 컨쥬게이트 패드를 붙여넣은 경우 NC 멤브레인과 겹치는 길이는 0.1cm여야 한다. Fusion3 멤브레인을 길이 1.8cm, 너비 3.5cm로 다듬고 샘플 패드로 사용합니다.그런 다음 샘플 패드를 PVC 보드에 놓고 컨쥬게이트 패드와 2밀리미터 겹칩니다. 절단, 절단 기를 사용하여 3.5 밀리미터 폭 스트립에 종이 보드를 조립하고 배치 라미네이션 시스템을 사용하여 컴팩트. 마지막으로 테스트 스트립을 셸에 넣습니다.건조제와 상점에서 빛이 없는 알루미늄 호일 백에 밀봉하십시오. 이제 ICS가 조립됩니다. 샘플 용액 50마이크로리터를 샘플 구멍에 떨어뜨려 크로마토그래피 공정을 관찰합니다.다음으로 휴대용 스트립 판독기를 사용하여 스트립을 분석합니다. 이 기계는 제어 선에 대한 테스트 라인의 비율을 제공할 수 있습니다. ICS 테스트의 특이성, 감도, 반복성 및 안정성을 평가합니다.준비된 콜로이드 골드 솔루션을 읽었습니다. 전염 전자 현미경 분석은 입자가 모양의 다각형이고 14 나노미터 평균 직경으로 균일하게 분포되었다는 것을 밝혔습니다. 고해상도 전송 전자 현미경 이미지는 금 나노 입자의 0.117 나노 미터의 간격으로 연속 프린지 패턴을 보였다.자외선 가시 흡수는 구연산 나트륨과 클로로우릭산의 비율을 변경하여 콜로이드 금 입자의 다양한 크기를 얻을 수 있음을 나타냈다. 정량 실험에서 사이코사포닌 D의 테스트 결과를 가진 스트립은 휴대용 ICS 판독기를 사용하여 스캔하였다. 사이코사포닌 D의 비농도를 각 농도에서 상응하는 흡수에 관련시킴으로써 표준 곡선을 계산했습니다.방법론적 조사 후, 소분자 화합물의 정량적 및 반질적 검출을 위해 방법을 적용할 수 있다. 이 절차는 콜로이드 금의 준비, 금 나노 입자 mAB 공수의 합성, 스트립 및 방법론 적 조사를 조립 포함. 이 작품은 작은 분자의 신속하고 정량적 검출에 사용하기 위한 면역 크로마토그래피 스트립의 개발을 위한 상세한 프로토콜을 제공합니다.이 비디오를 본 후 면역 크로마토그래피 스트립의 준비에 대한 좋은 이해가 있기를 바랍니다. 당신의 실험에 대한 보고 행운을 주셔서 감사합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

그들은 kHz에서 속도 저렴 picoliter, 자기들에게만 혈관을 생성할 수 있기 때문에 비말 기반 microfluidic 플랫폼은 높은 처리량 실험을위한 유망한 후보자 있습니다. 빠르고, 민감하고 고해상도 형광 spectroscopic 방법과의 통합을 통해 이러한 시스템 내에서 발생하는 정보의 다량은 효율적으로 추출 무력화하고 이용하실 수 있습니다.

microfluidic 비말 플랫폼 형광 검출 방법

통합 마이크로 열가소성 칩은 분자 진단으로 사용하기 위해 개발되었습니다. 이 칩은 핵산 추출, 역 transcriptase 및 PCR을 수행합니다. 제조 및 칩을 실행하기위한 방법은 설명되어 있습니다.

마이크로 유체 칩 제작 및 인플루엔자을 감지하는 방법

이 문서에서 우리는 단일 세포 분석을위한 마이크로 유체 칩을 제시한다. 그것은 수있는 세포 내 단백질, 효소, 조효소, 형광 분석이나 면역에 의해 두 번째 메신저의 정량화.

단일 세포의 다목적 화학 분석을위한 미세 유체 칩

이 프로토콜은 고래류의 미오글로빈에 강하게 반응하는 두 개의 IgG 클래스 단클론 항체(mAb)의 개발을 설명합니다. 이러한 mAb는 샌드위치 형식을 기반으로 하는 콜로이드 금 면역크로마토그래피 테스트 스트립에 적용되어 고래류의 Mb를 바다표범 및 다른 동물과 구별합니다.

고래 마이오글로빈의 검출을위한 콜로이드 골드 기반 면역 크로마토 그래피 테스트 스트립의 개발

여러 분석 요구 사항에 대한 간단한 제조 방법을 조사하기 위해 면 소재로 만든 유체 흡수 채널 시스템을 만들었습니다. 이 장치는 다중 검출 플랫폼을 구축하고 아질산염, 총 단백질 및 우로빌리노겐의 임상 소변 검사를 위해 측면 유동 기반 생체 의학 장치에 일반적으로 영향을 미치는 오염 문제를 해결하는 데 사용되었습니다.

면 분석 장치를 제조

미세 바이오 센서 플랫폼 설계 및 다양 한 analytes의 신속 하 고 민감한 정량화에 대 한 낮은 비용 드라이 필름 포토 레지스트 기술을 사용 하 여 조작. 이 단일 사용 시스템 중지 흐름 기술에 의하여 효소 연결 된 분석 실험에-칩-움직일의 전기 판독을 허용합니다.

드라이 필름 포토 레지스트 기반 전기 화학 미세 바이오 센서 플랫폼: 장치 제작, 온 칩 시험 준비 및 시스템 운영

여기 우리는 개발 및 유효성 검사는 단일 분자 배열 디지털 ELISA 분석 결과의 인간의 샘플에서 모든 IFN-α의 매우 민감한 탐지를 가능 하 게 설명 하는 프로토콜을 제시.

개발 및 검증 磁 단일 분자의 배열 디지털 효소 연결 된 Immunosorbent 분석 결과 인간 인터페론-α에 대 한

미세 유체 공학은 진단 테스트 개발을위한 강력한 도구입니다. 그러나 값비싼 장비와 재료, 힘든 제조 및 취급 기술이 필요한 경우가 많습니다. 여기에서는 저비용 및 사용이 간편한 환경에서 자성 마이크로 및 나노 입자 기반 면역 분석을위한 아크릴 미세 유체 장치의 제조 프로토콜에 대해 자세히 설명합니다.

컴퓨터 수치 제어 자기 나노 입자 기반 면역 분석에 대한 엇갈린 제한이있는 미세 유체 아크릴 장치의 마이크로 밀링

긴급한 뎅기열 진단 요구 사항을 해결하기 위해 임상 혈청/혈액 샘플에서 뎅기열 NS1 항원 농도를 정량화하기 위한 스마트폰 앱 통합 뎅기열 NS1 종이 기반 분석 장치(DEN-NS1-PAD)를 소개합니다. 이 혁신은 자원이 제한된 환경에서도 다양한 의료 환경에서 임상적 의사 결정을 지원함으로써 뎅기열 관리를 향상시킵니다.

뎅기열 NS1 항원의 비색 및 정량적 검출을 위해 스마트폰 애플리케이션과 결합된 휴대용 종이 기반 면역분석

이 프로토콜은 종양 관련 단백질 분해 효소 활성의 생체 외 분석을 통해 현장 암 진단을 가능하게 하는 CRISPR-Cas 매개 다중 분석물 합성 소변 바이오마커 검사에 대해 설명합니다.

휴대용 진단을 위한 CRISPR-Cas 매개 다중분석물 합성 소변 바이오마커 검사

여기에서는 양자점 나노비드(QDNB)의 제조 및 QDNB 기반 측면 유동 면역분석 스트립을 사용한 질병 바이오마커 검출을 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 테스트 결과는 UV 조명 아래에서 정성적으로 평가할 수 있으며 형광 스트립 리더를 사용하여 15분 이내에 정량적으로 측정할 수 있습니다.

Quantum Dots Nanobeads를 기반으로 한 형광 측면 유동 면역분석법

배우세요 측면 흐름 면역크로모그래피 스트립 제작 방법을. 염화금산과 구연산나트륨으로 교원질 금을 합성하고, 글래스 파이버 멤브레인을 이용해 결합체 패드를 준비한 뒤 PVC 보드에 조립하는 전체 과정을 상세히 다룹니다.

소분자 화합물의 신속하고 정량적 검출을 위한 측면 흐름 면역크로모그래피 스트립 개발

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