Name: 파킨슨 병의 일방적 인 6-OHDA 병변 쥐 모델에서 L-DOPA 유발 운동 이상증 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: 학습하세요 6-OHDA 병변 쥐 모델에서 L-DOPA 유발 운동 이상증을 평가하는 방법을. Sprague-Dawley 수컷 쥐에 스테레오택식 수술과 만성 약물 처리를 적용하여 파킨슨 병의 병태생리학적 변화를 모방하고 신경과학 연구에 활용합니다.

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이 연구는 상파울루 연구 재단 (FAPESP, 보조금 2017/00003-0)의 지원을 받았습니다. 고등 교육 인력 향상을 위한 조정(CAPES)에 감사드립니다. Anthony R. West 박사, Heinz Steiner 박사, Kuei Y. Tseng 박사의 지원과 멘토링에 감사드립니다.

모든 실험은 Ribeirão Preto의 철학, 과학 및 편지 학부 윤리위원회 (CEUA/FFCLRP 18.5.35.59.5)에 따라 수행되었습니다.
1. 6-OHDA 병변
<ol><li>실험 시작 (6 주)에 체중이 200-250g 인 Sprague-Dawley 수컷 쥐를 사용하십시오. 표준 실험실 조건 (12:12 h 명암 주기, 06:00 h에 조명 켜짐, 온도 조절 시설 (22-24 ° C))에서 동물 (케이지 당 2-3 마리)을 수용하고 음식과 물을 자유롭게 사용할 수 있습니다. 참고: 중증 6-OHDA-병변 래트를 생성하는 방법에 대한 완전한 설명은다른 곳(42)에 기재되어 있다.</li>
	<li>실험 절차를 시작하기 전에 동물을 적절하게 적응시킵니다.</li>
	<li>수술 30 분 전에 노르 에피네프린 운반 억제제 이미 프라 민 (20mg / kg, 0.9 % 식염수에 용해 됨)을 투여하십시오 (복강 내, i.p). 참고: 이미프라민 투여는 도파민성 뉴런에 대한 6-OHDA 선택성을 증가시킵니다.</li>
	<li>케타민 / 자일 라진 (70/10 mg / kg)을 복강 내 투여하십시오.</li>
	<li>동물이 발가락 꼬집음에 대한 반응의 부족으로 깊게 마취되고 가열 패드 상단의 정위 장치에서 경향이있는 위치에 위치하는지 확인하십시오.</li>
	<li>머리의 모피를 제거하고 요오드 기반 스크럽과 알코올을 번갈아 가며 수술 부위를 3 번 소독하십시오.</li>
	<li>메스를 사용하여 미세 주사가 발생할 부위를 절개 (약 1cm)하십시오.</li>
	<li>면봉으로 두개골 부위를 청소하고 브레그마와 람다가 노출되었는지 확인하십시오.</li>
	<li>MFB 입체 좌표가 bregma43,44,45에서 가져왔는지 확인합니다: -4.3mm 전방, 1.6mm 측면(오른쪽) 및 8.3mm 복부(경막에서).</li>
	<li>6-OHDA를 0.4μL/min(0.1% 아스코르브산이 함유된 4μL의 식염수 중 10μg)의 속도로 50μL 해밀턴 유리 주사기를 사용하여 오른쪽 내측 전뇌 다발(MFB)에 일방적으로 투여합니다.</li>
	<li>수술이 끝나면 두피 절개 부위를 봉합하고 따뜻한 (~ 37 ° C) 멸균 0.9 % 식염수 (~ 10 mL / kg, sc)로 동물을 재수 화합니다.</li>
	<li>정위 프레임에서 동물을 제거하고 따뜻하게 된 회복 케이지에 넣으십시오. 의식을 회복 할 때까지 모니터링하십시오.</li>
	<li>스테핑 테스트 46,47을 사용하여 병변 후 4 주 후에 도파민 성 병변의 효과를 평가하십시오. 알림: 이 검사에서 병변에 반대하는 앞다리의 무운동증은 병변에 반대하는 앞발과 함께 조정 단계의 수를 통해 평가됩니다. 반대쪽 앞다리와 함께 3 개 이하의 조정 단계를 나타내는 쥐는 추정되는 심각한 6-OHDA 병변 쥐48로 연구에 포함되었습니다.</li>
</ol>2. L-DOPA 만성 치료
<ol><li>6-OHDA 병변 후 4 주 월요일에 만성 치료를 시작하십시오. 참고: AIM은 3주 동안 주 연속 3일(수요일, 목요일, 금요일) 동안 녹화되므로 월요일에 치료를 시작하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>쥐를 새로 준비한 L-DOPA (피하 (sc), 1 mL / kg)와 벤세 라지드 염산염 (각각 5 mg / kg 및 12.5 mg / kg)으로 3 주 동안 월요일부터 금요일까지 하루에 한 번45. 참고: 일단 설정되면 AIM은 L-DOPA의 각 관리와 함께 나타납니다. 따라서, L-DOPA 투여는 3주 유도 기간 후에 주 2-4회 AIMs48의 안정한 발현을 유지하기에 충분하다.</li>
</ol>3. 목표 기록 및 채점
<ol><li>09:00에서 17:00 사이에 실험을 수행합니다. 조사자가 쥐의 정체성과 약리학 적 치료를 전혀 알지 못하도록하십시오.</li>
	<li>쥐를 투명한 실린더 (직경 20cm x 높이 40cm)에 조심스럽게 넣고 적어도 15 분 동안 순응하도록하십시오. 바닥이 침구 재료로 덮여 있는지 확인하십시오. 실험자가 가능한 모든 각도에서 동물을 관찰 할 수 있도록 거울은 실린더 뒤에 위치해야합니다. 참고: 실험당 한 마리 이상의 쥐가 있는 경우 각 쥐에 대해 실린더를 사용합니다. 세션 사이에 동물을 조작하면 행동 분석을 방해 할 수 있습니다.</li>
	<li>고해상도 비디오 카메라를 축, 사지 및 구강 언어 AIM을 보기 쉬운 방식으로 배치합니다. 이러한 실험 조건에서 회전 거동이 존재하기 때문에 실린더 뒤의 미러를 통해 360° 각도로 AIM을 추적할 수 있습니다. 삼각대를 사용하거나 카메라를 벤치에 직접 고정하십시오. 참고: 오로롤 언어 AIM은 특히 회전 행동의 발생률이 높은 경우 점수를 매기기 어려울 수 있습니다. 동물이 15° 각도로 있는 평면보다 약간 아래에 카메라를 배치하여 비디오를 캡처하면 이 움직임 하위 유형을 관찰하는 데 도움이 됩니다.</li>
	<li>실린더에서 동물을 부드럽게 제거하고 L-DOPA (5mg / kg과 12.5mg / kg의 벤세 라지드, sc.)를 투여합니다.</li>
	<li>동물을 실린더에 다시 넣고 L-DOPA 주입 후 AIM을 추적하는 타이머를 시작합니다. 비디오 카메라를 사용하여 L-DOPA 주입 후 180분 동안 AIM을 기록합니다. 분석은 동물을 직접 관찰하여 수행 할 수 있지만 오프라인 채점이 선호됩니다. 알림: L-DOPA 투여 후 정확한 시간에 AIM을 채점할 수 있도록 타이머도 비디오로 녹화되었는지 확인하십시오.</li>
	<li>처음에설명된 대로 L-DOPA 주입 후 최대 180분까지 30분 간격으로 AIM을 채점합니다(정의는 표 1 참조). 점수는 1-2분 에포크에 걸쳐 주어져야 하며 축, 사지 또는 구강 언어로 분류되어야 합니다(그림 1).</li>
	<li>심각도와 진폭에 대한 각 AIM 및 속성 점수를 주의 깊게 관찰합니다. 지침은 표 1 을 사용하십시오. 사육, 킁킁거리기, 몸단장, 갉아먹는 것과 같은 정상적인 행동을 등급에 포함하지 마십시오. 총 6 개의 관찰 기간 (30, 60, 90, 120, 150 및 180 분)이 있습니다.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>하위</td>
		</tr><tr><td>축 방향 : 머리, 목 및 몸통의 비틀림</td>
		</tr><tr><td>사지 : 원위부와 근위 앞다리의 비자발적 움직임</td>
		</tr><tr><td>구강 언어 : 구강 안면 근육의 비자발적 움직임</td>
		</tr><tr><td>심각도</td>
		</tr><tr><td>0: 없음</td>
		</tr><tr><td>1: 간헐적(중단 포함, 관찰 시간의 절반 미만에 존재)</td>
		</tr><tr><td>2: 자주(중단되지만 관찰 시간의 절반 이상에 있음)</td>
		</tr><tr><td>3: 지속적이지만 외부 감각 자극에 의해 중단됨</td>
		</tr><tr><td>4 : 지속적이고 외부 감각 자극에 의해 중단되지 않음</td>
		</tr><tr><td>진폭</td>
		</tr><tr><td>축</td>
		</tr><tr><td>1: 약 30° 각도에서 머리와 목의 비틀림</td>
		</tr><tr><td>2: 약 30° &lt; 각도 ≤ 60°에서 머리와 목의 비틀림</td>
		</tr><tr><td>3: 약 60° &lt; 각도에서 90° 각도≤ 머리, 목 및 상부 몸통의 비틀림</td>
		</tr><tr><td>4: 머리, 목, 몸통이 90° 각도로 비틀&gt; 종종 쥐가 균형을 잃게 합니다.</td>
		</tr><tr><td>사지</td>
		</tr><tr><td>1 : 원위 앞다리의 작은 비자발적 움직임</td>
		</tr><tr><td>2: 원위부와 근위 앞다리의 전위를 유발하는 저진폭의 움직임</td>
		</tr><tr><td>3 : 어깨 근육을 포함한 전체 사지의 비자발적 움직임</td>
		</tr><tr><td>4: 종종 탄도와 유사한 강한 사지와 어깨 움직임</td>
		</tr><tr><td>오로롤링</td>
		</tr><tr><td>1 : 구강 안면 근육의 작은 비자발적 움직임</td>
		</tr><tr><td>2 : 혀 돌출이있는 높은 진폭의 구강 안면 운동</td>
		</tr></tbody></table>표 1: AIMS 정의 및 등급 기준.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62924/62924fig01.jpg"> 그림 1: 각 AIM 하위 유형을 보여주는 일련의 사진. (A에서 A'까지") 다양한 각도에서 근긴장과 유사한 움직임을 보여주는 축 방향 AIM입니다(A: 30° 각도, A': 30° &lt; 각도 ≤ 60°, A": 60° &lt; 각도≤ 90° 및 A'": &gt; 90° 각도). (B에서 B로") 원위(B 및 B')와 전체 앞다리(어깨, B 포함)의 비자발적 움직임을 보여주는 사지 AIM (검은색 화살표"). (C) 혀 돌출부가있는 높은 진폭의 구강 언어 AIM (빨간색 화살표). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62924/62924fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
4. 데이터 분석
<ol><li>앞서 설명한 대로 L-DOPA 투여 후 각 관찰 기간(즉, 6개의 관찰 기간)에 대한 심각도 및 진폭 점수를 곱하여 축, 사지 또는 구강 언어 AIM 하위 유형을 계산합니다20. 한 동물이 한 번의 테스트 세션에서 축적 할 수있는 이론적 최대 점수는 240입니다 (관찰 기간 당 최대 점수는 40입니다. 자세한 내용은 표 1 참조).</li>
	<li>만성 L-DOPA 투여 3주 동안 수요일, 목요일, 금요일에 기록된 6개의 관찰 기간 모두에 대한 AIM 점수를 플롯합니다(그림 2). AIM은 만성 L-DOPA 투여 3주 동안 각 점수 매일(그림 3) 또는 매주(그림 4)에 각 동물의 최대 점수를 나타내도록 요약할 수 있습니다.</li>
	<li>통계 분석 접근 방식을 선택하기 전에 데이터에 정규 분포에 가까운 분포가 있는지 확인하십시오. 참고: AIM 등급 척도는 순서형 데이터로 구성되며 비모수 통계량으로 분석할 수 있습니다. 모수 테스트는 반복 테스트 세션40 후 실험 그룹 간의 AIM 점수를 비교할 때 널리 사용됩니다.</li>
</ol>

저자는 이해 상충이 없습니다.

이 프로토콜은 MFB에서 6-OHDA의 일방적 미세주입에 의해 유도된 PD의 래트 모델에서 AIMs를 유도하고 분석하는 방법을 보여줍니다. 저용량의 L-DOPA (5mg / kg, 벤세 라지드 12.5mg / kg과 병용)를 매일 만성적으로 투여하면 치료 3 주 동안 AIM이 발생했습니다. 시간적 분석은 AIM의 현저한 증가를 나타냈으며, L-DOPA 투여 후 30분에서 90분 사이에 피크 용량 운동 이상증이 관찰됩니다. AIM은 축, 사지 및 구강 언어 근육에 영향을 미치는 반복적이고 목적없는 움직임입니다. 여기에 제시된 프로토콜과 데이터는 이전 문헌 22,23,49,50,51과 일치합니다.
<p class="jove_content...

도파민 전구체 L-3,4- 디 히드 록시 페닐알라닌 (L-DOPA)은 파킨슨 병 (PD)의 운동 증상에 가장 효과적인 치료법입니다 1. L-DOPA 요법은 PD와 관련된 운동 증상을 개선할 수 있지만 시간이 지남에 따라 효과가 떨어집니다. "마모 변동" 또는 "용량 종료 악화"와 같은 운동 변동은 단일 L-DOPA 용량의 효과 단축 기간으로 임상적으로나타납니다2. 다른 경우에는 임상 증상이 느린 비틀림 운동과 비정상적인 자세 (근긴장 이상)3 로 구성되며 도파민 수치가 낮을 때 발생합니다 (오프 기간 근긴장 이상)4. 반면에 L-DOPA 유발 운동 이상증 (LID)은 혈장과 뇌의 도파민 수치가 높을 때 나타납니다5.
LID는 무도병, 근긴장 이상 및 탄도6 운동과 같은 운동 합병증을 포함하는 쇠약해지는 부작용을 생성합니다. 일단 확립되면 LID는 모든 L-DOPA 투여 후에 발생합니다. 운동 합병증은 5 년 동안 L-DOPA 치료를받는 PD 환자의 40 % -50 %에서 발생하며 발병률은 수년에 걸쳐 증가합니다7. PD 환자에서 LID의 발달에 관여하는 병태생리학적 기전이 아직 완전히 밝혀지지는 않았지만, 도파민성 탈신경화, 박동성 L-DOPA 투여, 선조체 단백질 및 유전자의 다운스트림 변화, 비도파민 전달 시스템의 이상은 이러한 원치 않는 부작용의 발생에 기여하는 인자이다 6,8,9,10.
신경독 6- 하이드 록시 도파민 (6-OHDA)은 설치류 11,12,13,14에서 PD를 연구하기위한 잘 특성화 된 도구입니다. 6-OHDA는 혈액 뇌 장벽을 통과하지 않기 때문에 흑색 선조체 경로에 직접 주사해야합니다. 6-OHDA-유도된 도파민성 고갈은 농도- 및 부위-의존적이다15. 내측 전뇌 다발(MFB)에서 6-OHDA를 일방적으로 투여하면 설치류16,17,18,19에서 심각한(>90%) 흑색선체 손상이 발생할 수 있습니다. 중증 일방적 인 6-OHDA 병변 설치류에 L-DOPA를 만성적으로 투여하면 비정상적인 비자발적 운동 (AIM)이라고하는 운동 이상과 유사한 움직임이 나타납니다. 설치류에서의 운동 장애-유사 운동은PD 환자에서 LID와 관련된 유사한 분자적, 기능적 및 약리학적 메커니즘을 공유한다5. 따라서, 6-OHDA 병변 래트20 및 마우스21은 LID를 연구하기 위한 귀중한 전임상 모델이다. L-DOPA (5-20 mg / kg)의 치료 용량으로 만성적으로 (7-21 일) 치료했을 때, 일방적으로 6-OHDA 병변을 입은 쥐와 마우스는 병변과 반대쪽의 앞다리, 몸통 및 구강 안면 근육에 영향을 미치는 AIM의 점진적인 발달을 보여줍니다 17,18,19,20,22,23,24 . 이러한 움직임은 PD 환자25에서 L-DOPA 유도 피크 용량 운동 이상증과 유사한 시간 코스에서 나타나며과 운동 운동 및 근긴장 이상증을 특징으로합니다5. AIM은 일반적으로 심각도(예: 특정 AIM이 있는 경우)와 진폭(예: 각 움직임의 진폭으로 특징지어짐)5,23,25에 따라 점수가 매겨집니다.
LID의 6-OHDA 병변 설치류 모델은 얼굴 유효성을 나타냅니다 (즉, 모델은 인간 상태와 유사한 몇 가지 특성을 가짐) 5,11,26,27,28. PD 환자에서 발생하는 것과 유사한 설치류 AIM은 과운동(앞다리 및 구강설) 및 근긴장(축 방향) 운동29으로 간주되며 피크 선량 운동 이상증을 모방합니다. 분자 및 기능적 수준에서 설치류 모델은 FosB / ΔFosB 19,26,30,31,32,33 및 세로토닌 수송 체 (SERT) 34,35의 상향 조절과 같은 PD 환자 5와 많은 병리학 적 특성을 공유합니다. . 예측 타당성과 관련하여, PD 환자에서 LID를 감소시키는 약물 (예를 들어, N-메틸-D-아스파르테이트 (NMDA) 수용체 길항제 아만타딘)은 설치류 모델 22,36,37,38,39에서 항이동성 효능을 나타낸다.
설치류 AIM 등급 척도는 머리, 목 및 몸통에 영향을 미치는 AIM(축 방향 AIM), 과운동 앞다리 움직임(사지 AIM) 및 운동성 유사 구강 언어 운동(구강 언어 AIM)을 포함하는 4가지 AIM 하위 유형을 기반으로 만들어졌습니다. 반대쪽 회전 (기관차 AIMs)이 일방적으로 병변 된 설치류 20,22,23,25,40에도 존재하지만, LIDS 22,37,41의 특정 측정을 나타내지 않을 수 있기 때문에 운동 장애와 같은 운동으로 점수가 매겨지지 않았습니다.
여기에서는 PD의 중증 (>90 %) 일방적 인 6-OHDA 병변 쥐 모델에서 운동 장애 유사 운동 (축 방향, 사지 및 구강 언어 AIMs)을 유도하고 분석하는 방법을 설명합니다. 우리는 이전 문헌과 실험실 전문 지식을 기반으로 프로토콜을 구성했습니다.

<table><tbody><tr><td>6-하이드록시도파민 하이드로브로마이드</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>H6507</td><td>카테콜아민 말단의 변성을 일으키는 신경독소</td></tr><tr><td>벤제라지드 하이드로클로라이드</td><td>시그마</td><td>B7283</td><td>말초 도파-데카르복실라제 억제제</td></tr><tr><td>카메라 Bullet IR Turbo HD (HD-TVI)&nbsp; 2.8mm B</td><td>HIKVISION</td><td>DS-2CE16C0T-IRP</td><td>모든 행동을 기록하는 데 사용되는 카메라</td></tr><tr><td>이미프라민 히드로클로라이드</td><td>Alfa Aesar</td><td>J63723</td><td>노르에피네프린 수송체 억제제(NET) 6-OHDA</td></tr><tr><td>케타민 염산염</td>으로부터 노르아드레날린성 뉴런을 보호하는 데 사용 <td>Ceva 외과</td><td></td>적 <td>개입을 위한 마취</td></tr><tr><td>L-3,4-디하이드록시페닐알라닌(L-DOPA) 메틸 에스테르(염산염)</td><td>Cayman Chemical Company</td><td>16149</td><td>도파민 전구체</td></tr><tr><td>미러</td><td></td><td></td><td>모든 방향에서 실험 중 동물의 행동을 관찰하는 데 사용</td></tr><tr><td>바늘 0.30 x 13mm</td><td>PrecisionGlide</td><td></td><td>바늘 약물 주입에 사용되는 바늘</td></tr><tr><td>염화나트륨 (NaCl)Samtec</td><td></td><td></td> <td>소금</td></tr><tr><td>주사기 1ml 멸균</td><td>BD Plastipak</td><td></td><td>주사기 약물 주입에 사용되는</td></tr><tr><td>투명 실린더</td><td></td><td></td><td>실험 중 동물의 행동을 기록하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Xylazine 염산염</td><td>Ceva 동물 건강</td><td></td><td>외과 수술 내정간섭을 위한 진정제, 진통제 및 근육 이완제</td></tr></tbody></table>

파킨슨 병의 일방적 인 6-ohda 병변 쥐 모델에서 l-dopa 유발 운동 이상증 평가

Rating L-DOPA-Induced Dyskinesias in the Unilaterally 6-OHDA-Lesioned Rat Model of Parkinson's Disease

L-DOPA 유발 운동 이상증 (LID)은 파킨슨 병 (PD) 환자에게 장기간 L-DOPA 투여로 인해 발생하는 운동 합병증을 나타냅니다. 클리닉에서 관찰되는 가장 흔한 패턴은 choreiform, 근긴장 이상 및 탄도 운동의 임상 증상으로 구성된 피크 용량 운동 이상증입니다. PD의 6-하이드록시도파민(6-OHDA) 래트 모델은 LID의 여러 특성을 모방합니다. 반복적인 L-DOPA 투여 후, 6-OHDA-병변을 가진 랫트는 이운동성 유사 움직임(예를 들어, 비정상적인 비자발적 움직임, AIMs)을 나타낸다. 이 프로토콜은 흑색 선조체 경로에서 90%-95% 도파민 고갈을 보이는 6-OHDA 병변 쥐에서 AIM을 유도하고 분석하는 방법을 보여줍니다. L-DOPA (5 mg / kg, 벤세 라지드 12.5 mg / kg과 병용)의 반복 투여 (3 주)는 AIM 발생을 유도 할 수 있습니다. 시간 과정 분석은 30-90 분 (피크 용량 운동 이상증)에서 AIM의 상당한 증가를 보여줍니다. LID의 설치류 모델은 효과적인 항이동성 중재를 확인하는 중요한 전임상 도구입니다.

쥐에서 관찰된 AIMs 패턴은 인간 및 비인간 영장류에서 관찰된 패턴에 비해 더 간단하고 제한적이지만, 이 모델은 만성 L-DOPA 투여에 의해 유도된 과운동 및 근긴장유사 운동을 모두 재현합니다. 여기에서는 3 주 (월요일부터 금요일) 동안 L-DOPA (벤세 라지드 12.5mg / kg과 결합 된 5mg / kg)로 만성적으로 처리 된 일방적 인 6-OHDA 병변 쥐 그룹 (n = 10)에서 수집 한 데이터를 제시합니다. 그림 2, 그림 3 및 그림 4 에 제시된 데이터는 동일한 동물에서 나온 것입니다.
그림 2 는 만성 L-DOPA 투여 3주 동안 축, 사지 및 구강 언어 AIM에 적용된 점수에 대한 시간 경과 분석을 보여줍니다. 특...

L-DOPA 유발 운동 이상증의 설치류 모델은 L-DOPA의 반복 투여로 인해 나타나는 증상을 완화하거나 발달을 약화시키기위한 치료 적 개입을 식별하는 데 귀중한 도구입니다. 이 프로토콜은 파킨슨 병의 일방적 인 6-OHDA 병변 쥐 모델에서 운동 장애와 같은 움직임을 유도하고 분석하는 방법을 보여줍니다.

파킨슨 병의 일방적 인 6-OHDA 병변 쥐 모델에서 L-DOPA 유발 운동 이상증 평가

L-DOPA-induced dyskinesias (LIDs) refer to motor complications that arise from prolonged L-DOPA administration to patients with Parkinson's disease (PD). ...

파킨슨병의 6-하이드록시도파민 래트 모델에서 L-DOPA 유도 운동이상증 등급은 효과적인 항이동성 중재를 확인하기 위한 중요한 전임상 도구입니다. 이 모델은 비교적 간단하고 비용이 저렴하며 클리닉에서 일어나는 일과 유사합니다. 이 절차는 실험실의 박사 과정 학생 인 Danilo Leandro Ribeiro가 시연합니다.무게가 200-250 그램 인 Sprague-Dawley 수컷 쥐로 실험을 시작하십시오. 표준 실험실 조건에서 케이지 당 2-3 마리의 동물을 수용하고 음식과 물을 자유롭게 이용할 수 있습니다. 수술 전에 노르에피네프린 수송체 억제제인 이미프라민을 쥐에게 복강 주사로 투여합니다.발가락 꼬집음에 대한 반응의 부족에 의한 마취를 확인한 후, 가열 패드 상단의 정위 장치에서 엎드린 위치에 쥐를 위치시킨다. 쥐가 위치하면 메스를 사용하여 미세 주사가 발생할 부위에 1cm 길이의 절개를합니다. 그런 다음 면봉으로 두개골 부위를 청소하고 브레그마와 람다가 노출되었는지 확인합니다.내측 전뇌 다발 또는 MFB, 브레그마에서 정위 좌표를 전방 4.3mm, 오른쪽 측면 1.6mm, 경도계에서 복부 8.3mm에서 취하십시오. 좌표가 결정되면 6- 하이드 록시 도파민 또는 6- OHDA를 50 마이크로 리터 해밀턴 유리 주사기로 오른쪽 MFB에 분당 0.4 마이크로 리터의 속도로 일방적으로 투여합니다. 수술이 끝나면 두피 절개를 봉합하고 따뜻하고 멸균 된 0.9 % 식염수로 동물을 킬로그램 당 10 밀리리터의 용량으로 피하 재수 화합니다.정위 프레임에서 동물을 제거하고 따뜻한 회복 케이지에 넣고 의식을 회복 할 때까지 모니터링하십시오. 병변 후 4 주에, 병변에 반대하는 앞다리의 무 운동증을 평가함으로써 스테핑 테스트를 사용하여 도파민 성 병변의 효과를 측정하십시오. 반대쪽 앞다리와 함께 3 개 이하의 조정 단계를 나타내는 쥐는 추정되는 심각한 6-OHDA 병변 쥐로 연구에 포함되어야합니다.6-OHDA 병변 4 주 후 월요일에 만성 치료를 시작하고 수요일에 비정상적인 비자발적 움직임을 기록합니다. 이렇게하려면 쥐를 직경 20cm, 높이 40cm의 투명한 실린더 안에 넣고 최소 15 분 동안 순응하도록하십시오. 바닥이 침구 재료로 덮여 있고 가능한 모든 각도에서 동물을 관찰 할 수 있도록 거울이 실린더 뒤에 있는지 확인하십시오.고해상도 비디오 카메라를 배치하여 축, 사지 및 구강 언어의 비정상적인 비자발적 움직임을 볼

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

파킨슨 질환은 실험적으로 6 - OH - 도파민에 의해 유도된 수있는 striatum에 dopaminergic innervation의 손실로 인해 발생합니다. 우리는 stereotaxic 병변을 수행하고 생쥐에서 apomorphine 유발 회전 동작을 모니터링하는 방법에 대해 설명합니다. 이 모델은 유용하고 파킨슨 질환에 대한 새로운 치료법을 테스트하기 위해 신뢰할 수 있습니다.

파킨슨병에 대한 Murine 모델 : 6 - OH 도파민의 병변에서 행동 테스트

생쥐의 중간 forebrain 번들의 일방적 6-OHDA의 병변을 수행하기위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 이 방법은 striatal 도파민과 90.63의&gt; 95 %의 손실을 보여주는 살아남은 동물의 89 %를 낮은 사망률 (13.3 %) ± -4.02 % 병변의 측면을 향해 ipsiversive 회전 편견을 가지고 있습니다.

파킨슨병의 일방적-6-OHDA lesioned 마우스 모델의 개발

이 비디오는 도파민 전환 억제제와 함께 레보도파를 투여하여 파킨슨병 쥐 모델에서 레보도파에 의한 운동이상증을 유발하는 과정을 보여줍니다. 반복적인 주사는 뇌 뉴런을 과도하게 자극하여 운동 기능 장애를 일으킵니다.

파킨슨병의 쥐 모델에서 레보도파에 의한 운동이상증의 유도

6-하이드록시도파민(6-OHDA) 모델은 파킨슨병에 대한 이해를 높이기 위해 수십 년 동안 사용되어 왔습니다. 이 프로토콜에서, 우리는 내측 전뇌 다발에 6-OHDA를 주입하여 쥐의 일방적 인 nigrostriatal 병변을 수행하는 방법을 보여주고, 운동 결핍을 평가하고, 스테핑 테스트를 사용하여 병변을 예측합니다.

파킨슨 병의 6- 히드 록시 도파민 쥐 모델

이 글은 파킨슨병의 래트 모델에서 레보도파로 인한 운동이상증을 유도하고 평가하는 방법을 설명한다. 이 프로토콜은 운동 이상과 운동 장애 행동의 범위, 둘 다 강도와 빈도에 관한 자세한 정보를 제공하여이 충족되지 않은 의학적 필요를 목표로하는 치료법을 테스트 할 수있는 신뢰할 수있는 도구를 제공합니다.

파킨슨 병의 쥐 모델에서 레보도파 유도 운동 장애의 유도 및 평가

올 Isacson는 간결한 파킨슨스의 질병의 개요, 그 원인, 치료 전략, 파킨슨병 연구에 발전을 제공합니다.

올 Isacson : 파킨슨병을위한 새로운 요법 개발

숙련된 도달 규모는 3 점 만점으로 평가된 것입니다 각각의 복합 요소로 음식 행위에 대한 도달의 forelimb하여 운동을 구분됩니다. 등급 규모는 정상 쥐에 대한 설명과 신경 운동 장애를 평가하는 방향으로 적용할 수 있습니다.

쥐에 도달 전문 Forelimb의 구조 : 운동 평가 척도

이 동영상은 파킨슨병에 대한 모델로 dopaminergic 신경 세포의 neurodegeneration을 평가 C. 엘레간스를 사용하는 방법을 보여줍니다. 또한, 유전자 화면은 어느 변성을 향상 또는 neuroprotective 가지 요인을 식별하는 데 사용됩니다.

잠재적인 파킨슨병의 유전자 검증을위한 C. 엘레간스 도파민 신경 세포의 변성 분석의 응용

분자 마커로 γH2AX 형성을 사용하여 DNA 이중 스트랜드 줄무늬의 부량 방사선 생물학에서 매우 중요한 도구가되었습니다. 여기 우리는 방사선에 노출 후 세포의 γH2AX foci의 부량위한 immunofluorescence 분석의 사용을 보여줍니다.

Ionising 방사선에 대한 응답으로 γH2AX Foci의 부량

DNA 이중 가닥의 휴식 시간에 대한 응답으로 빼앗아 - 139에서 H2AX의 인산화 다음 양식 γH2AX foci,의 현미경 분석 방사선 생물학에서 매우 중요한 도구가되었습니다. 여기서 우리는 핵 내에서 방사선 유발 γH2AX 형성의 공간적 분포를 평가하기 위해 적극적으로 속기 euchromatin의 epigenetic 마커로 라이신 4 모노 - methylated 히스톤 H3에 항체를 사용합니다.

이온화 방사선 다음 γH2AX의 공간적 분포 평가

학습하세요 6-OHDA 병변 쥐 모델에서 L-DOPA 유발 운동 이상증을 평가하는 방법을. Sprague-Dawley 수컷 쥐에 스테레오택식 수술과 만성 약물 처리를 적용하여 파킨슨 병의 병태생리학적 변화를 모방하고 신경과학 연구에 활용합니다.

파킨슨 병의 일방적 인 6-OHDA 병변 쥐 모델에서 L-DOPA 유발 운동 이상증 평가

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