Sample Preparation and Relative Quantitation using Reductive Methylation of Amines for Peptidomics Studies

Claudia Neves Correa; Louise Oliveira Fiametti; Maria Eduarda Mazzi Esquinca; Leandro  Mantovani de Castro

doi:10.3791/62971

펩티도믹스 연구를 위한 아민의 환원 메틸화를 이용한 샘플 준비 및 상대적 수량

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Biochemistry

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Sample Preparation and Relative Quantitation using Reductive Methylation of Amines for Peptidomics Studies

펩티도믹스 연구를 위한 아민의 환원 메틸화를 이용한 샘플 준비 및 상대적 수량

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08:00 min

November 4, 2021

DOI: 10.3791/62971-v

Claudia Neves Correa^1,2, Louise Oliveira Fiametti¹, Maria Eduarda Mazzi Esquinca¹, Leandro Mantovani de Castro^1,2

¹Department of Biological and Environmental Sciences, Bioscience Institute,Sao Paulo State University (UNESP), ²Biodiversity of Coastal Environments Postgraduate Program, Bioscience Institute,Sao Paulo State University (UNESP)

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이 문서에서는 열 불활성화를 기반으로 한 시료 준비 방법을 설명하여 내인성 펩티드를 보존하여 분해 후 모독을 피하고, 동위원소 라벨링과 LC-MS를 사용하여 상대적 수량을 유지합니다.

여기서, 우리는 천연 세포 내 펩티드를 보존하고, 세포및 조직에서 분해를 피하고, 동위원소 라벨링을 사용하여 펩타이드의 상대적 양에 이어 프로테아제의 빠른 열 비활성화에 기초한 교육 방법을 설명합니다. 이 라벨링 방법은 많은 장점이 있습니다. 시약은 시판되고 저렴하며 화학적으로 안정되며 단일 혈청에서 최대 5개의 샘플을 분석할 수 있습니다.

15%FBS 와 1%페니실린 연쇄상 구균신을 포함하는 DMEM에 있는 15센티미터 접시에 있는 인간 신경 모세포종 세포를 육성하는 것으로 시작합니다. 5%의 이산화탄소 하에서 섭씨 37도에서 세포를 유지합니다. PBS로 세포를 두 번 씻은 다음 PBS 10 밀리리터를 추가하고 세포를 긁어 내고 15 밀리리터 튜브로 수집합니다.

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