Rhesus 원숭이 뇌척수액에 있는 Aβ와 타우 수준의 반복적인 경두개 자기 자극에 대한 파일럿 연구

이 프로토콜은 직렬 시스테나 마그나 CSF 샘플링 방법을 사용하여 rTMS가 rHesus 원숭이의 알파 베타 및 타우 수준에 미치는 영향을 탐구합니다. 이 기술은 부작용의 위험이 낮은 완전히 깨어있는 조건에서 반복된 CSF 샘플링을 허용하는 새로운 CSF 샘플링 방법을 사용합니다. 이 절차를 시연하는 것은 남서부 의과대학의 생리학과 연구 조교인 잉첸 장(Ying-Qian Zhang)과 쓰촨대학교 대학원생인 후이신탄(Hui-Xin Tan)이 될 것입니다.

진통을 투여하고 성공적인 마취를 확인한 후, 5세 수컷 rhesus 원숭이를 측면 탈큐비투스 위치에 있는 수술대에 놓고 허리 주변 의 영역을 소독한다. 허리를 움츠려 무릎을 가슴쪽으로 가져온다. 요추 척추 L4 l4 ~ L5 사이에 척추 바늘을 삽입하고 인대 플라툼이 보관되는 요추 통에 들어가는 팝이 있을 때까지 밀어 넣습니다.

두 번째 팝이 두 번째 팝이 있을 때까지 바늘을 계속 밀어 넣은 다음 척추 바늘에서 스타일을 철회하고 CSF방울을 수집합니다. 다음으로, 시스테나 마그나에서 부력이 될 때까지 천막 바늘을 통해 지주 막부 공간에 경막외 카테터를 삽입하여 형광 유도하에 카테터 삽입을 수행한다. 그런 다음 포트 이식의 경우 천개 부위에서 5센티미터 절개를 머리쪽으로 만들고 피하 조직으로부터 피부를 분리하여 샘플링 포트를 배치합니다.

항막 카테터의 끝에 포트를 연결하고, 피부 아래에 포트를 이식하고 절개를 봉합합니다. CSF 컬렉션의 경우 케이지 바를 사용하여 원숭이를 억제하고 뒤로 구부러지십시오. 그런 다음 알코올 면봉으로 닦아 주사기를 샘플링 포트의 중앙에 삽입하여 카테터를 통해 시스테나 마그나에서 CSF를 추출합니다.

CSF의 처음 200 마이크로리터를 폐기한 다음 분석을 위해 CSF 1밀리리터를 수집합니다. 실험 전에 원숭이 의자에 원숭이를 고정하여 rTMS 개입 시 중단을 방지한 다음, 원숭이가 마취제의 영향을 피하기 위해 깨어있을 때 바이오마커 분석을 위해 CSF를 수집합니다. 수막카테터화 후 3일째, 실험 시작 2주 전, 원숭이는 원숭이 의자와 함께 하루에 두 번 30분씩 적응훈련을 받는다.

rTMS 적응 훈련 또는 샴 자극을 원숭이 의자와 함께 적응 훈련 후 1 주일 및 자극 과정에서 진동및 소리에 의해 실험의 진행을 방해하지 않도록 정식 실험의 시작 1 주일 전에. 가짜 자극의 경우 진동과 사운드를 생성하지만 자기장을 생성하지 않는 샴 코일을 사용하십시오. 자극 후, 그 과정에 적응하는 데 도움이 원숭이에게 음식을 제공합니다.

국제 10~20시스템에 따라 양측 등쪽 전두엽 피질을 국소화하고 24시간을 초과하는 세척 기간 없이 3개의 서로 다른 주파수를 사용하여 3개의 서로 다른 rTMS 세션을 수행한다. 3일 연속 1, 2, 3회 세션을 하루에 두 번 실시합니다. 4개의 CSF 바이오마커를 분석하려면 최소 침습카테터화 방법을 사용하여 CSF를 수집한다.

3분 간격으로 매 시점에 4개의 샘플로 CSF를 5회 시점에서 수집합니다. 3개의 주파수에 대해 총 60개의 샘플을 수집한 후, 최대 1개월 동안 영하 80도의 냉장고에 보관하십시오. 실험 후 제조업체의 지침에 따라 모든 샘플을 액체 칩 감지에 적용합니다.

하나의 hertz rTMS 자극 후, Abeta42 수준은 점차적으로 24 시간 이상 증가했다. 마찬가지로 20 헤르츠에서 rTMS와 마찬가지로 Abeta42 수준은 시간이 지남에 따라 증가하고 자극 후 6 시간에 피크에 도달했습니다. 대조적으로, 40 헤르츠 자극 후, Abeta42 수준은 크게 포스트 rTMS 시간 지점에서 즉시 증가, 다음 천천히 감소.

Abeta42와 Abeta40의 비율은 1및 20 헤르츠 rTMS로 자극 후 상승 추세를 보였으며 자극 후 2 시간 크게 증가했습니다. 그러나, 40 헤르츠에서 비율에 있는 중요한 다름이 없었습니다. CSF의 tTau 수준은 즉시 20 및 40 헤르츠 rTMS 자극 후 증가하고 점차적으로 감소.

그러나, 하나의 hertz 자극 후 유의한 차이가 없었다. pTau 수준은 40 헤르츠 자극 후 즉시 증가하고 24 시간 후에 기준 수준 이하로 감소했습니다. 대조적으로, 1및 20 헤르츠 자극에 대 한, pTau 수준 하향 추세를 보였다.

원숭이 CSF의 여러 샘플을 필요로 하는 연구원은 이 직렬 cisterna magna CSF 샘플링 방법을 고려할 수 있습니다.