Murine 힌드사지 선박의 계산 단층 촬영 기반 3차원 시각화를 위한 샘플 준비

여기서는 마이크로 엑스레이 계산단층 촬영을 사용하여 뮤린 뒷다리 혈관에 대한 시각화 및 정량화 방법을 설명합니다.

단계 프로토콜을 사용하여 하반신및 복부 기관에서 혈관의 CT 이미지를 취할 수 있습니다. 이 방법은 전체 혈관의 평가를 포괄적으로 가능하게 합니다. 또한 동맥만 평가하거나 동시에 동맥과 정맥을 평가할 수 있습니다.

혈전, 유출 또는 혈액을 잘 방지하고 기포를 피하는 것이 매우 중요합니다. 수술 전에 PBS에 1 단위/그램 헤파린을 마우스의 복막 내 구멍에 주입하십시오. 30 분 후, 안락사 마우스의 흉골에 중간 절개를하고 핀으로 열린 흉부를 수정합니다.

심장을 제거하기 전에 오름차순 대자를 잘라 낸 다음 폐를 제거하여 내림차순 대자를 노출시하십시오. 내림차순 대동맥을 대각선으로 잘라 선박의 단면을 드러냅니다. 다음으로, 혈관 확장 버퍼를 실행하는 동안 내림차장 내림에 22 게이지 카테터를 삽입합니다.

카테터의 루트를 고정하고 역류로 인한 누출을 방지하기 위해 매듭을 만듭니다. 완료되면 13~15킬로파스칼의 고정 압력으로 온난한 혈관 확장 용액으로 관류를 시작합니다. 3분 후 PBS에서 4%의 파라포름알데히드의 용액을 3분간 퍼퓨즈합니다.

관류를 중지하고, 13~15킬로파스칼 사이에 고정된 비율로 희석된 신선하게 준비된 조장 배지의 2mL로 카테터에 연결된 연장 튜브를 채우십시오. 동맥을 시각화하려면 입의 발톱을 확인하여 대비 배지가 동맥에 도달했는지 확인하십시오. 같은 방법으로, 격막의 열등한 베나 카바를 확인하여 콘트라스트 매체의 완전한 순환을 확인하고 모든 혈관을 시각화한다.

콘트라스트 배지의 순환이 완료되면 3방향 스톱콕을 닫고 튜브를 제거합니다. 하룻밤 동안 샘플을 섭씨 4도에서 배양합니다. 이 프로토콜에서는 마우스의 하부 사지에 있는 모든 혈관이 시각화되었습니다.

뒷사지 허혈 모델의 결과는 비 계합 대퇴동맥이 대퇴정맥과 평행하게 달리고 있음을 확인했습니다. 또한, 대조 매체의 중단은 쉽게 리그 대퇴 동맥과 부수적 인 선박의 개발을 볼 수 있었다. 대비 매체로 채워진 몇 척의 선박을 볼 수 있습니다.

한편, 비대조매체의 혼합또는 관류부족으로 인한 대비매체의 붕괴도 눈에 띄었다. 체막의 결함을 쉽게 평가하기 어렵게 만든 콘트라스트 매체의 스테레오현미경 관찰의 현미경으로 신체 표면의 동맥을 보는 것은 불가능했습니다. 카테터를 삽입할 때 기포를 피하는 것이 매우 중요합니다.

그들의 복부 기관은 또한 이완하기 때문에, 장기에서 꺼내 CT 검사를 취할 수 있습니다. 이 방법을 사용하여 새 분기의 채도를 식별할 수 있었습니다.