Name: 생쥐의 심근경색 유도를 위한 수정된 간단한 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: 배우세요 생쥐 심근경색 유도를 위한 수정된 간단한 외과 기법. 좌전하행동맥 결찰을 통해 심근경색 모델을 확립하고 심장 재형성 및 새로운 치료법 평가 연구에 활용하세요.

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이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (81930007, 81625002, 81800307, 81470389, 81500221, 81770238), 상하이 우수 학술 지도자 프로그램 (18XD1402400), 상하이시 과학 기술위원회 (201409005200), 상하이 푸장 인재 프로그램 (2020PJD030) 및 중국 박사후 과학 재단 (2020M671161, BX20190216)의 보조금으로 지원되었습니다.

동물 실험과 관련된 실험은 상하이 자오퉁 대학교 의과대학 런지 병원 실험실 동물 복지 윤리위원회(R52021-0506)의 필요한 모든 승인을 받아 수행됩니다. 8-10주 사이의 암컷 및 수컷 C57BL/6J 마우스가 연구에 사용되었습니다.
1. 간이 마취 장비 준비(선택 사항)
알림: 이것은 선택적 수술 전 설정이며 섹션 2에 언급된 대로 적정 가능한 마취로 대체할 수 있습니다. 이 설정을 동물 절차에 적용하기 전에 기관 동물 윤리 위원회와 수의사와 상의해야 합니다.
<ol><li>15mL 원심 분리 튜브를 사용하여 개구부에서 약 3cm 떨어진 튜브의 장축에 수직으로 절단합니다. 알림: 밸브가 성공적으로 삽입될 수 있도록 절단이 튜브 루멘의 원형 둘레의 절반보다 큰지 확인하십시오.</li>
	<li>절단부와 튜브 개구부 사이의 원심분리기 튜브 벽에 구멍(직경, 2mm)을 뚫습니다.</li>
	<li>플라스틱 시트에서 적절한 크기의 밸브 조각을 자르고 튜브 벽의 절단부에 밸브를 삽입합니다. 알림: 밸브는 삽입 깊이를 변경하여 이소플루란의 방출 속도를 제어하는 데 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>흄 후드 내부에서 튜브 바닥을 잘라 열고 산소 공급 장치에 연결합니다. 면봉을 튜브 하단 근처에 놓고 면봉에 0.5mL의 이소플루란(얻은 대로, 재료 표 참조)을 넣고 밸브를 닫습니다.</li>
	<li>위에서 설명한 대로 준비된 튜브로 마우스를 마스킹하여 마취 효능을 테스트합니다. 발가락 꼬집기 반응으로 호흡 속도와 마취 깊이를 모니터링합니다. 알림: 호흡 속도가 10회/10초 미만이면 과도한 마취를 암시하므로 판막의 삽입 깊이를 조정해야 합니다. 마취와 관련된 모든 절차의 경우 활성탄 시트로 채워진 가스 필터를 사용해야 하며(그림 1A-i) 후드 내에서 수술을 수행해야 합니다.</li>
</ol>2. 수술 준비 및 마취
<ol><li>집게 한 쌍, 미세 모기 지혈제, 수술용 가위 한 쌍, 바늘 홀더 두 쌍, 4-0 실크 수술용 봉합사, 6-0 실크 수술용 봉합사, 가스 필터 및 광원을 포함하여 수술 당일에 필요한 모든 기구를 준비하고 소독합니다( 재료 표 참조)(그림 1A).</li>
	<li>수술용 마스크와 멸균 장갑을 착용하십시오.</li>
	<li>제모 크림을 쥐 가슴에 바르고 1분 동안 기다립니다. 제모 크림과 머리카락을 젖은 거즈로 부드럽게 닦아냅니다.</li>
	<li>제모 후 주로 사용하는 손으로 마우스를 잡습니다. 산소 공급(1L/min)과 함께 기화된 이소플루란(4%)을 흡입하여 마취를 유도하고 2-3% 이소플루란을 유지합니다.</li>
	<li>발가락 꼬집기 반응이 없는 것으로 적절한 마취를 확인합니다.</li>
	<li>멸균 아이 크림을 양쪽 눈에 바르면 각막 건조를 예방할 수 있습니다.</li>
	<li>쥐를 앙와위 자세의 수술 플랫폼에 고정합니다. 포비돈-요오드 면봉( 재료 표 참조)을 흉부에 세 번 바르고 소독된 흉부를 멸균 드레이프로 덮습니다.</li>
</ol>3. 심근경색의 유도
<ol><li>멸균을 보장하기 위해 오염된 장갑을 교체하십시오.</li>
	<li>리도카인으로 국소 차단 후 xiphoids와 겨드랑이를 연결하는 선을 따라 0.5cm 피부를 자릅니다.</li>
	<li>집게와 미세 모기 지혈을 사용하여 가슴 대근육과 가슴 소근육을 뭉툭하게 분리하여 네 번째 늑간 공간을 노출시킵니다.</li>
	<li>미세 모기 지혈제를 사용하여 네 번째 늑간 공간을 엽니다.</li>
	<li>왼손 검지로 심장을 네 번째 늑간 공간 쪽으로 밀어 심장을 외부화합니다.</li>
	<li>왼손으로 심장을 고정하고 원점에서 3mm 떨어진 곳에 6-0 봉합사로 왼쪽 전방 하행 가지를 결찰합니다.</li>
	<li>심장을 빠르게 흉강에 다시 넣습니다. 알림: 30초 미만 동안 심장을 외부화하는 것이 안전합니다.</li>
	<li>흉강을 수동으로 부드럽게 눌러 흉강 밖으로 공기를 배출합니다.</li>
	<li>갈비뼈 위의 근육층을 6-0 실크 봉합사로 닫습니다.</li>
	<li>4-0 실크 봉합사로 피부를 닫습니다.</li>
	<li>수술 직후 마우스를 패드(37°C)에 놓습니다.</li>
	<li>부프레노르핀(0.05-0.1mg/kg)을 4-6시간마다 피하 주사하여 최대 72시간 동안 수술 후 통증을 줄입니다.</li>
	<li>완전히 회복되면 수술한 마우스를 케이지에 다시 넣습니다. 알림: 마우스는 수술 후 3-5분 이내에 완전히 회복됩니다.</li>
	<li>쥐를 주의 깊게 관찰하고 최대 7일 동안 습식 사료를 제공하십시오.</li>
</ol>4. 조직 채취
<ol><li>자궁 경부 탈구에 의한 MI 확립 후 다른 시점에서 마우스를 희생합니다.</li>
	<li>희생된 쥐를 수술 플랫폼에 누운 자세로 고정합니다.</li>
	<li>상복부에 복부 절개(~3-4cm)를 합니다. 흉강의 양쪽에서 갈비뼈를 자르고 횡격막을 제거합니다.</li>
	<li>뇌실 내 주사를 통해 10mL의 차가운 인산염 완충 식염수(1x PBS, 4°C)를 심장에 관류합니다.</li>
	<li>대동맥 뿌리를 잘라 심장을 채취하고 즉시 -80 °C에서 심장을 보관하십시오. 참고: 저자의 경험에 따르면 보관 후 2주 이내에 TTC 염색을 수행할 수 있습니다.</li>
	<li>2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)로 심장을 염색합니다.<ol><li>얼어붙은 심장을 면도날을 사용하여 얼음 위에서 1mm 두께로 자릅니다.</li>
		<li>준비된 심장 절편을 37°C에서 10-15분 동안 1% TTC 용액(1x PBS에 용해)에서 배양합니다. 알림: 15분 배양 후 TTC 용액을 버리고 염색된 심장 조각을 1x PBS에 담그십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>디지털 카메라를 사용하여 슬라이스를 촬영합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+efficient+method+for+in+vivo+cardiac-specific+gene+manipulation+by+intramyocardial+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A simple and efficient method for in vivo cardiac-specific gene manipulation by intramyocardial injection in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57074(2018).</li>
<li>Pell, S., Fayerweather, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+the+incidence+of+myocardial+infarction+and+in+associated+mortality+and+morbidity+in+a+large+employed+population%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population.</a> The New England Journal of Medicine. 312 (16), 1005-1011 (1985).</li>
<li>Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiarrhythmic+effects+of+growth+hormone--in+vivo+evidence+from+small-animal+models+of+acute+myocardial+infarction+and+invasive+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Electrocardiology%22%5BJournal%5D)">Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology.</a> Journal of Electrocardiology. 41 (2), 144-151 (2008).</li>
<li>Tabrizchi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-blocker+therapy+after+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Cardiovascular+Therapy%22%5BJournal%5D)">β-blocker therapy after acute myocardial infarction.</a> Expert Review of Cardiovascular Therapy. 11 (3), 293-296 (2013).</li>
<li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics-2020+update%3A+A+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association.</a> Circulation. 141 (9), 139(2020).</li>
<li>Cahill, T. J., Choudhury, R. P., Riley, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration+and+repair+after+myocardial+infarction%3A+Translational+opportunities+for+novel+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration and repair after myocardial infarction: Translational opportunities for novel therapeutics.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 16 (10), 699-717 (2017).</li>
<li>Froese, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-androgenic+therapy+with+finasteride+improves+cardiac+function%2C+attenuates+remodeling+and+reverts+pathologic+gene-expression+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Anti-androgenic therapy with finasteride improves cardiac function, attenuates remodeling and reverts pathologic gene-expression after myocardial infarction in mice.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 122, 114-124 (2018).</li>
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<li>Kumar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+myocardial+infarction%3A+Mainstay+in+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Regulatory+Toxicology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Animal models of myocardial infarction: Mainstay in clinical translation.</a> Regulatory Toxicology and Pharmacology. 76, 221-230 (2016).</li>
<li>Das, S., MacDonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A simple method of mouse lung intubation.</a> Journal of Visualized Experiments. (73), e50318(2013).</li>
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<li>Ahn, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarcts+of+a+predictable+size+and+location+by+branch+pattern+probability-assisted+coronary+ligation+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in C57BL/6 mice.</a> American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 286 (3), 1201-1207 (2004).</li>
<li>Gao, E., Koch, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">A novel and efficient model of coronary artery ligation in the mouse.</a> Methods in Molecular Biology. 1037, 299-311 (2013).</li>
<li>Most, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+S100A1+protein+levels+determine+contractile+performance+and+propensity+toward+heart+failure+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Cardiac S100A1 protein levels determine contractile performance and propensity toward heart failure after myocardial infarction.</a> Circulation. 114 (12), 1258-1268 (2006).</li>
<li>Christia, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+characterization+of+myocardial+inflammation%2C+repair%2C+and+remodeling+in+a+mouse+model+of+reperfused+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+%26+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Systematic characterization of myocardial inflammation, repair, and remodeling in a mouse model of reperfused myocardial infarction.</a> Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 61 (8), 555-570 (2013).</li>
<li>Frantz, S., Bauersachs, J., Ertl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-infarct+remodelling%3A+Contribution+of+wound+healing+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Post-infarct remodelling: Contribution of wound healing and inflammation.</a> Cardiovascular Research. 81 (3), 474-481 (2008).</li>
</ol>

저자는 공개할 것이 없습니다.

본 보고서는 Gao16에 의해보고 된 방법에서 수정 된 쉽게 구할 수있는 재료를 가진 마우스에서 MI 유도를위한 쉬운 프로토콜을 설명했습니다. Murine MI 모델은 MI 이후 기능 장애 및 리모델링을 위한 기계론적 탐색 및 약물 스크리닝에 없어서는 안 될 필수 요소입니다12. MI 유도를 위한 기존 기술 중 관상동맥 결찰술이 가장 일반적으로 시행되는 방법입니다. 관상동맥결찰술은 심근경색의 허혈적 특성을 충실히 재현하여 임상시나리오18,19와 유사한 흉터 치유 및 리모델링 반응을 유도한다. 그러나 관상동맥 결찰술에 대한 기존 프로토콜은 삽관, 인공호흡 및 흉부의 넓은 개방을 포함하며, 이는 기술적으로 어렵고 시간이 많이 걸립니다. 지난 몇 년 동안 관상동맥 결찰술에 대한 다양한 프로토콜이 보고되었으며 MI의 확립을 어느 정도 강화했습니다<...

심근경색(MI)은 전 세계적으로 사망 및 장애의 중요한 원인중 하나입니다 1,2,3,4,5. 시기적절한 재관류에도 불구하고 현재 MI 후 심장 리모델링을 치료할 수 있는 효과적인 치료법이 부족합니다. 이에 따라 MI 6,7,8에 대한 기계론적 탐색 및 치료 개발에 상당한 노력이 기울여졌습니다. 참고로, MI 모델의 구축은 이러한 목적을 달성하기 위한 전제 조건입니다.
몇몇 방법들(예를 들어, 이소프로테레놀 치료, 냉동 손상, 관상동맥 결찰술 등)이 작은 동물에서 MI 모델을 유도하기 위해 제안되었다. 이소프로테레놀 치료는 MI 유도를 위한 간단한 방법이지만, 표적 부위의 경색을 유도할 수 없다9. 냉동손상은 직접적인 허혈보다는 얼음 결정의 생성과 세포막의 파괴를 통해 심근 괴사를 유발한다10. 이에 반해 관상동맥결찰술은 교합부위와 경색부위의 정도를 정밀하게 조절할 수 있으며, 경색에 따른 리모델링 반응을 충실히 재현할 수 있다11,12. 관상동맥 결찰술은 일반적으로 삽관, 기계 환기 및 개흉술 후에 수행되며, 이는 기술적으로 까다롭습니다13,14. 관상동맥 결찰술(예: 무환기)에 대한 몇 가지 수정된 프로토콜이 보고되었고 MI 유도를 강화했지만 자세한 시각적 시연은 부족합니다15,16,17. 이러한 문제는 MI 모델을 사용하여 연구에 참여하고자 하는 그룹에게 상당한 재정적, 기술적 장벽을 제기합니다. 이 보고서는 마우스에서 MI 유도에 대한 접근 방식을 제시합니다. 현재의 방법은 쉽고, 시간을 절약하며, 대부분의 실험실에서 쉽게 볼 수 있는 수술 도구와 장비를 사용합니다.

<table><tbody><tr><td>2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td><td>SIGMA</td><td>T8877-25G</td><td>TTC 염색</td></tr><tr><td>4-0 실크 봉합</td>사 <td>YUANKANG</td><td>4-0</td><td>수술 기구</td></tr> 고형 부프레노르핀 용 <tr><td>히</td><td>라야마</td><td>HVE-50</td><td>살균</td></tr><tr><td></td><td>Qinghai Pharmaceutical FACTORY Co., Ltd.</td><td>수술 후 통증을 줄이기</td> <td>H10940181</td></tr><tr><td>원심분리 튜브</td><td>Biological Hope</td><td>1850-K</td><td>15ML</td></tr><tr><td>제모 크림</td><td>ZIKER BIOTECHNOLOGY</td><td>ZK-L2701</td><td>실험실 동물용 제모제</td></tr><tr><td>겸자</td><td>RWD</td><td>F12028</td><td>수술 기구</td></tr><tr><td>가스 필터</td><td>ZHAOXIN</td><td>SA-493</td><td>작업자 보호</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD</td><td>20071302</td><td>마취에 사용</td></tr><tr><td>광원</td><td>베이징 PDV</td><td>LG-150B</td><td>작동 램프</td></tr><tr><td>마이크로 모기 지혈</td><td>FST</td><td>13011-12</td><td>수술 기구</td></tr><tr><td>바늘</td><td>BINXIONG</td><td>42180104</td><td>수술 기구</td></tr><tr><td>바늘 및 6-0 실크 봉합</td>사 <td>JIAHE</td><td>SC086</td><td>수술 기구</td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>ShangHaiJZ</td><td>J32030</td><td>수술 기구</td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>ShangHaiJZ</td><td>J32010</td><td>수술 기구</td></tr><tr><td>포비돈-요오드 면봉</td><td>SingleLady</td><td>GB26368-2010</td><td>피부 소독</td></tr><tr><td>가위</td><td>CNSTRONG</td><td>JYJ1030</td><td>수술 기구</td></tr><tr><td>멸균 아이 크림</td><td>Shenyang Xingqi Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>H10940177 각막 건조를 예방</td>합니다<td>:</td></tr><tr><td>작은 동물을 위한 초고해상도 초음파 영상 시스템</td>, <td>VisualSonics</td><td>Vevo 2100</td>, <td>심초음파 분석</td></tr></tbody></table>

생쥐의 심근경색 유도를 위한 수정된 간단한 방법

A Modified Simple Method for Induction of Myocardial Infarction in Mice

심근경색(MI)은 주요 사망 원인 중 하나입니다. MI 모델은 MI 후 리모델링의 병리 메커니즘을 조사하고 새로운 치료제를 평가하는 데 널리 사용됩니다. MI를 유도하기 위해 다양한 방법(예: 이소프로테레놀 치료, 냉동 손상, 관상 동맥 결찰술 등)이 사용되었습니다. 이소프로테레놀 치료 및 냉동 손상과 비교했을 때, 관상동맥 결찰술은 MI 후 허혈 반응 및 만성 리모델링을 더 잘 반영할 수 있습니다. 그러나 생쥐의 관상동맥 결찰술을 위한 전통적인 방법은 기술적으로 어렵습니다. 현재 연구는 쉽게 구할 수 있는 재료를 사용하여 마우스에서 MI를 유도하는 간단하고 효율적인 프로세스를 설명합니다. 쥐의 흉부 피부는 안정된 마취 하에 절개되었다. 심장은 대흉근(pectoralis major)과 소흉근(pectoralis minor)을 둔하게 분리한 후 늑간 공간을 통해 즉시 외부화되었습니다. 좌측 전방 하행 분지(LAD)는 원점에서 3mm 떨어진 6-0 봉합사로 결찰되었습니다. LAD 결찰 후 2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC)로 염색한 결과 MI의 성공적인 유도 및 MI 후 흉터 크기의 시간적 변화를 나타냈습니다. 한편, 생존 분석 결과, MI 후 7일 이내에 주로 심장 파열로 인한 명백한 사망률이 나타났다. 또한, MI 후 심장 초음파 평가는 수축 기능 장애 및 심실 리모델링의 성공적인 유도를 보여주었습니다. 일단 숙달되면 쉽게 구할 수 있는 재료를 사용하여 2-3분 이내에 마우스에서 MI 모델을 설정할 수 있습니다.

실험 프로토콜과 몇 가지 중요한 단계는 그림 1에 나와 있습니다. 단순화된 마취 장비는 마취를 유도했습니다. 그림 2A에서 볼 수 있듯이 유도된 마취는 규칙적인 호흡 속도(테스트된 마우스에서 90-107회 호흡/분으로 다양함)에 반영된 바와 같이 안정적이었습니다. 관상동맥 결찰술 후 TTC 염색 분석은 심근경색의 성공적인 유도 및 MI 후 흉터 크기의 시간적 변화를 나타냈습니다(그림 2B). 한편, 생존 분석 결과는 수컷 및 암컷 C57BL/6J 마우스에서 MI 후 7일 이내에 명백한 사망률을 보여주었습니다(그림 2C,D). 심실 파열(수컷 생쥐 56%, 암컷 생쥐 40%)은 MI 후 사망의 흔한 원인이었다. 또한, MI 후 심장 초음파 평가는 수축 기능 장애 및 심실 리모델링의 성공적인...

적절한 마취 하에 쥐의 심장은 늑간 공간을 통해 외부화되었고, 대부분의 실험실에서 쉽게 구할 수 있는 재료를 사용하여 좌측 전방 하행 동맥(LAD)을 결찰하여 심근경색을 성공적으로 유도했습니다.

Myocardial infarction (MI) represents one of the leading causes of death. MI models are widely used for investigating the pathomechanisms of post-MI ...

이 보고서는 생쥐의 심근 경색 유도에 대한 독특한 접근 방식을 제시합니다. 현재의 방법은 쉽고 시간을 절약할 수 있으며 대부분의 실험실에서 쉽게 볼 수 있는 수술용 튜브와 장비를 사용합니다. 심근경색 모델의 확립은 MI 이후 리모델링의 과거 메커니즘과 새로운 치료법의 변형을 조사하기 위한 전제를 제공합니다.제모 크림을 쥐 가슴에 바르고 1분 동안 기다립니다. 그런 다음 젖은 거즈로 제모 크림과 머리카락을 부드럽게 닦아냅니다. 마우스를 앙와위 자세의 수술 플랫폼에 고정합니다.본문에 설명된 대로 수술 부위를 소독합니다. 그런 다음 소독 부위 주위에 멸균 드레이프를 놓습니다. 시푸스와 겨드랑이를 잇는 선을 따라 0.5cm의 피부를 절개하고 집게로 가슴 대근육과 가슴 소근육을 뭉툭하게 분리한다.Micro-Mosquito 지혈제를 사용하여 네 번째 늑간 공간을 엽니다. 왼손 검지로 심장을 네 번째 늑간 공간 쪽으로 밀어 심장을 외부화합니다. 왼손으로 심장을 고정하고 원점에서 3mm 떨어진 6/0 봉합사로 왼쪽 전방 하행 가지를 결찰합니다.심장을 빠르게 흉강에 다시 넣습니다. 흉강을 부드럽게 눌러 흉강에서 공기를 빼냅니다. 수술 후 통증 관리를 위해 수술 후 최대 72시간 동안 4-6시간마다 부프레노르핀을 피하 주사합니다.마우스를 가열 패드에 올려 놓고 마취에서 회복합니다. 안락사된 쥐를 수술 플랫폼에 누운 자세로 고정합니다. 상복부에 약 3-4cm의 복부 절개를 합니다.흉강의 양쪽에서 갈비뼈를 잘라낸 다음 횡격막을 제거합니다. 뇌실 내 주사를 통해 섭씨 4도의 차가운 10밀리리터를 심장에 관류합니다. 그런 다음 대동맥 뿌리를 잘라 심장을 채취하고 즉시 섭씨 영하 80도에 보관합니다.얼어붙은 심장을 면도날을 사용하여 얼음 위에서 1mm 두께로 자릅니다. 준비된 심장 절편을 섭씨 37도에서 10-15분 동안 1X PBS 1개에 용해된 1% TTC 용액에 배양합니다. 그런 다음 디지털 카메라를 사용하여 조각을 촬영합니다.관상동맥결찰술 후 TTC 염색 분석은 심근경색의 성공적인 유도 및 MI 후 흉터 크기의 시간적 변화를 나타냈습니다. 생존 분석 결과는 수컷 및 암컷 C57BL/6J 마우스에서 MI 후 7일 이내에 명백한 사망률을 보여주었습니다. 심실 파열은 MI 후 사망의 일반적인 원인이었습니다.MI 후 심장 초음파 평가는 수축 기능 장애 및 심실 리모델링의 성공적인 유도를 보여주었습니다. 심장을 외면화하려고 할 때 먼저 흉강을 누르지 말고, 우리의 저항을 따르는 것은 가중 칭찬에 대한 방향을 조정할 필요가 있음을 나타냅니다. 이 절차에 따라, 심장 질환 문제에서 유전자 치료제 또는 세포 치료제의 효능을 시험하기 위해 바이러스 벡터 또는 세포의 심내막 주사를 수행할 수 있습니다.

a-modified-simple-method-for-induction-myocardial-infarction

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

쥐 실험 심근 경색을 유발하는 데 사용되는 외과 수술은 심장과 왼쪽 폐의 앞쪽 표면을 시각화하기 위해 세 번째와 네 번째 갈비뼈 사이의 왼쪽 thoracotomy로 시작합니다. 왼쪽 관상 동맥이 출혈도 잡았되어 가슴이 폐쇄되고 마우스가 저절로 복구 할 수 있습니다.

마우스의 관상 동맥 결합에 대한 수정 기술

우리는 재현성을 높이기 위해 좌전 하행 동맥 (LAD)에 결찰의 위치에서 더 명확 수 있습니다 마우스 모델에서 심근 경색 (MI)을 시뮬레이션하기 위해 실험 허혈 / 재관류 (I / R) 손상을 유발하는 수술 방법을 소개합니다 마우스에있는 MI 실험.

왼쪽 앞쪽에 내림차순 동맥의 결찰을 통해 심근 허혈 - 재관류 손상의 생쥐 모델

최소한의 침습적 조작으로 마우스의 심근 경색에 대한 재현성이 높은 모델을 설명합니다. 모델을 쉽게 수행할 수 있어 재현성과 생존율이 높습니다. 따라서 설명된 모델은 3R 원칙(Replacement, Refinement and Reduction)에 의해 요청되는 대로 필요한 동물의 수를 줄일 것입니다.

쥐 심근 경색을 유도 최소 침습 수술

쥐 심근허혈/재관류 수술 중 폐색 합자의 올바른 배치는 일반적으로 심근 창백의 육안 관찰에 의해 확인됩니다. 본 명세서에서는 관찰된 심근 창백함을 보충하기 위해 허혈 및 재관류를 심전도로 확인하는 방법이 수컷 C57Bl/6 마우스에서 입증되었습니다.

표면 패드 심전도를 사용하여 마우스의 심근 허혈 및 재관류 손상의 확인

우리는 마우스 모델에서 좌측 전방 하행 동맥(LAD) 결찰에 대한 신뢰할 수 있는 방법을 제공합니다. 이 방법은 기관 내 삽관, 좌측 개흉술 접근법 및 흉강천자를 포함하는 다른 방법보다 상대적으로 덜 침습적입니다. 이 방법은 급성 및 만성 심근 경색(MI)에 대한 모델로 사용할 수 있습니다.

쥐 왼쪽 앞쪽에 내림차순 (LAD) 관상 동맥 결찰 : 심근 경색에 대한 개선 및 단순화 된 모델

여기서 우리는 마우스에서 좌측 전방 의 관상 동맥의 영구적 인 결찰을 달성하는 방법을 보여주는 외과 적 절차를 설명합니다. 이 모형은 심근 경색의 병리생리학 및 수반되는 생물학 프로세스를 조사하기 위하여 높은 관련성입니다.

왼쪽 전방 내림차순 관상 동맥의 영구 결찰을 사용하는 뮤린 심근 경색 모델

이 문서는 최소 침습 적 접근을 사용하여 쥐에 있는 심근 허혈 및 후속 만성 재관전을 능력을 발휘하는 능률적인 방법을 제시합니다. 또한, 쥐의 좌심실 혈역학 적 기능은 에코카예그래피와 고립 된 작업 심장 방법에 의해 평가됩니다.

쥐의 심근 경색과 격리 된 작업 심장 시스템에 의한 심장 기능 평가를 유도하는 반 최소 침습 적 방법

이 프로토콜은 심낭과 그 내용물을 보존하면서 마우스에서 심근 경색을 유도하는 단계를 설명합니다.

온전한 심낭 허혈성 설치류 모델

여기서는 미세 조작을 통해 좌측 전방 하행 관상동맥의 정밀 결찰에 의해 마우스에서 심근경색 또는 심근 허혈 재관류 손상을 유도할 수 있는 간단하고 재현 가능한 방법을 설명합니다.

마우스의 심근경색 및 심근 허혈-재관류 손상 유도

여기에 제시된 것은 생쥐에서 왼쪽 관상 동맥의 영구 결찰을위한 수술 절차입니다. 이 모델은 심근 경색 후 병태생리학 및 관련 염증 반응을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

좌측 관상동맥 결찰술: 심근경색의 외과적 쥐 모델

배우세요 생쥐 심근경색 유도를 위한 수정된 간단한 외과 기법. 좌전하행동맥 결찰을 통해 심근경색 모델을 확립하고 심장 재형성 및 새로운 치료법 평가 연구에 활용하세요.

생쥐의 심근경색 유도를 위한 수정된 간단한 방법

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