Name: TCID50 에세이를 사용하여 바이러스 성 적정에 대한 시각적 세포 병증 효과 기반 읽기를 개선하기 위해 크리스탈 바이올렛의 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-12T14:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 6 s
Description: 학습하세요 크리스탈 바이올렛 염색을 활용한 TCID50 바이러스 적정법으로 정확한 바이러스 정량화 방법을 익히세요. 이 프로토콜은 96웰 플레이트에서 7일 배양 후 세포병변효과를 시각화하여 신뢰할 수 있는 바이러스 농도 측정을 제공합니다.

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저자는 원고에서 자신의 유용한 의견에 대한 박사 프랭크 슐레를 인정하고 싶습니다, 클로이 마리언트는 현미경 이미지와 그녀의 도움이 영어 개정에 대한 테레사 M. 티지그녀의 도움에 대한.

1. 적정 프로토콜
참고: 신봉 세포를 감염시키는 세포요법 바이러스를 사용합니다. 이러한 시연을 위해 돼지 기원(A/California/07/2009/(H1N1)과 돼지 생식 및 호흡기 증후군 바이러스(PRRSV) 유형 2, 균주 NC 1-7-4의 인플루엔자 A 바이러스(IAV)가 사용되었다.
<ol><li>바이오 세이프티 레벨 2(BSL-2) 실험실에 위치한 생물안전 캐비닛에서 7일 동안 96개의 웰 플레이트에서 이러한 바이러스를 적시합니다.<ol>
<li>이러한 적정을 수행하기 위해, 필요한 세포주와 잘 플레이트 96 을 시드. PRRSV의 경우 MA-104 세포주및 IAV의 경우 MDCK 세포주 사용하십시오. 세포 배양의 경우, 10% FBS, L-글루타민 및 페니실린-스트렙토마이신으로 보충된 DMEM 배지를 사용하고 세포를 결합으로 성장시다.</li>
		<li>감염하기 전에 PBS의 200 μL을 사용하여 세포를 씻으라.</li>
		<li>900 μL의 미디어와 100 μL의 바이러스를 혼합하여 10 배 희석 계열을 사용하여 바이러스 주식을 희석하십시오. 배지와 바이러스의 적절한 혼합을 보장하고 희석 오류를 피하기 위해 튜브를 제대로 소용돌이해야합니다.</li>
		<li>뚜껑에 있는 플레이트의 레이아웃을 표시합니다. 1x 인산염 식염수 버퍼(PBS)로 우물을 씻으시다. 이전에 설명된 적정 방법에 따라 해당 우물에 접종의 50 μL을 추가합니다2,3.</li>
		<li>7 일 동안 5 % CO2 인큐베이터에서 37 °C에서 배양하십시오.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 현미경 검사를 통한 세포병증 효과(CPE) 평가
<ol><li>7일 간의 인큐베이션 후, 200 μL의 1x PBS로 모든 우물을 두 번 세척하십시오.</li>
	<li>경현미경하에서 플레이트의 모든 우물을 평가하여 CPE를 시각적으로 감지합니다. PRRSV와 IAV 의 경우, 그들의 CPE는 단층 중단으로 이끌어 내는 판에서 세포 죽음 및 후속 분리로 이루어져 있습니다. 그러나 다른 바이러스는 다양한 유형의 CPE를 제시할 수 있습니다.</li>
</ol>3. 스테인딩 프로토콜
참고: 세포병증 효과(CPE)는 크리스탈 바이올렛 염색을 통해 평가하였다.
<ol><li>7일 인큐베이션 후, 1x PBS 200 μL을 사용하여 모든 우물을 두 번 세척하십시오.</li>
	<li>1x PBS에 50 μL/well 4% 파라포름데히드(PFA)를 추가하여 세포를 수정하고 실온(RT)에서 15분 동안 배양합니다.</li>
	<li>인큐베이션 후, 1x PBS의 200 μL로 세포를 두 번 씻으시다. 그런 다음 물에 4 %로 희석 된 크리스탈 바이올렛 50 μL / 웰을 추가하고 RT에서 5 분 동안 배양하십시오. 참고 : 크리스탈 보라색 화학 물질은 고정 시 플레이트에 부착 된 상태로 남아있는 세포를 얼룩지게하여 세포가 얼룩지지 않은 것으로 분리 된 우물의 섹션을 남깁니다.</li>
	<li>마지막으로, 우물에서 크리스탈 바이올렛을 흡기하고 선택적으로 플레이트를 RT에서 2-5분 동안 건조하게 하거나 200μL의 물로 플레이트를 세척하여 시각화 전에 과도한 얼룩을 제거합니다.</li>
	<li>이전에 설명한 메서드를 사용하여 티터를 수학적으로 계산합니다. 여기서, Karber 공식 및 Muench 공식은 PRRSV와 IAV를 각각 적용2,3. 이러한 방정식의 세부 사항은 대표 결과 섹션에 표시됩니다.</li>
</ol>4. 면역 세포화학 (ICC) 라벨
참고: 두 바이러스에 대한 면역 세포 화학 라벨링은 이전에 설명된 방법에 따라 수행되었다9,10,11.
<ol><li>7일 간의 적정 배양 후, 3.2단계에서 설명된 바와 같이 PFA를 사용하여 세포를 수정한다.</li>
	<li>1M 트리스 염산염 100mL, 사포닌 1g, H2O 900mL에서 NaCl 8.5g으로 구성된 용액으로 플레이트를 세척한다. 그런 다음, 1x PBS와 5% 태아 소 세럼 (FBS)의 혼합물로 두 개의 추가 세척을 완료하고 실온 (RT)에서 Tris-Saponin-NaCl 솔루션으로 20 분 동안 배양하십시오.</li>
	<li>RT에서 2h에 대한 기본 항체로 모든 우물을 배양합니다. 참고: 각 바이러스에 대한 1차 항체의 부피는 100 μL이고 1x PBS에서 2%의 FBS의 1:300 희석을 사용하여 제조하였다.</li>
	<li>4.2단계에서 제조된 Tris, Saponin 및 NaCl 용액으로 세포를 두 번 세척합니다.</li>
	<li>RT에서 1 h에 대한 보조 항체와 모든 우물을 배양. 참고: 이차 항체의 부피는 100 μL이고 1x PBS에서 2% FBS의 1:250 희석을 사용하여 제조하였다.</li>
	<li>4.2 단계에서 설명된 대로 트리스, 사포닌 및 NaCl 희석으로 세포를 세척한다.</li>
	<li>RT에서 30분 동안 제조업체의 지시에 따라 1:50의 최종 희석에서 200 μL/t of aminoethyl carbazole (AEC) 용액으로 플레이트를 배양하고 배양합니다.</li>
	<li>인큐베이션 후 AEC 용액을 폐기하고 현미경 검사를 통해 이미징을 위해 100 μL/웰1x PBS를 추가합니다.</li>
	<li>3.5 단계에서 설명된 바와 같이 수학적으로 티터를 파생시다.</li>
</ol>

<ol><li>Kärber, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+to+the+collective+treatment+of+pharmacological+series+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn-Schmiedeberg%27s+Archive+for+Experimental+Pathology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Contribution to the collective treatment of pharmacological series experiments.</a> Naunyn-Schmiedeberg's Archive for Experimental Pathology and Pharmacology. 162 (4), 480-483 (1931).</li>
<li>Ramakrishnan, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+50%25+endpoint+titer+using+a+simple+formula%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Determination of 50% endpoint titer using a simple formula.</a> World Journal of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).</li>
<li>Reed, L. J., Muench, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+estimating+fifty+per+cent+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Epidemiology%22%5BJournal%5D)">A simple method of estimating fifty per cent endpoints.</a> American Journal of Epidemiology. 27 (3), 493-497 (1938).</li>
<li>Spearman, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+method+of+right+and+wrong+cases+%28constant+stimuli%29+without+Gauss%27s+formulae%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Psychology%22%5BJournal%5D)">The method of right and wrong cases (constant stimuli) without Gauss's formulae.</a> British Journal of Psychology. 2 (3), 227(1908).</li>
<li>Darling, A. J., Boose, J. A., Spaltro, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virus+assay+methods%3A+accuracy+and+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Biologicals%22%5BJournal%5D)">Virus assay methods: accuracy and validation.</a> Biologicals. 26 (2), 105-110 (1998).</li>
<li>Kim, J., Chae, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+virus+isolation%2C+polymerase+chain+reaction%2C+immunohistochemistry%2C+and+in+situ+hybridization+for+the+detection+of+porcine+circovirus+2+and+porcine+parvovirus+in+experimentally+and+naturally+coinfected+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Diagnostic+Investigation%22%5BJournal%5D)">A comparison of virus isolation, polymerase chain reaction, immunohistochemistry, and in situ hybridization for the detection of porcine circovirus 2 and porcine parvovirus in experimentally and naturally coinfected pigs.</a> Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 16 (1), 45-50 (2004).</li>
<li>Suchman, E., Blair, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytopathic+effects+of+viruses+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22American+Society+of+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Cytopathic effects of viruses protocols.</a> American Society of Microbiology. , (2007).</li>
<li>Karakus, U., Crameri, M., Lanz, C., Yángüez, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKarakus%2C+U+%22Influenza+Virus%22">Influenza Virus</a>. , Springer. 59-88 (2018).</li>
<li>Tingstedt, J. -E., Nielsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+immune+responses+in+the+lungs+of+pigs+infected+in+utero+with+PRRSV%3A+an+immunohistochemical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Viral+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cellular immune responses in the lungs of pigs infected in utero with PRRSV: an immunohistochemical study.</a> Viral Immunology. 17 (4), 558-564 (2004).</li>
<li>Guarner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+and+in+situ+hybridization+studies+of+influenza+A+virus+infection+in+human+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical and in situ hybridization studies of influenza A virus infection in human lungs.</a> American Journal of Clinical Pathology. 114 (2), 227-233 (2000).</li>
<li>Nicholls, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+highly+pathogenic+influenza+and+pandemic+influenza+virus+in+formalin+fixed+tissues+by+immunohistochemical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virological+Methods%22%5BJournal%5D)">Detection of highly pathogenic influenza and pandemic influenza virus in formalin fixed tissues by immunohistochemical methods.</a> Journal of Virological Methods. 179 (2), 409-413 (2012).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

바이러스 적 정수는 PFU 검출 및 TCID50 assays가장 일반적으로 사용되는 바이러스 학 연구에서 일상적으로 사용됩니다1,2,3,4. 두 방법 모두 감염된 세포에서 CPE의 검출에 의존하고, 현미경 검사를 통해 시각적으로 평가될 수 있더라도, 염색은 일반적으로 더 객관적인 결과를 얻거나 잠복시간을 감소시키기 위하여 적용됩니다. TCID50의 경우, 정확하고 객관적인 측정을 제공하는 시각적 CPE 검출에 가장 일반적으로 사용되는 대안 중 하나는 ICC 염색6이며, 이는 특정 항체의 사용률로 인해 시간이 많이 걸리고 종종 비용이 많이 듭니다9,10...

TCID50 분석법을 통한 바이러스 적정은 전염병 연구에서 일반적으로 사용되는 기술입니다1. 이 방법의 뒤에 수학에 변이는 시간이 지남에 제안되었지만1,2,3,4, 감염 검출의 현재 적용 방법은 현미경을 사용하여 세포 요법 효과 (CPE)의 존재를 통해 시각적 확인에 의존5. TCID50 분석에서 CPE 시각화를 보다 객관적으로 확인하기 위해, 바이러스의 단백질을 표적으로 하는 면역 세포 화학(ICC) 세포내 염색은 다른 바이러스가 다양한 형태의 CPE를 생성할 수 있기 때문에 가장 일반적으로 사용되는 방법 중 하나입니다6. 우리의 경우에, 세포 형태학적 변화는 감염된 세포가 반올림하고 접시에서 분리하는 인플루엔자 A 바이러스 (IAV)와 돼지 생식 및 호흡기 증후군 바이러스 (PRRSV)에 모두 감염될 때 유사합니다. PRRSV의 경우, 모든 세포가 우물에서 분리되는 "총 파괴"로 알려진 CPE를 일으킵니다. 한편, IAV는 감염 후 소수의 세포가 분리되지 않는 "서브토탈 파괴"로 알려진 총 파괴 및 추가 CPE를 둘 다 제시할 수 있다7. 그러나 이 기술은 수행하는 데 시간이 많이 걸리며 상대적으로 비용이 많이 드는 시약을 사용해야 합니다. ICC는 CPE에 라벨을 붙이지 않고 바이러스에 성공적으로 감염된 세포의 수를 주목하는 것이 중요합니다. 이것은 감염이 아직 CPE를 일으키지 않더라도 인큐베이션의 끝에 의해 성공적으로 감염된 세포가 긍정적으로 보일 것이라는 점을 암시하고, 따라서, CPE에 비해 ICC 양성 세포의 더 높은 비율이 예상된다. 이러한 이유로, 본 연구에서는 TCID50 분석에서 CPE의 시각적 검출의 보완적인 방법을 설명합니다, 세포막에 부착하고 신봉세포를 얼룩에 사용하는 양전전을 가진 화학 물질인 결정 보라색을 기반으로 합니다. 크리스탈 바이올렛은 종종 플라크 형성 단위를 측정하기 위해 바이러스 학 연구에서 활용8.
이 연구에서는, 우리는 높은 감도로 인해 더 객관적인 것으로 알려져 있는 바이러스성 단백질 인식에 근거를 둔 결정 보라색 염색 및 면역 세포화학 염색과 비 염색한 현미경 CPE 검출의 감도를 비교합니다. 이 연구는 크리스탈 바이올렛과 면역 세포화학 염색이 시각적 현미경 기반 CPE 검출보다 더 정확하며 TCID50 적정에서 감염된 우물을 객관적으로 식별하는 데 사용할 수 있음을 보여줍니다. 세포주에서 테스트된 세포병증 바이러스에 대한 정확도의 거의 동일한 수준에 도달하는 능력을 감안할 때, 크리스탈 바이올렛은 TCID50 분석에서 바이러스 적정을 결정하는 빠르고 저렴한 방법으로 제시됩니다. 상기 크리스탈 바이올렛 스테인링을 이용한 제안된 방법은 총 40분 동안 수행되며, 파라포름알데히드(PFA) 인큐베이션은 15분, 크리스탈 바이올렛 인큐베이션은 5분, 재료 제제, 완충 세차 및 건조를 위해 최대 15분이 소요된다. 비교에 적용된 면역세포화학 프로토콜은 평균 4시간 30분소요되며, 이전에 설명된 바와 같이 수행되었다9,10. 제안 된 방법은 완성 된 바이러스 성 적정을 시각화하는 것을 목표로합니다. 감염 및 잠복기는 바이러스에 따라 다른 레이아웃으로 수행 될 수있다. 여기에서 우리는 세포주에 세포병증 효력을 가진 2개의 RNA 바이러스를 시험했습니다.

<table><tbody><tr><td>96웰 세포 배양 플레이트</td><td>Genesee</td><td>25-221</td><td>투명하고 평평한 바닥</td></tr><tr><td>AEC 솔루션</td><td>Thermo Fisher</td><td>1122</td><td></td></tr><tr><td>크리스탈 바이올렛</td><td>Thermo Fisher</td><td>C581-25; C581-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>10-017-CV</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>BioWest</td><td>S1480</td><td></td></tr><tr><td>파라포르말데하이드</td><td>Thermo Fisher</td><td>J19943</td><td></td></tr><tr><td>1차 인플루엔자 항체</td><td>Bioss</td><td>BS-0344R</td><td></td></tr><tr><td>1차 PRRSV 항체</td><td>Bioss</td><td>BS-10043R</td><td></td></tr><tr><td>Saponin</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td>AAA1882014</tr><tr><td>Secondaty 항체</td><td>Invitrogen</td><td>31460</td><td></td></tr><tr><td>Tris Hydrochloride</td><td>Thermo Scientific</td><td>AM9856</td><td></td></tr></tbody></table>

tcid50 에세이를 사용하여 바이러스 성 적정에 대한 시각적 세포 병증 효과 기반 읽기를 개선하기 위해 크리스탈 바이올렛의 사용

Use of Crystal Violet to Improve Visual Cytopathic Effect-based Reading for Viral Titration using TCID50 Assays

바이러스 성 적정은 바이러스 학 연구에 대 한 핵심 분석. TCID50 애세 및 플라크 형성 장치(PFU) 애법을 통한 세포요법 효과(CPE)의 검출은 바이러스 스톡의 티터를 계산하는 두 가지 주요 방법이며 종종 시각화를 위한 현미경 검사감지 또는 세포 염색에 기초한다. TCID50 분석의 경우, 객관적인 시각화는 일반적으로 현미경 을 통해 시각적 CPE 검출과 결합 된 티터를 계산하기 위해 세포 내 바이러스의 면역 세포 화학 (ICC) 염색에 기초한다. 그러나 ICC 염색은 비용이 많이 들고 시간이 많이 걸립니다. 이 연구에서는, 우리는 현미경 검사법을 통해 시각적 CPE 관측을 비교, ICC 염색 및 크리스탈 보라색 얼룩 두 개의 CPE 형성 바이러스의 타이터를 결정하기 위해, 인플루엔자 A 바이러스 (IAV) 돼지 기원과 돼지 생식 및 호흡기 증후군 바이러스 (PRRSV). 우리는 크리스탈 바이올렛과 ICC 염색이 모두 IAV와 PRRSV 모두에 정밀도의 거의 동일한 수준을 제시, 시각적 CPE 검출보다 더 정확하다는 것을 보여줍니다. 이러한 이유로, 여기에서 우리는 세포주에서 적정된 CPE 형성 바이러스에 대한 TCID50 분석법에 바이러스 적정을 결정하는 빠르고 더 저렴한 방법으로 크리스탈 보라색 염색을 제시합니다.

티터를 수학적으로 계산하는 데 사용되는 방정식은 이전에 설명되었다2,3.
간단히 말해서 PRRSV의 경우, 우리는 Karber 방법을 적용합니다.
티터 (TCID50) = 10 T + 1.3 어디에 :
<img alt="회전 역학 방정식, T = d + (r/N) × (n + N/2), 공식 분석." src="/files/ftp_upload/63063/63063eq01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Equation 1">
이 수식 d = 완전한 양성 바이러스 반응으로 마지막 희석의 음수 로그: 5개의 양성 복제; r = 희석 범위의 로그; N = 희석에...

이 프로토콜은 광학 현미경 검사법과 면역 세포화학 얼룩과 비교하여 크리스탈 바이올렛을 사용하여 바이러스 성도를 시각화하는 정확하고 객관적인 접근 방식을 보여줍니다.

TCID50 에세이를 사용하여 바이러스 성 적정에 대한 시각적 세포 병증 효과 기반 읽기를 개선하기 위해 크리스탈 바이올렛의 사용

Viral titration is a key assay for virology research. The detection of cytopathic effect (CPE) via TCID50 assays and plaque-forming units (PFU) assays are ...

이 프로토콜의 목표는 바이러스 재고 적정을 생성하고 크리스탈 바이올렛 염색을 사용하여 시각화하는 것입니다. 이를 위해, 일반적인 바이러스 성 적정은 염색 다음에 입증될 것입니다. 이 적정은 생물 안전 수준 2 실험실 내의 생물 안전 캐비닛에서 7 일 동안 96 웰 플레이트에서 수행됩니다.이를 위해, 선호하는 세포주 96웰 플레이트는 해당 매체를 이용하여 시드되고 컨할 때까지 성장하게 한다. 바이러스 재고는 900 마이크로리터의 미디어와 100 마이크로리터의 바이러스 또는 상응하는 희석을 혼합하여 10배 희석제를 사용하여 희석될 것이다. 각 튜브를 소용돌이어 미디어와 바이러스의 적절한 혼합을 보장하고 희석제에 대한 오류를 피하십시오.감염 과정에서 플레이트의 레이아웃과 각 희석을 리드에 적어 둡니다. 감염하기 전에 PBS 의 200 마이크로 리터를 사용하여 세척하십시오. 해당 우물에 50 마이크로리터의 접종을 추가합니다.그런 다음 7 일 동안 5 % CO2 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 배양하십시오. 7일 간의 인큐베이션 후 PBS 200마이크로리터를 사용하여 세척하십시오. PBS에서 PFA 웰당 50 마이크로리터를 PBS에서 4%로 추가하고 실온에서 15분 동안 배양하여 세포를 수정합니다.인큐베이션 후, 200 마이크로리터의 PBS를 사용하여 다시 두 번 세척한 후, 물에 크리스탈 바이올렛의 웰 당 50 마이크로리터를 첨가하고 실온에서 5 분 동안 배양하십시오. 마지막으로, 우물에서 크리스탈 바이올렛을 흡기하고 선택적으로 플레이트를 실온에서 2~5분 동안 건조하게 하거나 200마이크로리터의 물로 세척하여 시각화 전에 과도한 얼룩을 제거합니다. 그 결과, 다시 염색한 후에, 부정적인 세포는 얼룩질 것입니다.긍정적 인 우물은 지워질 것입니다. 이 정보는 최종 바이러스 성 titer를 계산하기 위해 두 설명 된 수식 중 하나에서 사용됩니다. 각 방법을 사용하여 얻은 티터를 비교했을 때, 단사이토 화학 염색시 어떤 경우에는 크리스탈 바이올렛과 비교하여 추가 양성 우물을 검출할 수 있으며, 마찬가지로 두 염색 방법 모두 현미경 검사를 통해 시각적 평가보다 더 긍정적인 우물을 검출할 수 있음을 보여주었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

lentiviruses을 만들려면, DNA 벡터는 인간의 293 세포에 transfected 수 있습니다. 수확 후 뜨는을 집중, 바이러스 titer는 흐름 cytometer로 형광 표현식에 의해 결정됩니다.

Lentivirus 제작

분석은 박테리아와 곰팡이의 초기 biofilm 형성을 측정하는 빠른 방법을 설명합니다. 이 방법은 미생물의 biofilm 형성에 대한 하층으로 microtiter 접시를 사용하고, biofilm은 크리스탈 바이올렛 스트레인을 사용하여 시각입니다. 분석도 초기 biofilm 형성에 대한 질적 양적 분석 또는를 제공합니다.

Microtiter 디시 Biofilm 형성 분석

이 비디오에서는 화학요법 약물 내성 암세포에 대한 크리스털 바이올렛 염색 절차를 사용하여 세포 생존율 분석을 시연합니다.

Crystal Violet Staining: Colony Formation Assay를 사용하여 약물 내성 암세포를 시각화하는 기법

이 방법은 리프트 밸리 열병 바이러스 (RVFV) 변형 MP-12와 감염 후 숙주 세포의 전사의 변화를 측정하는 클릭 화학의 사용을 설명합니다. 결과는 형광 현미경을 통해 질적 시각 또는 유동 세포 계측법을 통해 정량적으로 얻을 수 있습니다. 이 방법은 다른 바이러스와 함께 사용하기위한 적응이다.

호스트 세포 RN​​A의 합성에 바이러스 감염의 효과를 측정하는 클릭 화학을 사용하여

세포 변성 효과 (CPE) 기반의 분석, 용량 - 반응 분석 및 시간 - 중 - 추가 TOA () 분석 등의 세 가지 분석은 물론, 개발, 최적화, 검증 및 Bluetongue 바이러스에 대한 새로운 항 바이러스제 (BTV)를 식별하기 위해 사용 된 새로 확인 된 항 바이러스제에 사용할 수있는 기계 장치의 액션 (대학교 미술관)을 결정하기로.

Bluetongue 바이러스에 대한 항 바이러스제 소설의 식별에 대한 분석

Plaque assay는 바이러스 정량화를 위한 황금 표준으로, 호스트 세포 단층의 entrapping overlays를 활용하여 바이러스 역가를 측정합니다. 전통적으로 다양한 반고체 오버레이가 사용되어 왔지만, 여기에서는 반고체 오버레이를 여러 바이러스 계열 중에서 새로운 액체 미정질 셀룰로오스와 비교하는 플라크 기술을 보여줍니다.

사용하여 전통과 소설 오버레이 시스템 : 플라크 분석 실험을 통해 바이러스 농도 결정

우리를 생성 하는 방법을 설명 하 고 RSVs에 대 한 호흡 syncytial 바이러스 (RSVs)와 최적화 된 패 분석 결과 수정 유전자 증폭. 우리는 두 재조합 바이러스는 각각 RSV 복제의 정량화를 허용 하 고 라이브 RSV 포함 몸과 포함 시체 관련 된과 립 역동성의 분석을 생성 하 여이 프로토콜을 설명 합니다.

생성, 증폭 및 재조합 호흡 Syncytial 바이러스의 적정

프로토콜의 목적은 후보 바이러스 진입 억제제를 식별하는 데 사용될 수 있는 바이러스 입력과 관련된 상이한 분석방법을 설명하는 것이다.

Coxsackievirus A16에 대하여 항바이러스 후보의 확인을 위한 바이러스 성 입력 분석 및 분자 도킹 분석의 사용

본 프로토콜은 베로 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포에서 지카 바이러스(ZIKV)의 증식과 24웰 및 96웰(고처리량) 형식의 세포 기반 비색 면역검출 방법을 사용한 ZIKV의 정량화에 대해 설명합니다.

바이러스 전파 및 세포 기반 비색 정량화

여기서 보고된 TCID50 분석법은 라벨 없는 실시간 임피던스 측정과 시스템의 바이러스학 모듈을 활용하여 바이러스 유발 세포병리 효과(CPE)를 실시간으로 객관적으로 모니터링합니다. 이 간소화된 분석법은 직접 손을 대고 작업하는 시간을 크게 줄이면서 고처리량의 정량적 동역학 CPE 측정을 지원하고 자동화된 실시간 TCID50 계산을 가능하게 합니다.

임피던스를 이용한 자동화된 바이러스 역가 정량을 위한 간소화되고 라벨이 없는 실시간 50% 조직 배양 감염 선량(TCID50) 분석법

여기서는 4-아미노퀴놀린 화합물의 화학적 합성, 결핵균에 대한 최소 억제 농도 결정, 포유류 세포주에서의 세포독성 평가를 포함하는 표현형 스크리닝을 통해 잠재적 항결핵 약물 후보를 식별하는 프로토콜을 제시합니다.

잠재적 항결핵 후보 식별: 포유류 세포에서 합성, MIC 결정 및 세포독성 평가에 대한 단계별 가이드

학습하세요 크리스탈 바이올렛 염색을 활용한 TCID50 바이러스 적정법으로 정확한 바이러스 정량화 방법을 익히세요. 이 프로토콜은 96웰 플레이트에서 7일 배양 후 세포병변효과를 시각화하여 신뢰할 수 있는 바이러스 농도 측정을 제공합니다.

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