Name: 비리오크크레아티드 덕트에 타우로콜레이트 나트륨의 역행 주입을 사용하여 마우스 심각한 급성 췌장염 모델의 설립 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: 배우세요 비리오크크레아티드 덕트에 타우로콜레이트 나트륨 역행 주입을 사용하여 마우스 심각한 급성 췌장염 모델을 수립하는 방법을. 이 모델은 질병 기전 연구와 치료 개발에 활용됩니다.

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NCRCH [2020WSA01]의 번역 연구 보조금, 소주건강위원회(KJXW20200002)의 KJXW 과학교부금, 소주시 과학기술계획(SKY2021038 및 SKJY2021050), 장쑤고등교육기관(PAPD)의 우선학술프로그램 개발 보조금, 1차 연구사회개발계획(PAPD)을 지원한다.

동물과 관련된 모든 실험은 소오하우 대학의 동물 윤리위원회의 승인을 받았습니다. 모든 수술 절차는 완전한 마취하에 수행되었습니다. 진통제는 이전 문학에 따라 질병의 자연적인 과정에 간섭을 피하기 위하여 이용되지 않았습니다28,29. 진통제의 부족에 대한 승인은 또한 소오하우 대학의 동물 윤리위원회에 의해 부여되었다.
1. 준비
<ol><li>수술 전 C57BL/6 야생형 마우스 8-12h를 빠르게 합니다.</li>
	<li>5% (w/v) TC 용액(93mMM)을 0.9%의 염화나트륨으로 희석한다. 0.22 μm 필터를 통해 용액을 필터링합니다.</li>
	<li>30분 동안 121°C의 온도에서 압력 멸균기를 사용하여 집게, 가위, 블레이드 홀더, 바늘 홀더, 혈전 성 클립, 혈관 클램프 및 멸균 드레이프를 포함한 수술 기구 및 재료를 자동 클랩합니다.</li>
	<li>수제 마이크로시링을 준비합니다. 이렇게 하려면 일회용 인슐린 팁과 25 μL 플랫 팁 마이크로리터 주사기에 장기간 플라스틱 파이펫 팁을 수동으로 설치합니다. 조사를 통해 살균.</li>
</ol>2. 마취 및 수술 전 준비
<ol><li>6-8주 된 남성 C57BL/6 야생형 마우스(약 21-23g)의 무게. 50 mg/kg의 용량으로 1% 펜토바르비탈 나트륨 용액의 관면 주사로 전신 마취를 유도하십시오.</li>
	<li>테이프와 함께 마취폼 플랫 플레이트의 수핀 위치에 마우스를 고정합니다.</li>
	<li>각 동물의 작동 영역을 시포이트 공정 수준에서 하향 조정하여 양측 전방 우수 일강 척추의 연결 선까지, 좌우면은 전방 축균선과 평행하게 결합하여 준비한다.</li>
	<li>외과 적 부위와 외과 의사의 전면에 준비된 영역으로 구성된 외과 적 부위에 중점을 둔 멸균 수술장을 준비하십시오.<ol>
<li>벤치탑을 소독합니다.</li>
		<li>수술 스크럽 솔루션의 여러 응용 프로그램으로 절개 부위를 청소하십시오. 0.5%의 요오도프기로 2~3회 피부를 닦아 매번 1-2분 동안 건조시키십시오.</li>
		<li>멸균 커튼으로 마우스를 덮습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 외과 적 절차
참고: 도 1 은 마이크로 주입에 의한 이중 성 원각 덕트에 TC의 역행 주입 전후에 마우스 췌장의 해부학 및 형태학을 묘사합니다.
<ol><li>약 2 ~ 3cm 길이의 중앙위부 절개를 합니다.</li>
	<li>위장을 따라 십이지장(duodenum)을 왼쪽에서 오른쪽으로 찾습니다. 십이지장과 왼쪽을 외과 용 집게와 소독제에 젖은 면봉을 사용하여 췌장, 이중 성 덕트 및 십이지장 유두를 부드럽게 당깁니다. 장 벽이나 관련 선박을 손상시키지 않도록주의하십시오.</li>
	<li>8-0 사용 유두 주위의 십이지장과 췌장 사이의 연결을 통과하고 마우스 몸의 왼쪽으로 당겨 십이지장을 고치도록 봉합사.</li>
	<li>피부와 간 의 아래 쪽 가장자리를 부드럽게 당깁니다. 일반적인 간 덕트를 고정하여 포털 정맥이나 췌장을 고정하지 않도록 하십시오. 근위 이중성 덕트를 고정합니다.</li>
	<li>소인주사를 분해 성 빌리오판크레아틱 덕트로 역행하여 관통합니다. 십이지성 유두 근처의 바늘 끝을 클램프로 고정합니다. 5 μL/min의 속도로 췌장 덕트에 5% TC의 10 μL을 주입합니다.</li>
	<li>안정적인 압력을 달성하기 위해 5 분 동안 비오 판크레틱 덕트를 닫습니다. 그런 다음 마이크로 인젝터를 꺼내 클램프를 제거합니다.</li>
	<li>십이지드넘을 원래 해부학적 위치로 복원하고 출혈을 확인합니다.</li>
	<li>6-0 봉합사로 상처를 닫고 0.5 %의 요오도프로 소독하십시오.</li>
</ol>4. 복구 및 수술 후 관리
<ol><li>37°C 열패드에서 마취에서 동물을 회수합니다. 모든 동물이 깨어날 때까지 수술 후 수술 후 방에 수술 된 동물을 보내지 마십시오.</li>
	<li>0.8 mL의 식염수 피하 및 천천히 유체 보충제를 투여하십시오.</li>
	<li>그들의 일반적인 상태 및 감염 또는 질병의 표시에 대 한 수술 후 동물을 모니터링.</li>
</ol>5. 세로지학적 시험 및 적법평가
<ol><li>에서 24 수술 후, 동일한 복용량 및 주입 경로를 사용 하 여 pentobarbital 나트륨으로 쥐를 마취.</li>
	<li>복부 대어타 (마우스 당 약 0.8 mL)에서 모든 혈액을 수집하고 추가 테스트를 위해 혈청을 분리하기 위해 1,500 x g 에서 15 분 동안 회전합니다.</li>
	<li>췌장 조직을 수집합니다.</li>
	<li>흉부 구멍을 열어 폐 조직을 수집합니다.</li>
	<li>아밀라제, 리파제, 간 기능(알라닌 트랜스아미나아제(ALT) 및 아스파르타트 트랜스아미나아제(AST) 및 신장 기능(urea 및 creatine)을 포함한 혈청의 생화학 기능 지수를 제조업체의 지침에 따라 상용 키트를 사용하여 측정합니다.</li>
	<li>폐와 췌장 조직을 균질화하고 제조업체의 지침에 따라 상용 키트를 사용하여 골수페록시다아제 (MPO) 수준을 측정합니다.</li>
	<li>흉부 캐비티를 열고 20 mL의 인산염 완충식식염수(PBS)를 두 번 인산염 식염수(PBS)로 인퓨즈한 다음 췌장을 수집합니다. 24시간 동안 4% 파라포름알데히드 용액에 담가 보시면 됩니다. 일련의 알코올 농도에서 탈수하고 파라핀에 포함됩니다.</li>
	<li>마이크로토메를 사용하여 5 μm 두께의 췌장 조직 섹션을 준비하십시오.</li>
	<li>췌장의 조직학적 평가를 위해 H&E 염색을 수행합니다.</li>
	<li>슈미트 외 30에서 제안된 기준에 따라 병리학 점수를 평가한다.</li>
</ol>

<ol><li>Lee, P. J., Papachristou, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">New insights into acute pancreatitis.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. 16 (8), 479-496 (2019).</li>
<li>Mandalia, A., Wamsteker, E. J., DiMagno, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+understanding+and+managing+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">Recent advances in understanding and managing acute pancreatitis.</a> F1000Research. 7, 959(2018).</li>
<li>Banks, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+acute+pancreatitis-2012%3A+revision+of+the+Atlanta+classification+and+definitions+by+international+consensus%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Classification of acute pancreatitis-2012: revision of the Atlanta classification and definitions by international consensus.</a> Gut. 62 (1), 102-111 (2013).</li>
<li>Munir, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+immunomodulatory+therapy+for+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Letters%22%5BJournal%5D)">Advances in immunomodulatory therapy for severe acute pancreatitis.</a> Immunology Letters. 217, 72-76 (2020).</li>
<li>Peery, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+gastrointestinal+disease+in+the+United+States%3A+2012+update%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Burden of gastrointestinal disease in the United States: 2012 update.</a> Gastroenterology. 143 (5), 1179-1187 (2012).</li>
<li>Hines, O. J., Pandol, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ%22%5BJournal%5D)">Management of severe acute pancreatitis.</a> BMJ. 367, 6227(2019).</li>
<li>James, T. W., Crockett, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+acute+pancreatitis+in+the+first+72+hours%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Management of acute pancreatitis in the first 72 hours.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 34 (5), 330-335 (2018).</li>
<li>Silva-Vaz, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+acute+pancreatitis%3A+a+critical+appraisal+of+clinical+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Murine models of acute pancreatitis: a critical appraisal of clinical relevance.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (11), 2794(2019).</li>
<li>Hyun, J. J., Lee, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Experimental models of pancreatitis.</a> Clinical Endoscopy. 47 (3), 212-216 (2014).</li>
<li>Renner, I. G., Wisner, J. R., Rinderknecht, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+exogenous+secretin+on+ceruletide-induced+acute+pancreatitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Protective effects of exogenous secretin on ceruletide-induced acute pancreatitis in the rat.</a> Journal of Clinical Investigation. 72 (3), 1081-1092 (1983).</li>
<li>Niederau, C., Ferrell, L. D., Grendell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caerulein-induced+acute+necrotizing+pancreatitis+in+mice%3A+protective+effects+of+proglumide%2C+benzotript%2C+and+secretin%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Caerulein-induced acute necrotizing pancreatitis in mice: protective effects of proglumide, benzotript, and secretin.</a> Gastroenterology. 88 (5), 1192-1204 (1985).</li>
<li>Foitzik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exocrine+hyperstimulation+but+not+pancreatic+duct+obstruction+increases+the+susceptibility+to+alcohol-related+pancreatic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+in+Surgery%22%5BJournal%5D)">Exocrine hyperstimulation but not pancreatic duct obstruction increases the susceptibility to alcohol-related pancreatic injury.</a> Archives in Surgery. 129 (10), 1081-1085 (1994).</li>
<li>Schneider, L., Dieckmann, R., Hackert, T., Gebhard, M. M., Werner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+alcohol-induced+pancreatic+injury+is+similar+with+intravenous+and+intragastric+routes+of+alcohol+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Acute alcohol-induced pancreatic injury is similar with intravenous and intragastric routes of alcohol administration.</a> Pancreas. 43 (1), 69-74 (2014).</li>
<li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+ethyl+ester+synthase+inhibition+ameliorates+ethanol-induced+Ca2%2B-dependent+mitochondrial+dysfunction+and+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Fatty acid ethyl ester synthase inhibition ameliorates ethanol-induced Ca2+-dependent mitochondrial dysfunction and acute pancreatitis.</a> Gut. 63 (8), 1313-1324 (2014).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NRF2+mitigates+acute+alcohol-induced+hepatic+and+pancreatic+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">NRF2 mitigates acute alcohol-induced hepatic and pancreatic injury in mice.</a> Food and Chemical Toxicology. 121, 495-503 (2018).</li>
<li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+methodology+of+L-arginine-induced+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">New insights into the methodology of L-arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 0117588(2015).</li>
<li>Creutzfeldt, W., Schmidt, H., Horbach, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+effects+of+a+trypsin+inhibitor+%28Trasylol%29+on+Enzyme+activities+and+morphology+in+taurocholate+and+calciphylaxis+pancreatitis+of+the+rat+%28a+contribution+to+the+pathogenesis+of+pancreatitis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Klin+Wochenschr%22%5BJournal%5D)">Studies on the effects of a trypsin inhibitor (Trasylol) on Enzyme activities and morphology in taurocholate and calciphylaxis pancreatitis of the rat (a contribution to the pathogenesis of pancreatitis).</a> Klin Wochenschr. 43, 15-22 (1965).</li>
<li>Liu, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+taurocholate-induced+model+of+severe+acute+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A simple taurocholate-induced model of severe acute pancreatitis in rats.</a> World Journal of Gastroenterology. 15 (45), 5732-5739 (2009).</li>
<li>Cavdar, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controversial+issues+in+biliary+pancreatitis%3A+when+should+we+perform+MRCP+and+ERCP%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Controversial issues in biliary pancreatitis: when should we perform MRCP and ERCP.</a> Pancreatology. 14 (5), 411-414 (2014).</li>
<li>Perides, G., van Acker, G. J., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li>
<li>Orabi, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cluster+of+differentiation+38+%28CD38%29+mediates+bile+acid-induced+acinar+cell+injury+and+pancreatitis+through+cyclic+ADP-ribose+and+intracellular+calcium+release%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Cluster of differentiation 38 (CD38) mediates bile acid-induced acinar cell injury and pancreatitis through cyclic ADP-ribose and intracellular calcium release.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (38), 27128-27137 (2013).</li>
<li>Fanczal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPM2-mediated+extracellular+Ca%282%2B%29+entry+promotes+acinar+cell+necrosis+in+biliary+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">TRPM2-mediated extracellular Ca(2+) entry promotes acinar cell necrosis in biliary acute pancreatitis.</a> Journal of Physiology. 598 (6), 1253-1270 (2020).</li>
<li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caffeine+protects+against+experimental+acute+pancreatitis+by+inhibition+of+inositol+1%2C4%2C5-trisphosphate+receptor-mediated+Ca2%2B+release%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Caffeine protects against experimental acute pancreatitis by inhibition of inositol 1,4,5-trisphosphate receptor-mediated Ca2+ release.</a> Gut. 66 (2), 301-313 (2017).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dehydrocholic+acid+ameliorates+sodium+taurocholate-induced+acute+biliary+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+and+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Dehydrocholic acid ameliorates sodium taurocholate-induced acute biliary pancreatitis in mice.</a> Biology and Pharmaceutical Bulletin. 43 (6), 985-993 (2020).</li>
<li>Hagiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombin+III+prevents+cerulein-induced+acute+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Antithrombin III prevents cerulein-induced acute pancreatitis in rats.</a> Pancreas. 38 (7), 746-751 (2009).</li>
<li>Hagiwara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Danaparoid+sodium+prevents+cerulein-induced+acute+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Danaparoid sodium prevents cerulein-induced acute pancreatitis in rats.</a> Shock. 32 (1), 94-99 (2009).</li>
<li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taurocholate-induced+pancreatitis%3A+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li>
<li>Barlass, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphine+worsens+the+severity+and+prevents+pancreatic+regeneration+in+mouse+models+of+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Morphine worsens the severity and prevents pancreatic regeneration in mouse models of acute pancreatitis.</a> Gut. 67 (4), 600-602 (2018).</li>
<li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+review+of+NSAIDs+treatment+for+acute+pancreatitis+in+animal+studies+and+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Research+in+Hepatology+and+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A systematic review of NSAIDs treatment for acute pancreatitis in animal studies and clinical trials.</a> Clinical Research in Hepatology and Gastroenterology. 44, 100002(2020).</li>
<li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+in+Surgery%22%5BJournal%5D)">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals in Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li>
<li>Junyuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+protects+against+intestinal+barrier+disruption+and+inflammation+in+acute+necrotizing+pancreatitis+through+TLR4%2FMyD88%2Fp38MAPK+and+ERS+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Quercetin protects against intestinal barrier disruption and inflammation in acute necrotizing pancreatitis through TLR4/MyD88/p38MAPK and ERS inhibition.</a> Pancreatology. 18 (7), 742-752 (2018).</li>
<li>Waldron, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Orai+Ca%282%2B%29+channel+inhibitor+CM4620+targets+both+parenchymal+and+immune+cells+to+reduce+inflammation+in+experimental+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The Orai Ca(2+) channel inhibitor CM4620 targets both parenchymal and immune cells to reduce inflammation in experimental acute pancreatitis.</a> Journal of Physiology. 597 (12), 3085-3105 (2019).</li>
<li>Petersen, O. H., Gerasimenko, J. V., Gerasimenko, O. V., Gryshchenko, O., Peng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+calcium+and+ATP+in+the+physiology+and+pathology+of+the+exocrine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The roles of calcium and ATP in the physiology and pathology of the exocrine pancreas.</a> Physiological Reviews. 101 (4), 1691-1744 (2021).</li>
</ol>

TC 유도 SAP 모델은 우수한 연구 도구입니다. 이 연구에서 와 같이,이 모델은 특정 장치를 사용하지 않고 일반 실험실에서 매우 쉽게 실현됩니다. 조직학 및 생화학적 분석과 함께 사용될 경우 AP를 유도하고 평가하기 위한 비용-(저렴한 시약) 및 시간 절약(24h 시간 창) 접근법을 제공합니다. TC의 농도조정은 또한 SAP를 유도하기 위해 TC를 고용하여 마우스20에 SAP를 유도할 수 있는 가능성을 제공하며, 주요 차이점은 TC주입에 사용되었다. 더 정확한 주입 복용량을 제공할 수 있습니다.
우리의 경험에 따르면, 모델 설립의 수술 과정에서 가장 중요한 요인은 이중 성 덕트의 전체 노출, 마이크로 인젝터의 부드러운 천자, 비교적 일정한 속도로 biliopancreatic 덕트 및 췌장 덕트에 TC의 주입을 포함했다. 수술 중 다음 사항에주의를 기울여야 합니다. 첫째, 십이지장 괴사귀가 발생할 수있는 과도한 힘의 적용을 피하기 위해...

급성 췌장염 (AP)은 비정상적으로 활성화 된 효소에 의해 후속 덕트 팽창 및 췌장 자가 소화를 가진 주요 췌장 덕트의 방해를 특징으로하는 췌장의 급성 염증입니다. 그것의 임상 표현은 현지 또는 전신 염증, 복통 및 혈청 아밀라세1,2의 고도를 포함합니다. 심각도 분류3에 따르면 AP는 경미하고, 온건하고, 심한 형태로 존재할 수 있으며, 그 중 심각한 급성 췌장염(SAP)은 30%4 이상의 높은 사망률로 인해 가장 심각한 급성 췌장염(SAP)이 가장 우려되는 상태입니다. 미국에서 AP는 200,000명 이상의 환자에 영향을 미치는 입원의 가장 흔한 이유 중 하나입니다5. 더욱이 AP, 특히 SAP는 매년 증가하고 젊은 연령집단에 영향을 미치고 있다6. 그러나, 현재 임상 실습에 효과적인 치료 옵션의 부족이있다6,7. 따라서 AP에 관련된 분자 메커니즘을 탐구하여 치료 개선을 촉진할 필요가 있습니다.
잘 확립 된 실험 동물 모델은 AP에 관련된 메커니즘을 연구하고 다른 치료 양식의 효과를 평가하기 위해 필요합니다. 형질 전환 및 녹아웃 균주의 쉬운 접근성과 생체 내 평가에 필요한 약물의 용량을 최소화하는 작은 크기로, 마우스는 AP 연구에 선호됩니다. 따라서, AP의 몇몇 모형은 마우스8,9에서 개발되었습니다.
caeruleinin10의 정맥 투여를 통해 유도된 온화한 췌장염 쥐 모델에서 작업한 Niederau et al.은 동일한 약물 및 주사 경로를 사용하여 유도된 아시나르 세포 괴사로 제시된 SAP 마우스 모델을 개발했다. 이 모델은 비침습성, 신속한 유도, 넓은 재현성 및 적용가능성을 포함한 몇 가지 장점을 가지고 있지만, 가장 큰 단점은 대부분의 경우 온화한 형태의 AP만이 개발되어 임상 관련성을 제한한다는 것입니다. 알코올은 AP의 주요 과인자 중 하나로 간주됩니다. 그러나, Foitzik 외. 외는 외크림 과자극12와 같은 그밖 요인과 결합될 때만 췌장 상해를 일으키는 원인이 된다는 것을 보고했습니다. 더욱이, 알콜 유도 AP 모형은 다른 행정 경로를 통해 개발되고, 약 복용량이 보고되고 있더라도, 그들의 주요 단점은 그(것)들을 재생하는 어려움입니다. L-아르기닌의 복막 투여는 마우스16에서 AP를 유도할 수 있다; 그러나, 그것의 낮은 임상 관련성은 그것의 응용프로그램을 방해합니다. 황소 자리, 담즙 소금, 먼저 췌장 덕트 주입을 통해 인간의 AP를 닮은 조건을 유도하기 위한 1965 년에 Creutzfeld 외. 에 의해 제안 되었다17. 병리학학18,19의 임상 관련성에 관한 논쟁이 존재하지만, 타우로콜린성 유도 췌장염은 SAP에 필수적인 모델로 남아 있습니다.
이 모델은 실현하기 쉽고 마우스에도 효과적이기 때문에, 이제 생체 내 연구에서 작은 동물을 위한 가장 많이 사용되는 AP 모델 중 하나입니다. Perides 외. 마우스20에서 SAP를 유도하기 위해 타우로콜레이트 나트륨(TC)을 고용하여 병리학을 이해하는 통찰력을 제공했습니다. 유전자 변형 기술과 결합된 이 모델은 AP에 관련된 몇 가지 특정 유전자를 확인할 수 있게 되었습니다. 예를 들어, Bicozo 외. CD38 유전자의 녹아웃은 TC-주입 췌장염의 모델에 대하여 보호되고 세포내 Ca2+ signaling21에 있는 변경에 기계장치를 기인한다는 것을 보여주었습니다. Fanczal 외. 마우스 췌장 아시나르 및 덕트 세포의 혈장 막에서 TRPM2 발현의 생리적 의미를 조사하고 TRPM2 녹아웃 mice22에서 TC 유도 SAP의 감소된 심각도를 입증하였다. 또한,이 모델은 또한 생체 내에서 많은 새로운 약물을 테스트하는 간단하고 효과적인 방법을 제공합니다. 예를 들어, 이 방법은 카페인23, 탈수성산24 및 다양한 항산화제 및 항응고제25,26의 치료 효과를 검증가능하게 하였다. 이 증거는 TC 유도 SAP 모델의 다재다능함을 보여줍니다. Wittel 외는 유사한 마우스 모델을 설명했지만27, 구현 절차에 대한 세부 사항의 부족은 결과를 재현 할 수없는 발생할 수 있습니다. 이 기사에서는 간단한 수제 현미경을 이용한 방법에 초점을 맞추고 TC 유도 SAP를 연구하여 AP의 발병 및 치료에 대한 추가 연구뿐만 아니라 다른 많은 물질에 완벽하게 적응할 수 있는 실험 방법을 위한 가능한 지침을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>0.5% 요오드포</td><td>Shanghai Likang 소독제</td><td>310102</td><td>4mL/마우스</td></tr><tr><td>0.9% 염화나트륨</td><td>Sinopharm Group Co., Ltd.</td><td>10019318</td><td>0.8 mL / 마우스</td></tr><tr><td>1 % 펜토 바르비탈 나트륨</td><td>시그마</td><td>P3761</td><td>0.2 -0.25 mL / 마우스</td></tr><tr><td>25 &mu; L 플랫 팁 마이크로 리터 주사기</td><td>Gaoge, 상하이</td><td>A124019</td><td></td></tr><tr><td>4 % 파라 포름 알데히드</td><td>Beyotime, Nantong, China</td><td>P0099-500ml</td><td></td></tr><tr><td>5 % 타우로 콜산 나트륨 (TC)</td> <td>알라딘</td><td>S100834-5g</td><td>10 &mu; L/SAP 마우스</td></tr><tr><td>6-0 나사산 바늘이 있는 멸균 나일론 미세 봉합사(1/2 원)</td><td>Cheng-He</td><td>20093</td><td></td></tr><tr><td>75% 알코올</td><td>Sinopharm Group Co., Ltd.</td><td>10009218</td><td>4 mL / 마우스</td></tr><tr><td>8-0 실 바늘이있는 멸균 나일론 미세 봉합사 (3/8 원)</td><td>Cheng-He</td><td>19064</td><td></td></tr><tr><td>ALT Activity Assay Kit</td><td>EPNK, Anhui, China</td><td>ALT0012</td><td></td></tr><tr><td>Amylase Assay Kit</td><td>EPNK, Anhui, China</td><td>AMY0012</td><td></td></tr><tr><td>12mm 턱 (3cm)이있는 각진 작은 불독 클램프</td><td>Cheng-He</td><td>HC-X022</td><td></td></tr><tr><td>아스펜 부스기 또는 마우스 침구용 파쇄</td><td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology</td><td>VR03015</td><td></td></tr><tr><td>AST Activity Assay Kit</td><td>EPNK, Anhui, China</td><td>AST0012</td><td></td></tr><tr><td>Blood Urea Nitrogen (BUN) Assay Kit</td><td>EPNK, Anhui, China</td><td>BUN0011</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 마우스</td><td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology</td><td>213</td><td></td></tr><tr><td>크레아틴 분석 키트</td><td>EPNK, 안후이, 중국</td><td></td><td></td>CRE0012</tr><tr><td>특징 마이크로톰 블레이드</td><td>Beyotime, Nantong, China</td><td>E0994</td><td></td></tr><tr><td>지혈 겸자(9.5cm, 곡선형)</td><td>JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.</td><td>JC3901</td><td></td></tr><tr><td>리파제 분석 키트</td><td>Jiancheng, Nanjing, China</td><td>A054-2-1</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica biosystem, 독일</td><td>RM2245</td><td></td></tr><tr><td>Mindray 생화학 분석기</td><td>Mindray, Shenzhen, China</td><td>BS-420</td><td></td></tr><tr><td>MPO 분석 키트</td><td>Jiancheng, Nanjing, China</td><td>A044-1-1</td><td></td></tr><tr><td>Normal mouse chow</td><td>Trophic, Nantong, China</td><td>LAD 1000</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Beyotime, 난퉁, 중국</td><td>C0221A</td><td></td></tr><tr><td>5mm 턱(1.5cm)이 있는 스트레이트 마이크로 불독 클램프</td><td>JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.</td><td>W40130</td><td></td></tr><tr><td>직선 또는 곡선 겸자(11.0cm)</td><td>Cheng-He</td><td>HC-X091A 또는 HC-X090A</td><td></td></tr><tr><td>스트레이트 가위(10.0cm)</td><td>Cheng-He, 닝보, 중국</td><td>HC-J039102</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific 원심분리기</td><td>Thermo Scientific, 미국</td><td>Multifuge X1R</td><td></td></tr></tbody></table>

비리오크크레아티드 덕트에 타우로콜레이트 나트륨의 역행 주입을 사용하여 마우스 심각한 급성 췌장염 모델의 설립

Establishment of a Mouse Severe Acute Pancreatitis Model using Retrograde Injection of Sodium Taurocholate into the Biliopancreatic Duct

급성 췌장염의 보급 (AP), 특히 심한 급성 췌장염 (SAP), 매년 젊은 연령 그룹에서 증가. 그러나, 현재 임상 실습에 효과적인 치료의 부족이 있다. 형질 전환 및 녹아웃 균주의 쉬운 접근성과 생체 내 평가에 필요한 약물의 최소 용량을 허용하는 작은 크기로, 마우스에서 잘 확립 된 실험 모델은 AP 연구에 선호됩니다. 더욱이, 타우로콜레이트 나트륨(TC)을 통해 유도된 SAP는 현재 가장 널리 사용되고 가장 잘 특징적인 모델 중 하나입니다. 이 모형은 AP의 프로세스 도중 새로운 치료 및 가능한 분자 사건을 위해 조사되었습니다. 여기서는 타우로콜레이트 나트륨과 간단한 수제 현미경을 이용한 AP 마우스 모델의 생성을 소개합니다. 또한, 우리는 또한 후속 조직학 및 세로가지 시험을 위한 방법론을 제공합니다.

위의 지시에 따라 약 40분의 평균 수술 기간을 얻었습니다. 마우스는 약간 비활성 상태였으며 각각 24시간, 48h 및 72h에서 약 0.5-1.75g, 0.85-1.85g 및 0.5-4.73g의 무게를 잃었습니다(그림 2).
수술 이완 시점부터 수술 후 24시간까지, 질병이 발달함에 따라 마우스는 비활성 상태가 되어 반응이 느리고 행동하였다.
대조군과 SAP 마우스의 생존율은 각각 100%(8/8) 및 72.7%(8/11)였으며, 72h 수술 후(그림 3)이었다.
H&amp;E 염색(그림 4) 및 병리학 점수(그림 5)에 따르면 췌장 섹션에서 발생하며, 명백한 부종 (...

중증 급성 췌장염의 마우스 모델은 본원에 기재된다. 여기에 제시된 절차는 매우 빠르고 간단하며 접근 가능하므로 잠재적으로 분자 메커니즘및 급성 췌장염의 다른 치료 내정간섭에 대한 연구가 편리한 방법으로 허용됩니다.

The prevalence of acute pancreatitis (AP), especially severe acute pancreatitis (SAP), is increasing in younger age groups annually. However, there is a ...

이 비디오의 전반적인 목표는 비관 증분 덕트로 나트륨 타우로 콜린산나트륨의 역행 주입을 통해 급성 췌장염의 마우스 모델을 설정하는 것입니다. 동물과 관련된 모든 실험은 소오하우 대학의 동물 윤리위원회의 승인을 받았습니다. 모든 수술 절차는 완전한 마취하에 수행되었습니다.진통제는 질병의 자연적인 과정을 방해하지 않기 위하여 사용되지 않았습니다, 이전 문학에 의해 입증되고 Soochow 대학의 동물 윤리 위원회에 의해 승인되었습니다. 수술 전 8~12시간 전에 마우스를 빠르게 합니다. 0.22 마이크로 필터를 통해 5%의 타우로콜레이트 용액 필터를 준비합니다.집게, 가위, 블레이드 홀더, 바늘 홀더, 혈전 성 클립, 혈관 클램프 및 멸균 커튼을 포함한 수술 기구 및 재료를 자동 클랩합니다. 마이크로 주사기는 조사를 통해 살균되었습니다. 마우스를 사용하면 킬로그램당 50 밀리그램의 투여량으로 1%펜토바르비탈 나트륨 용액의 관면 주사로 전신 마취를 유도하십시오.조사 된 폼 플랫 플레이트에 마우스를 테이프로 고정합니다. xiphoid 공정 수준에서 제거 크림을 사용하여 마우스의 털을 제거하여 양측 전방 우수한 iliac 척추의 연결 선까지, 좌우측면은 전면 축실선과 평행하게 된다. 0.5%의 요오도프기로 2~3회 피부를 닦고 매번 1~2분 간 건조시키세요.멸균 커튼으로 마우스를 덮습니다. 열린 피부 층을 잘라내고 피하로 엽니다. 약 2~ 3센티미터 길이의 중앙위부 절개를 합니다.위장을 따라 십이지장(duodenum)을 왼쪽에서 오른쪽으로 찾습니다. 십이지장과 왼쪽을 외과 용 집게와 소독제에 젖은 면봉을 사용하여 췌장, 이중 성 덕트 및 십이지장 유두를 부드럽게 당깁니다. 8-0 사용 유두 주위의 십이지장과 췌장 사이의 연결을 통과하는 봉합사, 마우스 몸의 왼쪽으로 봉합사를 당겨 십이지장을 고치게 한다.피부와 간 의 아래 쪽 가장자리를 부드럽게 당깁니다. 일반적인 간 덕트를 고정합니다. 소인주사를 분해 성 빌리오판크레아틱 덕트로 역행하여 관통합니다.십이지성 유두 근처의 바늘 끝을 클램프로 고정합니다. 분당 5 마이크로리터의 속도로 5%의 타우로콜레이트 나트륨 10마이크로리터를 이중성 덕트에 주입합니다. 안정적인 압력을 달성하기 위해 5 분 동안 비오 판크레틱 덕트를 닫습니다.클램프를 제거합니다. 마이크로 인젝터를 꺼내 다른 클램프를 제거하고 봉합사를 수정합니다. 십이지드넘을 원래 해부학적 위치로 복원하고 출혈을 확인합니다.6-0 봉합사로 상처를 닫습니다. 멸균 커튼을 제거합니다. 0.5%의 요오도프로 절개를 소독합니다.섭씨 37도 열패드에서 마취에서 동물을 회수하십시오. 관리 0.8 밀리 리터의 0.9% 식염수 피하 유체 보충에 대 한 피하. 수술 후 24시간, 동일한 용량과 주사 경로를 사용하여 펜토바르비탈 나트륨으로 마우스를 마취시킵니다.복부 대어에서 전체 혈액을 수집하고 15 분 동안 1, 500 x g에서 회전하여 혈청을 분리하여 혈청 테스트를 위해 분리하십시오. 조직학 평가를 위해 췌장과 폐 조직을 수집합니다. 췌장에 4%의 파라포름알데히드 용액을 24시간 동안 담가 두면 됩니다.일련의 알코올 농도에서 탈수하고 파라핀에 포함됩니다. 마이크로토메를 사용하여 5 마이크로 두꺼운 췌장 조직 섹션을 준비하십시오. 췌장의 조직학적 평가를 위해 H&E 염색을 수행합니다.마우스는 약간 비활성 상태였고 사전 작동에 비해 수술 후 24시간 동안 체중이 감소했습니다. 대조군과 SAP 마우스의 생존율은 수술 후 72시간 동안 각각 100%와 72.7%였다. 췌장 섹션에서 H&E 염색 결과에 따르면, 췌장 조직의 펄프 괴사는 SAP 마우스에서 관찰될 수 있는 반면, 대조마우스에서는 유의한 변화가 발견되지 않았다.더욱이, 아밀라제, 리파제, 췌장 및 폐 MPO 활성의 현저히 증가된 수준은 대조마우스에 비해 SAP 마우스에서 발견되었다. 또한, ALT, AST, BUN 및 크레아티닌을 포함한 간 및 신장 지수의 상당히 높은 수치가 발견되었습니다. 이중 성 덕트로 타우로 콜린나트륨의 역행 주입을 사용 하 여, 심각한 급성 췌장염 쥐에서 유도 될 수 있습니다.성공적인 펑크를 보장하기 위해 이중 성원 경작 덕트의 잘 노출. 천자 동안, 이중 성덕의 구멍을 피하기 위해 적절한 각도와 힘을 보장합니다. 여기서 낙담한 TC 유도된 SAP 모델은 가혹한 급성 췌장염에 관여하는 기계장치를 연구하기 위한 적합한 모델이다.그것은 저렴 한 시약을 사용 하 여 경제 모델 이며이 비디오 초보자 외과 의사를 더 빨리 훈련 하는 데 도움이.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 타우로콜레이트나트륨의 췌장 주입을 통해 급성 담췌장염이 있는 마우스 모델을 생성하는 절차를 설명합니다. 이 모델은 췌장에서 타우로콜산나트륨에 의해 유발된 병태생리학적 변화를 연구하는 데 도움이 됩니다.

급성 담췌구염 모델: 췌관관 주입을 통해 급성 담췌구염 마우스 모델을 생성하는 방법

가혹한 급성 췌장염을 위한 동물 모형은 염증성 사건의 진화의 관측을 용이하게 하는 초기 단계에서 병리학적 변화의 연구를 가능하게 합니다. 여기서 우리는 마취 C57BL/6 마우스의 췌장 덕트에 타우로콜린산 나트륨의 역그레이드 주입에 의하여 가혹한 급성 담즙 췌장염의 유도를 위한 프로토콜을 제공합니다.

C57BL/6 마우스에서 타우로콜레이트 나트륨 유도 심한 급성 췌장염

만성 췌장염 (CP)은 췌장의 염증과 섬유증을 특징으로하는 질병이며 종종 난치성 복통과 관련이 있습니다. 이 문서는 2,4,6 -trinitrobenzene 설포닉 산 (TNBS)로 담관 주입을 통해 CP의 마우스 모델을 생성하는 기술을 정제에 초점을 맞추고 있습니다.

담즙 덕트 TNBS 주입을 통한 만성 췌장염을 위한 마우스 모델

복강 내 약물 투여는 췌장 손상을 유발하기 위한 안전하고 효과적인 비침습적 접근법입니다. 이 연구는 다양한 정도의 췌장 손상을 유발하기 위해 마우스에 대한 5가지 고유한 복강 내 주사 프로토콜을 비교하고 중증 급성 췌장염(SAP)에 대한 병리학적 변화와 치료 전략을 조사하기 위해 중증 췌장 손상 모델을 설정했습니다.

Caerulein과 Lipopolysaccharide의 조합을 통한 중증 급성 췌장염의 마우스 모델 준비 복강 내 주사

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전기응고술을 통해 확립된 폐쇄성 만성 췌장염 모델

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