Name: 재생 능력의 비교 분석을 위해 Zebrafish와 Medaka를 사용한 성인 시신경의 찔린 상처 부상 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: 배우세요 성인 어류의 뇌 찔린 상처 모델을 이용한 재생 신경과학 연구 방법입니다. 형광 면역염색으로 망막 신경절 세포 증식과 분화를 평가하여 중추신경계 재생 치료에 대한 새로운 통찰을 제공합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작업은 JSPS KAKENHI 보조금 번호 18K14824 및 21K15195와 일본 AIST의 내부 보조금으로 지원되었습니다.

모든 실험 프로토콜은 국립 산업 기술 종합 연구소(National Institute of Advanced Industrial Science and Technology)의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았습니다. 제브라피쉬와 메다카는 표준 절차28에 따라 유지되었다.
1. 성인 시신경의 찔린 상처 부상
<ol><li>마취를 위해 0.4%(w/v) 트리카인 원액을 준비합니다. 100mL 원액의 경우 400mg 트리카인 메탄설포네이트( 재료 표 참조)를 증류수 90mL에 녹이고 1M Tris HCl 완충액(pH 9.0)을 사용하여 pH를 7.0으로 조정합니다. pH가 조정되면 물을 최대 100mL까지 추가한 다음 적절한 분취량을 만들어 -20°C에서 보관합니다.</li>
	<li>성체 제브라피쉬 또는 메다카를 마취하려면 0.4% 트리카인 원액을 어류 시설수로 희석하여 0.02%(w/v) 트리카인 용액을 준비합니다.</li>
	<li>0.02 % tricaine 용액으로 물고기를 마취하십시오. 움직이지 않거나 접촉에 반응하지 않으면 마취됩니다 (1-2 분).</li>
	<li>마취된 생선을 스티로폼 트레이( 재료 표 참조)에 놓고 스티로폼에 수직으로 삽입된 두 개의 30G 바늘 사이에 물고기를 똑바로 고정합니다.</li>
	<li>물고기 머리가 움직이지 않도록 물고기 몸을 잡고 두개골을 통해 30G 바늘을 시신경 반구 중 하나의 내측 영역에 수직으로 삽입합니다(그림 1A, B). 삽입 깊이는 ~0.75mm로 30G 베벨 길이의 절반과 거의 같습니다. 이 삽입 깊이는 제브라피쉬와 메다카의 몸 크기가 비슷하기 때문에 뇌 손상을 유발합니다. 참고: Medaka는 두개골에 비늘이 있습니다. 30G 바늘을 사용하여 비늘을 긁고 제거하여 찔린 상처를 효율적이고 정확하게 유도합니다(그림 1C).</li>
	<li>부상당한 물고기를 신선한 생선 시설 물이 있는 어항으로 옮기고 마취에서 완전히 회복되면 수조를 물고기 사육 시스템으로 옮깁니다. 알림: 물고기는 회복되어 몇 분 안에 자유롭게 움직이기 시작합니다.</li>
	<li>손상 후 혈통 분석을 위해 5mM 브로모데옥시유리딘(BrdU)을 함유한 신선한 어류 시설수를 준비한 다음(재료 표 참조) 이 5mM BrdU 용액으로 어류를 미리 결정된 시간동안 배양합니다(실험 설계에 의해 결정됨). 그런 다음 2단계에 따라 이 물고기를 해부하고 BrdU 통합 및 세포 계통 정체성을 적절하게 평가합니다. 참고: 이 단계는 세포 계통 분석을 위한 선택적 단계입니다. BrdU 신호를 검출하려면 4.3단계와 같이 항원 검색을 수행하십시오.</li>
</ol>2. 뇌 해부
<ol><li>0.02% 트리카인 용액, 해부용 스티로폼 트레이, 인산염 완충 식염수(1x PBS)가 포함된 10mL 주사기와 연장 튜브 및 심내 관류용 30G 바늘( 재료 표 참조)을 준비합니다.</li>
	<li>선택한 시점에서 부상당한 물고기를 마취하십시오.</li>
	<li>스티로폼 트레이에 종이 타월을 놓고 종이 타월 위에 마취 된 생선을 놓습니다.</li>
	<li>항문 지느러미의 양쪽에 두 개의 30G 바늘을 수직으로 삽입하여 물고기 몸을 제자리에 고정합니다(그림 2A).</li>
	<li>항문에서 심장까지 복부 절개를 하고(그림 2B) 이 장기의 양쪽에 30G 바늘 두 개를 더 삽입하여 심장이 보이도록 합니다(그림 2C). 참고: 심장은 제브라피쉬와 메다카 모두에서 피하의 은빛 상피층으로 덮여 있습니다(그림 2C).</li>
	<li>집게의 끝으로 은색 상피층을 부드럽게 제거합니다(그림 2D).</li>
	<li>30G 바늘을 심실에 삽입하고 경사를 위로 유지하고 집게를 사용하여 심방을 절개합니다(그림 2E). 주사기를 조심스럽게 눌러 1x PBS를 누르고 심방이 혈액을 씻어 냈는지 확인합니다. 알림: 바늘이 심실을 관통하는 것을 방지하려면 바늘을 반 경사 깊이까지 조심스럽게 삽입한 다음 삽입 깊이를 조정하십시오. 관류가 잘되면 아가미가 하얗게 변합니다(그림 2F,G).</li>
	<li>혈액이 배출되고 아가미가 하얗게 변한 후 관류를 중지하십시오.</li>
	<li>물고기 몸을 제자리에 고정하는 바늘을 제거하고 물고기 복부 쪽을 아래로 고정합니다(그림 2H). 척수를 자르고 시신경과 종뇌에서 두개골을 제거합니다(그림 2I). 그런 다음 시신경을 절단하고 뇌를 조심스럽게 해부합니다. 알림: 해부하는 동안 시신경은 지각에 연결되어 있으므로 주의하십시오. 시신경을 당기면 시신경이 뇌에서 분리될 수 있습니다. 혈액 제거가 완료되지 않으면 뇌가 연한 분홍색으로 보입니다( 그림 2J의 오른쪽 뇌).</li>
	<li>뇌를 1x PBS에 4% 파라포름알데히드 1mL와 함께 1.5mL 튜브로 옮기고 4°C에서 밤새 고정합니다.</li>
</ol>3. 냉동 절편의 준비
<ol><li>고정된 뇌를 1x PBS에서 각각 5분 동안 세 번 세척합니다.</li>
	<li>뇌를 냉동 보호하려면 1x PBS에 30%(w/v) 자당 1mL가 포함된 1.5mL 튜브로 옮기고 4°C에서 밤새 배양합니다. OCT 30mL와 30% 자당 15mL를 조합하여 임베딩 화합물(OCT 화합물과 30% 자당의 2:1 혼합물, 재료 표 참조)을 준비합니다. 4 °C에서 보관하십시오. 알림: 혼합 화합물에서 기포를 제거하려면 50mL 튜브를 10,000 x g 에서 실온에서 2분 동안 원심분리하거나 튜브를 밤새 똑바로 세워 두십시오.</li>
	<li>해부된 뇌가 임베딩 화합물과 함께 크라이오몰드에 포매된 직후 크라이오몰드를 냉각시키기 위해 알루미늄 블록을 -80°C에서 하룻밤 동안 인큐베이션한다. 알림: 액체 질소를 사용하여 알루미늄 블록을 냉각할 수도 있습니다. 이 경우 알루미늄 블록은 매립하기 직전에 알루미늄 블록을 덮을 수 있을 만큼 충분한 액체 질소로 채워진 스티로폼 상자에 넣어야 합니다. 액체 질소 승화를 확인한 후, 미리 냉각 된 알루미늄 블록에 cryomold를 놓습니다. 알루미늄 블록에 한 번에 몇 개의 극저온 금형을 놓을 수 있는지 확인하는 것이 좋습니다. 모든 샘플을 빠르게 냉각할 수 있는 충분한 공간을 확보하기 위해 액체 질소 또는 추가 사전 냉각 블록을 사용하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>예냉된 알루미늄 블록을 스티로폼 상자에 넣습니다. 알루미늄 블록이 따뜻해지는 것을 방지하기 위해 뚜껑이 있는 스티로폼 상자를 사용하십시오.</li>
	<li>관상 절편의 경우 뇌를 극저온 몰드에 삽입하고 현미경으로 집게를 사용하여 방향을 조정합니다(그림 3A).</li>
	<li>스티로폼 상자의 예냉된 알루미늄 블록에 극저온 몰드를 놓고 OCT 화합물이 얼도록 합니다(그림 3B). OCT 화합물이 얼기 시작하면 흰색이됩니다.</li>
	<li>표본 디스크에 작은 원형의 OCT 화합물을 바르고 극저온 블록을 장착하여 극저온 블록을 표본 디스크에 부착합니다.</li>
	<li>검체 디스크를 저온 유지 장치에 넣고 OCT 화합물을 완전히 동결합니다.</li>
	<li>저온 유지 장치의 표본 헤드에 표본 디스크를 놓습니다.</li>
	<li>크라이오 블록의 방향을 설정하고 OCT를 트리밍하여 추가 영역을 제거합니다. 알림: 종뇌를 절단하는 동안 절단면의 방향을 조정하십시오. 블레이드에는 저온 유지 장치가 장착되어 있습니다. 시편 헤드의 각도를 변경하여 절단면의 방향을 조정할 수 있습니다.</li>
	<li>저온 유지 장치를 사용하여 전체 시신경을 통해 14μm 두께의 직렬 섹션을 절단합니다. 슬라이드를 -25°C에서 보관하십시오. 알림: 장기 보관은 -80 °C여야 합니다.</li>
</ol>4. 형광 면역염색
<ol><li>건조 유리는 실온(RT)에서 30분 동안 슬라이드 랙에서 슬라이드됩니다. RT에서 30분 동안 1x PBS로 슬라이드를 세척합니다. 항 -PCNA 또는 BrdU 항체로 면역 염색을 수행해야하는 경우 4.2 단계 또는 4.3 단계로 진행하십시오.</li>
	<li>500mL 비이커에 10mM 구연산나트륨 500mL를 준비하고, 구연산염 완충액을 핫플레이트 마그네틱 교반기 상에서 85°C로 가온한 후, 슬라이드를 슬라이드 염색 랙에 넣고 85°C에서 30분 동안 구연산염 완충액에서 랙을 배양한다. 끓지 않으려면 온도를 약 85 °C로 유지하십시오. 항원 회수 후, 슬라이드를 1x PBS(PBSTr) 중 0.1% 트리톤으로 3회 세척하고, 각 세척은 RT에서 5분 정도 소요한다. 참고: 이 단계는 증식 세포 핵 항원(PCNA) 검색을 위한 선택적 단계입니다.</li>
	<li>증류수에 12N HCl을 희석하여 2N HCl 용액을 준비합니다. 액체 차단제( 재료 표 참조)를 사용하여 소수성 장벽으로 선을 그려 섹션 주위에 2N HCl 용액을 유지합니다.<ol><li>슬라이드를 면역염색 트레이에 놓고 200-300μL의 2N HCl 용액을 도포합니다. 트레이를 37°C에서 30분 동안 배양합니다. 항원 회수 후 0.1% PBSTr로 3회 세척하고 각 세척은 RT에서 5분 정도 소요됩니다. 참고: 이 단계는 BrdU 항원 검색을 위한 선택적 단계입니다.</li>
	</ol></li>
	<li>종이 타월을 사용하여 남은 용액을 흡수하고 제거하십시오. 그런 다음 액체 차단제를 사용하여 소수성 장벽을 그려 필요에 따라 섹션 주위에 항체 용액을 유지합니다.</li>
	<li>슬라이드를 트레이에 놓고 200-300 μL의 블로킹 용액, PBSTr의 3%(v/v) 말 혈청)를 모든 슬라이드에 바르고 RT에서 1시간 동안 슬라이드를 배양합니다.</li>
	<li>RT에서 5분 동안 PBSTr로 섹션을 세척하고 세 번 반복합니다.</li>
	<li>블로킹 용액(각 슬라이드에 대한 항체 용액 200-300 μL)을 사용하여 1차 항체( 재료 표 참조)를 준비합니다. 종이 타월로 나머지 PBSTr을 제거하고 슬라이드를 면역염색 트레이에 놓습니다. 1차 항체 용액을 모든 슬라이드에 적용하고 4°C에서 밤새 트레이를 배양합니다.</li>
	<li>RT에서 5분 동안 PBSTr로 섹션을 세척하고 세 번 반복합니다.</li>
	<li>블로킹 완충액(1:500)을 사용하여 형광 2차 항체 용액( 재료 표 참조)을 준비합니다. 종이 타월로 나머지 PBSTr을 제거하고 슬라이드를 면역염색 트레이에 놓습니다. 모든 슬라이드에 2차 항체 용액을 바르고 알루미늄 호일로 트레이를 가리십시오. RT에서 1-2 시간 동안 배양하십시오.</li>
	<li>PBSTr로 섹션을 빛에 노출시키지 않고 RT에서 5분 동안 세 번 세척합니다.</li>
	<li>핵 염색을 위해 Hoechst 용액(1x PBS에서 500:1 희석, 재료 표 참조)을 준비합니다. 종이 타월로 나머지 PBSTr을 제거하고 슬라이드를 면역염색 트레이에 놓습니다. 모든 슬라이드에 Hoechst 용액을 바르고 트레이를 알루미늄 호일로 덮습니다. RT에서 30 분 동안 배양하십시오.</li>
	<li>빛을 노출시키지 않고 RT에서 10분 동안 1x PBS로 섹션을 세척합니다.</li>
	<li>종이 타월을 사용하여 나머지 1x PBS를 흡수 및 제거하고 형광 면역염색을 위해 수용성 장착 매체( 재료 표 참조)를 사용하여 슬라이드에 섹션을 장착합니다. 24 x 45mm 커버슬립을 섹션에 천천히 놓습니다. 슬라이드를 빛에 노출시키지 않고 4°C에서 보관하십시오.</li>
	<li>형광 현미경 또는 컨포칼 현미경으로 단면을 관찰하고 이미지화합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Becker, T., Wullimann, M. F., Becker, C. G., Bernhardt, R. R., Schachner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+regrowth+after+spinal+cord+transection+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Axonal regrowth after spinal cord transection in adult zebrafish.</a> Journal of Comparative Neurology. 377 (4), 577-595 (1997).</li>
<li>Raymond, P. A., Barthel, L. K., Bernardos, R. L., Perkowski, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+retinal+stem+cells+and+their+niches+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of retinal stem cells and their niches in adult zebrafish.</a> BMC Developmental Biology. 6, 36(2006).</li>
<li>März, M., Schmidt, R., Rastegar, S., Strähle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+response+following+stab+injury+in+the+adult+zebrafish+telencephalon%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Regenerative response following stab injury in the adult zebrafish telencephalon.</a> Developmental Dynamics. 240 (9), 2221-2231 (2011).</li>
<li>Kang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+tissue+repair+by+regeneration+enhancer+elements%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Modulation of tissue repair by regeneration enhancer elements.</a> Nature. 532 (7598), 201-206 (2016).</li>
<li>Simões, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+directly+contribute+collagen+to+scar+formation+during+zebrafish+heart+regeneration+and+mouse+heart+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Macrophages directly contribute collagen to scar formation during zebrafish heart regeneration and mouse heart repair.</a> Nature Communications. 11 (1), 600(2020).</li>
<li>Hoang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+regulatory+networks+controlling+vertebrate+retinal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene regulatory networks controlling vertebrate retinal regeneration.</a> Science. 370 (6519), (2020).</li>
<li>Alunni, A., Bally-Cuif, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+view+of+regenerative+neurogenesis+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A comparative view of regenerative neurogenesis in vertebrates.</a> Development. 143 (5), 741-753 (2016).</li>
<li>Diotel, N., Lübke, L., Strähle, U., Rastegar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+and+distinct+features+of+adult+neurogenesis+and+regeneration+in+the+telencephalon+of+zebrafish+and+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Common and distinct features of adult neurogenesis and regeneration in the telencephalon of zebrafish and mammals.</a> Frontiers in Neuroscience. 14, 568930(2020).</li>
<li>Labusch, M., Mancini, L., Morizet, D., Bally-Cuif, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+and+divergent+features+of+adult+neurogenesis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Conserved and divergent features of adult neurogenesis in zebrafish.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 525(2020).</li>
<li>Ito, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+reparative+phenotypes+between+zebrafish+and+medaka+after+cardiac+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Differential reparative phenotypes between zebrafish and medaka after cardiac injury.</a> Developmental Dynamics. 243 (9), 1106-1115 (2014).</li>
<li>Lai, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+analyses+in+zebrafish+and+medaka+reveal+that+harnessing+the+immune+response+promotes+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Reciprocal analyses in zebrafish and medaka reveal that harnessing the immune response promotes cardiac regeneration.</a> eLife. 6, 25605(2017).</li>
<li>Lust, K., Wittbrodt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activating+the+regenerative+potential+of+M%C3%BCller+glia+cells+in+a+regeneration-deficient+retina%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Activating the regenerative potential of Müller glia cells in a regeneration-deficient retina.</a> eLife. 7, 32319(2018).</li>
<li>Shimizu, Y., Kawasaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regenerative+capacity+of+the+optic+tectum+of+adult+medaka+and+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Differential regenerative capacity of the optic tectum of adult medaka and zebrafish.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 686755(2021).</li>
<li>Adolf, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+and+acquired+features+of+adult+neurogenesis+in+the+zebrafish+telencephalon%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Conserved and acquired features of adult neurogenesis in the zebrafish telencephalon.</a> Developmental Biology. 295 (1), 278-293 (2006).</li>
<li>Grandel, H., Kaslin, J., Ganz, J., Wenzel, I., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+and+neurogenesis+in+the+adult+zebrafish+brain%3A+origin%2C+proliferation+dynamics%2C+migration+and+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells and neurogenesis in the adult zebrafish brain: origin, proliferation dynamics, migration and cell fate.</a> Developmental Biology. 295 (1), 263-277 (2006).</li>
<li>Alunni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+neural+stem+cells+in+the+medaka+optic+tectum+proliferation+zones%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Evidence for neural stem cells in the medaka optic tectum proliferation zones.</a> Developmental Neurobiology. 70 (10), 693-713 (2010).</li>
<li>Kuroyanagi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+zones+in+adult+medaka+%28Oryzias+latipes%29+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Proliferation zones in adult medaka (Oryzias latipes) brain.</a> Brain Research. 1323, 33-40 (2010).</li>
<li>Ito, Y., Tanaka, H., Okamoto, H., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neural+stem+cells+and+their+progeny+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Characterization of neural stem cells and their progeny in the adult zebrafish optic tectum.</a> Developmental Biology. 342 (1), 26-38 (2010).</li>
<li>Shimizu, Y., Ueda, Y., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+signaling+regulates+proliferation+and+differentiation+of+radial+glia+in+regenerative+processes+after+stab+injury+in+the+optic+tectum+of+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Wnt signaling regulates proliferation and differentiation of radial glia in regenerative processes after stab injury in the optic tectum of adult zebrafish.</a> Glia. 66 (7), 1382-1394 (2018).</li>
<li>Ueda, Y., Shimizu, Y., Shimizu, N., Ishitani, T., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+sonic+hedgehog+and+notch+signaling+in+regenerative+neurogenesis+in+adult+zebrafish+optic+tectum+after+stab+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Involvement of sonic hedgehog and notch signaling in regenerative neurogenesis in adult zebrafish optic tectum after stab injury.</a> Journal of Comparative Neurology. 526 (15), 2360-2372 (2018).</li>
<li>Kiyooka, M., Shimizu, Y., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+inhibition+promotes+regenerative+neurogenesis+after+stab+wound+injury+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase inhibition promotes regenerative neurogenesis after stab wound injury in the adult zebrafish optic tectum.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 529 (2), 366-371 (2020).</li>
<li>Shimizu, Y., Kawasaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+acetyltransferase+EP300+regulates+the+proliferation+and+differentiation+of+neural+stem+cells+during+adult+neurogenesis+and+regenerative+neurogenesis+in+the+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Histone acetyltransferase EP300 regulates the proliferation and differentiation of neural stem cells during adult neurogenesis and regenerative neurogenesis in the zebrafish optic tectum.</a> Neuroscience Letters. 756, 135978(2021).</li>
<li>Shimizu, Y., Kiyooka, M., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+analyses+reveal+IL6%2FStat3+signaling+involvement+in+radial+glia+proliferation+after+stab+wound+injury+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Transcriptome analyses reveal IL6/Stat3 signaling involvement in radial glia proliferation after stab wound injury in the adult zebrafish optic tectum.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 668408(2021).</li>
<li>Lindsey, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Midbrain+tectal+stem+cells+display+diverse+regenerative+capacities+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Midbrain tectal stem cells display diverse regenerative capacities in zebrafish.</a> Scientific Reports. 9 (1), 4420(2019).</li>
<li>Yu, S., He, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stochastic+cell-cycle+entry+and+cell-state-dependent+fate+outputs+of+injury-reactivated+tectal+radial+glia+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Stochastic cell-cycle entry and cell-state-dependent fate outputs of injury-reactivated tectal radial glia in zebrafish.</a> eLife. 8, 48660(2019).</li>
<li>Bisese, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+transcriptome+response+of+the+midbrain%2Fdiencephalon+to+injury+in+the+adult+mummichog+%28Fundulus+heteroclitus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">The acute transcriptome response of the midbrain/diencephalon to injury in the adult mummichog (Fundulus heteroclitus).</a> Molecular Brain. 12 (1), 119(2019).</li>
<li>Schmidt, R., Beil, T., Strähle, U., Rastegar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stab+wound+injury+of+the+zebrafish+adult+telencephalon%3A+a+method+to+investigate+vertebrate+brain+neurogenesis+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Stab wound injury of the zebrafish adult telencephalon: a method to investigate vertebrate brain neurogenesis and regeneration.</a> Journal of Visualized Experiments. (4), e51753(2014).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book.+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29+5th+ed%22">The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio) 5th ed</a>. , University of Oregon Press. (2007).</li>
<li>Kaslin, J., Kroehne, V., Ganz, J., Hans, S., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+of+neuroepithelial-like+and+radial+glia-like+progenitor+cells+in+cerebellar+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct roles of neuroepithelial-like and radial glia-like progenitor cells in cerebellar regeneration.</a> Development. 144 (8), 1462-1471 (2017).</li>
<li>Curado, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+targeted+cell+ablation+in+zebrafish%3A+a+new+tool+for+regeneration+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Conditional targeted cell ablation in zebrafish: a new tool for regeneration studies.</a> Developmental Dynamics. 236 (4), 1025-1035 (2007).</li>
<li>Shimizu, Y., Ito, Y., Tanaka, H., Ohshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radial+glial+cell-specific+ablation+in+the+adult+zebrafish+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Radial glial cell-specific ablation in the adult zebrafish brain.</a> Genesis. 53 (7), 431-439 (2015).</li>
<li>Godoy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopaminergic+neurons+regenerate+following+chemogenetic+ablation+in+the+olfactory+bulb+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dopaminergic neurons regenerate following chemogenetic ablation in the olfactory bulb of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Scientific Reports. 10 (1), 12825(2020).</li>
<li>Sawahata, M., Izumi, Y., Akaike, A., Kume, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+brain+ischemia-reperfusion+model+induced+by+hypoxia-reoxygenation+using+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">In vivo brain ischemia-reperfusion model induced by hypoxia-reoxygenation using zebrafish larvae.</a> Brain Research Bulletin. 173, 45-52 (2021).</li>
</ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

여기에서는 뇌 손상 후 RGC 증식 및 분화의 평가를 용이하게 하기 위해 바늘을 사용하여 시신경에 찔린 상처 손상을 유도하는 데 사용할 수 있는 일련의 방법이 설명되어 있습니다. 바늘 매개 찔린 상처는 표준 도구 세트를 사용하여 많은 실험 샘플에 적용할 수 있는 간단하고 효율적으로 구현된 방법입니다. 제브라피쉬 뇌의 여러 영역에 대한 찔린 상처 손상 모델이 개발되었습니다 3,19,29. 시신경은 뇌에서 가장 큰 부분 중 하나이며 조작하기 쉽습니다. 또한, 시신경의 대부분의 RGC는 종뇌와 비교할 때 생리학적 조건에서 정지 상태이므로 손상에 따라 RGC 증식 및 분화를 더 쉽게 관찰할 수 있습니다 3,19.
찔린...

제브라피쉬(Danio rerio)는 다른 포유류에 비해 중추신경계(CNS)를 재생하는 능력이 증가했다 1,2,3. 최근에, 이러한 증가된 재생 능력의 기초가 되는 분자 메커니즘을 더 잘 이해하기 위해, 차세대 시퀀싱 기술을 이용한 조직 재생의 비교 분석이 수행되었다 4,5,6. 제브라 피쉬와 테트라포드의 뇌 구조는 상당히 다릅니다 7,8,9. 이것은 유사한 뇌 구조와 생물학적 특징을 가진 작은 물고기를 사용하는 여러 뇌 손상 모델이 이러한 재생 능력 증가에 기여하는 기본 분자 메커니즘의 조사를 용이하게 하기 위해 개발되었음을 의미합니다.
또한, 메다카 (Oryzias latipes)는 제브라 피쉬에 비해 심장 및 신경 재생 능력이 낮은 인기있는 실험실 동물입니다 10,11,12,13. 제브라피쉬와 메다카는 성체 신경 줄기 세포(NSC)에 대해 유사한 뇌 구조와 틈새를 가지고 있습니다.14,15,16,17. 제브라피쉬와 메다카에서 시신경은 두 가지 유형의 NSC, 신경상피 유사 줄기 세포와 방사상 신경교 세포(RGC)를 포함합니다15,18. 성인 제브라피쉬의 시신경에 대한 찔린 상처 손상이 이전에 개발되었으며, 이 모델은 이 동물 19,20,21,22,23에서 뇌 재생을 조절하는 분자 메커니즘을 조사하는 데 사용되었습니다. 이 젊은 성인 제브라피쉬 찔린 상처 부상 모델은 RGC 19,24,25에서 재생 신경 발생을 유도했습니다. 시신경의 이 찔린 상처는 견고하고 재현 가능한 방법이다 13,19,20,21,22,23,24,25. 동일한 손상 모델을 성인 메다카에 적용했을 때, 메다카 시신경에서 RGC의 낮은 신경원성 능력은 손상 후 RGC 증식 및 분화의 비교 분석을 통해 밝혀졌습니다13.
시신경의 칼에 찔린 상처 손상 모델도 mummichog 모델26에서 개발되었지만, tectum 손상의 세부 사항은 종뇌 손상27과 비교할 때 잘 문서화되지 않았습니다. 제브라피쉬와 메다카를 사용한 시신경의 찔린 상처 손상은 차등 재생 능력을 가진 종 간의 차등 세포 반응과 유전자 발현을 조사할 수 있게 해줍니다. 이 프로토콜은 주사 바늘을 사용하여 시신경에 찔린 상처 손상을 수행하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 제브라피쉬와 메다카와 같은 작은 물고기에 적용할 수 있습니다. 형광 면역조직화학 및 냉동 절편을 사용한 조직학적 분석과 세포 증식 및 분화 분석을 위한 시료 전처리 공정이 여기에 설명되어 있습니다.

<table><tbody><tr><td>10mL 주사기</td><td>TERUMO</td><td>SS-10ESZ</td><td></td></tr><tr><td>1M Tris-HCl (pH 9.0)</td> <td>NIPPON GENE</td><td>314-90381</td><td></td></tr><tr><td>30G 바늘</td><td>Dentronics</td><td>HS-2739A</td><td></td></tr><tr><td>4 % 파라 포름 알데히드 인산염 완충 용액</td><td>Wako</td><td>163-20145</td><td></td></tr><tr><td>알루미늄 블록</td><td></td><td></td><td>115 x 80 x 37mm (W x D x H)는 6 개의 cryomolds를 동결하기에 충분한 크기입니다.</td></tr><tr><td>Anti-BLBP</td><td>Millipore</td><td>ABN14</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-BrdU</td><td>Abcam</td><td>ab1893</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-HuC</td><td>Invitrogen</td><td>A21271</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Anti-PCNA</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-56</td><td>1:200</td></tr><tr><td>Brmodeoxyuridine</td><td>Wako</td><td>023-15563</td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 현미경 C1 플러스</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>크라이오몰드</td><td>Sakura Finetek Japan</td><td>4565</td><td>10 x 10 x 5 mm (W x D x H)</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM1960</td><td></td></tr><tr><td>Danio rerio WT 스트레인 RW</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>확장 튜브</td><td>TERUMO</td><td>SF-ET3520</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount (TM) 수성 장착 매체, 형광 염료 염색 조직</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>F4680-25ML</td><td></td>과 함께 사용</tr><tr><td>겸자</td><td>DUMONT</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티 마우스 IgG (H + L) 고 교차 흡착 2 차 항체, Alexa Fluor Plus 488</td><td>Invitrogen</td><td>A32723</td><td></td></tr><tr><td>염소 안티 토끼 IgG (H + L) 고 교차 흡착 2 차 항체, Alexa Fluor 546</td><td>Invitrogen</td><td>A11035</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342 용액</td><td>Dojindo</td><td>23491-52-3</td><td></td></tr><tr><td>염산</td><td>Wako</td><td>080-01066</td><td></td></tr><tr><td>10슬라이드 배양실 다크 오렌지</td><td>COSMO BIO CO., LTD.</td><td>10DO</td><td></td></tr><tr><td>MAS 코트 슬라이딩 유리</td><td>Matsunami 유리</td><td>MAS-01</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 커버 유리</td><td>Matsunami 유리</td><td>C024451</td><td></td></tr><tr><td>현미경 Nikon</td><td></td><td>SMZ745T</td><td></td></tr><tr><td>Normal horse serum blocking solution</td><td>VECTOR LABRATORIES</td><td>S-2000-20</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T Compound</td><td>Sakura Finetek Japan</td><td>83-1824</td><td></td></tr><tr><td>Oryzias latipes WT 균주 Cab</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PAP Pen Super-Liquid Blocker</td><td>DAIDO SANGYO</td><td>PAP-S</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS) 정제, pH 7.4</td><td>TaKaRa</td><td>T9181</td><td></td></tr><tr><td>스티로폼 트레이</td><td></td><td></td><td>100 x 100 x 10 mm (W x D x H) 스티로폼 시트는 트레이로 사용 가능</td></tr><tr><td>자당</td><td>Wako</td><td>196-00015</td><td>30 % (w/v) 자당 PBS</td></tr><tr><td>트리카인 (MS-222)</td> <td>나카라이 테스크</td><td>14805-24</td><td></td></tr><tr><td>트리소듐 시트레이트 이수화물</td><td>와코</td><td>191-01785</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>와코</td><td>04605-250</td><td></td></tr></tbody></table>

재생 능력의 비교 분석을 위해 zebrafish와 medaka를 사용한 성인 시신경의 찔린 상처 부상 모델

Stab Wound Injury Model of the Adult Optic Tectum Using Zebrafish and Medaka for the Comparative Analysis of Regenerative Capacity

제브라피쉬는 중추신경계(CNS) 재생 능력이 우수하지만 메다카는 CNS 재생 능력이 낮습니다. 제브라피쉬와 메다카의 성체 시신경에서 뇌 손상 모델을 개발했으며 이러한 어종에 걸쳐 이 조직의 높은 재생 능력을 조절하는 분자 메커니즘을 밝히기 위해 비교 조직학적 및 분자 분석이 수행되었습니다. 여기에서는 바늘을 사용하여 성인 시신경에 대한 찔린 상처 손상 모델과 신경 줄기 세포(NSC)의 증식 및 분화를 위한 조직학적 분석을 제시합니다. 바늘을 시신경의 중앙 영역에 수동으로 삽입 한 다음 물고기를 심장 내로 관류하고 뇌를 해부했습니다. 이어서, 이들 조직을 냉동 절개하고, 적절한 NSC 증식 및 분화 마커에 대한 면역염색을 사용하여 평가하였다. 이 tectum 손상 모델은 제브라피쉬와 메다카 모두에서 강력하고 재현 가능한 결과를 제공하여 손상 후 NSC 반응을 비교할 수 있습니다. 이 방법은 제브라피쉬, 메다카, 아프리카 송사리를 포함한 작은 경골에 사용할 수 있으며 재생 능력을 비교하고 고유한 분자 메커니즘을 조사할 수 있습니다.

우반구에 바늘 삽입을 사용하여 시신경의 찔린 상처 손상(그림 1, 그림 4A 및 그림 5A)은 방사상 신경교 세포(RGC) 증식 및 신생아 뉴런 생성을 포함한 다양한 세포 반응을 유도합니다. 유사하게, 제브라피쉬와 메다카의 노화 개체군은 재생 반응에서 노화 효과를 상쇄하는 데 사용되었습니다. 그런 다음 동결 절편에 형광 면역 염색을 수행하고 제브라 피쉬와 메다카의 지각 손상 후 RGC 증식 및 분화를 분석했습니다 (그림 4-5) 13.
증식 세포 마커에 대한 항체, 증식 세포 항원 (PCNA) 및 RGC 마커, 뇌 지질 결합 단백질 (BLBP)을 사용하였으며, 이들은 제브라피쉬 및 메다카에서 입수...

성인 제브라피쉬의 기계적 뇌 손상 모델은 높은 재생 능력을 조절하는 분자 메커니즘을 조사하기 위해 설명됩니다. 이 방법은 형광 면역 염색을 사용하여 재생 반응을 평가하기 위해 여러 종의 작은 물고기의 시신경에 찔린 상처 손상을 만드는 것을 설명합니다.

재생 능력의 비교 분석을 위해 Zebrafish와 Medaka를 사용한 성인 시신경의 찔린 상처 부상 모델

While zebrafish have a superior capacity to regenerate their central nervous system (CNS), medaka has a lower CNS regenerative capacity. A brain injury ...

찔린 상처는 비특이적 세포 절제를 유도하는 기계적 손상 방법입니다. 이 방법은 뇌 손상 후 RGC 증식 및 분화의 평가를 용이하게 합니다. 바늘 매개 찔린 상처 손상은 뇌 손상을 유도하는 간단하고 효율적으로 구현된 방법입니다.이 방법은 표준 도구 세트를 사용하여 많은 실험 샘플에 적용 할 수 있습니다. 제브라피쉬의 재생 능력은 찔린 상처 부상 모델을 사용하여 설명되었습니다. 신경 재생을 조절하는 분자 메커니즘에 대한 새로운 통찰력은 중추 신경계의 재생 치료에 기여합니다.마취 된 성인 제브라 피쉬 또는 메다카를 스티로폼 트레이에 올려 놓는 것으로 시작하십시오. 스티로폼에 수직으로 삽입된 두 개의 30게이지 바늘 사이에 물고기를 똑바로 고정합니다. 물고기 머리가 움직이지 않도록 물고기 몸을 잡고 두개골을 통해 30 게이지 바늘을 시신경 구조 구체 중 하나의 내측 영역에 수직으로 삽입합니다.다음으로, 부상당한 물고기를 신선한 생선 시설 물이 담긴 어항으로 옮깁니다. 물고기가 마취에서 완전히 회복되면 탱크를 번식 시스템으로 옮깁니다. 스티로폼 트레이에 종이 타월을 올려 마취 된 생선을 놓습니다.그런 다음 항문 지느러미의 양쪽에 두 개의 30게이지 바늘을 수직으로 삽입하여 물고기 몸을 제자리에 고정합니다. 물고기가 배치되면 항문에서 심장까지 복부 절개를하십시오. 양쪽에 두 개의 30 게이지 바늘을 삽입하여 심장이 보이도록 합니다.그런 다음 집게의 끝을 사용하여은 상피층을 제거하십시오. 30게이지 바늘을 심실에 삽입하고 경사를 위로 유지하고 집게를 사용하여 심방을 절개합니다. 그런 다음 주사기를 눌러 심방에서 혈액을 씻어내어 PBS를 심방으로 밀어 넣습니다.혈액이 배출되고 아가미가 하얗게 변하면 PBS 관류를 중단하십시오. 나중에 물고기 몸을 제자리에 고정하는 바늘을 제거하고 물고기 복부 쪽을 아래로 고정합니다. 척수를 절단하고 시신경과 종뇌에서 두개골을 제거한 후 시신경을 절단하고 뇌를 해부합니다.다음으로, 뇌를 PBS에 4 % 파라 포름 알데히드 1 밀리리터가 함유 된 1.5 밀리리터 튜브에 옮겨 섭씨 4도에서 밤새 고정시킵니다. 고정된 뇌를 PBS에서 각각 5분씩 3회 세척한 후 동결방지제로 PBS에 30중량% 자당 1밀리리터를 넣고 1.5밀리리터 튜브에 뇌를 옮기고 섭씨 4도에서 하룻밤 동안 배양합니다. 30% 자당과 30밀리리터의 최적 절단 온도 또는 OCT 화합물을 결합하여 임베딩 화합물을 준비하고 섭씨 4도에

stab-wound-injury-model-adult-optic-tectum-using-zebrafish-medaka-for

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

이 비디오는 레이저 손상을 사용하여 성인 제브라피시의 망막 변성을 유도하는 절차를 보여줍니다. 레이저는 망막의 광수용체 세포를 표적으로 삼아 세포 사멸과 퇴행성 과정을 유발합니다. 이 손상은 뮐러 신경교세포(MG) 세포를 활성화하여 망막 재생을 돕는 줄기세포 전구세포로 역분화시킵니다.

Targeting Retinal Degeneration and Regeneration in Zebrafish Using a Focal Laser Injury(초점 레이저 손상을 사용한 제브라피시의 망막 퇴행 및 재생 모델링)

척추 절개 한 후, 성인 zebrafish의 육주 후 손상에 의한 기능 회복이있다. 유생의 투명성과 빠른 복구를 이용하려면, 우리는 애벌레 척수에 병행하는 방법을 제시한다. 절개 한 후, 우리는 3 일 후 부상으로 이일 후 상해에서 시작 감각 회복을 관찰하고 C-굴곡 운동.

애벌레 Zebrafish의 척수 절개

제브라피시 성체 신경 발생 및 재생의 세포 및 분자 메커니즘을 밝히기 위해 우리는 제브라피시 성체 텔렌스팔론에서 기계적 손상을 일으키는 침습적 수술과 면역조직화학 또는 현장 교잡화에 의한 찌른 반구의 변화를 모니터링하는 프로토콜을 개발했습니다.

Zebrafish의 성인 Telencephalon의 자상 부상 : 척추 동물의 뇌 신경 발생과 재생을 조사하는 방법

여기에서는 겐타마이신 주사로 급성 신장 손상을 유발하여 성인 신장 재생을 연구하는 신뢰할 수 있는 방법을 제시합니다. 우리는 부상이 겐타마이신 투여량과 환경 온도에 따라 달라진다는 것을 보여주며, LHX1a+가 새로운 네프론을 개발하기 위해 현장 교잡법을 사용합니다.

겐타 마이신 유도 부상으로 성인 Zebrafish의에서 신장 재생

이 기사는 제브라피시 배아에서 기계적 혈관 손상을 일으키는 방법을 설명합니다. 이 부상 모델은 실시간 현미경 검사에 이상적으로 적합한 유기체에서 지혈, 부상 관련 염증 및 상처 치유를 연구하기 위한 플랫폼을 제공합니다.

Zebrafish의 태아에서 기계 선박 부상

제브라 망막 재생이 거의 고정 된 망막을 이용하여 연구되었다. 그러나, interkinetic 핵 마이그레이션 동적 프로세스는 재생 반응 중에 발생 및 기본 메커니즘을 조사하기 위해 라이브 세포 이미징을 필요로한다. 여기, 우리는 광자 현미경을 사용하여 Interkinetic 핵 마이그레이션 (INM) 실시간을 모니터링하는 문화 및 이미징 조건을 설명합니다.

다중 광자 현미경으로 라이브 셀 이미징을위한 성인 형질 전환 Zebrafish의 망막의 Explants의 문화

Zebrafish는 척추 동물의 망막 변성/중생의 메커니즘 연구 인기 동물 모델입니다. 이 프로토콜에서는 내부 망막에 최소한의 손상으로 외부 망막을 방해 하는 지역화 된 상해를 유도 하는 방법을 설명 합니다. 망막 형태학 및 망막 재생 내내 뮐러 명과 응답 이후, vivo에서 모니터링합니다.

레이저 유도 된 망막 변성 및 재생 Zebrafish 모델 뮐러 명과 셀 활성화

여기, 우리 3 성인 zebrafish 부상 모델 및 면역 억제 약물 치료와 결합 된 그들의 사용을 설명합니다. 우리는 거기에 뼈 강화 작용을 감지 및 조직 재생의 이미징에 지침을 제공 합니다.

성인 Zebrafish 부상 모델 뼈 조직 재생에 Prednisolone의 효과 연구

우리는 무딘 힘 외상성 뇌 손상 (TBI) 및 후속 신경 재생의 기초 메커니즘에 따라 병리학의 폭을 검사하기 위해 성인 얼룩말 물고기에 대한 Marmarou 체중 드롭 모델을 수정했습니다. 이 무딘 힘 TBI 모델은 확장 가능, 온화한 유도, 보통, 또는 심한 TBI, 인간의 TBI에서 관찰 부상 이질성을 다시 수상.

성인 얼룩말 피시의 무딘 힘 부상의 효과를 연구하는 확장 가능한 모델

이 기사는 망막 입력이 광학 텍텀의 성장과 발달에 어떻게 영향을 미치는지 조사하기위한 첫 번째 단계로 살아있는 제브라 피쉬 유충에서 눈을 외과 적으로 제거하는 방법을 설명합니다. 또한이 기사는 애벌레 마취, 고정 및 뇌 해부에 대한 정보를 제공하고 면역 조직 화학 및 공초점 이미징을 제공합니다.

살아있는 제브라 피쉬 유충의 눈 제거는 시각 시스템의 신경 의존적 인 성장과 발달을 조사합니다.

이 프로토콜은 세포 수준에서 후속 상처 폐쇄를 평가하기 위해 마모를 통해 제브라 피쉬의 안구 표면을 손상시키는 데 중점을 둡니다. 이 접근법은 안구 버를 이용하여 각막 상피를 부분적으로 제거하고 주사 전자 현미경을 사용하여 상처 폐쇄 중 세포 형태의 변화를 추적합니다.

제브라피쉬 각막 상처 치유: 마모에서 상처 폐쇄 영상 분석까지

배우세요 성인 어류의 뇌 찔린 상처 모델을 이용한 재생 신경과학 연구 방법입니다. 형광 면역염색으로 망막 신경절 세포 증식과 분화를 평가하여 중추신경계 재생 치료에 대한 새로운 통찰을 제공합니다.

재생 능력의 비교 분석을 위해 Zebrafish와 Medaka를 사용한 성인 시신경의 찔린 상처 부상 모델

더 많은 동영상 탐색