Name: 박테리아 운동성에서 박테리아 글리코실트랜스퍼라제의 역할을 밝히기 위한 Null 돌연변이체의 생성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-11T13:45:00.000+00:00
Duration: 12 min 29 s
Description: 배우세요 Aeromonas 균주에서 null 돌연변이체를 생성하여 박테리아 글리코실트랜스퍼라제가 플라젤라 글리코실화와 운동성에 미치는 영향을 분석하는 방법입니다. 이 기술은 병원성 박테리아의 당지방질 생합성 메커니즘을 규명하는 데 활용됩니다.

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이 연구는 캐나다 국립 연구위원회 (Plan Nacional de I + D) (Ministerio de Economía y Competitividad, Spain) 및 Generalitat de Catalunya (Centre de Referència en Biotecnologia)의 지원을 받았다.

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이 방법의 중요한 초기 단계는 편모 및 추정 GT의 글리코실화에 관여하는 영역을 확인하는 것인데, 이는 이들 효소가 높은 상동성을 보이고 많은 과정에 관여하기 때문이다. 공공 데이터베이스에서 Aeromonas 게놈의 생물 정보학 분석은이 영역이 많은 균주의 편모 유전자를 포함하고 pseudaminic acid27의 생합성에 관여하는 유전자를 포함하는 극성 편모 영역 2에 인접 해 있음을 보여줍니다. 이로 인해 Aeromonas 에서 편모 글리코실화 섬을 검출하기위한 가이드 라인을 개발할 수있게되었으며, 이는 편모 글리칸에 pseudaminic acid 유도체가 포함 된 다른 박테리아에서이 영역을 확인하는 데 사용할 수 있습니다. 또한, 이 방법은 편모 글리코실화에 관여하는 유전자 클러스터를 분석하는 방법을 기술하지만, 다른 그람 음성 박테리아에서 편모 형성, 회전 또는 조절에 관여할 수 있는 단백질을 코딩하는 유전자를 연구하는 데에도 사용될 수 있다.</...

단백질 글리코실화는 그람 양성 및 그람 음성 박테리아 둘 다에 기술되어 있으며, 아미노산 측쇄 1,2에 대한 글리칸의 공유 부착으로 구성된다. 원핵생물에서, 이 과정은 보통 두 가지 주요 효소적 메카니즘을 통해 발생한다: O- 및 N-글리코실화3. O-글리코실화에서, 글리칸은 세린(Ser) 또는 트레오닌(Thr) 잔기의 히드록실기에 부착된다. N-글리코실화에서, 글리칸은 트리펩티드 서열 Asn-X-Ser/Thr 내의 아스파라긴(Asn) 잔기의 측쇄 아미드 질소에 부착되며, 여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산일 수 있다.
글리칸은 선형 또는 분지 구조를 채택 할 수 있으며 글리코시드 결합에 의해 공유적으로 연결된 단당류 또는 다당류로 구성됩니다. 원핵생물에서, 글리칸은 보통 진핵 글리칸4과 비교하여 설탕 조성 및 구조에서 다양성을 나타낸다. 더욱이, 글리칸이 조립되고 수용체 단백질로 전달되는 방법에 있어서 상이한 두 개의 상이한 박테리아 글리코실화 경로가 기술되었다: 순차적 및 엔블럭 글리코실화 5,6. 순차적 글리코실화를 위해, 복합 글리칸은 단당류의 연속적인 첨가에 의해 단백질 상에 직접 구축된다. 엔블럭 글리코실화에서, 미리 조립된 글리칸은 특수화된 올리고사카릴트랜스퍼라제(OTase)에 의해 지질-연결된 올리고당으로부터 단백질로 전사된다. 두 경로 모두 N- 및 O-글리코실화 과정7에 관여하는 것으로 나타났다.
단백질 글리코실화는 단백질의 물리화학적 및 생물학적 특성을 조절하는 역할을 한다. 글리칸의 존재는 단백질이 리간드와 상호 작용하는 방식에 영향을 미칠 수 있으며, 이는 단백질의 생물학적 활성에 영향을 미치지 만 단백질 안정성, 용해도, 단백질 분해에 대한 감수성, 면역원성 및 미생물 - 숙주 상호 작용 8,9에도 영향을 줄 수 있습니다. 그러나, 글리칸의 수, 글리칸 조성, 위치 및 부착 메카니즘과 같은 몇몇 글리코실화 파라미터는 또한 단백질 기능 및 구조에 영향을 미칠 수 있다.
글리코실트랜스퍼라제(GTs)는 복합 글리칸과 글리코컨쥬게이트의 생합성에 있어서 핵심 효소이다. 이들 효소는 활성화된 공여체 분자로부터의 당 모이어티와 특정 기질 수용체 사이의 글리코시드 결합 형성을 촉매한다. GTs는 공여체 분자로서 뉴클레오티드 및 비뉴클레오티드 둘 다를 사용할 수 있고, 단백질, 당류, 핵산 및 지질(10)과 같은 상이한 기질 수용체를 표적으로 할 수 있다. 따라서 분자 수준에서 GT를 이해하는 것은 작용 메커니즘과 특이성을 확인하는 데 중요하며 관련 분자를 변형시키는 글리 칸의 당 조성이 병원성과 어떻게 관련되어 있는지 이해할 수 있습니다. 탄수화물 활성 효소 데이터베이스 (CAZy)11은 GT를 서열 상동성에 따라 분류하며, 이는 대부분의 GT 패밀리에서 구조적 폴드 및 작용 메커니즘이 불변하기 때문에 예측 도구를 제공합니다. 그러나, 많은 GTs의 기질 특이성을 예측하기 어려운 네 가지 이유: 1) 원핵생물에서 기질 특이성을 결정하는 명확한 서열 모티프가 결정되지 않은12, 2) 많은 GTs 및 OTases는 기질 난잡함을 나타내고13,14, 3) 기능적 GTs는 재조합 형태로 고수율로 생산하기 어렵고 4) 공여체 및 수용체 기질 둘 다의 확인은 복잡하다. 그럼에도 불구하고, 최근의 돌연변이 유발 연구는 촉매 메커니즘의 이해와 GT의 뺄셈 결합에 상당한 진보를 얻는 것을 가능하게했다.
박테리아에서, O-글리코실화는 N-글리코실화보다 더 널리 퍼진 것으로 보인다. O-글리코실화 부위는 컨센서스 서열을 나타내지 않으며, 많은 O-글리코실화 단백질이 분비되거나 세포-표면 단백질, 예컨대 편모, 필리, 또는 자가수송체1. 편모 글리코실화는 수용체 부위의 수, 글리칸 조성, 및 구조에서 가변성을 나타낸다. 예를 들어, Burkholderia spp flagellins에는 하나의 수용체 사이트 만 있고 Campylobacter jejuni에서는 flagellins가 19 개의 수락자 사이트15,16을 가지고 있습니다. 또한, 일부 박테리아의 경우, 글리칸은 단일 단당류이며, 다른 박테리아는 올리고당을 형성하기 위해 다른 단당류로 손상된 이질적인 글리칸을 가지고 있습니다. 이러한 이질성은 동일한 종의 균주들 사이에서도 발생한다. 헬리코박터 편모는 pseudaminic acid (PseAc)17에 의해서만 변형되고, 캄필로박터 편모는 PseAc, 아세타미디노 형태의 pseudaminic acid (PseAm) 또는 레지오나민산 (LegAm)에 의해 변형될 수 있고, 이들 당으로부터 유래된 글리칸은 아세틸, N-아세틸글루코사민, 또는 프로피온성 치환18,19로 유도된다. Aeromonas에서 편모는 단일 PseAc 산 유도체에서 헤테로 다당류20에 이르는 조성의 글리 칸에 의해 변형되며 편모 단량체에 글리 칸을 부착하는 것은 항상 PseAc 유도체를 통해 이루어집니다.
일반적으로, 편모의 글리코실화는 편모 필라멘트 조립, 운동성, 독성, 및 숙주 특이성에 필수적이다. 그러나, C. jejuni16, H. pylori17 및 Aeromonas sp의 편모가 있는 동안. 도 21은 단백질 단량체가 글리코실화되지 않는 한 필라멘트로 조립할 수 없으며, 슈도모나스 spp. 및 Burkholderia spp. 도 15는 편모 조립을 위한 글리코실화를 필요로 하지 않는다. 더욱이, 일부 C. jejuni 균주에서, 편모 글리칸의 당 조성의 변화는 박테리아-숙주 상호작용에 영향을 미치고, 특정 면역 반응(16)을 회피하는 역할을 할 수 있다. 자가 응집은 편모와 관련된 글리 칸의 조성의 변형에 의해 영향을받는 또 다른 표현형 특성입니다. 더 낮은 자가응집은 마이크로콜로니 및 생물막(22)을 형성하는 능력의 감소를 유도한다. 일부 박테리아에서, 편모가 전염증 반응을 촉발시키는 능력은 편모 글리코실화와 관련이 있었다. 따라서, P. aeruginosa에서, 당화 편모는 당화되지 않은23보다 더 높은 전염증 반응을 유도한다.
에어로모나스는 그람 음성 박테리아로 환경에 유비쿼터스이며, 이는 모든 One Health 구성 요소(24)의 계면에 있을 수 있게 한다. 중온성 에어로모나스는 단일 극성 편모를 가지고 있으며, 이는 구성적으로 생산됩니다. 임상 단리물의 절반 이상은 또한 고점도 매질 또는 플레이트에서 유도성 측방향 편모를 발현한다. 다른 연구는 두 편모 유형을 박테리아 병인의 초기 단계와 관련시켰다25. 현재까지 보고된 극성 편모는 그의 중심 면역원성 도메인의 5-8 Ser 또는 Thr 잔기에서 O-글리코실화되는 반면, 측방 편모는 모든 균주에서 O-글리코실화되지 않는다. 상이한 균주로부터의 극성 편모 글리칸이 그들의 탄수화물 조성 및 사슬 길이20에서 다양성을 나타내지만, 연결 당은 pseudaminic acid 유도체인 것으로 나타났다.
이 원고의 목표는 GT를 포함하는 특정 GT 또는 염색체 영역에서 null 돌연변이를 얻는 방법을 설명하여 관련 다당류의 생합성 및 박테리아 병원성뿐만 아니라 글리칸 자체의 역할에 대한 관여를 분석하는 것입니다. 예를 들어, 우리는 극성 편모 글리코실화에 대한 관여를 확립하고 편모 글리칸의 역할을 분석하기 위해 Aeromonas 의 GT를 포함하는 염색체 영역을 확인하고 삭제합니다. 우리는이 글리 칸의 생합성과 변형 된 글리 칸의 역할에서 그 기능을 확립하기 위해 특정 GT를 삭제하는 방법을 보여줍니다. Aeromonas 를 예로 들자면, 이 원리는 다른 그람 음성 박테리아의 편모 글리코실화 섬을 확인 및 연구하고, O-항원 리포폴리사카라이드와 같은 다른 글리칸의 생합성에 관여하는 GT의 기능을 분석하는데 사용될 수 있다.

<table><tbody><tr><td>ABI PRISM Big Dye Terminator V. 3.1 Cycle Sequencing Ready Reaction Kit</td><td>Applied Biosystems</td><td>4337455</td> AccuPrime Taq DNA Polymerase <td>염기서열분석에 사용</td></tr><tr><td>, 고충실도</td><td>Invitrogen</td><td>12346-086</td><td>AB, CD 및 AD 단편 증폭에 사용</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Conda-Pronadise</td><td>8008</td><td>DNA 전기영동,</td></tr><tr><td>알칼리성 인산가수분해효소, 송아지 장(CIAP)에 사용됨</td><td>Promega</td><td>M1821</td><td>5' 말단에서 인산염을 제거하는 데 사용</td></tr><tr><td>Bacto 한천</td><td>Becton Dickinson</td><td>214010</td><td>운동성 분석에 사용</td></tr><tr><td>BamHI</td><td>Promega</td><td>R6021</td><td>엔도뉴클레아제 제한에 사용</td></tr><tr><td>BglII</td><td>Promega</td><td>R6081</td><td>엔도뉴클레아제 제한에 사용</td></tr><tr><td>BioDoc-It Imagin 시스템</td><td>UVP</td><td></td><td>바이오 이미징 스테이션 DNA 시각화에 사용</td></tr><tr><td>Biotaq 중합 효소</td><td>Bioline</td><td>BIO-21040</td><td>콜로니 스크리닝에 사용</td></tr><tr><td>염화 세슘</td><td>Applichem</td><td>A1126,0100</td><td>편모 정제에 사용</td></tr><tr><td>Chloramphenicol</td><td>Applichem</td><td>A1806,0025</td><td>triparent 짝짓기에 사용</td></tr><tr><td>Cytiva illustra GFX PCR DNA 및 젤 밴드 정제 키트</td><td>Cytivia</td><td>28-9034-71</td><td>PCR 앰플리콘 및 DNA 단편의 정제에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Applichem</td><td>131026.1211</td><td>DNA 전기영</td></tr>동 <tr><td>전기천공법 큐벳 2mm 갭</td><td>VWR</td><td>732-1133</td><td>변환에 사용</td></tr><tr><td>Ethidium bromide</td><td>Applichem</td><td>A1152,0025</td><td>DNA 시각화에 사용</td></tr><tr><td>HyperLadder 1 Kb 마커</td><td>Bioline</td><td>BIO-33053</td><td>DNA 마커</td></tr><tr><td>Invitrogen Easy-DNA gDNA 정제 키트</td><td>Invitrogen</td><td>10750204</td><td>세균 염색체 DNA 정제에 사용됨</td></tr><tr><td>Luria-Bertani (LB) Miller 한천</td><td>Condalab</td><td>996</td><td>Escherichia coli culture에 사용됨</td></tr><tr><td>Luria-Bertani (LB) Miller broth</td><td>Condalab</td><td>1551</td><td>Escherichia coli culture</td></tr><tr><td>Nanodrop ND-1000</td><td>NanoDrop Techonologies Inc</td><td></td><td>분광 광도계 DNA 정량화에 사용</td></tr><tr><td>Rifampicin</td><td>Applichem</td><td>A2220,0005</td><td>triparent mating에 사용</td></tr><tr><td>SOC Medium</td><td>Invitrogen</td><td>15544034</td><td>electroporation recovery에 사용</td></tr><tr><td>Spectinomycin</td><td>Applichem</td><td>A3834,0005</td><td>triparent mating에 사용</td></tr><tr><td>SW 41 Ti Swinging-Bucket Rotor</td><td>Beckman</td><td>331362</td><td>편모 정제</td></tr><tr>에 사용<td>T4 DNA 리가제</td><td>Invitrogen</td><td>15224017</td><td>결찰 반응에 사용</td></tr><tr><td>Trypticasein soy 한천</td><td>Condalab</td><td>1068</td><td>에어로모나스 재배</td></tr><tr><td>트립티카제인 콩 육수에</td> 사용 <td>Condalab</td><td>1224</td><td>에어로모나스 성장</td></tr><tr><td>트립톤</td><td>Condalab</td><td>1612</td>에 사용 <td>운동성 분석에 사용</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Applichem</td><td>A2264,0500</td><td>DNA 전기영동 및 편모 정제에 사용</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Applichem</td><td>A4975,0100</td><td>박테리아 용해에 사용</td></tr><tr><td>울트라 클리어 튜브(14mm x 89mm)</td><td>Beckman</td><td>344059</td><td>편모 정제에 사용</td></tr><tr><td>Veriti 96 well Thermal Cycler</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td>PCR 반응에 사용</td></tr><tr><td>Zyppy Plasmid Miniprep II Kit</td><td>Zymmo research</td><td>D4020</td><td>플라스미드 DNA의 분리에 사용</td></tr></tbody></table>

박테리아 운동성에서 박테리아 글리코실트랜스퍼라제의 역할을 밝히기 위한 null 돌연변이체의 생성

Generation of Null Mutants to Elucidate the Role of Bacterial Glycosyltransferases in Bacterial Motility

원핵생물에서 글리코실화에 대한 연구는 빠르게 성장하는 영역이다. 박테리아는 표면에 다른 당화 된 구조를 가지고 있으며, 글리 칸은 균주 별 바코드를 구성합니다. 관련 글리 칸은 진핵 생물보다 설탕 조성과 구조에서 더 높은 다양성을 보여 주며 박테리아 - 숙주 인식 과정 및 환경과의 상호 작용에 중요합니다. 병원성 박테리아에서 당단백질은 감염 과정의 여러 단계에 관여했으며 글리 칸 변형은 당단백질의 특정 기능을 방해 할 수 있습니다. 그러나, 글리칸 조성, 구조 및 생합성 경로의 이해에서 이루어진 진보에도 불구하고, 병원성 또는 환경과의 상호작용에서 당단백질의 역할에 대한 이해는 매우 제한적이다. 또한, 일부 박테리아에서, 단백질 글리코실화에 필요한 효소는 리포폴리사카라이드 및 캡슐 생합성 경로와 같은 다른 다당류 생합성 경로와 공유된다. 글리코실화의 기능적 중요성은 글리코실화 과정에 관여하는 것으로 생각되는 특정 유전자의 돌연변이와 표적 당단백질 및 변형 글리칸의 발현에 미치는 영향에 대한 연구를 통해 여러 박테리아에서 해명되었다. 중온성 에어로모나스는 단일 및 O 글리코실화 극성 편모를 갖는다. 편모 글리 칸은 Aeromonas 균주 간의 탄수화물 구성과 사슬 길이의 다양성을 보여줍니다. 그러나, 현재까지 분석된 모든 균주는 세린 또는 트레오닌 잔기를 변형시키는 연결 당으로서 pseudaminic acid 유도체를 보여준다. pseudaminic acid 유도체는 극성 편모 조립에 필요하며 그 손실은 접착, 생물막 형성 및 식민지화에 영향을 미칩니다. 이 기사에 자세히 설명된 프로토콜은 편모 글리칸의 생합성에서 추정적 글리코실트랜스퍼라제를 함유하는 유전자 또는 게놈 영역의 관여를 이해하기 위해 널 돌연변이체의 구축이 어떻게 사용될 수 있는지를 기술한다. 여기에는 글리코실트랜스퍼라제의 기능 및 글리칸의 역할을 이해할 수 있는 잠재력이 포함된다. 이는 글리칸 결핍 돌연변이체를 야생형 균주와 비교함으로써 달성될 것이다.

이 방법론은 편모 글리코실화 및 편모 필라멘트의 역할에 영향을 줄 수 있는 Aeromonas 의 유전자 또는 염색체 영역에서 널 돌연변이를 생성하는 효과적인 시스템을 제공합니다(그림 1).
이 프로토콜은 추정 FGI의 생물 정보학 적 확인과 GT를 코딩하는 유전자가이 영역에 제시하는 것으로 시작됩니다. 에어로모나스에서 FGI의 염색체 위치는 세 가지 유형의 유전자의 검출을 기반으로합니다 : pseudaminic acid (pseI 및 pseC)의 생합성에 관여하는 유전자, 극성 편모 유전자 및 luxC. A. 친수성 AH-130과 같은 단일 pseudaminic acid 유도체에 의해 당화되는 극성 편모가 그의 균주는 FGIs 그룹 I27에 위치한...

여기에서, 우리는 글리코실트랜스퍼라제를 함유하는 특정 글리코실트랜스퍼라제 또는 영역에서 에어로모나 스의 널 돌연변이체의 구축, 글리칸의 생합성에서 그들의 암호화된 효소의 관여 및 기능을 확립하기 위해 수행된 운동성 분석, 및 편모 정제, 뿐만 아니라 박테리아 병인에서 이러한 글리칸의 역할을 기술한다.

박테리아 운동성에서 박테리아 글리코실트랜스퍼라제의 역할을 밝히기 위한 Null 돌연변이체의 생성

The study of glycosylation in prokaryotes is a rapidly growing area. Bacteria harbor different glycosylated structures on their surface whose glycans ...

그래서 신경산 유도체는 병원성 박테리아에만 존재하며, aminiglycosylated flagella는이 설탕을 함유하고 있습니다. 프레임에서 유전자에 포함된 영역의 결실은 편모 글리코실화 클러스터를 찾는 것을 도울 수 있다. 이러한 기술은, 그들 사이에 높은 상동성을 가지며 상이한 과정에 관여하는 글리코실트랜스퍼라제와 같은 최신 특정 영역 또는 유전자, 및 편모 글리코실화 과정에 대한 그의 관여를 분석한다.이 기술은 또한 병원성 박테리아에서 관련 다당류의 생합성에 관여하는 글리코실트랜스퍼라제의 역할과 편모 형성에 관여하는 단백질을 코딩하는 유전자의 역할을 찾는 데 도움이 될 수 있다. 절차를 시연하면 내 실험실의 기술자 인 Maite Polo가 될 것입니다. 결실될 선택된 유전자 또는 영역의 상류 및 하류의 DNA 영역을 증폭시키는 두 쌍의 프라이머를 설계한다.프라이머 A 및 D는 pDM4에서의 클로닝을 허용하는 엔도뉴클레아제에 대한 제한 부위인 다섯 개의 프라임 말단에 포함할 필요가 있다. 프라이머 B 및 C가 결실될 유전자 내에 있거나 결실될 영역의 첫 번째 및 마지막 유전자 내에 있는지 확인하십시오. 두 프라이머가 프레임 내에 있고 유전자 내부에 다섯 개에서 여섯 개의 코돈 사이에 위치하는지 확인하십시오.두 프라이머 모두 DNA 앰플리콘 AB 및 CD에 결합하기 위해 다섯 개의 프라임 말단에 21개의 염기쌍 무료 서열을 포함하는지 확인하십시오.정제된 염색체 DNA 100나노그램을 AB 및 CD 프라이머가 있는 비대칭 PCR 두 세트에서 주형으로 사용한 다음 1%아가로스 겔에서 결과물을 분석합니다. 전기영동 겔로부터 적출된 앰플리콘을 정제하고 정량화한다. 각 앰플리콘 100나노그램을 프라이머 없이 PCR 시약과 섞는다.그것을 확장 한 후, A 및 D 프라이머를 추가하고 단일 단편으로 증폭하십시오. 다음으로 앞서 설명한 바와 같이 결과 제품을 분석, 정제 및 정량화합니다. pDM4 한 마이크로 그램과 400 나노그램의 AD 앰플리콘을 엔도뉴클레아제로 소화하십시오.소화된 pDM4를 몰 벡터에서 AD 앰플리콘과 결합하여 하나 내지 4의 비율로 삽입하고 라이게이션 반응을 준비한다. 섭씨 20도에서 하룻밤 동안 배양하십시오. 나중에 섭씨 70도에서 20 분 동안 T4 리가아제를 비활성화하십시오.에스케리치아 콜리 균주를 루리아 베르타니 밀러 브로스에 접종하고 0.4와 0.6 사이의 광학 밀도가 관찰될 때까지 200R

generation-null-mutants-to-elucidate-role-bacterial

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

체계적인 대규모 합성 유전자 (유전자 유전자 또는 epistasis) 상호 작용 화면은 유전 이중화 및 경로 간 대화를 탐험하는 데 사용할 수 있습니다. 여기, 우리는 높은 처리량 정량 합성 유전자 배열 검사 기술을 설명, eSGA 우리는 epistatic 관계를 elucidating과의 유전 적 상호 작용 네트워크를 탐험하기 위해 개발이...

에 박테리아 기능 네트워크 및 경로를 매핑<em&gt; 대장균</em&gt; 합성 유전자 배열을 사용하여

출처: Tomás, JM, et al. 박테리아 운동성에서 박테리아 글리코실트랜스퍼라제의 역할을 밝히기 위한 null 돌연변이체의 생성. J. Vis. 경험. (2022).이 비디오는 대장균  에서 자살 플라스미드의 개시자 의존적 증폭을 보여줍니다.항생제 내성 유전자를 운반하는 플라스미드는 숙주에 의해 암호화된 개시제 단백질이 있는 경우에만 복제됩니다. 전기천공 및 회수 배지에서 배양한 후, 혼합물을 항생제 함유 한천에 도금합니다. 플라스미드를 가진 박테리아는 개시제 단백질이 플라스미드의 항생제 내성 유전자를 발현할 수 있기 때문에 생존합니다.

박테리아 숙주에서 자살 플라스미드의 증폭

엔테로 박터 SP. YSU는 포도당 최소 염 배지에서 성장한다. 영양 요구 임의로 숙주 게놈 내로 그 자체를 삽입 transposome로 변환함으로써 생성된다. 돌연변이는 최소 배지에 복잡한 매체로부터 복제 도금에 의해 발견된다. 중단 된 유전자는 유전자 구조 및 시퀀싱에 의해 식별됩니다.

생성 엔테로 박터 SP. YSU 영양 요구는 트랜스포존 돌연변이 유발을 사용하여

군집 운동성은 물리적, 환경적 요인의 영향을 받습니다. 우리는 군집 분석 준비 및 데이터 수집과 일반적으로 관련된 문제를 우회하기 위한 2단계 프로토콜과 지침을 설명합니다. 현재의 분석 기술로는 제공되지 않는 떼 행동에 대한 자세한 정보를 얻기 위해 거시적 이미징 기술이 사용됩니다.

세균 표면 운동성 분석의 준비, 이미징 및 정량화

본 연구에서는 나노 미세 유체 흐름 챔버는 시각화 기능 Xylella fastidiosa, 포도 나무에 피어스의 질병을 일으키는 세균의 꿈틀 운동의 특성을 사용 하였다.

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우리 유전자 교란 구 mutans 의 생성에 대 한 손쉬운, 신속한, 그리고 상대적으로 저렴 한 방법 설명 변종; 이 기술은 다양 한 종의 유전자 교란 종자의 생성에 대 한 적용할 수 있습니다.

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많은 박테리아는 자신의 환경을 탐색하고 개별적으로 및 집단으로 모두 유리한 환경을 식민지화하기 위해 플래그텔라 구동 운동성을 사용합니다. 여기에 수영과 모성에 기여하는 구성 요소 / 경로를 식별하기 위해 선택 도구로 운동성을 활용하는 세 가지 확립 된 방법의 사용이 입증된다.

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이 프로토콜은 기존의 액체 배양 또는 페트리 접시보다 자연 서식지에 더 가까운 복잡한 3D 다공성 하이드로겔 매트릭스에서 박테리아 군집의 운동성과 성장을 연구하기 위한 박테리아 군집의 3차원(3D) 프린팅 절차를 설명합니다.

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녹농균(Pseudomonas aeruginosa)에서 운동성 표현형을 관찰하기 위한 고처리량 방법

배우세요 Aeromonas 균주에서 null 돌연변이체를 생성하여 박테리아 글리코실트랜스퍼라제가 플라젤라 글리코실화와 운동성에 미치는 영향을 분석하는 방법입니다. 이 기술은 병원성 박테리아의 당지방질 생합성 메커니즘을 규명하는 데 활용됩니다.

박테리아 운동성에서 박테리아 글리코실트랜스퍼라제의 역할을 밝히기 위한 Null 돌연변이체의 생성

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